专利名称：在液体中贮藏植物培养组织的方法
技术领域：
本发明涉及植物组织贮藏的方法，适用于农业、林业等通过组织培养大规模生产植物的方法。
最近，通过植物组织在培养容器中营养性繁殖或增殖来形成大量克隆小植株的组织培养技术已被广泛用作繁殖能营养性繁殖的花和作物以及大量具有优良性状的植物个体的方法，该技术有显著的效果，例如产物均一且产量高。
另一方面，许多植物根据季节有不同的要求，而且许多植物幼苗的种植时间局限于一年中的特定时间。因此，在用组织培养大规模生产克隆小植株的情况下，考虑到这些要求和合适的种植时间，需要一次性全部产生种植所需量的这些小植株，并要统一地调校它们的生长阶段，以满足某一特定的时间要求。为实现该目的，需要雇佣大量人力开足全部设备来进行生产。而且，这种生产只是在非常有限的时间内(每年大约3个月)才需要。在上述情况下，尽管大规模生产组织培养小植株的技术有上述优点，但导致高成本，因为工人和设备不可能进行有效的工作，而且也很难根据计划来进行生产。
为了解决这一问题，需要有一种贮藏方法，在该方法中，使培养的植物组织的增殖(即组织的形态发生和生长)受抑制一段时间，然后再任选地使植物组织增殖。已知的贮藏方法例如有，低温低营养物状态下贮藏的方法，减压或低氧下贮藏的方法，以及用石腊或矿物油贮藏的方法。然而，这些方法所存在的问题是，即使当植物组织再次置于增殖条件下，该植物组织还需要一段时间才能开始重新增殖，或是增殖率本身很低。因此，这些方法适用于对贮藏后组织产量没有严格要求的场合，例如贮藏植物基因来源等目的，但是这些方法并不适用于大规模生产组织培养小植株的目的。
鉴于上述问题，本发明的一个目的是提供一种贮藏植物组织的方法，其中贮藏一定时间后的植物组织能以高的增殖率迅速开始重新增殖。
在作了广泛的研究后，本发明者发现，通过将植物组织培养获得的枝条于阴凉暗处贮藏在含有细胞激动素和碳源的液体培养基中，就可实现上述目的，从而完成了本发明。
即，本发明涉及一种将植物枝条贮藏在液体中的方法，该方法包括，将植物组织培养获得的枝条贮藏在含有细胞激动素和碳源的植物组织培养用的液体培养基中，所述贮藏在4-10℃的温度下、1微摩尔/平方米/秒或更低的光强下进行。
另外，本发明涉及一种大规模生产植物的方法，该方法包括，在枝条增殖的条件下，重新培养并增殖根据上述贮藏方法贮藏的植物枝条，并使该植物枝条生根再生成植物。
下面将详细描述本发明。
本发明中的贮藏指维持植物组织处于增殖(即形态发生或生长)受抑制或停止状态下至少1个月。
本发明的目标植物可以是任何种类的植物。然而，木质植物通常比草本植物生长得慢，并且难以进行营养性繁殖，因此在进行大规模组织培养生产时，获得的效果是显著的。因此，当将本发明应用于木质植物时，预计还能获得更为显著的效果。
另一方面，在本发明中，用组织培养获得的枝条作为贮藏材料实现了本发明目的。枝条包括从不定芽伸出的枝条，从多枝条(multiple shoot)获得的芽伸出的枝条，枝条原基等。多枝条指在合适条件下从定芽或不定芽衍生出的组织，该组织分化出多个芽。多枝条增殖非常活跃，并分化成多个芽。因此，当用组织培养来大规模生产木质植物的克隆小植株时，有效的方法是首先从木质植物组织诱导出多枝条，使这些多枝条增殖，收集多枝条的枝条，然后将这些枝条用于植物再生。
从木质植物组织引导出多枝条通常通过下列步骤来进行。首先，收集植物组织的顶芽或侧芽，然后将它们浸在具有0.4-2％氯的次氯酸钠水溶液10-30分钟，对它们的表面进行消毒。然后，在无菌条件下，用无菌水清洗这些芽，并将它们插入固体培养基中以使芽解开，然后将伸长的枝条传代培养在组成相同的培养基中，形成多枝条。在桉树(Eucalyptus)或金合欢(Acacia)属腋芽情况下，较佳的是采用Murashige-Skoog培养基(Murashige and Skoog(1962)，下文称“MS”培养基)，该培养基含有0.02-1.0毫克/升苄基氨基嘌呤(下文称“BAP”)或激动素(下文称“kin”)作为植物激素，10-50克/升蔗糖以及0.2-0.3％(重量/体积)吉兰糖胶或0.6-1.0％(重量/体积)琼脂，或是将MS培养基中硝酸铵和硝酸钾组分减少一半产生的改进的MS培养基。通过将多枝条适当分开，并再次置于具有相同组成的培养基中对它们进行传代培养，就可以维持并增殖这样诱导产生的多枝条。
在基部处切下多枝条等伸出的枝条并贮藏。此时，选择有4或5个结节具有腋芽或腋芽原基的枝条作为贮藏枝条对于大规模生产克隆幼小植株很有效的，因为贮藏后在增殖条件下重新培养时能产生近10个枝条。另外，用于贮藏的先前切下的枝条顶芽在贮藏后加速从腋芽处伸出枝条。就来自多枝条的枝条而言，长约5厘米的枝条含有4或5个有腋芽或腋芽原基的结节，因此是适合贮藏的。当传代培养多枝条进行维持和增殖时，这些枝条的选择及其贮藏提供了迅速的方法，以满足在增殖条件下通过重新培养枝条来大规模生产克隆小植株的要求。在枝条贮藏期间，枝条可以有或没有叶子，但是叶子会在贮藏期间凋谢掉落，飘落到液体培养基中缠绕住枝条，从而使枝条转移到增殖条件的操作变得复杂。另一方面，当贮藏预先除去叶子的枝条时，一个容器内可以贮藏多得多的枝条。而且，除去了叶子的枝条比贮藏带叶子的枝条能贮藏更长的时间。因此，较佳的是贮藏前除去叶子。
根据本发明，将如此制得的枝条贮藏在含有细胞激动素和碳源的植物组织培养用液体培养基中，从而为组织表面提供充分的必需营养物。这是因为这些枝条即使在贮藏期间其生命活动也没有完全停止，而是仍然有一定程度的生命活动。尤其是当贮藏用液体培养基中没有加入细胞激动素时，形成枝条的能力没有复原，因此即使在贮藏后将枝条置于增殖条件下重新培养时，从腋芽形成枝条的速度也会变得很慢。另外，不加入碳源会导致枝条在贮藏时枯萎。
较佳的细胞激动素加入量因贮藏的植物种类以及细胞激动素种类而异，但是本发明的目的通过可以0.05-0.5毫克/升的用量来实现。BAP和kin很容易购得，并容易用作细胞激动素。
作为碳源，通常采用的是蔗糖。然而，也可采用其它碳源。其例子包括单糖(例如，葡萄糖、果糖等)、寡糖(如麦芽糖、纤维二糖、蜜三糖等)、多糖(如可溶性淀粉、糊精等)，在很少情况下，要用有机酸，这取决于植物的种类。在蔗糖情况下，5-40克/升的加入量就足以实现本发明的目的。
作为用于植物组织培养物的液体培养基，可使用已知的用于植物组织培养的基础培养基本身或是适当稀释后的培养基，如MS培养基、Gamborg B5培养基等，这取决于待贮藏的植物种类。例如，在桉树(Eucalyptus)或金合欢(Acacia)属情况下，MS培养基可作1-10倍的稀释。
在本发明中，贮藏植物枝条是浸没在液体培养基中或漂浮在液体培养基与空气间的界面上。在以浸没在液体培养基中的形式贮藏枝条时，较佳的是将空气通入液体培养基中，以防止组织玻璃化(变成有水泡的组织；其外观通常变得半透明)。
作为贮藏容器，任何能在贮藏期间保持无菌条件的容器均可使用，其没有限制。然而，考虑到贮藏空间，较佳的是用塑料袋作为容器。例如，当将塑料袋制成封套等形状并用作贮藏用容器时，可将它们铺开并在垂直方向上堆积，从而节省了大量贮藏空间。在要贮藏大量枝条时，这是非常有利的。
贮藏容器的塑料材料是任何柔软的塑料膜，它们能通过密封形成袋状，其内部能如上所述那样在贮藏时维持在无菌条件下，只要当塑料形成贮藏容器时，它对作为内含物的含有细胞激动素和碳源的植物组织培养用液体培养基以及植物枝条没有不利影响。其中，用作本发明贮藏容器的较佳材料是最容易获得的聚乙烯塑料膜，或是具有透气性并有耐热性能经受高压蒸汽处理的氟化树脂(下文称“PFA”)。尤其是，当用PFA膜作为材料制成贮藏容器时，由于它有透气性，空气能进入内含的液体培养基中，因此即使当枝条浸没在培养基中进行贮藏时，也能防止枝条玻璃化。
在本发明中，植物枝条贮藏在最适合植物的4-10℃范围温度下。当温度为4℃或以下时，枝条很有可能会枯萎死亡，因为该温度超出了大多数植物组织的耐冷极限。当温度超过10℃时，组织开始生长和增殖，因此它们不能再继续贮藏。另外，如此生长并增殖的组织呈豆芽或玻璃化形式，因此很难对它们进行处理，且很难形成健康的枝条和后续的小植株，即使是贮藏后在正常增殖条件下对组织进行重新培养时。
在本发明中，植物枝条应在1微摩尔/平方米/秒或更低的光强下进行培养。当光强高于1微摩尔/平方米/秒时，组织也会开始生长和增殖，从而不能继续贮藏。
根据本发明方法贮藏的枝条在增殖条件下重新培养时会立即活跃增殖。在重新培养时，宜切开贮藏枝条的茎轴，在结节之间分开，将所得物分别置于适合枝条增殖的培养基中进行培养。在具有对生叶的植物如桉属或金合欢属中，一个茎轴结节处存在至少两个腋芽或腋芽原基，因此从放置的一个茎轴能伸出至少两根枝条。在桉属或金合欢属情况下，通过将从贮藏后的枝条如此制备的茎轴置于类似于上述用来诱导和增殖多枝条的培养基中，并在光强40微摩尔/平方米/秒、每天光照16小时、20-30℃的温度下培养大约20-30天，可获得能转移至生根过程的大量枝条。
植物最后的再生是这样实现的，将如此获得的枝条切下，将它们培养在用于植物组织培养的合适的培养基中使它们生根，该培养基含有碳源(如蔗糖等)和植物生长素(例如吲哚乙酸、吲哚丁酸、萘乙酸、二氯乙酸等)作为植物激素。可将CO2气体通入培养环境中代替蔗糖作为碳源。枝条从贮藏到生根过程的所有操作原则上均在无菌条件下进行。然而，当CO2用作代替蔗糖的碳源时，生根过程可在非无菌条件下进行。在桉属或金合欢属枝条的情况下，生根是通过将其培养在含有0.01-2.0毫克/升植物生长素的MS培养基中并在环境中通入CO2来实现的。MS培养基最高可作4倍稀释。可采用液体培养基或固体培养基。在采用液体培养基的情况下，可先用液体培养基润湿载体，然后将枝条插入苯酚树脂、石棉等具有合适的空隙的支持载体内。
我们认为不需要给低温贮藏的植物组织提供营养。这是因为在低温下贮藏的植物组织处于休眠状态，它不需要营养。
然而，本发明者发现，在植物组织培养获得的枝条情况下，为了贮藏和随后的迅速和活跃的重新增殖，即使贮藏在冷暗处，也必需提供营养物，尤其是细胞激动素和碳源。即，即使在贮藏时，若不外部加入细胞激动素，枝条的形成比例会变低，若不加入任何碳源，则枝条会在贮藏期间枯萎死亡。认为这种现象的原因是，这些枝条即使贮藏在冷暗处也没有完全停止其生命活动，而是会发挥一定程度的生命活动，因此会代谢诸如细胞激动素和碳源等营养物。因此，加入这些营养物的贮藏方法能维持枝条在贮藏期间处于健康状态并在贮藏后顺利启动活性和组织增殖。
另外，认为这些细胞激动素和碳源在贮藏期间能从植物组织表面掺入细胞。因此，在本发明中，将植物组织培养获得的枝条贮藏在含有细胞激动素和碳源的液体培养基中。因此，这些组分会从枝条的几乎整个表面供给细胞，从而表现出更显著的效果。
根据本发明，可以长时间地贮藏植物组织培养获得的枝条，且在贮藏后，枝条能迅速增殖，形成新的枝条。
另外，当在本发明中用塑料袋作为贮藏容器时，能够大量节省贮藏空间。
即，根据本发明，大量枝条能够有效地保藏任何长的时期，而且还能从如此贮藏的枝条迅速活跃地产生新的枝条。
因此，即使当用于大规模产生克隆小植株时，本发明是实用的，并显著改善了效果。
下面将参照实施例说明本发明；然而，本发明并不局限于这些实施例。
实施例1收集10年龄蓝桉(Eucalyptus globulus，下文称为“E.globulus”)的新梢(currentshoot)，将它们浸在可得氯为1％的次氯酸钠溶液中20分钟，以对其表面消毒，然后用无菌水清洗。然后，将枝条插入含有0.1毫克/升BAP、20克/升蔗糖和0.25％(重量/体积)吉兰糖胶的MS固体培养基中。1个月后，将发育中的腋芽置于具有相同组成的培养基中，传代培养以诱导多枝条。
从多枝条切下大约3-5厘米长的枝条，用手术刀除去顶芽和叶子后，将枝条放入PFA膜制成的袋(长85毫米，宽12毫米，体积100毫升)中10毫升稀释4倍的MS液体培养基(pH 5.6-5.8)内，该培养基含有0.1毫克/升BAP和20克/升蔗糖，每个袋子中放120根枝条。然后，除去袋内空气，将袋子加热密封，在1微摩尔/平方米/秒或更低的光强下贮藏在4、8或10℃的培养箱中。此时，用于上述贮藏的每根枝条有4个结节。
贮藏后第3个月、第6个月或第12个月，每次取出10根枝条，在结节之间将它们切成片，将片插入含有0.1毫克/升BAP、20克/升蔗糖、50毫升椰子汁和0.25％重量/体积吉兰糖胶的MS固体培养基内，在40微摩尔/平方米/秒的光强下保温于24℃，进行重新培养。
表1显示了重新培养后30天形成的枝条数。在表1中，只计数长度为2厘米或更长的枝条。
实施例2用与实施例1相同的方式贮藏从多枝条获得的枝条然后重新培养，只是用含有0.1毫克/升BAP和20克/升蔗糖的MS液体培养基(pH5.6-5.8)作为贮藏用液体培养基，贮藏于4℃或8℃下。重新培养后第30天调查形成的枝条数。
结果显示在下表1中。
实施例3用与实施例1相同的方式贮藏从多枝条获得的枝条然后重新培养，只是用含有0.1毫克/升BAP和20克/升蔗糖的稀释10倍的MS液体培养基(pH5.6-5.8)作为贮藏用液体培养基，且贮藏于8℃下。在重新培养后的第30天调查枝条数。
结果显示在下表1中。
实施例4用与实施例1相同的方式贮藏从多枝条获得的枝条然后重新培养，只是用聚乙烯制成的袋子作为贮藏容器，且贮藏于8℃下。在重新培养后的第30天调查形成的枝条数。
结果显示在下表1中。
实施例5用与实施例1相同的方式贮藏从多枝条获得的枝条然后重新培养，只是用聚乙烯制成的袋子作为贮藏容器，在将液体培养基和枝条放入袋中后并且不除去空气加热密封所得袋子后，贮藏于8℃下。在重新培养后的第30天调查形成的枝条数。
结果显示在下表1中。
实施例6
用与实施例1相同的方式贮藏从多枝条获得的枝条然后重新培养，只是用体积为360毫升的培养瓶作为贮藏容器，将50毫升液体培养基和枝条放入其中，用螺帽紧密密封所得的瓶子而不除去空气，贮藏于8℃下。在重新培养后的第30天调查枝条数。
结果显示在下表1中。
对比例1用与实施例1相同的方式贮藏从多枝条获得的枝条然后重新培养，只是用单单含有0.1毫克/升BAP的稀释4倍的MS液体培养基(pH5.6-5.8)作为贮藏用液体培养基，贮藏于8℃下。在重新培养后的第30天调查形成的枝条数。
结果显示在下表1中。
对比例2用与实施例1相同的方式贮藏从多枝条获得的枝条然后重新培养，只是贮藏在1℃或12℃下进行。在重新培养后的第30天调查枝条数。
结果显示在下表1中。
对比例3用与实施例1相同的方式贮藏从多枝条获得的枝条然后重新培养，只是用含有0.1毫克/升BAP、20克/升蔗糖和0.24％重量/体积吉兰糖胶的稀释4倍的MS液体培养基(pH5.6-5.8)作为贮藏用培养基，用体积为360毫升的培养瓶作为贮藏容器，在每个培养瓶中将30根枝条插入培养瓶中的固体培养基内，用螺帽紧密密封得到的瓶子而不除去空气，在8℃下贮藏。在重新培养后的第30天调查形成的枝条数。
结果显示在下表1中。
对比例4调查蓝桉未经贮藏而形成的枝条数。
即，用与实施例1相同的方式诱导多枝条后，切下长约3-5厘米的枝条，在结节之间切成片后，立即将片插入含有0.1毫克/升BAP、20克/升蔗糖、50毫升椰子汁和0.25％重量/体积吉兰糖胶的MS固体培养基中，然后在40微摩尔/平方米/秒的光强下24℃培养。30天后调查形成的枝条数。
结果显示在下表1中。
表1蓝桉的贮藏条件以及贮藏后形成的枝条数
PE聚乙烯从表1看出，从蓝桉多枝条获得的枝条在8℃贮藏后显示出枝条形成最为活跃。尤其是，当用含有0.1毫克/升BAP和20克/升蔗糖的稀释4倍的MS液体培养基(pH5.6-5.8)作为贮藏培养基，用PFA制成的袋子作为贮藏容器，8℃贮藏枝条时，随后重新培养时的枝条形成比未经贮藏过程的情况更活跃，而贮藏12个月后枝条的形成能力几乎没有改变。
另外，表1显示在12℃下贮藏的那些枝条在重新培养时也发现有一定程度的枝条形成。然而，在这种情况下，枝条在贮藏期间生长并增殖，导致产生许多呈豆芽或玻璃化形式的组织。因此，较长的贮藏期会导致能用来重新培养的健康枝条减少。结果，重新培养后形成的枝条数也随贮藏时间的增加而减少。
对于蓝桉而言，最合适的贮藏用液体培养基是加入了BAP和蔗糖的稀释4倍的MS培养基。当用稀释10倍的MS培养基进行贮藏时，较长的贮藏期会使重新培养后形成的枝条数显著减少。这一现象可如下解释。由于受贮藏的枝条即使在贮藏时也会消耗液体培养基中的组分，因此当用稀释10倍的培养基时，随贮藏时间的流逝，培养基中营养物不足，从而导致贮藏枝条本身的活性降低。
在不同贮藏容器材料之间几乎没有发现有差别，但是贮藏环境中空气的存在对日后重新培养时枝条的形成随贮藏时间的流逝有显著的影响。即，当用透气性差的聚乙烯制成的袋子在除去空气后紧密密封贮藏蓝桉枝条12个月后，重新培养后形成的枝条数与贮藏6个月相比减少了40％以上。然而，在不除去袋中空气的类似贮藏例中，重新培养后形成的枝条数几乎没有改变，即使是贮藏较长时间后也如此。
另一方面，在1℃下贮藏以及培养基中不加碳源进行贮藏时，重新培养后不形成枝条。另外，当将枝条插入固体培养基中贮藏时，重新培养后形成的枝条数很少，当贮藏超过3个月时，没有形成枝条。当将枝条插入固体培养基进行贮藏时，培养基中的组分只有在枝条插入处的一小部分提供给枝条，而不象枝条贮藏在液体培养基中那样。因此，当经过一定贮藏时间后，这种贮藏就象是贮藏在未给予培养基组分的条件下，因此认为贮藏枝条的活性会降低。
实施例7以实施例1所述的相同方式，用含有0.1毫克/升BAP、30克/升蔗糖和0.25％重量/体积吉兰糖胶的MS固体培养基从5年龄光亮桉(Eucalyptus nitens，下文称为“E.nitens”)的新梢诱导出多枝条，制得用于贮藏的枝条。
将如此制得的枝条放入PFA膜制成的袋子(长85毫米、宽12毫米、体积为100毫升)中10毫升稀释4倍的MS液体培养基(pH5.6-5.8)内，该培养基含有0.1毫克/升BAP和10克/升蔗糖，每个袋子放20个枝条。然后，除去袋中空气，将袋子加热密封，并在1微摩尔/平方米/秒或更低的光强下在培养箱中4℃或8℃贮藏6个月。用与实施例1相同的方式制得贮藏后枝条，然后重新培养。
表2显示了重新培养后第30天时形成的枝条数。
实施例8用与实施例7相同的方式贮藏从多枝条获得的枝条然后重新培养，只是用含有0.1毫克/升BAP和10克/升蔗糖的MS液体培养基(pH5.6-5.8)作为贮藏用液体培养基，贮藏于4℃或8℃下。重新培养后第30天调查形成的枝条数。
结果显示在下表2中。
对比例5用与实施例7相同的方式贮藏从多枝条获得的枝条然后重新培养，只是贮藏在1℃下进行。在重新培养后的第30天调查枝条数。
结果显示在下表2中。
对比例6用与实施例7相同的方式贮藏从多枝条获得的枝条然后重新培养，只是用单单含有10克/升蔗糖的稀释4倍的MS液体培养基(pH5.6-5.8)作为贮藏用液体培养基，贮藏在4℃或8℃下进行。在重新培养后的第30天调查形成的枝条数。
结果显示在下表2中。
对比例7用与实施例7相同的方式贮藏从多枝条获得的枝条然后重新培养，只是用单单含有10克/升蔗糖的MS液体培养基(pH5.6-5.8)作为贮藏用液体培养基，且贮藏在4℃或8℃下进行。在重新培养后的第30天调查形成的枝条数。
结果显示在下表2中。
对比例8另外调查光亮桉未经贮藏过程而形成的枝条数。
即，将实施例7相同方式从多枝条诱导获得的10根枝条用与实施例7相同的方式立即制成用于重新培养的枝条，然后进行重新培养。30天后调查形成的枝条数。
结果显示在下表2中。
表2光亮桉的贮藏条件以及贮藏后形成的枝条数
从表2看出，从光亮桉的多枝条获得的枝条当贮藏在1℃下进行时，也表现出在随后的重新培养中不形成枝条，但是当贮藏于4℃然后重新培养时，却发现枝条形成活跃。尤其是当枝条贮藏于4℃，采用含有0.1毫克/升BAP和10克/升蔗糖的稀释4倍的MS液体培养基(pH5.6-5.8)作为贮藏培养基时，随后重新培养时形成的枝条数要大于未经任何贮藏过程的情况。在这种情况下，贮藏培养液中加入BAP对随后重新培养时形成枝条起了非常好的作用。
另外，在蓝桉情况下，8℃贮藏后的枝条形成最为活跃，而对于光亮桉在此温度下的贮藏，发现随后的枝条形成少。然而在这种情况下，并没有发现当蓝桉在12℃下贮藏时所见贮藏组织异常增殖的现象。因此，认为枝条形成率低可能是因为植物种类的不同。
权利要求
1．一种将植物枝条贮藏在液体中的方法，该方法包括，将植物组织培养获得的枝条贮藏在含有细胞激动素和碳源的植物组织培养用的液体培养基中，所述贮藏在4-10℃的温度和1微摩尔/平方米/秒或更低的光强下进行。
2．根据权利要求1所述的方法，其中植物是木质植物。
3．根据权利要求1或2所述的方法，其中液体培养基中的细胞激动素含量为0.05-0.5毫克/升。
4．根据权利要求1至3任一项所述的方法，其中细胞激动素是苄基氨基嘌呤。
5．根据权利要求1至4任一项所述的方法，其中液体培养基中含有5-40克/升蔗糖作为碳源。
6．根据权利要求1至5任一项所述的将植物枝条贮藏在液体中的方法，其中枝条是已经除去叶子的枝条。
7．根据权利要求1至6任一项所述的方法，其中枝条贮藏至少1个月。
8．根据权利要求1至7任一项所述的方法，其中枝条贮藏在塑料袋制成的贮藏容器中。
9．一种大规模生产植物的方法，该方法包括，在枝条增殖的条件下，重新培养并增殖按照权利要求1至8任一项所述的方法进行贮藏的植物枝条，并使该植物枝条生根再生成植物。
全文摘要
一种将植物枝条贮藏在液体中的方法,该方法包括,将植物组织培养获得的枝条贮藏在含有细胞激动素和碳源的植物组织培养用的液体培养基中,所述贮藏在4－10℃的温度和1微摩尔/平方米/秒或更低的光强下进行,以及一种大规模生产植物的方法,该方法包括,在枝条增殖的条件下,重新培养并增殖按上述贮藏方法贮藏的植物枝条,并使该植物枝条生根再生成植物。
文档编号C12N5/04GK1308854SQ01104658
公开日2001年8月22日 申请日期2001年2月16日 优先权日2000年2月16日
发明者村上章, 村上邦睦, 田中道男 申请人:日本制纸株式会社