一种脱毒马铃薯试管薯的诱导方法
【专利摘要】本发明涉及一种脱毒马铃薯试管薯的诱导方法，属于试管薯制备技术领域。本发明首先将MS培养基，腐植酸钠等物质混合，高温杀菌，制备基础培养基，再将剪成茎段的试管薯接种至基础培养基中培养，利用盐酸溶液调节pH后，在黑暗处培养后，接着将其进行光照培养，并加入制备的诱导剂，待培养一段时间后，即可完成对试管薯的诱导。本发明制备的试管薯质量高，单粒薯重为0.12～0.15a，诱导率达到85％以上，优质薯率达到98％以上。
【专利说明】
一种脱毒马铃薯试管薯的诱导方法
技术领域
[0001]本发明涉及一种脱毒马铃薯试管薯的诱导方法，属于试管薯制备技术领域。
【背景技术】
[0002]马铃薯试管薯是指在培养瓶内通过诱导，于试管苗叶腋间形成的直径为2—10毫米大小的块茎。试管薯不仅保持了试管苗的所有优点，而且由于体积小、重量轻，繁殖期间杜绝了外来病菌的再次侵染，具有贮藏、运输、种植方便的优点。因此，马铃薯试管薯的诱导与生产，对于马铃薯种质保存、种子交换、脱毒苗繁殖等方面都有重要意义。
[0003]采用植物组织培养工厂化生产进行马铃薯育种是国内国际应用的先进技术。现有培养技术分成两大部分:即指组织培养和试管薯诱导出薯两部分。这两部分可以直接一步进行，也可以分步诱导进行，先培养母苗，然后再加入诱导培养基诱导结薯。这两种方法各有优缺点，直接诱导有利于工厂化生产，减少中间环节，减少生长时间，减少污染，但是直接诱导的培养基到后期养分不足，会引起试管薯质量不高。结合直接诱导和分步诱导的优势，使用液体培养，即直接诱导培养，简化了生产工序，同时使用了营养缓释添加剂，解决了试管薯后期营养不足，造成试管薯个数不多，单薯质量不高等问题。
【发明内容】
[0004]本发明所要解决的技术问题:针对利用植物组织培养中的直接诱导的培养基到后期养分不足，导致试管薯质量不高，或者添加营养缓释添加剂，会造成试管薯个数不多，单薯质量不高等问题，提供了一种首先将MS培养基，腐植酸钠等物质混合，高温杀菌，制备基础培养基，再将剪成茎段的试管薯接种至基础培养基中培养，利用盐酸溶液调节PH后，在黑暗处培养后，接着将其进行光照培养，并加入制备的诱导剂，待培养一段时间后，即可完成对试管薯的诱导的方法。本发明制备的试管薯质量高，单粒薯重为0.12?0.15a，诱导率达到85%以上，优质薯率达到98%以上。
[0005]为解决上述技术问题，本发明采用如下所述的技术方案是:
(1)按重量份数计，取52?68份MS培养基、10?15份腐植酸钠、8?12份氯化铵、4?6份硝酸钾及10?15份质量分数为15%葡萄糖溶液，搅拌均匀后，将其放置于高温灭菌锅中，于150 0C下进行杀菌消毒，得基础培养基；
(2)取有7?9叶脱毒马铃薯试管薯，将其剪成带有I?2叶的茎段，取90mL上述制备的基础培养基放入150mL三角瓶中，向其中接种4?7个茎段，使用质量分数为10%盐酸溶液调节pH 至 6.0 ?6.5;
(3)待上述pH调节完成后，将三角瓶移至恒温培养箱中，设定温度为28?35°C，使用黑布将恒温培养箱遮盖，培养4?6天；
(4)待培养结束后，撤除黑布，使用光强为800?9001ux的白炽灯进行照射，同时向其中加入5?8mL上述制备的诱导液，每3?5h，增加光强200?250lux，同时增加诱导液2?4mL，待光强增加至2800?35001ux，将三角瓶移至自然光下照射8?12天，即可完成对脱毒马铃薯试管薯的诱导。
[0006]所述的诱导液是按重量份数计，取30?35份质量分数为20%蔗糖溶液、10?15份吲哚乙酸、25?30份碳灰、16?18份酪氨酸及40?50份蒸馏水，搅拌均匀制备而成。
[0007]本发明与其他方法相比，有益技术效果是:
(1)本发明制备的试管薯质量高，单粒薯重为0.12?0.15a，诱导率达到85%以上，优质薯率达到98%以上；
(2)本发明制备步骤简单，所需成本低。
【具体实施方式】
[0008]首先按重量份数计，取52?68份MS培养基、10?15份腐植酸钠、8?12份氯化铵、4?6份硝酸钾及10?15份质量分数为15%葡萄糖溶液，搅拌均匀后，将其放置于高温灭菌锅中，于150°C下进行杀菌消毒，得基础培养基；再取有7?9叶脱毒马铃薯试管薯，将其剪成带有I?2叶的茎段，取90mL上述制备的基础培养基放入150mL三角瓶中，向其中接种4?7个茎段，使用质量分数为10%盐酸溶液调节PH至6.0?6.5;待上述pH调节完成后，将三角瓶移至恒温培养箱中，设定温度为28?35°C，使用黑布将恒温培养箱遮盖，培养4?6天;待培养结束后，撤除黑布，使用光强为800?900Iux的白炽灯进行照射，同时向其中加入5?8mL上述制备的诱导液，每3?5h，增加光强200?2501ux，同时增加诱导液2?4mL，待光强增加至2800?35001UX，将三角瓶移至自然光下照射8?12天，即可完成对脱毒马铃薯试管薯的诱导。其中诱导液是按重量份数计，取30?35份质量分数为20%蔗糖溶液、10?15份吲哚乙酸、25?30份碳灰、16?18份酪氨酸及40?50份蒸馈水，搅拌均勾制备而成。
[0009]实例I
首先按重量份数计，取68份MS培养基、10份腐植酸钠、8份氯化铵、4份硝酸钾及10份质量分数为15%葡萄糖溶液，搅拌均匀后，将其放置于高温灭菌锅中，于150°C下进行杀菌消毒，得基础培养基；再取有9叶脱毒马铃薯试管薯，将其剪成带有2叶的茎段，取90mL上述制备的基础培养基放入150mL三角瓶中，向其中接种7个茎段，使用质量分数为10%盐酸溶液调节pH至6.5;待上述pH调节完成后，将三角瓶移至恒温培养箱中，设定温度为35°C，使用黑布将恒温培养箱遮盖，培养6天;待培养结束后，撤除黑布，使用光强为9001UX的白炽灯进行照射，同时向其中加入8mL上述制备的诱导液，每5h，增加光强2501ux，同时增加诱导液4mL，待光强增加至35001uX，将三角瓶移至自然光下照射12天，即可完成对脱毒马铃薯试管薯的诱导。其中诱导液是按重量份数计，取35份质量分数为20%蔗糖溶液、10份吲哚乙酸、25份碳灰、16份酪氨酸及40份蒸馏水，搅拌均匀制备而成。本发明制备的试管薯质量高，单粒薯重为0.12a，诱导率达到86%，优质薯率达到98.5%。
[0010]实例2
首先按重量份数计，取52份MS培养基、15份腐植酸钠、12份氯化铵、6份硝酸钾及15份质量分数为15%葡萄糖溶液，搅拌均匀后，将其放置于高温灭菌锅中，于150°C下进行杀菌消毒，得基础培养基；再取有7叶脱毒马铃薯试管薯，将其剪成带有I叶的茎段，取90mL上述制备的基础培养基放入150mL三角瓶中，向其中接种4个茎段，使用质量分数为10%盐酸溶液调节pH至6.0;待上述pH调节完成后，将三角瓶移至恒温培养箱中，设定温度为28°C，使用黑布将恒温培养箱遮盖，培养4天;待培养结束后，撤除黑布，使用光强为SOOlux的白炽灯进行照射，同时向其中加入5mL上述制备的诱导液，每3h，增加光强2001ux，同时增加诱导液2mL，待光强增加至28001uX，将三角瓶移至自然光下照射8天，即可完成对脱毒马铃薯试管薯的诱导。其中诱导液是按重量份数计，取30份质量分数为20%蔗糖溶液、10份吲哚乙酸、25份碳灰、18份酪氨酸及50份蒸馏水，搅拌均匀制备而成。本发明制备的试管薯质量高，单粒薯重为0.15a，诱导率达到87%，优质薯率达到98.8%。
[0011]实例3
首先按重量份数计，取60份MS培养基、10份腐植酸钠、8份氯化铵、4份硝酸钾及10份质量分数为15%葡萄糖溶液，搅拌均匀后，将其放置于高温灭菌锅中，于150°C下进行杀菌消毒，得基础培养基；再取有8叶脱毒马铃薯试管薯，将其剪成带有I叶的茎段，取90mL上述制备的基础培养基放入150mL三角瓶中，向其中接种6个茎段，使用质量分数为10%盐酸溶液调节pH至6.2;待上述pH调节完成后，将三角瓶移至恒温培养箱中，设定温度为30°C，使用黑布将恒温培养箱遮盖，培养5天;待培养结束后，撤除黑布，使用光强为8501UX的白炽灯进行照射，同时向其中加入7mL上述制备的诱导液，每4h，增加光强2201ux，同时增加诱导液3mL，待光强增加至30001UX，将三角瓶移至自然光下照射10天，即可完成对脱毒马铃薯试管薯的诱导。其中诱导液是按重量份数计，取32份质量分数为20%蔗糖溶液、12份吲哚乙酸、25份碳灰、18份酪氨酸及45份蒸馏水，搅拌均匀制备而成。本发明制备的试管薯质量高，单粒薯重为0.14a，诱导率达到85.6%，优质薯率达到99%。
【主权项】
1.一种脱毒马铃薯试管薯的诱导方法，其特征在于具体诱导步骤为: (1)按重量份数计，取52?68份MS培养基、10?15份腐植酸钠、8?12份氯化铵、4?6份硝酸钾及10?15份质量分数为15%葡萄糖溶液，搅拌均匀后，将其放置于高温灭菌锅中，于150 0C下进行杀菌消毒，得基础培养基； (2)取有7?9叶脱毒马铃薯试管薯，将其剪成带有I?2叶的茎段，取90mL上述制备的基础培养基放入150mL三角瓶中，向其中接种4?7个茎段，使用质量分数为10%盐酸溶液调节pH 至 6.0 ?6.5 ； (3)待上述pH调节完成后，将三角瓶移至恒温培养箱中，设定温度为28?35°C，使用黑布将丨旦温培养箱遮盖，培养4?6天； (4)待培养结束后，撤除黑布，使用光强为800?9001UX的白炽灯进行照射，同时向其中加入5?8mL上述制备的诱导液，每3?5h，增加光强200?250lux，同时增加诱导液2?4mL，待光强增加至2800?35001ux，将三角瓶移至自然光下照射8?12天，即可完成对脱毒马铃薯试管薯的诱导。2.根据权利要求1所述的一种脱毒马铃薯试管薯的诱导方法，其特征在于:所述的诱导液是按重量份数计，取30?35份质量分数为20%蔗糖溶液、10?15份吲哚乙酸、25?30份碳灰、16?18份酪氨酸及40?50份蒸馏水，搅拌均匀制备而成。
【文档编号】A01H4/00GK105875407SQ201610228461
【公开日】2016年8月24日
【申请日】2016年4月13日
【发明人】袁春华, 薛培龙, 宋奇
【申请人】袁春华