专利名称：痢疾杆菌诊断试剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种痢疾杆菌诊断试剂，其主要成分是胰蛋白胨、枸橼酸钠、去氧胆酸钠、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、氯化钠、小牛血清、葡萄糖、甘露醇经一定的工艺制成。用以供粪便增菌培养痢疾杆菌。利用培养试验鉴别细菌的种类，其关键在于准确、快速、简便。而细菌接种量大小，会直接影响检测结果。往往需要将样本通过不同方法进行增菌培养，来进行细菌种类的鉴别，这是目前微生物实验室最常用的手段。由于目前培养条件的应用范围所限，供粪便痢疾杆菌增菌培养的诊断试剂没有特效的，存在所需接种量大、培养时间长、易出现假阳性或假阴性等问题。随着生物研究的进展，国内外对细菌鉴别的增菌诊断试剂研究也在不断的发展中。生物工作者一直希望能有一种能克服上述不足的增菌诊断试剂一--痢疾杆菌诊断试剂。
背景技术：
本发明的目的在于提供一种能克服已有鉴别诊断试剂不足的痢疾杆菌诊断试剂。与其它同类诊断试剂相比具备下列特点所需接种量小，少量细菌即可迅速繁殖，在通常室温下或37。C培养5-6小时即可观察结果；不易出现假阳性和假阴性；能破坏标本中存在的抑菌物质，使细菌生长不受抑制
发明内容
本发明的要点在于选择合适的组分，并进行合理混配，经加温、溶解、混合、冷却、分装、高温灭菌等工艺而成一种痢疾杆菌诊断试剂。
本发明选择的配方如下(组分及其重量百分比％):胰蛋白胨(1.8-2.2)、枸橼酸钠
(0. 4-0. 5)、去氧胆酸钠(0. 04-0. 06)、磷酸二氢钾(0. 14-0. 16)、磷酸氢二钾(0. 38-0. 42)、氯化钠(0.4-0.5)、葡萄糖(0.10-0.12)、甘露醇(0.15-0.25)、小牛血清(0.4-0.5)、蒸馏水加至100ml。
本诊断试剂含有枸橼酸钠和去氧胆酸钠，对革兰氏阴性菌有抑制作用，大肠杆菌，绿脓杆菌及变形杆菌，在接种6小时内生长缓慢，而痢疾杆菌可相对地得到增殖.氯化钠用于调整渗透压；磷酸二氢钾用于调节pH。胰蛋白胨、小牛血清、葡萄糖、甘露醇是诊断试剂中的营养和支持成分。标本接种后即计算时间，在通常室温下或37'C培养，均有增菌作用.增菌培养6小时后，即用划线法移种到肠道选择性诊断试剂上以分离致病菌。
本发明产品的制备方法是
1) 、将胰蛋白胨、枸橡酸钠、去氧胆酸钠、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、氯化钠、葡萄糖、甘
露醇按比例加入蒸馏水中，再加热溶解，矫正pH至7.0矫正pH至6.8，用滤纸过滤；
2) 、压力蒸汽灭菌0.70kg15分钟；
3) 、无菌条件下，加入无菌小牛血清,分装安培瓶，每瓶约5ml，存于冰箱中备用。
本发明具有以下优点(1)所需接种量小，培养时间短，少量细菌即可迅速繁殖，在通常室温下或37。C培养5-6小时即可观察结果；(2)不易出现假阳性或假阴性；(3)能破坏标本中存在的四环素、金霉素、土霉素、新霉素、多粘菌素及链霉素的抑菌作用。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的详细说明按照下表所列数据(重量百分比％)及其所述步骤进行配置配方一
胰蛋白胨1.8-2.2
枸橼酸钠0. 4-0. 5
去氧胆酸钠0. 04-0. 06
磷酸二氢钾0. 14-0. 16
磷酸氢二钾0. 38-0. 42
氯化钠0. 4-0. 5
葡萄糖0. 10-0. 12
甘露醇0. 15-0. 25
小牛血清0. 4-0. 5
蒸馏水加至100
配方二
胰蛋白胨1.8-2.0
枸橼酸钠0. 4-0. 45
去氧胆酸钠0. 04-0. 05
磷酸二氢钾0. 14-0. 15
磷酸氢二钾0. 38-0. 40
氯化钠0. 4-0. 45
葡萄糖0. IO-O. 11
甘露醇0. 15-0. 20
小牛血清0. 4-0. 45
蒸馏水加至100
配方三
胰蛋白胨2. 0-2. 2
枸橼酸钠0. 45-0. 5
去氧胆酸钠0. 05-0. 06
磷酸二氢钾0. 15-0. 16
磷酸氢二钾0. 40-0. 42
氯化钠0. 45-0. 5
葡萄糖0. 11-0. 12
甘露醇0. 18-0. 25
小牛血清0. 45-0. 5
蒸馏水加至100
4配方四
胰蛋白胨1.9-2. 1
枸橼酸钠0. 42-0. 45
去氧胆酸钠0. 05-0. 06
磷酸二氢钾0. 15-0. 16
磷酸氢二钾0. 39-0. 40
氯化钠0. 42-0. 45
葡萄糖0. 11-0. 12
甘露醇0. 17-0. 22
小牛血清0. 42-0. 45
蒸馏水加至100
权利要求
1、一种痢疾杆菌诊断试剂，是以胰蛋白胨、枸橼酸钠、去氧胆酸钠、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、氯化钠、小牛血清、葡萄糖、甘露醇为主要成分；其特征在于具有如下配方(组分及其重量百分比％)胰蛋白胨(1.8-2.2)、枸橼酸钠(0.4-0.5)、去氧胆酸钠(0.04-0.06)、磷酸二氢钾(0.14-0.16)、磷酸氢二钾(0.38-0.42)、氯化钠(0.4-0.5)、葡萄糖(0.10-0.12)、甘露醇(0.15-0.25)、小牛血清(0.4-0.5)、蒸馏水100ml。
2、 一种权利要求1所述痢疾杆菌诊断试剂的制备方法，其特征在于具有如下的步骤1) 、将胰蛋白胨、枸橼酸钠、去氧胆酸钠、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、氯化钠、葡萄糖、甘露醇按比例加入蒸馏水中，再加热溶解，矫正pH至7.0矫正pH至6.8，用滤纸过滤；2) 、压力蒸汽灭菌0.70kgl5分钟;3) 、无菌条件下，加入无菌小牛血清，分装安培瓶，每瓶约5ml，存于冰箱中备用。
全文摘要
本发明涉及一种痢疾杆菌诊断试剂，其主要成分是胰蛋白胨、枸橼酸钠、去氧胆酸钠、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、氯化钠、小牛血清、葡萄糖、甘露醇经一定的工艺制成。用以供粪便增菌培养痢疾杆菌。利用培养试验鉴别细菌的种类，其关键在于准确、快速、简便。而细菌接种量大小，会直接影响检测结果。往往需要将样本通过不同方法进行增菌培养，来进行细菌种类的鉴别，这是目前微生物实验室最常用的手段。由于目前培养条件的应用范围所限，供粪便痢疾杆菌增菌培养的诊断试剂没有特效的，存在所需接种量大、培养时间长、易出现假阳性或假阴性等问题。本发明具有以下优点(1)所需接种量小，培养时间短，少量细菌即可迅速繁殖，在通常室温下或37℃培养5-6小时即可观察结果；(2)不易出现假阳性或假阴性；(3)能破坏标本中存在的四环素、金霉素、土霉素、新霉素、多粘菌素及链霉素的抑菌作用。
文档编号C12Q1/04GK101463374SQ20071011562
公开日2009年6月24日 申请日期2007年12月18日 优先权日2007年12月18日
发明者丁月芳 申请人:丁月芳