一种黄樟离体植株再生的方法
【专利摘要】本发明属于植物组织培养技术领域，具体涉及一种黄樟离体植株再生的方法。所述的黄樟离体植株再生的方法包含如下步骤：(1)外植体采集，(2)腋芽诱导，(3)增殖培养，(4)生根培养，(5)炼苗与移栽，(6)移栽幼苗管理。本发明以生长速度快、干型通直、材性优良、樟脑樟油含量高及抗逆性强的成年优良单株为母本，以基部萌枝为外植体，通过基本培养基选择、激素种类、浓度及其配比的筛选，建立其高效的离体植株再生快繁技术，达到增殖芽健壮伸长生长快、增值率高、生根率高、生根苗健壮、移栽成活率高的目的。
【专利说明】
一种黄樟离体植株再生的方法
技术领域
[0001]本发明属于植物组织培养技术领域，具体涉及一种黄樟离体植株再生的方法。
【背景技术】
[0002]黄棒(Cinnamomumporrectum(Roxb.)Kosterm.)隶属棒科(Lauraceae)棒属(Cinnamomum)，成年树高可达20m，胸径40cm以上。黄樟产自我国广州、广西、福建、江西、湖南、贵州、四川、云南等地。巴基斯坦、印度经马来西亚至印度尼西亚也有黄樟分布。
[0003]黄樟为常绿乔木，其树姿秀丽，主干明显而通直光滑，生长快速，其胸径年平均生长量比香樟大50%，材积大100%，是优良的速生树种。黄樟木材纹理通直，结构均匀细致，稍重而韧，易于加工，纵切面平滑，干燥后少开裂，且不变性，含油或粘液很丰富，各切面均极油润，耐腐防蛀，且富有香气，是一种贵重木材，也是造船、家具和工艺美术品的绝佳用材。黄樟枝繁叶茂，四季常青，耐修剪，可造型；叶片较大，叶色浓绿，有光泽，秋末时分有部分老叶呈桔红色，较为美观，是优良的园林造景树种，亦可作行道树。黄樟树冠高大，能遮阳蔽日，可滞尘吸音，净化空气，具有优良的生态价值。黄樟的枝叶富含樟脑、樟油，是提制樟脑和蒸取樟油原材料。樟脑有兴奋、强心、消炎、镇痛、抗菌、止咳、促渗等药理作用，多用于医药上，樟油被广泛应用于香料工业、医药卫生等领域，随着现代化工、医药工业的发展进步，人们对天然樟脑、樟油的需求越来越大。
[0004]黄樟具有良好的材用、观赏、生态和经济价值，近年栽培和造林面积不断扩大。但目前黄樟人工栽培所用苗木都是采用种子苗造林，来自不同种源、家系种子的遗传变异，导致黄樟苗木及其造林后的林分的生长速度、木材质量、精油含量等相差很大，从而影响到林地经营的产量及经济效益。选择优良母本进行组培规模化育苗，实现良种无性化推广是黄樟这一优良树种产业化开发的重要途径。
[0005]目前，黄樟的组织培养技术未见报道。
【发明内容】
[0006]为了克服现有技术的不足和缺点，本发明的首要目的在于提供一种黄樟离体植株再生的方法，该方法具有不定芽诱导快、增殖倍率高、芽粗壮伸长快、生根率高、生根苗根系发达健壮、移栽成活率高等特点。
[0007]本发明的另一目的在于提供上述方法的应用。
[0008]本发明的目的通过下述技术方案实现:
[0009]—种黄樟离体植株再生的方法，包含如下步骤:
[0010](I)外植体采集:取黄樟树干基部萌枝，作为外植体，然后消毒；
[0011](2)腋芽诱导:将步骤(I)消毒后的外植体接种到诱导培养基进行诱导培养，得到腋芽；
[0012](3)增殖培养:将步骤(2)培养得到的腋芽转接到增殖培养基上进行增殖培养，得到增殖苗；
[0013](4)生根培养:从步骤(3)培养得到的增殖苗中切取顶芽转接到生根培养基上进行生根培养，得到组培生根苗；
[0014](5)炼苗与移栽:将步骤(4)培养得到的组培生根苗移到温室炼苗移栽，得到容器苗；
[0015](6)移栽幼苗管理；
[0016]步骤(I)中所述的黄樟优选为:干型通直圆满、树姿秀丽、生长速度快、富含樟脑和樟油、无病虫害的优良黄樟单株为母本；
[0017]步骤(I)中所述的黄樟优选为种植时间不小于15年的黄樟；
[0018]步骤(I)中优选对黄樟进行基部环割以促进基部萌枝；
[0019]步骤(I)中外植体采集前，优选每隔7?1d用多菌灵、百菌清交替喷洒萌枝4?5次；
[0020]步骤(I)中所述的外植体采集的时间优选为秋季(9?11月)；
[0021]步骤(I)中所述的外植体优选为:半木质化萌枝去叶后切成带I?2个叶腋的茎段；
[0022]所述的茎段的长度优选为2?4cm;
[0023]步骤(I)中所述的消毒的方式优选为:将外植体清洗后，依次用新洁尔灭溶液、乙醇溶液和升汞溶液浸泡消毒并再次清洗；
[0024]步骤(I)中所述的消毒的方式进一步优选为:
[0025]①将外植体用水清洗后，用体积分数为0.1 %的新洁尔灭溶液刷洗3?7min，再用无菌水冲洗I?2次；
[0026]②将步骤①中冲洗后的外植体用体积分数为70?75%的乙醇溶液浸泡20?30s，再用无菌水冲洗I?2次；
[0027]③将步骤②中冲洗后的外植体加入质量分数为0.05%?0.1 %的升汞溶液中浸泡3?1min，其间不断摇动，再用无菌水冲洗5?6次;具体浸泡时间，依据外植体幼嫩程度确定；
[0028]步骤(2)中所述的消毒后的外植体优选切除叶柄、茎段两端受伤部位后，再接种到诱导培养基中；
[0029]步骤(2)中所述的诱导培养基包含MH基本培养基以及6-BA 0.1?1.0mg/L、NAA
0.01?0.lmg/L、鹿糖25?40g/L和卡拉胶7?8g/L，诱导培养基的pH为5.8?6.0 ；
[0030]步骤(2)中所述的诱导培养的条件优选为温度为25±2°C，光照(60μπιΟ1.πΓ^s+1)时间为8?12h/d;
[0031]步骤(2)中所述的诱导培养的条件进一步优选为温度为25±2°C，光照(60μπιΟ1.πι—2.s—O 时间为12h/d;
[0032]步骤(2)中所述的诱导培养的时间优选为20?30d；
[0033]步骤(3)中所述的腋芽的高度为不小于2cm;
[0034]步骤(3)中所述的腋芽优选截成1.0?1.5cm的茎段再转接到增殖培养基上；
[0035]步骤(3)中所述的增殖培养基包含MH基本培养基以及6-BA 0.5?2mg/L、KT 0.3?lmg/L,NAA 0.05?0.2mg/L、蔗糖25?40g/L和琼脂5?6g/L，增殖培养基的pH为5.8?6.0 ；
[0036]步骤(3)中所述的增殖培养的条件优选为25±2°C，光照(60μπιο1.m—2.s—1)时间为8?12h/d;
[0037]步骤(3)中所述的增殖培养的条件进一步优选为25±2°C，光照(60ymol.m—2.s一 O时间为12h/d;
[0038]步骤(3)中所述的增殖培养的的时间优选为20?30d；
[0039]步骤(4)中所述的顶芽的长度优选为2.0?3.0cm；
[0040]步骤(4)中所述的生根培养基包含1/2MH基本培养基以及NAA0.1?0.5mg/L、蔗糖15?20g/L、琼脂5?6g/L，生根培养基的pH为5.8?6.0 ；
[0041 ]步骤(4)中所述的生根培养的条件优选为25 ± 2 °C，光照(60μπιοI.m—2.s—1)时间为8?12h/d;
[0042]步骤(4)中所述的生根培养的条件进一步优选为25±2°C，光照(60μηιο1.m—2.s一O时间为12h/d;
[0043 ]步骤(4)中所述的生根培养的时间优选为15?20d;
[0044]所述1/2MH基本培养基为将MH基本培养基中所含大量元素，包括NH4NO3、ΚΝ03、CaCl2.2H20、MgS04.7H20、KH2P04的用量减半，其余成分不变；
[0045]所述的MH基本培养基包含如下组分:
[0046]720mg/L NH4NO3、1800mg/L KN03、340mg/L CaCl2.2H20、200mg/L Ca(N03)2、370mg/L MgSO4.7H20、170mg/L KH2PO4、22.3mg/L MnSO4.4H20、8.6mg/L ZnSO4.7H20、6.2mg/L H3B03、0.83mg/L K1、0.25mg/L Na2Mo04.2H2CK0.025mg/L CuSCU.5出0、0.025mg/L CoCl2、27.8mg/L FeSO4.7H20、37.3mg/L Na2.EDTA.H2O、lOOmg/L Myo-1nsitol (肌醇)、2.0mg/L Glycine(甘氨酸)、0.lmg/L Thiamine.HCl (维生素BI)、0.5mg/L Nicotinic.acid(烟酸)、0.5mg/L Pyridoxine.HCl(维生素B6)，MH基本培养基的pH为5.8;
[0047]步骤(5)所述的炼苗移栽的方式优选为:将组培生根苗移到温室中适应外界环境5?7d，然后将组培瓶盖从半开到全开炼苗I?2d，将组培苗小心取出，洗净粘于根上的培养基，移栽到混合基质中，移栽完后淋透定根水；
[0048]所述的混合基质优选为:泥炭土与珍珠岩按照体积比为3: I混合；
[0049]所述的混合基质使用前优选用质量分数为I?2%。的高锰酸钾灭菌；
[0050]步骤(6)中所述的移栽幼苗管理的方式优选为:移栽后第一周采用盖塑料膜保湿，随后揭开薄膜，保持基质湿润，空气相对湿度在95%以上，控制培养温度15?30°C，荫棚用70%的遮光网遮光;在移栽后当天采用质量体积百分比浓度0.1 %的百菌清或多菌灵溶液喷施小苗，之后每隔7?10天喷雾一次;移栽后待幼苗生长稳定，长出新芽和新根后，喷施质量体积百分比浓度I?2%。的复合肥，根据幼苗生长状况，每隔7?10天喷施一次，并逐步增加光照强度，直到进行全光照常规管理；
[0051 ]本发明的原理:本发明以生长速度快、干型通直、材性优良、樟脑樟油含量高及抗逆性强的成年优良单株为母本，以基部萌枝为外植体，通过基本培养基选择、激素种类、浓度及其配比的筛选，建立其高效的离体植株再生快繁技术，达到增殖芽健壮伸长生长快、增值率高、生根率高、生根苗健壮、移栽成活率高的目的。上述黄樟成年优树的高效离体植株再生方法，外植体的腋芽诱导率高达100%;增殖系数达10.5以上，增殖芽伸长生长快，培养20?30d芽高达3?4cm;生根率可达96%，平均根数为3.4根/株;组培生根苗健壮、移栽成活率高达93%。
[0052]本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果:
[0053](I)本发明提供的黄樟离体植株再生的方法诱导速度快、诱导率高;殖系数大、丛芽粗壮、伸长生长快;生根率高，根系发达，生根苗粗壮、移栽成活率高，苗木生长健壮整齐。
[0054](2)本发明操作简单，陈本低，易于大规模推广使用，通过规模化育苗，将为我国黄樟优良单株的无性化推广提供技术支持，为提升黄樟人工林经济效益提供优质种苗保障，有着极其重大的意义。
【附图说明】
[0055]图1是实施例1优树无菌材料的腋芽诱导的结果图。
[0056]图2是实施例1诱导腋芽形成的芽丛的形态图。
[0057]图3是实施例1增殖培养基中的增殖苗的形态图。
[0058]图4是实施例1生根培养基中的组培生根苗的形态图。
[0059]图5是实施例1生根培养基中的组培生根苗的根系形态图。
[0060]图6是实施例1生根移栽苗的形态图。
【具体实施方式】
[0061]下面结合实施例及附图对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。
[0062]根据黄樟优树嫩枝的生理状态、离体培养的营养需求设计MH基本培养基，以下实施例中涉及到的MH基本培养基的配方如下:
[0063]720mg/L NH4NO3、1800mg/L KN03、340mg/L CaCl2.2H20、200mg/L Ca(N03)2、370mg/L MgSO4.7H20、170mg/L KH2PO4、22.3mg/L MnSO4.4H20、8.6mg/L ZnSO4.7H20、6.2mg/L H3B03、0.83mg/L K1、0.25mg/L Na2Mo04.2H2CK0.025mg/L CuSCU.5出0、0.025mg/L CoCl2、27.8mg/L FeSO4.7H20、37.3mg/L Na2.EDTA.H2O、lOOmg/L Myo-1nsitol (肌醇)、2.0mg/L Glycine(甘氨酸)、0.lmg/L Thiamine.HCl (维生素BI)、0.5mg/L Nicotinic.acid(烟酸)、0.5mg/L Pyridoxine.HCl(维生素B6);其pH值为5.8;
[0064]所述的I /2MH基本培养基为将MH基本培养基中所含大量元素(NH4NO3、KNO3、CaCl2.2H20,MgSO4.7H20、KH2P04)的用量减半，其余成分不变。
[0065]实施例1一种黄樟成年优良单株的高效离体植株再生方法
[0066](I)外植体采集和消毒:选取干型通直圆满、树姿秀丽、生长速度快、富含樟脑和樟油、无病虫害、树龄15年以上的黄樟优良单株为母本，将所选优树进行基部环割促进基部萌枝，采集外植体前，每隔7d用多菌灵、百菌清交替喷洒萌枝5次；10月份天气晴朗的上午10时左右，剪取树干基部半木质化萌枝，去叶后保湿处理后带回实验室，用纯净水清洗干净置4°(:冰箱保存备用;然后将枝条剪成4cm长、带2个叶腋的茎段，在超净工作台上先用无菌水擦洗干净，再用体积分数0.1 %的新洁尔灭溶液轻轻刷洗7min，随后用无菌水冲洗2次;在体积分数为70 %的酒精中浸泡20s，倒掉酒精后无菌水冲洗2次;然后加入质量分数0.1 %的升汞溶液，浸泡5min，其间不断摇动，倒掉升汞溶液用无菌水冲洗5次，用无菌滤纸吸干无菌材料表面水珠备用；
[0067](2)腋芽诱导培养:将步骤(I)消毒好的带叶腋茎段切除叶柄、茎段两端受伤部位，随后接种到诱导培养基(MH+0.5mg/L 6-BA+0.05mg/L NAA+蔗糖30g/L+卡拉胶8g/L(激素购自Sigma-Aldrich公司)，pH为5.8)中进行诱导培养(培养温度为25°C，光照(60μηιο1.m—2.s1)时间为12h/d)，每瓶接种一个外植体;诱导培养4?5d之后，叶柄开始松动脱落，腋芽萌动，诱导培养25d后一个叶腋能萌出多个腋芽(图1、图2)，腋芽平均高度为3.5cm，诱导率为100% ；
[0068](3)丛芽增殖培养:将步骤(2)培养得到的腋芽截成1.0?1.5cm的茎段转接入增殖培养基(MH+6-BA 1.0mg/L+KT 0.5mg/L+NAA 0.lmg/L+蔗糖30g/L+琼脂6g/L，pH为5.8)中进行增殖培养(培养温度为25°C，光照(60ymol.m—2.s—O时间为12h/d)，增殖培养30d后，单芽形成增殖苗(芽丛)，芽伸长生长快，增殖系数和有效芽(芽高3 2cm)分别高达10.5和9.61个/丛(图3);
[0069](4)生根培养:从步骤(3)培养得到的增殖苗中切取健壮的有效顶芽，长度为2cm，转接到生根培养基(1/2MH+NAA 0.3mg/L+蔗糖15g/L+琼脂6g/L，pH为5.8)中进行生根培养(培养温度为25°C，光照(60ymol.m—2.s—O时间为12h/d)，生根培养20d后，得到组培生根苗；其中，不定根的诱导率为96%，平均根数3.4条/株(图4、图5);
[0070](5)炼苗与移栽:将步骤(4)培养得到的组培生根苗移到温室中适应外界环境7d，然后将组培瓶盖从半开到全开炼苗ld，将组培苗小心取出，洗净粘于根上的培养基，移栽到用质量分数为1%。的高锰酸钾灭过菌的泥炭土与珍珠岩体积比为3:1的混合基质中，该移栽成活率为93% (图6);
[0071](6)移栽幼苗管理:移栽后第一周采用盖塑料膜保湿，随后揭开薄膜，保持基质湿润，空气相对湿度在95%以上，控制培养温度30°C，荫棚用70 %的遮光网遮光；在移栽后当天采用质量体积百分比浓度0.1%的百菌清溶液喷施小苗，之后每隔10天喷雾一次;移栽后待幼苗生长稳定，长出新芽和新根后，喷施质量体积百分比浓度1%。的复合肥，根据幼苗生长状况，每隔7天喷施一次，并逐步增加光照强度，直到进行全光照常规管理。
[0072]实施例2—种黄樟成年优良单株的高效离体植株再生方法
[0073](I)外植体采集和消毒:选取干型通直圆满、树姿秀丽、生长速度快、富含樟脑和樟油、无病虫害、树龄15年以上的黄樟优良单株为母本，将所选优树进行基部环割促进基部萌枝，采集外植体前，每隔Sd用多菌灵、百菌清交替喷洒萌枝5次;9月份天气晴朗的上午10时左右，剪取树干基部半木质化萌枝，去叶后保湿处理后带回实验室，用纯净水清洗干净置4°(:冰箱保存备用;然后将枝条剪成3cm长、2个带叶腋的茎段，在超净工作台上先用无菌水擦洗干净，再用体积分数为0.1 %的新洁尔灭溶液轻轻刷洗5min，随后用无菌水冲洗I次;在体积分数为70%的酒精中浸泡30s，倒掉酒精后无菌水冲洗I次，然后加入质量分数为0.05%的升汞溶液，浸泡3min，其间不断摇动，倒掉升汞溶液用无菌水冲洗5次，无菌滤纸吸干无菌材料表面水珠备用；
[0074](2)腋芽诱导培养:将步骤(I)消毒好的带叶腋茎段切除叶柄、茎段两端受伤部位，然后接种到诱导培养基(MH+0.lmg/L 6-BA+0.01mg/L NAA+蔗糖25g/L+卡拉胶7.5g/L(激素购自Sigma-Aldrich公司)，pH为5.9)中进行诱导培养(培养温度为25°C，光照(60μηιο1.m—
2.s_1)时间为12h/d)，每瓶接种一个外植体;诱导培养5?6d之后，叶柄开始松动脱落，腋芽萌动，诱导培养20d后一个叶腋能萌出多个腋芽，腋芽平均高度为2.9cm，诱导率为95% ;
[0075](3)丛芽增殖培养:将步骤(2)培养得到的腋芽截成1.0?1.5cm的茎段转接入增殖培养基(MH+6-BA 0.5mg/L+KT 0.3mg/L+NAA0.05mg/L+蔗糖40g/L+琼脂5g/L，pH为5.9)中进行增殖培养(培养温度为25°C，光照(60μπιο1.πΓ2.s—O时间为12h/d)，增殖培养20d后，单芽形成增殖苗(芽丛)，芽伸长生长快，增殖系数和有效芽(芽高3 2cm)分别高达7.82和6.3个/丛；
[0076](4)生根培养:从步骤(3)培养得到的增殖苗中切取健壮的有效顶芽，长度为3cm，转接到生根培养基(1/2MH+NAA 0.3mg/L+蔗糖20g/L+琼脂5g/L，pH为6.0)中进行生根培养(培养温度为25 0C，光照(60μπιοI.m—2.s—1)时间为12h/d)，生根培养15d后，得到组培生根苗；其中，不定根的诱导率为90%，平均根数2.8条/株；
[0077](5)炼苗与移栽:将步骤(4)培养得到的组培生根苗移到温室中适应外界环境5d，然后将组培瓶盖从半开到全开炼苗ld，将组培苗小心取出，洗净粘于根上的培养基，移栽到用质量分数为1%。的高锰酸钾灭过菌的泥炭土与珍珠岩体积比为3:1的混合基质中，该移栽成活率为93%;
[0078](6)移栽幼苗管理:移栽后第一周采用盖塑料膜保湿，随后揭开薄膜，保持基质湿润，空气相对湿度在95%以上，控制培养温度25°C，荫棚用70 %的遮光网遮光；在移栽后当天采用质量体积百分比浓度0.1%的百菌清溶液喷施小苗，之后每隔10天喷雾一次;移栽后待幼苗生长稳定，长出新芽和新根后，喷施质量体积百分比浓度2%。的复合肥，根据幼苗生长状况，每隔7天喷施一次，并逐步增加光照强度，直到进行全光照常规管理。
[0079]实施例3—种黄樟成年优良单株的高效离体植株再生方法
[0080](I)外植体采集和消毒:选取干型通直圆满、树姿秀丽、生长速度快、富含樟脑和樟油、无病虫害、树龄15年以上的黄樟优良单株为母本，将所选优树进行基部环割促进基部萌枝，采集外植体前，每隔1d用多菌灵、百菌清交替喷洒萌枝4次；11月份天气晴朗的上午10时左右，剪取树干基部半木质化萌枝，去叶后保湿处理后带回实验室，用纯净水清洗干净置4°C冰箱保存备用;然后将枝条剪成2cm长、I个带叶腋的茎段，在超净工作台上先用无菌水擦洗干净，再用体积分数为0.1 %的新洁尔灭溶液轻轻刷洗3min，随后用无菌水冲洗I次;在体积分数为75 %的酒精中浸泡30s，倒掉酒精后无菌水冲洗I次;然后加入质量分数为0.1 %的升汞溶液，浸泡8min，其间不断摇动，倒掉升汞溶液用无菌水冲洗6次，无菌滤纸吸干无菌材料表面水珠备用；
[0081](2)腋芽诱导培养:将步骤(I)消毒好的带叶腋茎段切除叶柄、茎段两端受伤部位，然后接种到诱导培养基(MH+1.0mg/L 6-BA+0.lmg/L NAA+蔗糖40g/L+卡拉胶7g/L(激素购自Sigma-Aldrich公司)，pH为6.0)中进行诱导培养(培养温度为25°C，光照(60ymol.m—2.s
1)时间为12h/d)，每瓶接种一个外植体;诱导培养4?5d之后，叶柄开始松动脱落，腋芽萌动，诱导培养30d后一个叶腋能萌出多个腋芽，腋芽平均高度为3.7cm，诱导率为91 % ;
[0082](3)丛芽增殖培养:将步骤(2)培养得到的腋芽截成1.0?1.5cm的茎段转接入增殖培养基(MH+6-BA 2.0mg/L+KT lmg/L+NAA0.2mg/L+蔗糖25g/L+琼脂6g/L，pH为6.0)中进行增殖培养(培养温度为25 0C，光照(60μπιο1.m—2.s—1)时间为12h/d)，增殖培养25d后，单芽形成增殖苗(芽丛)，芽伸长生长快，增殖系数和有效芽(芽高3 2cm)分别达9.7和8.64个/丛；
[0083](4)生根培养:从步骤(3)培养得到的增殖苗中切取健壮的有效顶芽，长度为2cm，转接到生根培养基(1/2MH+NAA0.5mg/L+蔗糖15g/L+琼脂6g/L，pH为5.9)中进行生根培养(培养温度为25°C，光照(60ymol.m—2.s—O时间为12h/d)，生根培养20d后，得到组培生根苗；不定根的诱导率为98%，平均根数2.3条/株；
[0084](5)炼苗与移栽:将步骤(4)培养得到的组培生根苗移到温室中适应外界环境5d，然后将组培瓶盖从半开到全开炼苗ld，将组培苗小心取出，洗净粘于根上的培养基，移栽到用质量分数为2%。高锰酸钾灭过菌的泥炭土与珍珠岩体积比为3:1的混合基质中，该移栽成活率为93%;
[0085](6)移栽幼苗管理:移栽后第一周采用盖塑料膜保湿，随后揭开薄膜，保持基质湿润，空气相对湿度在95%以上，控制培养温度20°C，荫棚用70 %的遮光网遮光；在移栽后当天采用质量体积百分比浓度0.1%的百菌清溶液喷施小苗，之后每隔10天喷雾一次;移栽后待幼苗生长稳定，长出新芽和新根后，喷施质量体积百分比浓度1%。的复合肥，根据幼苗生长状况，每隔7天喷施一次，并逐步增加光照强度，直到进行全光照常规管理。
[0086]上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。
【主权项】
1.一种黄樟离体植株再生的方法，其特征在于包含如下步骤: (1)外植体采集:取黄樟树干基部萌枝，作为外植体，然后消毒； (2)腋芽诱导:将步骤(I)消毒后的外植体接种到诱导培养基进行诱导培养，得到腋芽； (3)增殖培养:将步骤(2)培养得到的腋芽转接到增殖培养基上进行增殖培养，得到增殖苗； (4)生根培养:从步骤(3)培养得到的增殖苗中切取顶芽转接到生根培养基上进行生根培养，得到组培生根苗； (5)炼苗与移栽:将步骤(4)培养得到的组培生根苗移到温室炼苗移栽，得到容器苗； (6)移栽幼苗管理。2.根据权利要求1所述的黄樟离体植株再生的方法，其特征在于: 步骤(I)中所述的外植体采集的时间为9?11月。3.根据权利要求1所述的黄樟离体植株再生的方法，其特征在于: 步骤(I)中所述的外植体为:半木质化萌枝去叶后切成带I?2个叶腋的茎段。4.根据权利要求1所述的黄樟离体植株再生的方法，其特征在于: 步骤(2)中所述的诱导培养基包含MH基本培养基以及6-BA 0.1?1.0mg/L、NAA 0.0l?0.lmg/L、鹿糖25?40g/L和卡拉胶7?8g/L，诱导培养基的pH为5.8?6.0。5.根据权利要求1所述的黄樟离体植株再生的方法，其特征在于: 步骤(3)中所述的增殖培养基包含MH基本培养基以及6-BA 0.5?2mg/L、KT 0.3?lmg/L、NAA 0.05?0.2mg/L、蔗糖25?40g/L和琼脂5?6g/L，增殖培养基的pH为5.8?6.0。6.根据权利要求1所述的黄樟离体植株再生的方法，其特征在于: 步骤(4)中所述的生根培养基包含1/2MH基本培养基以及NAA 0.1?0.5mg/L、蔗糖15?20g/L、琼脂5?6g/L，生根培养基的pH为5.8?6.0。7.根据权利要求4?6任一项所述的黄樟离体植株再生的方法，其特征在于: 所述的MH基本培养基包含如下组分: 720mg/L NH4N03、1800mg/L KN03、340mg/L CaCl2.2H20、200mg/L Ca(NO3)2、370mg/LMgSO4.7H20、170mg/L KH2PO4、22.3mg/L MnSO4.4H20、8.6mg/L ZnSO4.7H20、6.2mg/LH3B03、0.83mg/L K1、0.25mg/L Na2MoO4.2H20、0.025mg/L CuSO4.5H20、0.025mg/L C0CI2、27.8mg/L FeSCU.7Η2θ、37.3mg/L Na2.EDTA.H2O、lOOmg/L Myo-1nsitol、2.0mg/LGlycine、0.lmg/L Thiamine.HCl、0.5mg/L Nicotinic.acid、0.5mg/L Pyridoxine.HCl，MH基本培养基的pH为5.8。8.根据权利要求1所述的黄樟离体植株再生的方法，其特征在于: 步骤(2)中所述的诱导培养的条件为温度为25±2°C，光照时间为8?12h/d; 步骤⑶中所述的增殖培养的条件为25 ± 2 °C，光照时间为8?12h/d; 步骤⑷中所述的生根培养的条件为25 ± 2 °C，光照时间为8?12h/d。9.根据权利要求1所述的黄樟离体植株再生的方法，其特征在于: 步骤(5)所述的炼苗移栽的方式为:将组培生根苗移到温室中适应外界环境5?7d，然后将组培瓶盖从半开到全开炼苗I?2d，将组培苗取出，洗净粘于根上的培养基，移栽到混合基质中，移栽完后淋透定根水。10.根据权利要求1所述的黄樟离体植株再生的方法，其特征在于: 步骤(6)中所述的移栽幼苗管理的方式为:移栽后第一周采用盖塑料膜保湿，随后揭开薄膜，保持基质湿润，空气相对湿度在95 %以上，控制培养温度15?300C，荫棚用70%的遮光网遮光;在移栽后当天采用质量体积百分比浓度0.1 %的百菌清或多菌灵溶液喷施小苗，之后每隔7?10天喷雾一次;移栽后待幼苗生长稳定，长出新芽和新根后，喷施质量体积百分比浓度I?2%。的复合肥。
【文档编号】A01H4/00GK105900834SQ201610228167
【公开日】2016年8月31日
【申请日】2016年4月12日
【发明人】邓小梅, 白红娟, 奚如春, 鲁好君, 赵帅, 陈晓阳
【申请人】华南农业大学