专利名称：阿尔茨海默病治疗药物的制作方法
技术领域：
本发明涉及阿尔茨海默病的治疗。具体涉及利用抗炎症细胞因子或携
带抗炎症细胞因子基因的负链RNA病毒载体等表达抗炎症细胞因子的载 体，治疗阿尔茨海默病。
背景技术：
随着日本快速步入老龄化社会，老年性痴呆症及其护理问题日渐成为 巨大的社会问题。据报告显示，10%的65岁以上老人患有老年性痴呆症。 阿尔茨海默病是导致老年性痴呆症的两大原因之一，约占老年性痴呆症患 者的50%，看护问题也已经成为重大的社会问题。
目前，阿尔茨海默病的治疗药物有乙酰胆碱类活性剂和乙酰胆碱酯酶 抑制剂等乙酰胆碱调控剂、抑制淀粉样蛋白肽生成的P分泌酶(BACE)阻断 剂和淀粉样蛋白肽的凝集阻断剂等(3-淀粉样蛋白调控剂、神经肽及神经成 长因子等神经保护和神经营养药，此外还有螯合剂、抗氧化剂、抗炎药物等。
阿尔茨海默病治疗药物从治疗效果上可划分为以下3种。在阿尔茨海 默病的初期使用可在某种程度上改善认知功能，但几乎不能控制痴呆本身 的发展，此为第一代药物；既能改善认知功能又可望能够控制病情发展， 此为第二代药物；从根本上进行预防、治疗的为第三代药物。目前得到评 价的几乎只有第一代药物。关于阿尔茨海默病的发病及进展机制， 一种较 有力的"淀粉样蛋白级联反应假说"认为，P -淀粉样蛋白肽的生成和储积是 形成老年斑的主要原因，期待以P淀粉样蛋白肽为目标的部分药剂有助于 第二代或第三代药物有关联的药物的开发。目前的现状是，确实有效的第
一代药效自不必说，人们强烈期望出现能够彻底治愈阿尔茨海默病的第二、 第三代药物。
另一方面，作为被一向认可的发病机制，"炎症假说"认为，阿尔茨海 默病的发病是由于阿尔茨海默病患者脑内的炎症性小胶质细胞的活性亢进导致神经细胞死亡。实际已获确认的是，阿尔茨海默病患者脑内的小胶质 细胞活性亢进尤其聚积在老年斑周围，且淋巴细胞侵润脑内，进而被炎症 激活的物质(如补体)储积脑内。流行病学的调查分析结果表明，抗炎剂尤其
是非类固醇抗炎药(Nonsteroidal Anti-Inflammatory Drugs: NSAIDs )有望 控制阿尔茨海默病的发展，也有报告显示P引咮美辛(indomethacin)在试验 性临床试验中明显控制了阿尔茨海默病情的进展(Rogers J et al., Neurology. 1993 Aug;43(8):1609國11.),并以较少影响消化功能的Cox-2特异性抑制剂 为主开展了大规模的临床试验。遗憾的是，在以轻到中度的阿尔茨海默病 患者为对象进行的l年试验中，没有得到第一代NSAIDs和新一代NSAIDs 对阿尔茨海默病情的发展具有控制效果的报告(Aisen PS et al., JAMA. 2003 Jun 4;289(21 ):2819-26.， Imbimbo BP. Expert Opin Investig Drugs. 2004 Nov;13(ll):1469-81., Townsend KP et al" FASEB J. 2005 Oct;19(12):1592-601.)。报告还显示，作为神经胶质细胞中的诱发炎症的细 胞因子产生的选择性抑制剂，被称为MW01-5-188WH的化合物口服给药小 鼠后，可控制淀粉样蛋白卩l-42诱导下的海马中白细胞介素1 p、胂瘤坏死 因子a、 S100B的上调，此外，海马神经键不全同时得到恢复，海马依存性 Y迷宫行为也得到改善(Ralay Ranaivo H et al., J Neurosci. 2006 Jan ll;26(2):662-70.)。
非专利文献1 Rogers J et al.， Neurology. 1993 Aug;43(8): 1609-11 非专利文献2 Aisen PS et al.， JAMA. 2003 Jun 4;289(21):2819-26 非专利文献 3 Imbimbo BP, Expert Opin Investig Drugs. 2004 Nov;13(ll):1469-81
非专利文献4 Townsend KP et al.， FASEB J. 2005 Oct; 19(12): 1592-601 非专利文献5Ralay Ranaivo H et al" J Neurosci. 2006 Jan ll;26(2):662-70
发明内容
发明所要解决的课题
鉴于以上情况，本发明所要解决的课题为提供一种以治疗阿尔茨海默 病为目的的新型治疗方法和治疗药物。 解决课题的方法本发明者们为完成这一课题不懈努力，发明了有效治疗阿尔茨海默病
的全新方法。#元炎症细月包因子(anti-inflammatory cytokines )之一 的白细月包 介素10(interleukin-10: IL-10 )与炎症细胞因子(pro-inflammatory cytokines ) 活性的竟争性作用可调节炎症反应。有报告指出，阿尔茨海默病中IL-10启 动子区域的基因多态(polymorphism)与病情的发展有关(Lio D et al., Genes Immun. 2003 Apr;4(3):234画8.; Scassellati C et al" Neurosci Lett. 2004 Feb 12;356(2):119-22.; Arosio B et al.， Neurobiol Aging. 2004 Sep;25(8):1009-15.; Ma SL et al" Neurobiol Aging. 2005 Jul;26(7): 1005-10.)。但没有以阿尔茨海 默病的治疗为目的对抗炎症细胞因子进行评价的实例。本发明使用抗炎症 细胞因子和表达抗炎症细胞因子基因的负链RNA病毒载体等载体，提供阿 尔茨海默病的新型疗法。本发明还提供一种以治疗和预防阿尔茨海默病为 目的的新型基因治疗方法。
即本发明涉及 一 种用于阿尔茨海默病治疗或治疗药物开发的携带抗炎 症细胞因子基因的负链RNA病毒载体、包含该负链RNA病毒载体在内的 阿尔茨海默病药物组合物及使用该负链RNA病毒载体的阿尔茨海默病治疗 和预防方法等，具体为，
〔1 〕 一种阿尔茨海默病预防或治疗用药物组合物，其包含抗炎症细胞因 子或其部分肽、或者携带编码该细胞因子或其部分肽的负链RNA病毒载体；
〔2 〕 〔 1 〕所述的组合物，其包含携带编码抗炎症细胞因子或其部分肽 基因的负链RNA病毒载体；
〔3 〕 〔 1 〕所述的组合物，其包含抗炎症细胞因子或其部分肽；
〔4 〕 〔 1 〕或〔2 〕所述组合物，其中，负链RNA病毒载体为副粘病毒 载体；
〔5 〕 〔 1 〕或〔2 〕所述组合物，其中，负链RNA病毒载体为仙台病毒 载体；
〔6 〕 〔 1 〕 - 〔 5 〕中任一项所述的组合物，其中，抗炎症细胞因子从 白细胞介素4 、白细胞介素1 0 、白细胞介素1 3及其部分肽组成的群体 中选择；
〔7 〕 〔 1 〕 - 〔 6 〕中任一项所述的组合物，其用于经鼻给药； 〔8 〕 一种用于阿尔茨海默病治疗或药物开发的携带抗炎症细胞因子或其 部分肽的基因的负链RNA病毒载体；〔9 〕 一种用于阿尔茨海默病治疗或药物开发的抗炎症细胞因子蛋白质； 〔10〕 〔 8 〕所述载体，其中，负链RNA病毒载体为副粘病毒载体； 〔11〕 〔 8 〕所述载体，其中，负链RNA病毒载体为仙台病毒载体； 〔12〕 〔8〕、 〔10〕或〔11〕所述载体，其中，抗炎症细胞
因子是从由白细胞介素4 、白细胞介素1 0 、白细胞介素1 3及它们的部
分肽组成的群体中选择的；
〔13〕 一种包含抗炎症细胞因子或其部分肽、或者携带编码该细胞因子 或其部分肽的基因的负链RNA病毒载体的给药步骤的阿尔茨海默病治疗或 预防方法；
〔14〕 〔13〕所述方法，所述给药为经鼻给药； 本发明还包含，
〔1 〕 一种用于阿尔茨海默病治疗或药物开发的携带抗炎症细胞因子或其
部分肽的基因的负链RNA病毒载体； 〔2〕 〔 1 〕所述载体，其中，负链RNA病毒载体为副粘病毒载体； 〔3〕 〔 1 〕所述载体，其中，负链RNA病毒载体为仙台病毒载体； 〔4〕 〔1〕 - 〔3〕任一项所述载体，其中，抗炎症细胞因子是从白细胞
介素4、白细胞介素l0、白细胞介素l3及其部分肽组成的群体中选择的。
〔5 〕 一种包含〔1 〕 - 〔 4 〕中的任一载体的阿尔茨海默病治疗或预防 药物组合物。
〔6 〕 〔 5 〕所述的药物组合物，其用于经鼻给药。
本发明还涉及一种包含抗炎症细胞因子或对其进行编码的载体的给药 步骤的治疗或预防阿尔茨海默病的方法。本发明尤其涉及一种包含携带抗 炎症细胞因子基因的负链RNA病毒载体等可以表达抗炎症细胞因子的载体 的给药步骤的治疗或预防阿尔茨海默病的方法。该负链RNA病毒载体优选 副粘病毒载体，更优选仙台病毒载体。同时抗炎症细胞因子优选IL-IO。给 药方式优选经鼻给药。
此外，本发明还涉及在生产治疗或预防阿尔茨海默病药物中，抗炎症 细胞因子或对其进行编码的载体的应用。本发明尤其提供在生产治疗或预 防阿尔茨海默病药物中，抗炎症细胞因子、携带该抗炎症细胞因子基因的 载体、特别是携带抗炎症细胞因子基因的负链RNA病毒载体的应用。该负链RNA病毒载体优选副粘病毒载体，更优选仙台病毒载体。抗炎症细胞因
子优选IL-IO。含有负链RNA病毒载体的药物优选制成适合经鼻给药的剂型。
发明的效果
本发明提供一种利用抗炎症细胞因子的阿尔茨海默病新型治疗药物和
的阿尔茨海默病治疗药和利用该载体对阿尔茨海默病进行基因治疗的方 法。本发明的方法可以成为一种可替代其他阿尔茨海默病治疗方法或者与 其并用的新型治疗方法。
图1
IL-10表达SeV载体给药后的血中IL-10量的测定图。对照组使用了 LacZ表达SeV载体。血中IL-10以IL-10表达SeV载体特异性及剂量依赖 性的方式被检出。图2
大脑新皮质头顶叶及海马的老年斑图(抗A(3抗体染色)。载体给药4 周后(上图面)和8周后(下图面)，SeV18+mlL10/TSAF群(右)大脑新 皮质的老年斑(红褐色斑状物)明显少于SeV18+LacZ/TSAF群(左)。图3
老年斑占大脑新皮质的面积率(％ )示意图(平均士SE)。通过图像解 析软件测出给药8周后大脑新皮质中老年斑的面积率(％ )， SeV18+mlL10/TSAF群明显(p<0.01 Student t检验)少于对照群
(SeV18+LacZ/TSAF群)。
图4
嗅球中的小胶质细胞活性化(Iba-1染色)示意图。给药4周后(上图 面)和8周后(下图面)，SeV18+mlL10/TSAF群(右)嗅球的活性化小胶 质细胞(红褐色的变形细胞)明显多于SeV18+LacZ/TSAF群(左)。图5
Iba-l染色嗅球切片的一个分区中的小胶质细胞面积的比率(％ )图(平 均士SE)。通过图像解析软件测出的给药8周后嗅球的一个分区中Iba-l阳
7性小胶质细胞面积率(％ ) , SeV18+mlL10/TSAF群明显(p<0.01 Student t test)多于对照群(SeV18+LacZ/TSAF群)。图6
IL-10表达SeV载体给药后脑组织中的A卩量的测定图。对照使用了 LacZ表达SeV载体。IL-10表达SeV载体给药群几乎所有级分均可见A卩 量减少，尤其可溶性A(340 ( TBS级分、1% Triton级分)和不溶性Ap42 (蚁 酸级分)明显减少。图7
IL-10表达SeV载体给药后正常小鼠血中IL-10量的测定图。血中IL-10 以剂量依赖性的方式被检出。图8
IL-10表达SeV载体给药后的血中IL-10量动力学图。 SeV18+mlL10/TSAF —次经鼻给药(5xl07 CIU/只)得到的值为AUC = 176,000 pg h/ml。图9
IL-10表达SeV载体给药后的血中IL-10的脑内转移示意图。对正常 C57BL/6N小鼠(N=5 )以5xl08 CIU/只/53(！1经鼻给药SeV18+mlL10/TSAF 或SeV18+LacZ/TSAF。对照组同量给药DPBS(-)。给药第3天回收脑(分为 嗅球、大脑/海马、小脑/延髓3部分)、鼻粘膜、气管/肺、血浆，使用ELISA 对各组织中的mIL-lO进行了定量。
(B)为(A)嗅球、大脑/海马及小脑/延髓中mlL-10表达量的纵坐标放大图。
图1 0
IL-10表达SeV载体经鼻给药后的IL-10脑内转移示意图。对正常 C57BL/6N小鼠(N=5 )以5xl08 ClU/只/53fi1经鼻给药SeV18+mlL10/TSAF 或SeV18+LacZ/TSAF。对照组同量给药DPBS(-)。给药第3天回收了灌流脑。 使用ELISA对脑(分为嗅球、大脑/海马、小脑/延髓3个部分)、鼻粘膜、 气管/肺及血浆中的mlL-10进行了定量。
(B)为(A)嗅球、大脑/海马及小脑/延髓中mlL-10表达量的纵坐标放大图。
图1 1IL-10表达SeV载体经鼻给药后的IL-10脑内转移示意图。对正常 C57BL/6N小鼠(N=5 )以5xl08 ClU/只/53ial经鼻给药SeV18+mlL10/TSAF 或SeV18+LacZ/TSAF。对照组同量给药DPBS(-)。给药第7天回收脑(分为 嗅球、大脑/海马、小脑/延髓为3等分)、鼻粘膜、气管/肺、回收血浆，使 用ELISA对各组织中的mIL-lO进行了定量。
(B)为(A)嗅球、大脑/海马及小脑/延髓中mlL-10表达量的纵坐标放大图。
图1 2
IL-10表达SeV载体经鼻给药后IL-10脑内转移示意图。对正常 C57BL/6N小鼠(N=5 )以5xl08 CIU/只/53nl经鼻给药SeV18+mlL10/TSAF 或SeV18+LacZ/TSAF。对照组同量给药DPBS(-)。给药第7天回后回收灌流 脑。使用ELISA对脑(分为嗅球、大脑/海马、小脑/延髓3个部分)、鼻粘 膜、气管/肺及血浆中的mlL-10进行了定量。
(B)为(A)嗅球、大脑/海马及小脑/延髓中mlL-10表达量的纵坐标放大图。
图1 3
IL-10表达SeV载体经鼻给药后的IL-10脑内转移(CSF内浓度)示意 图。对正常Wistar大鼠(N=5 )以lx109 CIU/只/106pl经鼻给药 SeV18+mlL10/TSAF (大鼠#1-#5)或SeV18+LacZ/TSAF (大鼠#6画#10)。 对照组同量给药DPBS(-)(大鼠#11-#15)。给药后第3天回收血浆和脑脊 髓液，使用ELISA对mIL-10进行了定量。图1 4
正常小鼠(C57BL/6N) IL-10蛋白质皮下给药后的血中IL-10量动力学 图。背部皮下给药源自重组小鼠的IL-10(2.0吗/10(Hil/只)，使用ELISA对 血中mIL-lO进行定量。得到的值为AUC = 40,800 pg h/ml 。 Cmax二约 12，000pg/ml; Tmax:约1.5hr; t1/2 =约lhr (初始值)。图1 5
APP小鼠IL-10蛋白质皮下给药后的血中IL-10量示意图。图1 6
APP模型小鼠(Tg2576 ) IL-10连续皮下给药的效果照片。显示了抗A卩 抗体(4G8)的大脑新皮质头顶叶和海马切片的免疫染色结果。上图面表示IL-10给药群的结果，大脑新皮质中可见少量的老年斑(茶色斑点)。下图
面表示DPBS(-)给药群的结果，大脑新皮质多见老年斑。图1 7
IL-10连续皮下给药的APP模型小鼠(Tg2576)中老年斑的半定量结果 图。按老年斑的大小分别设定大斑9分、中斑3分、小斑1分，算出脑全 部范围(脑干、小脑除外)可观察到的老年斑合计分，在群间进行统计分 析(Student's t检验、平均士标准误差)。图1 8
IL-10连续皮下给药的APP模型小鼠(Tg2576 )的嗅球、大脑新皮质及 海马的老年斑面积比率图(Studentt检验)。
图注表记I L -10为I L -10给药群、DPBS (-)为DPBS (-)给药
群的结果。
发明的
具体实施例方式
阿尔茨海默病治疗和预防药物。载体有质粒、棵DNA、核糖体组分及病毒 载体等。本发明尤其涉及用于阿尔茨海默病治疗或治疗药物开发的携带抗 炎症细胞因子基因的负链RNA病毒载体以及包含该载体的阿尔茨海默病治 疗和预防药物组合物。负链RNA病毒(也记述为(-)链RNA病毒)是以负 链RNA (与编码病毒蛋白的有义链互补的反义链)为基因组的病毒。负链 RNA病毒也可称为负链RNA病毒。本发明中所使用的负链RNA病毒尤其 优选单链负链RNA病毒(也可称非分节型(non-segmented)负链RNA病 毒)。所谓单链负链RNA病毒是指以一条负链RNA为基因组的病毒。该 类病毒包4舌属副粘病毒(包含副粘病毒一牛(Paramyxoviridae);副粘病毒属 (genus Paramyxovirus),麻渗病毒属(genus Morbillivirus)，月思&泉炎病毒属 (genus Rubulavims)以及肺病毒属(genus Pneumovirus)等)、腮腺炎病毒(包含 弹状病毒科(Rhabdoviridae);水泡性病毒属(genus Vesiculovirus),莱萨病毒 属(genus Lyssavirus)，以及短暂热病毒属(genus Ephemerovirus)等)、纤丝病毒 科(Filoviridae)等病毒科的病毒。本发明的负链RNA病毒载体可以是具有传 播性或非传播性的载体。"传播性"是指，病毒载体感染宿主细胞时，在该细 胞内病毒可以进行自我复制，并产生感染性病毒粒子。
本发明中尤其优选的负链RNA病毒具体包括，属于副粘病毒科
10(Paramyxoviridae)病毒的仙台病毒(Sendai virus)、 新城疫病毒(Newcastle disease vims)、月思腺炎病毒(mumps virus)、麻渗病毒(measles virus)、 RS病毒 (respiratory syncytial virus)、 牛瘕病毒(rinderpest virus)、 瘋热病毒(distemper virus)、猴副流感病毒(SV5)、人副流感病毒1型和2型及3型；属于正粘病 毒牙牛(Orthomyxoviridae)的流感病毒；属于弹4犬病毒-牛(Rhabdoviridae)的水泡 性口内炎病毒(Vesicular stomatitis vims)及狂犬病毒(rabies vims)等。
本发明优选使用副粘病毒。副粘病毒是指属于副粘病毒科 (Paramyxoviridae )的病毒或其衍生物。副粘病毒中优选使用副粘病毒亚科 (Paramyxovirinae)(包4舌呼吸道病毒属(Respirovirus)、月思&泉炎病毒属和麻渗 病毒属(Morbillivirus), 以及肺病毒亚牙+ (Pneumovirinae)(包4舌肺病毒属 (Pneumovims)和间质'I"生月申病毒属(Metapneumovirus》等病毒；更优选p乎吸道 病毒属(genus Respirovirus )(也称副粘病毒属)的病毒或其书f生物。书亍生物 包含为了不破坏、病毒基因导入能力而改变病毒基因的病毒以及化学修饰 病毒等。本发明适用的呼吸道病毒属如人副流感病毒1型(HPIV-1)、人 副流感病毒3型(HPIV-3 )、牛副流感病毒3型(BPIV-3 )、仙台病毒(Sendai virus;也称小鼠副流感病毒1型)以及猴副流感病毒10型(SPIV-10)等。 本发明中的副粘病毒最优选仙台病毒。这些病毒可源自天然林，野生型抹， 突变抹，实验室传代株，人工构建抹等。
本发明中的"载体"是将核酸导入细胞的承运体。仙台病毒等负链RNA 病毒作为基因导入载体非常优越，在它们的生命周期内，没有DNA期，仅 通过宿主细胞的细胞质进行转录和复制，所以不会整合(integration)到染 色体。因此，不会造成由染色体异常所导致的癌化或永生化等安全问题。 负RNA病毒的这种特征在作为载体使用时对其安全性具有重大意义。从表 达外来基因的结果来看，即使对仙台病毒进行连续多次传代，也基本上不 发生碱基突变。这表明其基因组具有高度稳定性，并且能长期稳定表达所 插入的外来基因(Yu，D.etal., Genes Cells 2， 457-466 (1997))。同时，因缺失 衣壳结构蛋白，所以在插入基因的大小或包装的柔软性(flexibility)等性质上 也具有优势。
本发明的负链RNA病毒载体可以是，例如负链RNA病毒的基因组RNA 和病毒蛋白形成的复合体，即核糖核蛋白体(RNP)。具体来说，这种RNP 是包含负链RNA病毒的基因组RNA、 N蛋白、P蛋白、和L蛋白的复合体。RNP导入细胞后，在病毒蛋白的作用下，从基因组RNA转录编码病毒蛋白 的顺反子的同时，基因组也进行自我复制，形成子代RNP，所以可以期待 进行持续表达。向细胞导入RNP时，可以与所期望的转染试剂一起组合导 入。对于基因组RNA的复制，可以通过RT-PCR、 Northern杂交等检测RNA 拷贝数的增加来确认。
本发明的负链RNA病毒载体优选负链RNA病毒的病毒粒子。术语"病 毒粒子"是指在病毒蛋白的作用下由细胞中释放出的核酸微粒子。负链RNA 病毒的病毒粒子的结构是，由基因组RNA和病毒蛋白形成的上述RNP被 包在源自细胞膜的脂质膜(也称包膜)中。病毒粒子可以具有感染性。感染性 是指，负RNA病毒载体由于具有细胞吸附能力和膜融合能力，而能够将载 体内部的核酸导入吸附着的细胞内的能力。本发明的负链RNA病毒载体可 以是具有传播能力或不具有传播能力的载体。"具有传播能力"是指，病毒载 体感染宿主细胞时，在该细胞内病毒可以进行自我复制，并产生感染性病 毒粒子。
负链RNA病毒载体的基因组RNA以反义序列编码携带基因。通常， 负链RNA病毒的基因组在3，前导区和5，尾随区之间病毒基因成反义序列排 列。各基因的开放阅读框(ORF)之间呈转录终止序列(E序列)-间插序列(I序 列)-转录起始序列(S序列)，由此，编码各基因ORF的RNA可以分别被转 录成单独的顺反子。本发明载体的基因组RNA反义编码该RNA编码的基 因群的表达以及RNA本身自我复制所需的病毒蛋白N(核衣壳，又称核蛋白 (NP))、 P(磷)和L(大蛋白)。该RNA还可以编码形成病毒粒子所需的M(基 质)蛋白。该RNA进而还可以编码病毒粒子感染所需的包膜蛋白。负链RNA 病毒的包膜蛋白具体包括产生细胞膜融合的F(融合)蛋白以及病毒吸附于细 胞所需的HN(血凝素-神经氨酸酶)蛋白或H(血凝素)蛋白。但是，某些特定 细胞的感染并不需要HN蛋白(Markwell， MA. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82(4): 978-982 (1985))，只要有F蛋白便可感染。RNA也可以编码除了 F蛋白及/或HN蛋白以外的包膜蛋白。
例如，副粘病毒亚科各病毒的基因通常表述如下。NP基因通常也可表 示为"N"。另外，HN不具有神经氨酸酶活性时表述为H(血凝素)。
呼吸道病毒 NPP/C/V M F HN- L
腮腺炎病毒 NP P/V M F HN(SH)L
12麻渗病毒 NPP/C/V M F H- L
本发明的负链RNA病毒载体也可以缺损野生负链RNA病毒中的某几 个基因。病毒基因组RNA只要编码RNP重构时所需的病毒蛋白(N、 L及 P)，即使不编码包膜构成蛋白也可在细胞内进行复制，表达携带基因。例如， 虽然因病毒种类而异，^旦可以例示至少缺失一种以上编码F、 H、 HN、 G、 M及Ml等包膜构成蛋白的基因(WO 00/70055及WO 0(V70070; Li， H,O. et al" J. Virol. 74(14): 6564-6569,2000)。具体来说，对副粘病毒载体来说，不 含M、 F、 HN基因或它们的任意组合的病毒载体也可用作本发明优选使用 的载体。这种病毒载体可以通过例如外源性提供所缺失的基因产物来进行 重构。如此制备的病毒载体和野生型病毒一样，吸附于宿主细胞后，产生 细胞融合。但由于导入细胞中的载体基因组中缺失病毒原本具有的某一基 因，不会形成与本来的病毒具有同样感染力的子代病毒粒子。因此，这种 病毒是一种具有一次性基因导入能力的安全实用型病毒载体。基因组中缺 失的基因为，例如F基因及/或HN基因。至少缺失F基因的载体是本发明 的优选。例如，通过将表达F基因缺失型重组负链RNA基因组的质粒载体 与F蛋白表达载体和P、 L蛋白表达载体一起转染宿主细胞，可以重构病毒 载体(国际
发明者井上诚, 原裕人, 岩崎仁, 德炭由美子, 田畑寿晃, 长谷川护 申请人:生物载体株式会社