] 抑菌生根培养基的制备：以配制1L抑菌培养基计算，将实施例1中所得全部A液 放入2L烧杯中，用生根培养基定容至1L，然后加入500mg/LNAA母液2ml，混匀，制得抑菌培 养基。分装于培养容器中，每瓶50ml。
[0045] 实施例5抑菌组合物用于培养容器的消毒
[0046] 将实施例1中的A液与无菌水按1:30的比例稀释，制得稀释液（简称B液）。将 培养容器放入B液中充分浸泡4h，瞭干，备用。
[0047] 实施例6抑菌组合物用于试管苗的消毒
[0048] 先用75%酒精消毒试管苗30s，无菌水冲洗3遍，再用2%次氯酸钠浸泡2min，无 菌水冲洗5遍，然后将试管苗放入B液（实施例5所制备）中充分浸泡2h，晾干，备用。
[0049] 实施例7抑菌组合物用于试管苗的培育
[0050] 在开放的自然环境中，将实施例6中消毒后的试管苗用滤纸吸干，接种于抑菌培 养基中，放在自然环境中培养。
[0051] 试验例1抑菌培养基组成成分的筛选试验
[0052] 一、试验方法
[0053](一）各处理的配方组成
[0054] 本试验将见血飞、颠茄草、通城虎、樗叶花椒、洋金花、管花马兜铃等按表1的方式 进行配伍，抑菌组合物的制备方法参照实施例1-3的方法进行制备；后续操作过程（包括制 备抑菌培养基、培养容器的消毒、试管苗的消毒、试管苗的培育等）按照实施例4-7的方式 执行。
[0055] 表1各处理抑菌培养基配方组成成分试验
[0056]
[0058](二）室内试验
[0059] 选用株高2-3cm，生长健壮的红颜试管苗为试验材料，进行生根培养。试验在本公 司的组培室内进行。试验共14个处理（见表1)，4次重复，每重复10瓶，每瓶1株，随机区 组排列。处理1-13在自然环境中操作，处理14按照传统组培方法，在封闭的超净工作台中 操作。
[0060] 观察过程中统计污染瓶数，最后计算污染率；试验结束后统计草莓苗的各种形态 指标。
[0061] 污染率（％ )=污染瓶数/总接种瓶数X100 %。
[0062] 二、试验结果
[0063] 室内组培试验结果见表2-6。
[0064] 试验结果表明：将见血飞、颠茄草和通城虎按一定比例混合煎煮，得到的药液与生 根培养基混合制得的抑菌培养基（处理1)相比于对照（处理14):株高增加20. 4%，根长 增加41. 0%，根条数增加15. 5%。由试验结果可知：处理1与处理（2-14)在株高、根长和 根条数间存在极显著差异；而污染率中，处理1与处理14间无显著差异，处理1与处理2-13 间有极显著差异。这说明将见血飞、颠茄草和通城虎按一定比例混合煎煮，得到的药液与生 根培养基混合，制得的抑菌培养基具有极显著的协同增效的功能，不仅具有显著的抑菌效 果，还能有效的促进试管苗的生长。
[0065]表2各处理抑菌培养基配方组成成分试验结果
[0077] 试验例2抑菌培养基组成成分的复核试验
[0078] 一、试验方法
[0079](一）各处理的配方组成
[0080] 试验例1的组成成分筛选试验的结果表明，将见血飞、颠茄草和通城虎按一定比 例混合煎煮，得到的药液与生根培养基混合，制得的抑菌培养基，不仅能抑菌，还能增加株 高，促进根长，增加根条数。鉴于植物配伍成分影响非常复杂，可能存在增效、拮抗等多种影 响，可能存在二元复配优于三元复配的情况。所以根据试验例1的情况设计二元复配试验， 各处理参照表7的用量设计。
[0081] 表7各处理抑菌培养基配方组成成分试验
[0082]
[0084] (二）室内试验
[0085] 选用株高2-3cm，生长健壮的红颜试管苗，进行生根试验。试验在本公司的组培室 内进行。试验共20个处理（见表7)，4次重复，每重复10瓶，每瓶1株，随机区组排列。处 理1-19在自然环境中操作，处理20按照传统组培方法，在封闭的超净工作台中操作。
[0086] 观察过程中统计污染瓶数，最后计算污染率；试验结束后统计草莓苗的各种形态 指标。
[0087] 污染率（％ )=污染瓶数/总接种瓶数X100%。
[0088] 二、试验结果
[0089] 室内组培试验结果见表8-12。
[0090] 根据试验结果可见，将见血飞、颠茄草和通城虎按一定比例混合煎煮，得到的药液 与生根培养基混合，制得的抑菌培养基的效果显著优于处理2-20的复配方案（差异达极显 著水平）；结合试验例1综合考虑，将见血飞、颠茄草和通城虎按一定比例混合煎煮的复配 效果要明显优于其它的复配方案，这表明该复配方案中的见血飞、颠茄草和通城虎的配伍 组合有显著的协同增效功效。
[0091] 表8各处理抑菌培养基配方组成成分试验结果
[0102] 试验例3抑菌培养基组成成分的用量筛选试验
[0103] 一、试验方法
[0104](一）组成成分的用量设计
[0105] 按照表13的用量设计处理。
[0106] 表13组成成分的用量
[0109](二）室内试验
[0110] 选用株高2-3cm，生长健壮的红颜试管苗，进行生根试验。试验在本公司的组培室 内进行。试验共14个处理（见表13)，4次重复，每重复10瓶，每瓶1株，随机区组排列。处 理1-13在自然环境中操作，处理14按照传统组培方法，在封闭的超净工作台中操作。
[0111] 观察过程中统计污染瓶数，最后计算污染率；试验结束后统计草莓苗的各种形态 指标。
[0112] 污染率（％ )=污染瓶数/总接种瓶数x100 %。
[0113] 二、试验结果
[0114] 试验结果见表13-17。根据试验结果可见，效果较好的复配方案是："见血飞 16-20g、颠茄草3-5g和通城虎4-6g"，该复配方案在增加株高、促进根长、增加根条数和抑 制培养基污染等方面的效果显著优于其它用量的复配方案；其中，综合各项指标，"见血飞 18g、颠茄草4g和通城虎5g的配伍"得到的药液与生根培养基混合，制得的抑菌培养基的效 果是复配方案中最好的，显著优于该处理2-14的复配方案（差异达显著水平）。
[0115] 表13组成成分不同用量的试验
【主权项】
1. 用于开放式植物组织培养消毒的抑菌组合物，其特征在于，由以下原料制成：见血 飞、颠茄草和通城虎。2. 按照权利要求1所述的抑菌组合物，其特征在于，各原料的重量份是：见血飞12-25 份、颠茄草2-10份、通城虎1-8份。3. 按照权利要求2所述的抑菌组合物，其特征在于，各原料的重量份是：见血飞16-20 份、颠茄草3-5份、通城虎4-6份；优选的，各原料的重量份是：见血飞18份、颠茄草4份、通 城虎5份。4. 一种制备权利要求1-3任何一项所述抑菌组合物的方法，其特征在于，包括：（1)称 取见血飞、颠茄草和通城虎；（2)将见血飞、颠茄草和通城虎混合均匀后用水煎煮；煎煮液 过滤，取滤液，即得。5. 按照权利要求4所述的方法，其特征在于：步骤（2)中按照g/ml计，见血飞、颠茄草 和通城虎组成的抑菌组合物与水的比例为1:10-30,优选为1:20 ; 所述的煎煮是50-70°C煎煮0. 5-4h，优选为60°C煎煮2h。6. -种抑菌的生根培养基，其特征在于：含有权利要求1-3任何一项所述的抑菌组合 物。7. 权利要求1-3任何一项所述抑菌组合物在植物组织培养消毒或促进试管苗生长中 的应用。8. 按照权利要求7所述的应用，其特征在于，包括：将所述的抑菌组合物应用于制备抑 菌培养基；优选的，所述的培养基是生根培养基，更优选为草莓的生根培养基；最优选的， 所述草莓的生根培养基的成分包括：1/2MS、NAA、琼脂和蔗糖； 优选的，所述制备抑菌培养基的方法包括： 生根培养基的制备：称取5. 7g1/2MS培养粉、24g蔗糖和8. 4g琼脂，混合均匀，放入 1. 2L水中，加热煮沸，备用； 抑菌生根培养基的制备：将按照权利要求4或5所述方法制备的抑菌组合物放入2L烧 杯中，用生根培养基定容至1L，然后加入500mg/LNAA母液2ml，混匀，制得抑菌培养基。9. 按照权利要求7所述的应用，其特征在于，包括：将所述的抑菌组合物应用于培养容 器的消毒；优选的，将制备的抑菌组合物与无菌水按1:30的比例稀释，制得稀释液；将培养 容器放入稀释液中充分浸泡，晾干。10. 按照权利要求7所述的应用，其特征在于：所述的应用包括应用所述的抑菌组合物 对试管苗进行消毒或应用于试管苗的培育； 优选的，应用所述的抑菌组合物对试管苗进行消毒包括：将制备的抑菌组合物与无菌 水按1:30的比例稀释，制得稀释液，备用；先用75%酒精消毒试管苗30s，无菌水冲洗3遍， 再用2%次氯酸钠浸泡2min，无菌水冲洗5遍，然后放入稀释液中充分浸泡2h，晾干； 所述的试管苗的培育包括：在开放的自然环境中，将按照上述消毒方式消毒后的试管 苗用滤纸吸干，接种于抑菌培养基中，放在自然环境中培养。
【专利摘要】本发明公开了开放式植物组织培养的抑菌组合物及其制备方法，属于开放式植物组织培养的抑菌剂领域。本发明首先通过组分筛选试验发现将见血飞、颠茄草和通城虎配伍在一起得到的抑菌组合物，不仅能有效抑菌，还能显著增加试管苗的株高、促进根长并增加根条数。本发明进一步发现，将见血飞、颠茄草和通城虎按照16-20:3-5:4-6的质量比例进行配伍后具有更佳的协同效果，尤其是按照18:4:5的比例进行配伍后，三者之间具有极显著的协同增效功效，不仅能有效抑制生根培养基的污染，而且在增加试管苗的株高、促进根长和增加根条数等方面的效果也更为显著。本发明有效降低了组培的设备投资、环境要求低、操作简单、效益高。
【IPC分类】A01N65/38, A01P1/00, A01P21/00, A01N65/44, A01H4/00
【公开号】CN105248473
【申请号】CN201510781883
【发明人】蔡家锟, 李金艳, 赵东平, 朱珂佳
【申请人】北京阿格瑞斯生物技术有限公司
【公开日】2016年1月20日
【申请日】2015年11月16日