一种滇黄精种子一步成苗的组培方法
【技术领域】
[0001]本发明属中药材种植技术领域，特别涉及一种滇黄精种子一步成苗的组培方法。
【背景技术】
[0002]滇黄精(Polygonatum kingianum Coll.et Hemsl.)是百合科黄精属草本植物，是常用中药黄精三种基原植物之一。黄精作为常用中药，在我国已有2000多年的用药历史，其性味甘平，入肺、脾、肾经。功效补中益气，润心肺，强筋骨。治虚损寒热，肺痨咯血，病后体虚食少，筋骨软弱，风湿疼痛，风癞癣疾，为补阴之品。近年来药理研究表明，除上述功效外，黄精还有抗菌作用，尤其是对结核杆菌和真菌有显著的效果，同时又有降低血压的作用。近期研究结果还表明黄精对增加冠状动脉血流量，减轻动脉粥样硬化程度，提高肝脏中超氧化物歧化酶(SOD)活性有明显的作用。长期以来，由于人工栽培量较小，黄精药材来源主要以野生采集为主。随着市场对药材黄精需求量的增加和野生资源的急剧减少，采集野生黄精不但不能满足市场需求，更破坏了生态环境和黄精野生资源。由于黄精种子在自然条件下发芽率较低，自然条件下，黄精种子要经历2个冬季休眠后，才能长出一片真叶，目前在黄精人工栽培中多采用块茎进行无性繁殖。繁殖周期长、繁殖系数低。
[0003]申请号为:201110450738.4，名称为“黄精组培繁殖方法”的中国专利申请公开了一种黄精组培繁殖方法，具体为:黄精组培繁殖方法，包括引种灭菌、组织诱导、继代培养、分化培养、壮苗培养和生根培养，其有益效果是通过组织培养，可以大量生产种苗，从块茎到培养成生根苗，只需7个月，大大缩短了种苗生产时间和成本，提高了扩繁速度。
[0004]申请号为:201210085056.2，名称为“九华黄精的组培快繁方法”的中国专利申请公开了一种黄精组培繁殖方法，具体为:以黄精根状茎为外植体，经过不定芽的诱导阶段，丛芽增殖阶段，生根阶段和炼苗移栽阶段，调配和优选各培养阶段的培养基配方和培养条件，形成了每年扩繁速度为106倍的组培技术，实现了九华黄精的组织培养和快速稳定繁殖，可以有效解决九华黄精的优质种苗供应问题。
[0005]申请号为:201310532853.5，名称为“黄精根茎的组织培养基及离体再生方法”的中国专利申请公开了一种黄精根茎的组织培养基及离体再生方法；该黄精根茎的组织培养基包括诱导培养基、增殖培养基和生根培养基；使用所述黄精根茎的组织培养基进行黄精根茎离体再生的方法，包括芽的诱导、芽的增殖培养和生根培养三个步骤。该发明利用植物组织培养技术建立了黄精离体再生体系，并对涉及的诱导培养基、增殖培养基和生根培养基进行了选择优化，具有芽诱导率高、增殖系数高、生根率高、芽苗健壮、叶形叶色正常等优点，能够满足市场对优质黄精种苗的需要。
[0006]申请号为:201410130683.2，名称为“一种黄精的快速繁殖技术方法”的中国专利公开了一种黄精快速繁殖的方法，具体为:采用变温处理加激素处理打破种子休眠，以及利用打破休眠，已经萌发的种子作材料进行离体诱导培养愈伤组织，经过分化培养和根诱导，无性繁殖黄精种苗。采用该技术能大大提高黄精繁殖倍数，缩短生产周期，减少用种量，降低生产成本。
[0007]上述技术，显示了组织培养技术在黄精种苗繁育应用的可能性，申请号为:201410130683.2，名称为“ 一种黄精的快速繁殖技术方法”的中国专利与本发明类似，但该专利技术存在前处理、使用已经萌发的种子作离体诱导、培养愈伤组织、芽的诱导、芽的增殖培养和生根培养等复杂程序，不但工序复杂、技术难度高、时间周期长，而且生产成本较高，不利于滇黄精种苗的大规模生产。
[0008]经文献检索，未见与本发明相同的公开报道。
【发明内容】
[0009]本发明的目的在于克服现有技术存在工序复杂、技术难度高、时间周期长，而且生产成本较高的缺陷，提供一种新的滇黄精种子一步成苗的组培方法。
[0010]本发明的目的通过下述技术方案实现:
[0011]—种滇黄精种子一步成苗的组培方法，包括以下步骤如下:
[0012](I)滇黄精果实的选取
[0013]在10月，选取8成成熟的新鲜、无病虫害的滇黄精果实，放置于4°C冰箱中保存7天;
[0014](2)滇黄精种子的处理
[0015]将选取的滇黄精果实剥去果皮，取出种子置入烧杯中，用体积分数为75%的酒精消毒Imin后，无菌水冲洗2?3次，转入无菌工作台，用质量分数为0.1 % HgCl2S液浸泡14?15min，再无菌水冲洗3?4次；
[0016](3)滇黄精种子一步成苗培养
[0017]将经步骤(2)处理的滇黄精种子，接种于盛有MS+BA 0.5mg/L培养基的培养瓶中，在培养温度为25°C ±2°C，光照时间为12-14h/天，光照强度为1501x条件下培养至黄精种子萌发2片真叶时，将培养瓶置于培养温度为25°C ±2°C，光照时间为12h/天，光照强度为15001x条件下继续培养至生根；
[0018]⑷炼苗移栽
[0019]将培养瓶塞打开后，置于20001x的光照下炼苗3?4d，取出生根苗，洗净培养基，移栽到混合土中，并覆盖保鲜膜，移栽后7d内保持没有直射光照射，保鲜膜内温度在15?30°C之间、且湿度在80%，7d后去膜，即得到滇黄精种苗；所述混合土由蛭石、黑土和珍珠岩按蛭石:黑土:珍珠岩的体积比为(10?14): (1.5?2.5):1混合而成。
[0020]步骤(3)中所述的滇黄精种子的接种于培养瓶中，滇黄精种子的密度优选为10?15粒/瓶，培养瓶的直径为7cm，高为11cm。
[0021]与现有技术相比，本发明的有益效果是:
[0022]本发明提出了新的技术方案，省略了离体诱导、培养愈伤组织、芽的增殖培养等复杂工序，从种子接种一步培养即可成苗，从收集种子至种子接种一步培育成生根组培苗，仅需90天-99天，繁育周期大大缩短，种子萌芽率达到90?95%，培育的苗壮，根系发达，炼苗成活率达100%，取得了预料不到的技术效果。
[0023]本发明方法能够打破滇黄精种子休眠期，缩短滇黄精种子的萌芽期，促进滇黄精种子萌发，种子置于培养基25天-32天快速生成2片真叶，把滇黄精的萌芽期从两个冬季缩短到I个月，萌芽率从大田种植的10?20%提高到90?95%，形成膨大根茎，生长出3?1cm长的根系，苗壮，直接可应用于黄精生产。
[0024]本发明方法简便易行，成本