专利名称：一种脂肪酸合成酶抑制剂及其制造方法与应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及酶的抑制剂及其制造方法与应用，特别是涉及一种脂肪酸合成酶抑制剂及其制造方法与应用。
研究表明，高等动物的体脂一方面靠直接摄入，更多的由体内自身合成(Lenninger，A.L.，1982.Principles of Biochemistry，Chapter 13，p333-360 andChapter 21，p593-614；Wakil，S.J.et al.，1983.Ann.Rev.Biochem.52，p537-579)。脂肪酸合成酶是生物细胞内合成脂肪过程中最重要的酶。田维熙等对家禽脂肪酸合成酶的研究发现，家禽腹腔的脂肪水平和脂肪酸合成酶活性有很高的正相关，并提出控制脂肪酸合成酶活性是控制动物体脂水平的有效方法的理论(田维熙，1994.动物的体脂水平和脂肪酸合成酶活性的调控.生命的化学，14，(1)184；田维熙等，1996.不同生长期蛋鸡的体脂水平和肝脏脂肪酸合成酶活性的关系.生物化学杂志，12(2)234-236；Mei Li et al.，1999.Factors influencingthe levels of fatty acid synthase complex activity in fowl.Biochemistry andMolecular Biology International，47(1)63-69)。最近，霍普金斯大学Loftus等对小鼠脂肪酸合成酶的研究结果证明，抑制脂肪酸合成酶可造成丙二酰辅酶A的积累，而后者抑制与进食相关的下丘脑神经肽Y的表达，在不影响小鼠活动能力的情况下使食欲下降，体重降低。Loftus等指出，脂肪酸合成酶可以作为控制体重潜在的治疗靶位(Loftus.T.M.et al.，2000.Science，288(5475)2379-2381)。以上结果表明，抑制脂肪酸合成酶的活性，不仅可抑制细胞内脂肪的合成，而且还能抑制动物的食欲，进而限制直接摄入的热量。因此，研制和开发脂肪酸合成酶的抑制剂将具有重大的现实意义及开发潜力。
本发明的目的是提供一种能有效抑制脂肪酸合成酶活性的脂肪酸合成酶抑制剂。
本发明的另一目的是提供一种制造上述脂肪酸合成酶抑制剂的方法。
本发明的又一目的是提供上述脂肪酸合成酶抑制剂的用途。
本发明的脂肪酸合成酶抑制剂是用有机溶剂或水或有机溶剂与水的混合物，从中药桑寄生中萃取出的物质。
所述的有机溶剂为极性有机溶剂，其中，优选的是乙醇。所述乙醇的浓度可以在15％-95％的范围内，其中，优选的是40％-70％的乙醇，最优选的是50％的乙醇。
生产上述脂肪酸合成酶抑制剂的方法，包括以下步骤(1)、将粉碎后的桑寄生置于容器中，加入有机溶剂或水或有机溶剂与水的混合物；(2)、在20℃-40℃条件下萃取4-9小时；(3)、离心或过滤，收集上清液。
在上述生产方法中，所述加入的有机溶剂或水或有机溶剂与水的混合物的重量可以为所述桑寄生重量的4-15倍，其中优选的为5-8倍。
如果萃取在搅拌、30℃条件下进行，则萃取4小时即可；如果离心是在8000转/分钟的条件下进行，则进行15分钟。
以本发明的脂肪酸合成酶抑制剂为活性成分生产的药物，是本发明脂肪酸合成酶抑制剂的主要应用领域。
本发明的脂肪酸合成酶抑制剂还可以作为食品添加剂、日用化学品(特别是化妆品)添加剂及保健品添加剂。
中药桑寄生为桑寄生科植物桑寄生Loranthus Parasticus(L.)，Merr.或槲寄生Uiscum Coloratum(Kom.)Nakai的枝叶。桑寄生又名桃木寄生、沙梨寄生、枇杷寄生、油茶寄生、广寄生，产于我国广东、广西、云南、贵州、四川、江西等地。槲寄生又名北寄生、柳寄生，产于我国河北、辽宁、吉林、安徽、内蒙古、湖南、浙江、河南、黑龙江、山西、陕西、四川、江西、福建、湖北、江苏、青海等地。中药桑寄生“性苦，平”(《本经》)，“甘，无毒”(《别录》)，“入肝、肾”(《本草求真》)。中医认为，桑寄生的功用主要为补肝肾，强筋骨，除风湿，通经络，益血，安胎。主治腰膝酸痛，筋骨瘘弱，偏枯，脚气，风寒湿，胎漏血崩，产后乳汁不下。
本发明巧妙地将传统的中药桑寄生用有机溶剂或水或有机溶剂与水的混合物，特别是乙醇进行萃取，创造性地揭示出，所萃取出的物质是有效的脂肪酸合成酶抑制剂。由于中药桑寄生本身无毒，因而为该脂肪酸合成酶抑制剂的进一步开发利用提供了广阔的前景。实验表明脂肪酸合成酶抑制剂可以有效抑制脂肪酸合成酶的活性，而脂肪酸合成酶活性的强弱直接影响到生物细胞内合成脂肪的多少。也就是说，抑制了脂肪酸合成酶的活性，生物细胞内合成脂肪的过程会弱化，脂肪含量即会得到控制，甚至减少，而且，脂肪酸合成酶抑制剂还可以控制动物的食欲，因此本发明的脂肪酸合成酶抑制剂可以作为减肥药物的活性成分，生产口服液、冲剂、胶囊、片剂、针剂等各种剂型的减肥药物。本发明的脂肪酸合成酶抑制剂还可以作为保健品、食品的添加剂，比如可作为高热量食品的添加剂，使喜食高热量食品的人既满足了口福，又不用担心会增胖。本发明的脂肪酸合成酶抑制剂还可以作为美容日用化学品的添加剂，如可以制成减肥霜，对需要减肥的部位进行定点涂抹。同时，由于中药桑寄生的源植物分布广泛，因而价格较低，为脂肪酸合成酶抑制剂的工业化生产提供了保证。
下面结合具体实施例对本发明作进一步说明。
在下述的实施例中，所用的脂肪酸合成酶均为用常规方法(W.X.Tian et al.，1985.J.Biol.Chem.，260(20)11375-11387；田维熙等，1996.不同生长期蛋鸡的体脂水平和肝脏脂肪酸合成酶活性的关系.生物化学杂志，12(2)234-236)自新鲜鸡肝中分离提纯的，并经聚丙烯酰胺凝胶电泳检测为单一带。
脂肪酸合成酶活性采用乙酰辅酶A、丙二酰辅酶A、NADPH为底物的标准测活方法测定(W.X.Tian et al.，1985.J.Biol.Chem.，260(20)11375-11387；田维熙等，1996.不同生长期蛋鸡的体脂水平和肝脏脂肪酸合成酶活性的关系.生物化学杂志，12(2)234-236)。
脂肪酸合成酶(FAS)活性被抑制的程度用I％(抑制程度)来表示，其计算方法为以底物中只加入相应提取溶剂的为对照，测定其脂肪酸合成酶活性值，该值用A0表示，并设定其为100％。底物中加入脂肪酸合成酶抑制剂提取液的为实验组，测得其脂肪酸合成酶活性的数值为A；RA％(剩余活性)＝A/A0×100％I％(抑制程度)＝100％-RA％在以下的实施例中，每项实验均分别用桑寄生科植物桑寄生及槲寄生制成的中药进行了对比实验，实验结果没有显著差异，推论其萃取出的有效物质相同，因此统称为中药桑寄生。
实施例1用乙醇从中药桑寄生中萃取脂肪酸合成酶抑制剂(1)取中药桑寄生，粉碎后置于容器中，加入5倍重量95％的乙醇，充分搅拌后密封；(2)在30℃、搅拌的条件下萃取4小时；(3)将上述萃取液在8000转/分钟的条件下离心15分钟，取上清液，即为含脂肪酸合成酶抑制剂的提取液，以备下面的实验使用。
可以用与该实施例相同的方法，用不同梯度的乙醇(如17％，40％，50％，70％，80％)、水、与乙醇极性相近或较弱的有机溶剂(如丙酮)来萃取脂肪酸合成酶抑制剂。如果是在非搅拌条件下进行萃取，则至少应每隔4小时搅拌一次，萃取8小时。用该实施例的方法自中药桑寄生中萃取脂肪酸合成酶抑制剂，搅拌条件下，萃取时间只要不低于4小时，温度在20-100℃之间均能萃取出有效成分。在实际生产中，萃取后一般采用压滤机来收取上清液。
实施例2相同的实验底物中加入不同数量的脂肪酸合成酶抑制剂对FAS活性的影响(测活的酶加入量为每毫升实验底物10微克)。每毫升底物中加实施例1提取液的微升数 0.125 0.25 0.51.0折算成加入中药桑寄生的毫克数0.025 0.05 0.10.2折算成每毫克酶加入中药桑寄生的毫克数2.5 5 10 20FAS酶活性被抑制的程度I％37 83 93 98由以上实验结果可以看出，随着加入提取液量的增加，FAS酶活性被抑制程度I％升高，当每毫升底物中加入1.0微升的提取液时，I％已高达98％，表明脂肪酸合成酶的活性基本被抑制。
实施例3萃取溶剂对脂肪酸合成酶活性的影响取与实施例2相同的底物，分别向每毫升底物中加0.125、0.25、0.5、1.0微升95％的乙醇，检测计算FAS酶活性被抑制的程度I％，结果是I％均为0，表明所加量的萃取溶剂乙醇不会抑制脂肪酸合成酶的活性，抑制脂肪酸合成酶活性的是从中药桑寄生中萃取出的物质。
实施例4脂肪酸合成酶抑制剂的半抑制浓度用实施例1所得的提取液进行实验，结果表明，要达到I％＝50％，每毫升溶液中需加入0.15微升的提取液，折算成加入中药桑寄生的毫克数为0.03，折算成每毫克酶加入中药桑寄生的毫克数为3，半抑制浓度非常低，说明本发明的脂肪酸合成酶抑制剂对脂肪酸合成酶的活性有强烈的抑制作用，并且所需有效剂量很低。
实施例5不同萃取剂对萃取出的脂肪酸合成酶抑制剂数量的影响萃取剂 水 50％ 95％ 丁醇 丙酮 乙醚 石油醚乙醇乙醇每毫升底物中加入1.00.2 0.5 0.50.50.5 0.5提取液的微升数折算成加入中药 0.20.040.1 0.10.10.1 0.1桑寄生的毫克数折算成每毫克酶加入 20 4 10 10 10 10 10中药桑寄生的毫克数FAS酶活性被抑959693274000制的程度I％从以上实验结果可以看出，本发明的脂肪酸合成酶抑制剂可以溶于水，但溶解性以在乙醇中为佳，最好的是50％左右的乙醇，而在弱极性的丁醇、丙酮中溶解性不高，在非极性溶剂中不溶。
实施例6动物试验以50％酒精为萃取溶剂，按实施例1所述的方法由中药桑寄生中萃取脂肪酸合成酶抑制剂。所得提取液用2倍纯水稀释，以稀释液用灌胃法给大鼠每只每天口服饲喂3毫升，连续25天。对照组用2倍纯水稀释的50％酒精取代提取液同样每只大鼠每天饲喂3毫升。试验组共10只雌性大鼠，起始平均体重280.45克，对照组共10只雌性大鼠，起始平均体重278.50克。饲喂15天后试验组平均体重268.45克，降低12克；对照组平均体重280.70克，增加2.2克。饲喂25天后试验组平均体重259.56克，降低20.89克；对照组平均体重267.25克，降低10.65克。经统计分析，试验组和对照组体重下降差异较显著。
大鼠血清甘油三脂测定的初始平均值为1.5，试验25天后测定试验组为0.897，对照组为1.02，试验组血清甘油三脂降低40％，比对照组低12％。
试验期，日平均进食量试验组为每只10.98克标准饲料，对照组为每只12.64克，试验组比对照组少进食13.13％。
以上结果表明，口服自桑寄生中萃取出的脂肪酸合成酶抑制剂后，可减少大鼠体重，血清甘油三脂和进食量，对减肥降脂有明显作用。
权利要求
1.脂肪酸合成酶抑制剂，它是用有机溶剂或水或有机溶剂与水的混合物，从中药桑寄生中萃取出的物质。
2.根据权利要求1所述的脂肪酸合成酶抑制剂，其特征在于所述有机溶剂为极性有机溶剂，其中，优选乙醇。
3.根据权利要求2所述的脂肪酸合成酶抑制剂，其特征在于所述乙醇的浓度为15％-95％，其中，优选的是40％-70％，最优选的是50％。
4.一种生产权利要求1所述脂肪酸合成酶抑制剂的方法，包括以下步骤(1)将粉碎后的桑寄生置于容器中，加入有机溶剂或水或有机溶剂与水的混合物；(2)在20℃-40℃条件下萃取4-9小时；(3)离心或过滤，收集上清液。
5.根据权利要求4所述的生产脂肪酸合成酶抑制剂的方法，其特征在于所述加入的有机溶剂或水或有机溶剂与水的混合物的重量为所述桑寄生重量的4-15倍；其中优选的为5-8倍。
6.根据权利要求4或5所述的生产脂肪酸合成酶抑制剂的方法，其特征在于所述萃取在搅拌、30℃条件下，进行4小时；所述离心是在8000转/分钟的条件下进行15分钟。
7.以权利要求1所述的脂肪酸合成酶抑制剂为活性成分的药。
8.权利要求1所述的脂肪酸合成酶抑制剂作为食品添加剂的应用。
9.权利要求1所述的脂肪酸合成酶抑制剂作为日用化学品添加剂的应用。
10.权利要求1所述的脂肪酸合成酶抑制剂作为保健品添加剂的应用。
全文摘要
本发明公开了一种脂肪酸合成酶抑制剂,它是用有机溶剂或水或有机溶剂与水的混合物,从中药桑寄生中萃取出的物质;所述有机溶剂优选乙醇;所述乙醇的浓度优选的是40%－70%,最优选的是50%。一种生产上述脂肪酸合成酶抑制剂的方法,包括以下步骤:(1)将粉碎后的桑寄生置于容器中,加入有机溶剂或水或有机溶剂与水的混合物;(2)在20℃－40℃条件下萃取4－9小时;(3)离心或过滤,收集上清液。本发明的脂肪酸合成酶抑制剂可以在制药、食品添加剂及日用化学品添加剂等领域得到广泛应用。
文档编号A23L1/30GK1372947SQ0110923
公开日2002年10月9日 申请日期2001年2月28日 优先权日2001年2月28日
发明者田维熙, 李丽春, 吴晓东, 陈传楚, 王玄 申请人:田维熙