一种uva调控槲蕨柚皮苷含量的方法
【技术领域】
[0001 ]本发明属于植物栽培领域，具体设及一种调控搬藤抽皮巧含量的方法。
【背景技术】
[0002] 搬藤(化ynaria roosii)是中型附生藤类，其根状茎W骨碎补入药，并且作为骨碎 补的唯一正品收载于《中国药典》中，具有补肾坚骨、续伤止痛的功效。2001年中国中医科学 院在多年临床的基础上提取搬藤中的有效成分总黄酬成功研制了中药强骨胶囊，该药填补 了我国治疗骨质疏松症状尚无中药二类新药的空白。目前我国对骨碎补药材的需求量很 大，但搬藤原材料仍全部来源于野外资源的采挖，不仅浪费大量的人力财力，还对生态环境 造成了不可逆的破坏，所W搬藤的人工栽培和工厂化规模生产亟待研究和推广，运也是我 国中药现代化的必然趋势。
[0003] 大量的试验及临床应用常把抽皮巧和新北美圣草巧两种有效成分的含量作为搬 藤(骨碎补)药材的质量标准。两者均为黄酬类化合物，抽皮巧可用于防治屯、脑血管疾病、镇 痛、清热及消炎;新北美圣草巧可用于治疗骨质疏松。由此可见，在补肾健骨方面，主要是新 北美圣草巧发挥显著效用。本研究组通过对人工栽培3年生搬藤进行品质分析发现:其新北 美圣草巧的含量不足0.1%，运严重限制了人工栽培搬藤作为骨碎补药材使用的生产实践。
[0004] 已有研究表明，紫外福射对植物细胞内黄酬类次生代谢产物的合成和积累有一定 的调控作用，但很少将其应用于生产实践中。本发明首次利用LED光源UVA对人工栽培搬藤 进行福射处理，用W调控搬藤中黄酬类成分一抽皮巧的含量，并将其转化为疗效更为显著 的成分一新北美圣草巧。国内外尚未有相关研究人员或生产企业对搬藤中抽皮巧的含量进 行调控。
【发明内容】
[0005] 为了解决上述问题，本发明提供一种UVA调控搬藤抽皮巧含量的方法。
[0006] -方面，本发明一种UVA调控搬藤抽皮巧含量的方法，其为利用80-320KJ/m2的福 射剂量福射搬藤植株，调控搬藤抽皮巧向新北美圣草巧转化，优选地，福射剂量为160KJ/ O m O
[0007] 其中，所述的UVA优选为L邸光源UVA。
[000引其中，所述的L抓光源UVA的波长优选为365nm，功率优选为30-50W，光源距离植株 优选 8-15cm。
[0009] 其中，所述搬藤植株为3-5年生搬藤。
[0010] 另一方面，本发明提供一种提高搬藤新北美圣草巧含量的方法，其为用UVA福射搬 藤植株，UVA的福射剂量为80-320KJ/m 2，优选地，福射剂量为160KJ/m2。
[0011] 其中，所述的UVA优选为L邸光源UVA。
[0012] 其中，所述的L抓光源UVA的波长优选为365nm，功率优选为30-50W，光源距离植株 优选 8-15cm。
[0013] 其中，所述搬藤植株为3-5年生搬藤。
[0014] 与未用本发明方法处理的对照组相比，处理组抽皮巧的含量降低了 56%，而新北 美圣草巧的含量升高了 5.4倍，并且两成分的总量与对照无显著差异。本发明方法有效地调 控了搬藤抽皮巧向药用价值更高的新北美圣草巧的转化。该发明经济实用、简便易行，可W 将此应用于人工栽培搬藤有效成分的调控中，进而促进人工栽培搬藤作为骨碎补药材的生 产实践，缓解生态压力，并推动我国传统中药骨碎补的大规模开发利用和推广，加快中药现 代化的实施进程。
【具体实施方式】
[0015] W下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
[0016] 实验材料
[0017] 植物材料:溫室中人工繁殖栽培的=年生搬藤植株；
[0018] 光源:L邸光源-UVA，波长365nm，功率40W，光源距离植株IOcm;
[0019] 仪器与设备:培养架、粉碎机、自动磨样机、超低溫保存冰箱、超声波清洗仪、冷冻 干燥机、干燥器、离屯、机、安捷伦高效液相色谱仪(DAD检测器)等。
[0020] 试剂:色谱级甲醇、超纯水、抽皮巧标准品、新北美标准品等。
[0021 ]实验方法
[0022] 应用L邸光源UVA连续福射搬藤植株一定剂量后取样，测定其根状茎中抽皮巧和新 北美圣草巧的含量变化情况。
[0023] 福射剂量:80KJ/m2、160KJ/m2、320KJ/m2。
[0024] 对照:未经紫外福射的同批次搬藤植株。
[0025] 液相色谱条件：W十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；W纯乙腊、0.1 %甲酸水为流 动相，检测波长为280nm。
[0026] 有效成分提取方法:取福射处理后的搬藤植株，去掉叶片和根，只留根状茎。用刷 子刷去泥±，洗净后放入自动磨样机中研磨成粉末，将粉末装入EP管中，迅速转入液氮中速 冻，然后放入冷冻干燥机内进行干燥，彻底干燥后取搬藤根状茎干粉20mg，精密称定，置于 1.5ml离屯、管中，加80%甲醇ImL，超声提取30min，4°C过夜，再次超声提取30min，离屯、，将上 清液转移到新的离屯、管中，4°C离屯、（10000转/min)3次，每次lOmin，即得搬藤有效成分提取 液。
[0027] 抽皮巧标准品配制：取抽皮巧对照品3.2mg，精密称定，加甲醇55化L制成IOM mo 1 的抽皮巧标准品溶液。
[0028] 抽皮巧标准曲线的绘制：分别配制1.875M mol、3.75M mol、7.5M mol、15M mol和 30M mol的抽皮巧标准品溶液，按照W上色谱条件进样，绘制标准曲线并进行回归计算，得 出标准曲线为:y = 805.71x+838.59，R2 = 0.9981。
[0029] 新北美圣草巧标准品配制：取新北美圣草巧标准品Img，精密称定，加甲醇167.化L 制成1 OMmo 1浓度的标准品溶液。
[0030] 新北美圣草巧标准曲线的绘制：分别配制0.38M mol、0.75M mol、1.5M mol、3M mol、6M mol的新北美圣草巧标准品溶液，按照W上色谱条件进样，绘制标准曲线并进行回 归计算，得出标准曲线为:y = 870.70x巧54.22，R2 = 0.9962。
[0031 ]实施例1 80KJ/m2的UVA福射搬藤对抽皮巧和新北美圣草巧含量的影响
[0032] 取6株长势一致的3年生搬藤植株，其中3株作为对照，另3株置于LED光源UVA下进 行福射，当福射剂量累积至80KJ/V时停止处理。利用HPLC分析两种主效成分抽皮巧和新北 美圣草巧的含量，进样量为40yL。得到色谱图，分析搬藤中抽皮巧和新北美圣草巧的含量。
[0033] 表 1
[0035] 经SPSS分析，L抓光源UVA 80KJ/V的福射剂量处理后，搬藤中的抽皮巧、新北美圣 草巧及两成分的总含量与对照相比均没有显著差异。经SPSS分析，L抓光源UVA 80KJ/V的 福射剂量处理后，搬藤中的抽皮巧及两成分的总含量与对照相比没有显著差异，而新北美 圣草巧的含量显著升高。
[0036] 实施例2 160KJ/m2的UVA福射搬藤对抽皮巧和新北美圣草巧含量的影响
[0037] 取6株长势一致的3年生搬藤植株，其中3株作为对照，另3株置于LED光源UVA下进 行福射，当福射剂量累积至160KJ/V时停止处理。利用HPLC分析两种主效成分抽皮巧和新 北美圣草巧的含量，进样量为40yL。得到色谱图，分析搬藤中抽皮巧和北美圣草巧的含量。 [00；3引 表2
[0040]经SPSS分析，L抓光源UVA 160KJ/m2的福射剂量处理后，搬藤中的抽皮巧含量下 降，新北美圣草巧极显著上升，为对照的5.4倍，并且两成分的总含量与对照相比均没有显 著差异。由此可见，L抓光源UVA 160KJ/V的福射剂量极显著调控了抽皮巧向新北美圣草巧 的转化。
[0041 ]实施例3 320KJ/m2的UVA福射搬藤对抽皮巧和新北美圣草巧含量的影响
[0042] 取6株长势一致的3年生搬藤植株，其中3株作为对照，另3株置于LED光源UVA下进 行福射，当福射剂量累积至320KJ/V时停止处理。利用HPLC分析两种主效成分抽皮巧和新 北美圣草巧的含量，进样量为40化。得到色谱图，分析搬藤中抽皮巧和新北美圣草巧的含 量。
[0043] 表 3
[0046] 经SPSS分析，L抓光源UVA 320KJ/m2的福射剂量处理后，搬藤中的抽皮巧含量下 降，新北美圣草巧显著上升，为对照的5.0倍，并且两成分的总含量与对照相比均没有显著 差异。由此可见，L邸光源UVA 320KJ/m2的福射剂量同样调控了抽皮巧向新北美圣草巧的转 化。
[0047] 综上:L抓光源UVA 80KJ/m2的福射剂量处理后，搬藤中新北美圣草巧的含量显著 上升；160KJ/V的福射剂量处理后，搬藤中的抽皮巧含量下降，新北美圣草巧极显著上升， 为对照的5.4倍，并且两成分的总含量与对照相比没有显著差异;320KJ/V的福射剂量处理 后，搬藤中的抽皮巧含量下降，新北美圣草巧显著上升，为对照的5.0倍，并且两成分的总含 量与对照相比均没有显著差异。由此可见，L抓光源160KJ/V的UVA福射最大效率地调控了 搬藤抽皮巧向药用价值更高的新北美圣草巧的转化。
[004引 W上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人 员来说，在不脱离本发明技术原理的前提下，还可W做出若干改进和润饰，运些改进和润饰 也应视为本发明的保护范围。
【主权项】
1. 一种UVA调控槲蕨柚皮苷含量的方法，其特征在于，利用80-320KJ/V的辐射剂量辐射 槲蕨植株，调控槲蕨柚皮苷向新北美圣草苷转化。2. 如权利要求1所述的UVA调控槲蕨柚皮苷含量的方法，其特征在于，所述的UVA为LED 光源UVA。3. 如权利要求2所述的UVA调控槲蕨柚皮苷含量的方法，其特征在于，所述的LED光源 UVA的波长为365nm，功率30-50W，光源距离植株8-15cm〇4. 如权利要求1所述的UVA调控槲蕨柚皮苷含量的方法，其特征在于，所述槲蕨植株为 3-5年生槲蕨。5. 如权利要求1所述的U V A调控槲蕨柚皮苷含量的方法，其特征在于，辐射剂量为 160KJ/m2。6. -种提高槲蕨新北美圣草苷含量的方法，其特征在于，用UVA辐射槲蕨植株，UVA的辐 射剂量为80_320KJ/m 2。7. 如权利要求6所述的提高槲蕨新北美圣草苷含量的方法，其特征在于，所述的UVA为 LED 光源 UVA。8. 如权利要求7所述的提高槲蕨新北美圣草苷含量的方法，其特征在于，所述的LED光 源UVA的波长为365nm，功率30-50W，光源距离植株8-15cm〇9. 如权利要求6所述的提高槲蕨新北美圣草苷含量的方法，其特征在于，所述槲蕨植株 为3-5年生槲蕨。10. 如权利要求6所述的提高槲蕨新北美圣草苷含量的方法，其特征在于，辐射剂量为 160KJ/m2。
【专利摘要】本发明公开了一种UVA调控槲蕨柚皮苷含量的方法，利用80-320KJ/m2的辐射剂量辐射槲蕨植株，调控槲蕨柚皮苷向新北美圣草苷转化。与未用本发明方法处理的对照组相比，处理组柚皮苷的含量降低了56％，而新北美圣草苷的含量升高了5.4倍，并且两成分的总量与对照无显著差异。本发明方法有效地调控了槲蕨柚皮苷向药用价值更高的新北美圣草苷的转化。该发明经济实用、简便易行，可以将此应用于人工栽培槲蕨有效成分的调控中，进而促进人工栽培槲蕨作为骨碎补药材的生产实践，缓解生态压力，并推动我国传统中药骨碎补的大规模开发利用和推广，加快中药现代化的实施进程。
【IPC分类】A01G7/04
【公开号】CN105660215
【申请号】CN201610151150
【发明人】石雷, 黄凤杰, 李杨, 李 东, 姚然, 王頔, 杨华
【申请人】中国科学院植物研究所
【公开日】2016年6月15日
【申请日】2016年3月16日