生根培养基为:l/2MS+0.lmg/LNAA+20g/L 蔗糖 +3.5g/L 琼脂，pH 为 5.4。
[0019](6)炼苗移栽:试管苗生根20天后，具备发达健壮的根时将组培苗不揭瓶盖在自然光下炼苗7天。移栽时用镊子从瓶中取出组培苗，小心洗净基部残留的培养基，选择健壮苗移栽到消过毒的轻基质中，浇足水，遮荫处理。移栽后经常喷水，保持空气湿度。植株成活后转入正常土壤中定植，移栽30天后成活率达到97.4%。
[0020]实施例2
(I)外植体消毒处理:晴天从田间取无病害大薯幼嫩茎，用自来水冲洗干净后，用中性洗衣粉轻洗外植体。置于流水下冲洗2h后置于无菌超净工作台上，备用。先用75%酒精快速灭菌15s，然后用无菌水冲洗5次，接着用0.1% HgCl2*别消毒8min，无菌水冲洗3次后用无菌滤纸擦干外植体表面水分后备用。
[0021](2)愈伤组织诱导:将步骤(I)消毒处理好的茎段接种于萌动培养基中进行愈伤组织诱导培养。接种后先黑暗条件下培养，待种子萌发后再移至置于每天光照13小时，光照强度为15001x，置于培养温度为26°C，空气相对湿度为75%的条件下培养30天后萌动率达到 94.9%ο 所述的萌动培养基为:MS+1.5mg/L 6-BA+ 5.0mg/L 2，4_D+25g/L 蔗糖 +3.5g/L琼脂，pH为5.6。
[0022](3)增殖培养:将步骤(2)诱导培养得到的愈伤组织转接到增殖培养基中进行继代。接种后置于每天光照12小时，光照强度为25001x，置于培养温度为26°C，空气相对湿度为75%的条件下培养30天后增殖系数达到6.16。所述的增殖培养基为:MS+1.2mg/L6-BA+3.0mg/LNAA+25g/L 蔗糖 +4.5g/L 琼脂，pH 为 5.4。
[0023](4)分化培养:将步骤(3)继代得到的愈伤组织转接至分化培养基中进行诱导分化培养。接种后置于每天光照12小时，光照强度为25001χ，置于培养温度为27°C，空气相对湿度为75%的条件下培养30天后统计分化率达到90%。所述的分化培养基为:MS+0.3mg/LNAA+1.0mg/L6-BA+25g/L 蔗糖 +3.5 ?6.0g/L 琼脂，pH 为 5.6。
[0024](5)生根培养:将经步骤(4)分化培养得到的无根试管苗转接至生根培养基中进行生根。接种后置于每天光照14小时，光照强度为30001χ，置于培养温度为25°C，空气相对湿度为75%的条件下培养30天后生根率达到96.1%。所述的生根培养基为:l/2MS+0.5mg/LNAA+20g/L 蔗糖 +3.5g/L 琼脂，pH 为 5.6。
[0025](6)炼苗移栽:试管苗生根20天后，具备发达健壮的根时将组培苗不揭瓶盖在自然光下炼苗7天。移栽时用镊子从瓶中取出组培苗，小心洗净基部残留的培养基，选择健壮苗移栽到消过毒的轻基质中，浇足水，遮荫处理。移栽后经常喷水，保持空气湿度。植株成活后转入正常土壤中定植，移栽30天后成活率达到95.9%。
【主权项】
1.一种大薯组织培养再生体系的建立方法，其特征在于包括以下步骤: (1)外植体消毒处理:晴天从田间取无病害大薯幼嫩茎，用自来水冲洗干净后，用中性洗衣粉轻洗外植体，置于流水下冲洗I?2h后置于无菌超净工作台上，备用，先用75%酒精快速灭菌10?20s，然后用无菌水冲洗3?4次，接着用0.1% HgCl2*别消毒5?15min，无菌水冲洗3?5次后用无菌滤纸擦干外植体表面水分后备用； (2)愈伤组织诱导:将步骤(I)消毒处理好的茎段接种于萌动培养基中进行愈伤组织诱导培养，接种后先黑暗条件下培养，待种子萌发后再移至置于每天光照12?14小时，光照强度为1000?20001x，置于培养温度为25?28°C，空气相对湿度为75%的条件下培养30天后统计萌动率； (3)增殖培养:将步骤(2)诱导培养得到的愈伤组织转接到增殖培养基中进行继代，接种后置于每天光照12?14小时，光照强度为2000?30001x，置于培养温度为25?28°C，空气相对湿度为75%的条件下培养30天后统计增殖情况； (4)分化培养:将步骤(3)继代得到的愈伤组织转接至分化培养基中进行诱导分化培养，接种后置于每天光照12?14小时，光照强度为2000?30001x，置于培养温度为25?280C，空气相对湿度为75%的条件下培养30天后统计分化情况； (5)生根培养:将经步骤(4)分化培养得到的无根试管苗转接至生根培养基中进行生根，接种后置于每天光照12?14小时，光照强度为2000?30001x，置于培养温度为25?280C，空气相对湿度为75%的条件下培养30天后统计生根情况； (6)炼苗移栽:试管苗生根20天后，具备发达健壮的根时将组培苗不揭瓶盖在自然光下炼苗7天，移栽时用镊子从瓶中取出组培苗，小心洗净基部残留的培养基，选择健壮苗移栽到消过毒的轻基质中，浇足水，遮荫处理，移栽后经常喷水，保持空气湿度，植株成活后转入正常土壤中定植。
2.根据权利要求1所述的一种大薯组织培养再生体系的建立方法，其特征在于步骤(2)所述的萌动培养基为:MS+1.0 ?2.0mg/L 6-BA+ 2.0 ?5.0mg/L 2，4-D+25 ?30g/L 蔗糖 +3.5 ?6.0g/L 琼脂，pH 为 5.4 ?5.8。
3.根据权利要求1所述的一种大薯组织培养再生体系的建立方法，其特征在于步骤(3)所述的增殖培养基为:MS+1.0 ?5.0mg/L6-BA+l.0 ?3.0mg/LNAA+25 ?30g/L 蔗糖+3.5 ?6.0g/L 琼脂，pH 为 5.4 ?5.8。
4.根据权利要求1所述的一种大薯组织培养再生体系的建立方法，其特征在于步骤(4)所述的分化培养基为:MS+0.1 ?0.5mg/LNAA+0.5 ?1.0mg/L6_BA+20 ?30g/L 蔗糖+3.5 ?6.0g/L 琼脂，pH 为 5.4 ?5.8。
5.根据权利要求1所述的一种大薯组织培养再生体系的建立方法，其特征在于步骤(5)所述的生根培养基为:l/2MS+0.1?1.0mg/LNAA+20?30g/L蔗糖+3.5?6.0g/L琼脂，pH 为 5.4 ?5.8。
【专利摘要】本发明公开了一种大薯组织培养再生体系的建立方法，大薯（Dioscorea alata L.）又名参薯,为多年生缠绕草质藤本,隶属于薯蓣科薯预属;大薯营养丰富,色泽鲜艳,口感俱佳,是人们喜爱的一种食物。大薯耐旱,耐热,产量潜力高,且淀粉含量较高,生育期短,是一种颇具发展潜力的能源植物。目前,大薯主要通过地下块茎进行无性繁殖,种子材料消耗大,且这种自留种的栽培形式会使其种性退化,品质降低,产量下降，因此有必要构建大薯离体培养再生体系。本发明的主要流程为：外植体消毒处理→接种于萌动培养基诱导出愈伤组织→愈伤组织增殖培养→愈伤组织分化为丛生芽→生根及成苗培养。
【IPC分类】A01H4-00
【公开号】CN104782496
【申请号】CN201510216184
【发明人】冯文杰
【申请人】冯文杰
【公开日】2015年7月22日
【申请日】2015年5月2日