培养皿2的外壁上形成水膜，大蜡螟虫尸4上侵染的昆虫病原线虫会通过第二培 养皿2的外壁上的水膜游到第一培养皿1中的蒸馏水6中，在第一培养皿1上盖上一个开 口向下的内径为6cm的第三培养皿3,从而构建一个密闭的培养容器，将上述培养容器放在 扎有小孔的封口袋中，再放在不透明盒中避光，然后将不透明盒放在防虫网中，一周后，依 次打开防虫网、不透明盒、封口袋、第三培养皿3后，在第一培养皿1的蒸馏水6中可收集得 到昆虫病原线虫，第一培养皿1中的蒸馏水6和昆虫病原线虫的混合物构成昆虫病原线虫 悬浮液； 扩繁：先在显微镜下观察昆虫病原线虫悬浮液中的昆虫病原线虫的浓度，当昆虫病原 线虫悬浮液中的昆虫病原线虫浓度大于20条/20ul时，用移液枪吸取50ul昆虫病原线虫 悬浮液放在24孔板的每个孔中，在每个孔中加入一条4-5龄的老熟大蜡螟幼虫，任溶液中 的线虫侵染大蜡螟幼虫，进行扩繁，3天后大蜡螟幼虫死亡，得到大蜡螟虫尸，然后将此大蜡 螟虫尸再次按照上述"白色陷阱"方式，从大蜡螟虫尸上诱捕昆虫病原线虫，得到昆虫病原 线虫浓度大于5000条/毫升的昆虫病原线虫悬浮液。
[0012] 2?使用时间及方法 烤烟移栽时将昆虫病原线虫悬浮液灌入大田中的烟苗根部的土壤中，让昆虫病原线虫 悬浮液中的昆虫病原线虫侵染土壤中的烟草根结线虫，从而抑制烟草根结线虫。
[0013] 3.昆虫病原线虫悬浮液的施用量 每株烤烟使用浓度为5000条/mL的昆虫病原线虫悬浮液2 mL。
[0014] 本发明达到的技术效果： 使用昆虫病原线虫悬浮液40天后收集烟草根上的根结线虫虫卵，如下表1如示，结 果表明斯氏线虫科昆虫病原线虫5： 对烟草上根结线虫具有显著的抑制作用。 以昆虫病原线虫悬浮液方式施加，每株烟草上的根结线虫卵数仅为55. 6个，显著少于对 照组的106. 9个，LSD均值差的显著水平为0. 05, LSD的英文全称为Least - Significant Difference，其中文含义为最小显著性差异法。表1中的"对照组"是指没有对烟苗采取任 何防治措施的栽培方式。
[0015] 表1 EPN悬液对烟草上根结线虫的影响
*LSD均值差的显著水平为0. 05 该方法能替代化学农药防治烟草根结线虫，昆虫病原线虫悬浮液中的昆虫病原线虫数 量容易定量，安全性高，短期效果好。
【主权项】
1. 使用昆虫病原线虫悬浮液来防治烟草根结线虫的方法，其特征在于，包括以下顺序 步骤： 将烟苗从育苗盘中移栽到大田时，将昆虫病原线虫悬浮液灌入大田中的烟苗根部的土 壤中，让昆虫病原线虫悬浮液中的昆虫病原线虫侵染土壤中的烟草根结线虫，从而抑制烟 草根结线虫； 所述昆虫病原线虫悬浮液是指由水，以及分散于水中的昆虫病原线虫构成的混合物。2. 根据权利要求1所述的使用昆虫病原线虫悬浮液来防治烟草根结线虫的方法，其特 征在于： 所述昆虫病原线虫悬浮液的浓度为每毫升昆虫病原线虫悬浮液中含有5000条昆虫病 原线虫，昆虫病原线虫悬浮液的施用量为每株烟苗施用2毫升昆虫病原线虫悬浮液。3. 根据权利要求2所述的使用昆虫病原线虫悬浮液来防治烟草根结线虫的方法，其特 征在于： 所述昆虫病原线虫悬浮液在施用40天后，对烟草根结线虫达到显著的抑制作用。4. 根据权利要求1、2或3所述的使用昆虫病原线虫悬浮液来防治烟草根结线虫的方 法，其特征在于，所述昆虫病原线虫悬浮液的制备方法包括以下顺序步骤： 步骤1 :通过寄主从土壤中诱捕目标物： 将大蜡螟幼虫放入含有昆虫病原线虫的土壤中，在对土壤翻动的条件下，使昆虫病原 线虫侵染大蜡螟幼虫6至8天，在侵染期间每天对大蜡螟幼虫进行人工剥茧，待大蜡螟死亡 后，得到大蜡螟虫尸； 步骤2 :从寄主中提取目标物： 取若干个开口向上的第一培养皿，在每个第一培养皿中，放入一个开口向下的第二培 养皿，其中第二培养皿的口径小于第一培养皿，在第二培养皿的顶部放入一块500目尼龙 过滤网，在尼龙过滤网的顶部放上一条大蜡螟虫尸，沿着第二培养皿的顶部向第一培养皿 中加入2毫升以上的蒸馏水，使蒸馏水沿第二培养皿的外壁向上对尼龙过滤网持续进行浸 润，使大蜡螟虫尸上侵染的昆虫病原线虫通过第二培养皿的外壁上的水膜游到第一培养皿 中的蒸馏水中，在第一培养皿上盖上一个开口向下的第三培养皿，其中第三培养皿的口径 大于第一培养皿，从而构建一个密闭的培养容器，将上述培养容器放在扎有小孔的封口袋 中，再放在不透明盒中避光，然后将不透明盒放在防虫网中，6至8天后，依次打开防虫网、 不透明盒、封口袋、第三培养皿后，在第一培养皿的蒸馏水中可收集得到昆虫病原线虫，第 一培养皿中的蒸馏水和昆虫病原线虫的混合物构成昆虫病原线虫悬浮液，其中昆虫病原线 虫悬浮液中的昆虫病原线虫的浓度大于20条/20微升； 步骤3:对目标物进行扩繁： 取工作面上具有若干个沉孔的孔板，在每个沉孔中放入50微升的昆虫病原线虫悬浮 液，在每个沉孔中放入一条大蜡螟幼虫，使沉孔中的昆虫病原线虫悬浮液中的昆虫病原线 虫侵染大蜡螟幼虫，3天后沉孔中的大蜡螟幼虫死亡，得到大蜡螟虫尸，然后将大蜡螟虫尸 返回到步骤2中，再次从寄主中提取目标物，得到昆虫病原线虫浓度大于5000条/毫升的 昆虫病原线虫悬浮液。
【专利摘要】使用昆虫病原线虫悬浮液来防治烟草根结线虫的方法，属于烟草病虫害的生物防治技术领域，解决了现有烟草根结线虫采取化学防治时会破坏生态环境的问题，包括以下顺序步骤：将烟苗从育苗盘中移栽到大田时，将昆虫病原线虫悬浮液灌入大田中的烟苗根部的土壤中，让昆虫病原线虫悬浮液中的昆虫病原线虫侵染土壤中的烟草根结线虫，从而抑制烟草根结线虫；所述昆虫病原线虫悬浮液是指由水，以及分散于水中的昆虫病原线虫构成的混合物。本发明方法能替代化学农药防治烟草根结线虫，生态环保，安全性高。
【IPC分类】A01N63/02, A01N25/04, A01P5/00
【公开号】CN104886153
【申请号】CN201510259948
【发明人】谷星慧, 张立猛, 计思贵, 徐冰, 吴林林, 赵念席, 阮维斌, 赵进龙, 崔永和, 沙传平
【申请人】云南省烟草公司玉溪市公司, 南开大学
【公开日】2015年9月9日
【申请日】2015年5月21日