一种白色金针菇片段形态液体菌种的培养方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于食用菌工厂化栽培技术领域，具体的说涉及一种白色金针菇片段形 态液体菌种的培养方法。
【背景技术】
[0002] 目前国内白色金针菇菌种主要为固体菌种和球形的液体菌种。固体菌种的众多缺 点已在淘汰的边缘，而球形液体菌种有两大缺陷，球形菌种的粒径大，在接种操作时容易堵 住喷头，对生产效率和员工士气影响很大。球形菌种的菌丝含量偏低，有效菌丝量也偏少、 接种后萌发偏慢，整个栽培瓶发菌周期达到22天左右。相对传统的固体菌种的栽培尚存在 优势，但是在集约化规模化的生产中已成瓶颈。
【发明内容】
[0003] 本发明旨在解决上述技术问题。
[0004] 本发明的目的是提供一种白色金针菇片段形态液体菌种的培养方法。
[0005] 为解决上述技术问题，本发明公开一种白色金针菇片段形态液体菌种的培养方 法，包括如下步骤： 51. 分别配制接种培养基和转接培养基； 52. 接种培养基和转接培养基灭菌； 53. 液体母种处理； 54. 将S3处理后的液体母种接种至接种培养基进行培养； 55. 步骤S4培养完成后，利用转接培养基进行转接培养。
[0006] 进一步的，步骤Sl所述接种培养基由如下组分组成：白糖30g/L，豆柏粉4g/L， MgSO4 0. 2~1.0 g/L，KH2PO4O. 2~I. 2g/L，消泡剂0. 3~0. 4ml/L，加水定容，配制液体培养 基；所述豆柏粉经过140目粉碎。
[0007] 作为进一步的优选方案，步骤Sl所述转接培养基由如下组分组成：豆柏粉0. 15% ~0· 35%、白砂糖 0· 15% ~0· 35%、MgSO4 0· 04% ~0· 09%、KH2PO4 0· 04% ~0· 09%、余量 为水，配制液体培养基；所述豆柏粉经过140目粉碎后用水溶解，所述白砂糖用热水溶解， 所述MgSC^P KH 2P04用水溶解。
[0008] 作为进一步的优选方案，步骤S2所述灭菌是将液体培养基(接种培养基和转接培 养基)加入液体菌种培养罐内后，将培养罐推入灭菌锅灭菌，温度95~105 °C维持60min，再 温度121~123°C维持80min。
[0009] 更进一步地，所述液体培养基灭菌完成后推进万级冷却室，冷却到室温。
[0010] 作为进一步的优选方案，步骤S3所述液体母种处理是将挑选好的液体母种，放置 在磁力搅拌机上搅拌14~16分钟后使用。
[0011] 作为进一步的优选方案，步骤S4或步骤S5均是在百级层流罩下接种，然后推入 万级培养室接无菌压缩空气培养6~9天，在培养期间控制培养温度19~22°C，通气压力 I. 2 ~I. 8Mpa〇
[0012] 更近一步地，所述无菌压缩空气是由最小孔径为0.0 lppm的过滤器所过滤，并由 冷冻式干燥机、吸附式干燥机除油除水的空气。
[0013] 与现有技术相比，本发明技术方案的有益效果是： 1、液体菌种制备过程简单，操作简便。
[0014] 2、菌丝形态大部分为极小片段，接种时很少堵喷头，能渗透至培养基内部。
[0015] 3、接种后菌丝活性高，萌发快，整个发菌周期短。
[0016] 4、应用本发明的培养基培养金针菇液体菌种，发菌时间只需16~18天，比球形 菌种缩短4~6天。
【具体实施方式】
[0017] 下面结合实施例对本发明的作进一步的说明。但本发明的实施方式并不因此限定 于以下实施例。除非特别说明，本发明采用的材料和加工方法为本技术领域常用材料和加 工方法。
[0018] 一种白色金针菇片段形态液体菌种的培养方法，包括如下步骤： 51. 培养基配制； 52. 培养基灭菌； 53. 液体母种处理； 54. 接种； 55. 转接培养。
[0019] 步骤Sl中进行培养基配制包括以下步骤： Sl 1.接种培养基配制； S12.转接培养基配制。
[0020] 首先，步骤Sll中接种培养基配制包括以下步骤：豆柏粉过140目的粉碎机粉碎， 按以下比例：白糖30g/L，豆柏粉4g/L，MgS04 0· 2~I. 0g/L，KH2P04 0· 2~I. 2g/L，消泡剂 150~200ml/500L，加水定容，配制液体培养基。
[0021] 步骤S12中转接培养基配制包括以下步骤：豆柏粉过140目的粉碎机粉碎后用 水溶解，白糖用热水溶解，硫酸镁和磷酸二氢钾用水溶解后，按以下重量比例：豆柏粉〇. 15% ~0· 35%、白砂糖 0· 15% ~0· 35%、MgS04 0 . 04% ~0· 09%、KH2P04 0· 04% ~0· 09%、余量 为水，配制液体培养基。
[0022] 其次，步骤S2中将液体培养基加入液体菌种培养罐内后，将培养罐推入灭菌锅灭 菌，温度95~105°C维持60min，温度121~123°C维持80min。灭菌完成后推进万级冷却 室，冷却到室温。
[0023] 再次，步骤S3中将挑选好的液体母种，放置在磁力搅拌机上搅拌14~16分钟后 使用。
[0024] 最后，步骤S4、S5在百级层流罩下接种，然后推入万级培养室接无菌压缩空气培 养6~9天，在培养期间控制培养温度19~22°C，通气压力1. 2~I. 8Mpa。无菌压缩空气 是由最小孔径为〇. Olppm的过滤器所过滤，并由冷冻式干燥机、吸附式干燥机除油除水的 空气。
[0025] 本发明实施例所采用的供试菌种，白色金针葫（F. var. velutipes.)母种为电白中 茂生物技术有限公司佛山三水分公司的W14。
[0026] 接种培养基包括：白糖 30g/L、豆柏粉4g/L、MgS04 0· 2-1. 0g/L，KH2P04 0· 2-1. 2g/ L，其余为水。并放入磁力搅拌器转子1枚，规格为长35mm，宽8mm。IL刻度三角瓶装液量为 600ml。灭菌后接入8块2mm左右试管斜面原种，将其放入22°C、转速为150转/分摇床中 培养9天。
[0027] 转接培养基配制： ① 将白糖放入容器中加 IOL水，搅拌使其溶解； ② 加入MgSOjP KH 2P04并使其溶解； ③ 将豆栢粉经过120目筛子过滤，然后加入上述溶液中，使其充分分散在水中定容。
[0028] ④将上述液体通过40目的不锈钢筛过滤，倒入发酵罐，加入消泡剂200ml ;加水 将配制好的培养基倒入发酵罐中，121°C高压蒸汽灭菌，待其温度冷却至85°C以下时，将发 酵罐推出，通入无菌空气，压力为1.2~1.8兆帕，并在罐体上放置一水淋以迅速冷却罐体， 当罐体温度冷却至25°C以下时即可接液体母种。
[0029] 其中，发酵罐培养温度为21°C，通气压力为1. 2兆帕，液体母种培养8天后测量菌 丝含量、菌球密度与直径。
[0030] 菌丝含量的测定：将培养好的发酵罐出料口打开倒出菌丝，分别在上中下三层用 三角瓶取250ml菌液，菌丝放置磁力搅拌机上搅拌10分钟，量取IOml菌液进行3500r/m离 心分离，倒掉上清液，称量菌丝重量。
[0031] 下表为对发酵罐液体菌种的菌丝含量、菌球密度、菌体粒径的测量结果：
【主权项】
1. 一种白色金针菇片段形态液体菌种的培养方法，其特征在于，包括如下步骤：
51. 分别配制接种培养基和转接培养基；
52. 接种培养基和转接培养基灭菌；
53. 液体母种处理；
54. 将S3处理后的液体母种接种至接种培养基进行培养；
55. 步骤S4培养完成后，利用转接培养基进行转接培养。
2. 根据权利要求1所述的白色金针菇片段形态液体菌种的培养方法，其特征在于，步 骤Sl所述接种培养基由如下组分组成：白糖30g/L，豆柏粉4g/L，MgSO4 0. 2~I.Og/L， KH2PO4O. 2~I. 2g/L，消泡剂0? 3~0? 4ml/L，加水定容；所述豆柏粉经过140目粉碎。
3. 根据权利要求1所述的白色金针菇片段形态液体菌种的培养方法，其特征在于，步 骤Sl所述转接培养基由如下组分组成：豆柏粉0. 15%~0. 35%、白砂糖0. 15%~0. 35%、 MgSO4 0? 04% ~0? 09%、KH2PO4 0? 04% ~0? 09%、余量为水； 所述豆柏粉经过140目粉碎后用水溶解，所述白砂糖用热水溶解，所述MgSOjPKH2PO4 用水溶解。
4. 根据权利要求1所述的白色金针菇片段形态液体菌种的培养方法，其特征在于，步 骤S2所述灭菌是将接种培养基和转接培养基在95~105°C维持60min，再121~123°C维 持 80min。
5. 根据权利要求4所述的白色金针菇液体菌种的制备方法，其特征在于，所述灭菌完 成后冷却到室温。
6. 根据权利要求1所述的白色金针菇片段形态液体菌种的培养方法，其特征在于，步 骤S3所述液体母种处理是将挑选的液体母种，放置在磁力搅拌机上搅拌14~16分钟后使 用。
7. 根据权利要求1所述的白色金针菇片段形态液体菌种的培养方法，其特征在于，步 骤S4或步骤S5是在百级层流罩下接种，然后推入万级培养室接无菌压缩空气培养6~9 天，在培养期间控制培养温度19~22°C，通气压力1. 2~I. 8Mpa。
8. 根据权利要求7所述的白色金针菇片段形态液体菌种的培养方法，其特征在于，所 述无菌压缩空气是由最小孔径为0.Olppm的过滤器所过滤，并由冷冻式干燥机、吸附式干 燥机除油除水的空气。
【专利摘要】本发明公开一种白色金针菇片段形态液体菌种的培养方法，包括：培养基配制、培养基灭菌、液体母种处理、接种、转接培养。将挑选好的液体母种，放置在磁力搅拌机上搅拌14～16分钟后，在百级层流罩下接种，然后推入万级培养室接无菌压缩空气培养6～9天，在培养期间控制培养温度19～22℃，通气压力1.2～1.8Mpa。本发明技术方案的有益效果是：液体菌种制备过程简单，操作简便。菌丝形态大部分为极小片段，能渗透至培养基内部，接种时很少堵喷头。接种后菌丝活性高，萌发快，整个发菌周期短。应用本发明的培养基培养金针菇液体菌种，发菌时间只需16～18天，比球形菌种缩短4～6天。
【IPC分类】A01G1-04
【公开号】CN104838894
【申请号】CN201510301673
【发明人】程加兵
【申请人】电白中茂生物科技有限公司
【公开日】2015年8月19日
【申请日】2015年6月5日