用于治疗阿尔茨海默病的化合物的制作方法
【专利摘要】本发明涉及调节阿尔茨海默病(AD)相关蛋白(淀粉样前体蛋白(APP)、β和γ分泌酶以及淀粉样β肽(Aβ))之浓度的方法，并且还涉及降低Aβ脱落的方法。此外，本发明延伸至用于治疗AD的化合物，并且还延伸至治疗AD的方法。
【专利说明】用于治疗阿尔茨海默病的化合物
【技术领域】
[0001]本发明涉及调节人和/或动物中37kDa / 67kDa层粘连蛋白受体的化合物。本发明延伸至调节阿尔茨海默病(Alzheimer’s Disease, AD)相关蛋白(淀粉样前体蛋白(amyloid precursor protein, APP)、β 和 Y 分泌酶(secretase)以及淀粉样 β 妝(amyloid beta peptide,Αβ ))之浓度的方法。此外,本发明延伸至用于治疗AD的化合物，并且还延伸至治疗AD的方法。
【背景技术】
[0002]阿尔茨海默病(AD)显然是困扰老年人的最普遍形式的痴呆种类，并且与众多遗传学、环境、表观遗传学、饮食及生活方式风险因素相关1O据称AD影响全球超过3700万人Π 4O
[0003]AD的神经病理学标志包括细胞内神经纤维缠结(neurofibrillary tangle)形成和细胞外淀粉样β肽(Αβ)斑块沉积5。淀粉样前体蛋白(APP)经β和Y分泌酶依次切割2，导致4kDa Αβ的脱落(shedding)，其聚集形成淀粉样斑块。作为可溶性低聚物以及斑块包含的聚集体，A β是治疗AD之研究努力的主要焦点。
[0004]Αβ以及更特别地42个氨基酸的同种型(Αβ42)被广泛认为是AD中的主要致病原(因为Αβ积聚是tau(另一种AD相关蛋白)过度磷酸化的先决条件)6。特别地，Αβ通过β-分泌酶和Y-分泌酶对I型跨膜蛋白APP进行蛋白水解切割而产生。Αβ诱导神经元缺失(AD的关键病理生理学特征之一)的潜在机制仍有待证实。有人提出，Αβ的神经毒性部分地通过其与细胞受体的相互作用来介导3。这些相互作用可能包括Αβ与神经元上的表面受体结合，从而改变其生化结构，负面影响神经元传导。有人提出，Αβ可通过与细胞表面受体(例如N-甲基-d-天冬氨酸(NMDA)受体、胰岛素受体、α-7烟碱受体)直接结合而诱发信号转导途径改变，从而影响神经元传导3’7。或者，Αβ可能通过整合入质膜的脂膜以及(较小程度上)细胞器而间接改变信号转导通路8。这被认为引起脂质结合受体的结构和功能改变，结果导致异常的信号转导通路8。
[0005]为了治疗AD，需要有用于调节人或动物中ΑΡΡ、β和Y分泌酶以及Αβ之产生和浓度的化合物。为了治疗AD，还需要有调节细胞内神经纤维缠结形成和细胞外Αβ斑块沉积的化合物。
[0006]概述
[0007]根据本发明的第一方面，提供了用于降低至少一种选自包括但不限于淀粉样前体蛋白(APP)、β和Y分泌酶以及淀粉样β肽(Αβ)之组的阿尔茨海默病(AD)相关蛋白之浓度的方法，所述方法包括使细胞表面蛋白(优选细胞外基质糖蛋白)与细胞表面蛋白特异性抗体(优选单克隆抗体)或前述抗体的任意片段接触，以使细胞表面蛋白的表面表位与细胞表面蛋白特异性抗体之间发生结合，导致所述至少一种AD相关蛋白之浓度的降低。
[0008]Αβ浓度的降低可以是相对于正常健康人或动物中Αβ浓度的降低，或者其可以是相对于患有AD的人或动物中A β浓度的降低。[0009]要理解的是，细胞表面蛋白的表面表位与细胞表面蛋白特异性抗体之间的结合至少阻碍(优选阻止)所述至少一种AiD相关蛋白与所述细胞表面蛋白的结合。
[0010]细胞表面蛋白可以是层粘连蛋白受体蛋白。在本发明的一个优选实施方案中，层粘连蛋白受体是人和/或动物的37kDa / 67kDa层粘连蛋白受体(LRP / LR)。LRP / LR又名LAMR、RPSA和p40。细胞表面蛋白也可以是与层粘连蛋白受体蛋白示出至少80 %或更高同源性(优选与LRP / LR示出至少80%或更高同源性)的蛋白。
[0011]在本发明的一个优选实施方案中，其浓度通过本发明的方法降低的AD相关蛋白是Αβ。Αβ量的降低导致人和/或动物细胞(优选神经元细胞)中细胞内神经纤维缠结形成的降低和/或细胞外A β斑块沉积的降低，从而治疗和/或预防AD。
[0012]细胞表面蛋白特异性抗体可以是针对细胞表面蛋白产生(raised)的任意抗体或其片段。在一个优选实施方案中，所述抗体是针对LRP / LR或者与LRP / LR具有80%或更高同源性的蛋白产生的。抗体或其片段可以是F(ab’)2片段、Fab片段scFv、双特异性scFv、三特异性scFv、单链或串联双抗体(tandem diabody)、单结构域抗体(dAb)、微型抗体(minibody)或分子识别单元(molecular recognition unit, MRU)。此外，抗体或其片段可以是单价、二价或多价的。抗体或其片段还可包含至少一个另外的抗原相互作用位点和/或至少一个另外的效应结构域。
[0013]在本发明的一个优选 实施方案中，所述抗体或其片段可以是抗层粘连蛋白受体特异性抗体，优选抗LRP / LR特异性抗体，更优选IgGl-1S18。
[0014]在本发明的一个优选实施方案中，细胞表面蛋白和/或细胞表面蛋白特异性抗体是人或动物细胞表面蛋白和/或细胞表面蛋白特异性抗体。细胞表面蛋白可以位于鼠神经元细胞(N2a)、人神经元细胞(SH-SY5Y)、幼仓鼠肾细胞(BHK)和人胚肾细胞(HEK293和/或 HEK293FT)上。
[0015]在本发明的一个优选实施方案中，用于降低至少一种选自包括但不限于ΑΡΡ、β和Y分泌酶以及Αβ之组的AD相关蛋白之浓度的方法包括使LRP / LR与IgGl-1S18或其任意片段接触，以使LRP / LR与IgGl-1S18或其任意片段之间发生结合，导致Αβ的浓度降低。
[0016]根据本发明的第二方面，提供了用于降低由β和Y分泌酶对淀粉样前体蛋白(APP)进行蛋白水解切割造成的淀粉样β肽(Αβ)脱落的方法，所述方法包括使细胞表面蛋白(优选细胞外基质糖蛋白)与细胞表面蛋白特异性抗体(优选单克隆抗体)或前述抗体的任意片段接触，以使细胞表面蛋白的表面表位与细胞表面蛋白特异性抗体之间发生结合，从而阻碍β和Y分泌酶对APP的蛋白水解切割。
[0017]Αβ脱落的降低可以是相对于正常健康人或动物中Αβ脱落的降低，或者其可以是相对于患有AD的人或动物中A β脱落的降低。
[0018]要理解的是，细胞表面蛋白的表面表位与细胞表面蛋白特异性抗体之间的结合至少阻碍(优选阻止)至少一种AD相关蛋白(ΑΡΡ、β和Y分泌酶以及Αβ)与细胞表面蛋白的结合。要理解的是，所述结合导致Aβ脱落的降低。
[0019]细胞表面蛋白可以是层粘连蛋白受体蛋白。在本发明的一个优选实施方案中，层粘连蛋白受体是人和/或动物的37kDa / 67kDa层粘连蛋白受体(LRP / LR)。LRP / LR又名LAMR、RPSA和p40。细胞表面蛋白也可以是与层粘连蛋白受体蛋白示出至少80 %或更高同源性(优选与LRP / LR示出至少80%或更高同源性)的蛋白。
[0020]细胞表面蛋白特异性抗体可以是针对细胞表面蛋白产生的任意抗体或其片段。在一个优选实施方案中，所述抗体是针对LRP / LR或与LRP / LR具有80%或更高同源性的蛋白产生的。所述抗体或其片段可以是F (ab’)2片段、Fab片段scFv、双特异性scFv、三特异性scFv、单链或串联双抗体、单结构域抗体(dAb)、微型抗体或分子识别单元(MRU)。此外，所述抗体或其片段可以是单价、二价或多价的。所述抗体或其片段还可以包含至少一个另外的抗原相互作用位点和/或至少一个另外的效应结构域。
[0021 ] 在本发明的一个优选实施方案中，所述抗体或其片段可以是抗层粘连蛋白受体特异性抗体，优选抗LRP / LR特异性抗体，更优选IgGl-1S18。
[0022]在本发明的一个优选实施方案中，所述细胞表面蛋白和/或细胞表面蛋白特异性抗体是人或动物细胞表面蛋白和/或细胞表面蛋白特异性抗体。所述细胞表面蛋白可以位于鼠神经元细胞(N2a)、人神经元细胞(SH-SY5Y)、幼仓鼠肾细胞(BHK)和人胚肾细胞(HEK293 和 / 或 HEK293FT)上。
[0023]在本发明的一个优选实施方案中，降低由β和Y分泌酶对APP进行蛋白水解切割造成的A β脱落的方法包括使LRP / LR与IgGl-1S18或其任意片段接触，以使LRP / LR与IgGl-1S18或其任意片段之间发生结合，导致A β脱落降低。
[0024]根据本发 明的第三方面，提供了用于降低至少一种选自包括但不限于淀粉样前体蛋白(ΑΡΡ)、β和Y分泌酶以及淀粉样β肽(Αβ)之组的阿尔茨海默病(AD)相关蛋白之浓度的方法，所述方法包括使细胞表面蛋白(优选细胞外基质糖蛋白)与核苷酸序列(优选RNA序列，更优选短发夹RNA (shRNA)序列或短干扰RNA (siRNA)序列或微RNA (miRNA)序列)接触，以使细胞表面蛋白的mRNA与核苷酸序列之间发生结合，导致细胞表面蛋白的下调，进而导致所述至少一种AD相关蛋白之浓度的降低。
[0025]要理解的是，细胞表面蛋白的mRNA与核苷酸序列之间的结合下调细胞表面蛋白，以使当与正常生理功能相比时，存在于细胞上的细胞表面蛋白更少。因此，有较少的结合位点可供至少一种AD相关蛋白结合。结合位点的降低导致至少一种AD相关蛋白(ΑΡΡ、β和Y分泌酶以及Αβ)之浓度的降低。
[0026]细胞表面蛋白可以是层粘连蛋白受体蛋白。在本发明的一个优选实施方案中，层粘连蛋白受体是人和/或动物的37kDa / 67kDa层粘连蛋白受体(LRP / LR)。LRP / LR又名LAMR、RPSA和p40。细胞表面蛋白也可以是与层粘连蛋白受体蛋白示出至少80 %或更高同源性(优选与LRP / LR示出至少80%或更高同源性)的蛋白。
[0027]优选地，当核苷酸序列与mRNA之间发生结合时，所述结合是在核苷酸序列与LRPmRNA之间。
[0028]在本发明的一个优选实施方案中，其浓度通过本发明方法降低的AD相关蛋白是Αβ。Αβ量的降低导致人和/或动物细胞(优选神经元细胞)中细胞内神经纤维缠结形成的降低和/或细胞外Αβ斑块沉积的降低，从而治疗和/或预防AD。Αβ浓度的降低可以是相对于正常健康人或动物中A β浓度的降低，或者其可以是相对于患有AD的人或动物中Αβ浓度的降低。
[0029]核苷酸序列优选为shRNA，更优选为分别具有SEQ ID NO:1和2所示序列之shRNAl和shRNA7中的至少一种。[0030]在本发明的一个优选实施方案中，细胞表面蛋白和/或核苷酸序列是人或动物细胞表面蛋白和/或核苷酸序列。细胞表面蛋白可以位于鼠神经元细胞(N2a)、人神经元细胞(SH-SY5Y)、幼仓鼠肾细胞(BHK)和人胚肾细胞(HEK293和/或HEK293FT)上。
[0031]在本发明的一个优选实施方案中，用于降低至少一种选自包括但不限于ΑΡΡ、β和Y分泌酶以及Αβ之组的AD相关蛋白之浓度的方法包括使LRP mRNA与分别具有SEQ IDNO:1和2所示序列之shRNAl和/或shRNA7接触，以使LRP mRNA与shRNAl和/或shRNA7之间发生结合，导致A β浓度降低。
[0032]根据本发明的第四方面，提供了用于降低由β和Y分泌酶对淀粉样前体蛋白(APP)进行蛋白水解切割造成的Αβ脱落的方法，所述方法包括使细胞表面蛋白(优选细胞外基质糖蛋白)与核苷酸序列(优选RNA序列，更优选短发夹RNA (shRNA)序列或短干扰RNA(siRNA)序列或微RNA(miRNA)序列)接触，以使细胞表面蛋白的mRNA与核苷酸序列之间发生结合，导致细胞表面蛋白的下调，进而导致β和Y分泌酶对APP的蛋白水解切割的降低。
[0033]Αβ脱落的降低可以是相对于正常健康人或动物中Αβ脱落的降低，或者其可以是相对于患有AD的人或动物中A β脱落的降低。
[0034]要理解的是，细胞表面蛋白的mRNA与核苷酸序列之间的结合下调细胞表面蛋白，以使与正常生理功能相比，存在于细胞上的细胞表面蛋白更少。因此，有较少结合位点可供至少一种AD相关蛋白结合。结合位点的降低导致Αβ脱落的降低。
[0035]细胞表面蛋白可以是层粘连蛋白受体蛋白。在本发明的一个优选实施方案中，所述层粘连蛋白受体是人 和/或动物的37kDa / 67kDa层粘连蛋白受体(LRP / LR)。LRP /LR又名LAMR、RPSA和p40。细胞表面蛋白也可以是与层粘连蛋白受体蛋白示出至少80%或更高同源性(优选地与LRP / LR示出至少80%或更高同源性)的蛋白。
[0036]优选地，当核苷酸序列与mRNA之间发生结合时，所述结合是在核苷酸序列与LRPmRNA之间。
[0037]核苷酸序列优选为shRNA，更优选为分别具有SEQ ID NO:1和2所示序列之shRNAl和shRNA7中的至少一种。
[0038]在本发明的一个优选实施方案中，细胞表面蛋白和/或核苷酸序列是人或动物细胞表面蛋白和/或核苷酸序列。细胞表面蛋白可以位于鼠神经元细胞(N2a)、人神经元细胞(SH-SY5Y)、幼仓鼠肾细胞(BHK)和人胚肾细胞(HEK293和/或HEK293FT)上。
[0039]在本发明的一个优选实施方案中，用于降低由β和Y分泌酶对APP进行蛋白水解切割造成的A β脱落的方法包括使LRP mRNA与分别具有SEQ ID NO:1和2所示序列的shRNAl和/或shRNA7接触，以使LRPmRNA与shRNAl和/或shRNA7之间发生结合，降低LRP / LR细胞表面水平，导致Αβ脱落降低。
[0040]根据本发明的第五方面，提供了用于降低至少一种选自包括但不限于淀粉样前体蛋白(ΑΡΡ)、β和Y分泌酶以及淀粉样β肽(Αβ)之组的阿尔茨海默病(AD)相关蛋白浓度的方法，所述方法包括使本发明第一方面的细胞表面蛋白与本发明第一方面的抗体以及本发明第三方面的核苷酸序列接触。
[0041]根据本发明的第六方面，提供了用于降低由β和Y分泌酶对淀粉样前体蛋白(APP)进行蛋白水解切割造成的Αβ脱落的方法，所述方法包括使本发明第二方面的细胞表面蛋白与本发明第二方面的抗体以及本发明第四方面的核苷酸序列接触。
[0042]根据本发明的第七方面，提供了抗层粘连蛋白受体特异性抗体在制备治疗阿尔茨海默病(AD)的药物组合物中的用途。
[0043]在本发明的一个优选实施方案中，抗层粘连蛋白受体特异性抗体可以是抗37kDa / 67kDa层粘连蛋白受体(LRP / LR)特异性抗体，更优选地，抗LRP / LR特异性抗体可以是IgGl-1S18。
[0044]根据本发明的第八方面，提供了抗层粘连蛋白受体特异性抗体，其用于治疗阿尔茨海默病(AD)。在本发明的一个优选实施方案中，抗层粘连蛋白受体特异性抗体可以是抗37kDa / 67kDa层粘连蛋白受体(LRP / LR)特异性抗体，更优选地，抗LRP / LR特异性抗体可以是IgGl-1S18。
[0045]根据本发明的第九方面，提供了核苷酸序列在制备治疗阿尔茨海默病(AD)的药物组合物中的用途。
[0046]在本发明的一个优选实施方案中，核苷酸序列可以是shRNA，更优选为分别具有SEQ ID NO:1和2所示序列之shRNAl和shRNA7中的至少一种。所述用途可以进一步包括抗层粘连蛋白特异性受体抗体，优选抗LRP / LR特异性抗体，更优选IgG1-1S18。
[0047]根据本发明的第十方面，提供了核苷酸序列，其用于治疗阿尔茨海默病(AD)。
[0048]在本发明的一个优选实施方案中，核苷酸序列可以是shRNA，更优选为分别具有SEQ ID NO:1和2所示序列之shRNAl和shRNA7中的至少一种。提供了用于与抗层粘连蛋白特异性受体抗体(优选抗LRP / LR特异性抗体，更优选IgGl-1S18) —起使用的核苷酸序列。
[0049]根据本发明的第十一方面，提供了治疗阿尔茨海默病(AD)的方法，其包括向有此需求的人或动物施用抗层粘连蛋白特异性受体抗体，优选抗37kDa / 67kDa层粘连蛋白受体(LRP / LR)特异性抗体，更优选地，所述抗LRP / LR特异性抗体可以是IgGl_iS18。
[0050]根据本发明的第十二方面，提供了治疗阿尔茨海默病(AD)的方法，其包括向有此需求的人或动物施用核苷酸序列，优选shRNA,更优选分别具有SEQ ID NO:1和2所示序列之shRNAl和shRNA7中的至少一种。所述方法可进一步包括向有此需求的人或动物施用抗层粘连蛋白特异性受体抗体，优选抗LRP / LR特异性抗体，更优选IgGl-1S18。
[0051]附图简述
[0052]现在仅通过举例的方式参考附图来描述本发明，其中
[0053]图1a通过免疫荧光显微术示出37kDa / 67kDa层粘连蛋白受体(LRP / LR)与阿尔茨海默病(AD)相关蛋白(淀粉样前体蛋白(APP)、β和Y分泌酶以及淀粉样β肽(Αβ))在人胚肾细胞(ΗΕΚ293)细胞表面上的共定位；
[0054]图1aa示出图1a的黑白线图；
[0055]图1b通过免疫荧光显微术示出LRP / LR与AD相关蛋白ΑΡΡ、β和Y分泌酶以及Αβ在鼠成神经细胞瘤(N2a)细胞表面上的共定位；
[0056]图1bb示出图1b的黑白线图；
[0057]图2a示出在用抗体IgGl-1S18和IgGl_HD37处理之后的HEK293和人神经元细胞(SH-SY5Y)中，经抗体孵育18小时后，由AiiELISA(人淀粉样蛋白β (l-χ)测定试剂盒(IBL))检测的Αβ浓度；[0058]图2b示出SH-SY5Y细胞用不同剂量的IgGl_iS18处理18小时后，由Αβ ELISA确定的Αβ浓度；
[0059] 图2c示出经IgGl-1S18处理后，人胚肾细胞(HEK293FT)和SH-SY5Y细胞表面上ΑΡΡ、β -分泌酶和Y -分泌酶水平的流式细胞术分析；
[0060]图2d示出反映SH-SY5Y细胞经不同浓度(0-100 μ g / ml) IgGl_iS18处理18小时后，细胞培养基中sAPPi3 (sAPP β是由β-分泌酶的作用产生的脱落的APP切割产物)水平的Western印迹分析；
[0061]图3示出LRP / LR靶序列，以及短发夹RNAl (shRNAl)和短发夹RNA7 (shRNA7)的结构；
[0062]图4a示出转染了 LRP特异性shRNAl和shRNA7 (以及乱序对照(scrabbledcontrol), shRNAscr)的 HEK293 细胞的 Western 印迹分析；
[0063]图4b示出shRNA对LRP / LR之下调的作用，其中转染shRNA的HEK293细胞之细胞培养基中的A β浓度使用A β ELISA进行分析；
[0064]图4c示出转染shRNA的HEK293细胞表面上ΑΡΡ、β -分泌酶和Y -分泌酶水平的流式细胞术分析；
[0065]图4d示出转染shRNA的HEK293细胞中的sAPP β水平通过Western印迹进行分析；
[0066]图4e示出转染shRNAscr和模拟转染的HEK293细胞培养基中的A β浓度；
[0067]图5a示出抗体处理HEK293细胞后，β -分泌酶、Y -分泌酶和APP的流式细胞术叠加直方图；
[0068]图5b示出抗体处理SH-SY5Y细胞后，β -分泌酶、Y -分泌酶和APP的流式细胞术叠加直方图；
[0069]图5c 示出 shRNA 处理 HEK293 细胞，转染 shRNAl、shRNA7 或 shRNAscr 后，β -分泌酶、Y-分泌酶和APP的流式细胞术叠加直方图；
[0070]图6a (i)示出包含重组表达LRP / LR: =FLAG的细胞裂解物与外源A β共孵育的拉下测定(pull down assay)；
[0071]图6a(ii)示出用于确认LRP::FLAG(~38kDa)位置的免疫印迹；
[0072]图6b示出用合成六042外源处理和与抗LRP / LR抗体IgGl-1S18或IgGl-HD37(阴性对照)共孵育后，通过3-(4，5_ 二甲基噻唑-2-基)-2，5_ 二苯基四氮唑溴盐(MTT)(lmg / ml)测定所确定的HEK293细胞之细胞活力；
[0073]图6c示出SH-SY5Y细胞的细胞活力；
[0074]图6d示出N2a细胞的细胞活力；
[0075]图6e示出通过5-溴-2 '-脱氧尿苷(BrdU)非同位素比色免疫测定(r:ill)iochenri< )确定的N2a细胞的细胞增殖，允许fcdu掺入培养细胞4h ；以及
[0076]图7示出拉下测定后对照样品的蛋白检测。
[0077]发明详述
[0078]根据本发明的第一方面，提供了用于降低至少一种选自包括但不限于淀粉样前体蛋白(ΑΡΡ)、β和Y分泌酶以及淀粉样β肽(Αβ)之组的阿尔茨海默病(AD)相关蛋白之浓度的方法，所述方法包括使细胞表面蛋白(优选细胞外基质糖蛋白)与细胞表面蛋白特异性抗体(优选单克隆抗体)或前述抗体的任意片段接触，以使细胞表面蛋白的表面表位与细胞表面蛋白特异性抗体之间发生结合，导致所述至少一种AD相关蛋白浓度的降低。
[0079]至少一种AD相关蛋白之浓度的降低是相对于正常健康人或动物中AD相关蛋白之量的降低，或者相对于患有AD的人或动物的降低。
[0080]要理解的是，细胞表面蛋白的表面表位与细胞表面蛋白特异性抗体之间的结合至少阻碍(优选阻止)至少一种AD相关蛋白与细胞表面蛋白的结合。
[0081 ] 所述细胞表面蛋白可以是层粘连蛋白受体蛋白。然而，在本发明的一个优选实施方案中，层粘连蛋白受体是人和/或动物的37kDa / 67kDa层粘连蛋白受体(LRP / LR)。LRP / LR又名LAMR、RPSA和p40。细胞表面蛋白也可以是与层粘连蛋白受体蛋白示出至少80%或更高同源性(优选地与LRP / LR示出至少80%或更高同源性)的蛋白。
[0082]在以下一些举例说明性和/或例示性的实施例中，其浓度通过本发明方法降低的AD相关蛋白是Αβ。Αβ量的降低导致人和/或动物细胞(优选神经元细胞)中细胞内神经纤维缠结形成的降低和/或细胞外Aβ斑块沉积的降低，从而治疗和/或预防AD。当为了治疗和/或预防AD，实施该降低A β浓度的方法时，接触通常发生在体内。
[0083]细胞表面蛋白特异性抗体可以是针对细胞表面蛋白产生的任意抗体或其片段。通常，所述抗体是针对LRP / LR或与LRP / LR具有80%或更高同源性的蛋白产生的。所述抗体或其片段可以是F (ab’ )2片段、Fab片段scFv、双特异性scFv、三特异性scFv、单链或串联双抗体、单结构域抗体(dAb)、微型抗体或分子识别单元(MRU)。此外，所述抗体或其片段可以是单价、二价或多价的。所述抗体或其片段还可以包含至少一个另外的抗原相互作用位点和/或至少一个另外的效应结构域。优选地，所述抗体或其片段是抗层粘连蛋白受体特异性抗体，更优选抗LRP / LR特异性抗体，更更优选IgGl-1S18。
[0084]细胞表面蛋白和/或细胞表面蛋白特异性抗体通常是人或动物细胞表面蛋白和/或细胞表面蛋白特异性抗体。细胞表面蛋白可以位于鼠神经元细胞(N2a)、人神经元细胞(SH-SY5Y)、幼仓鼠肾细胞(BHK)和人胚肾细胞(HEK293和/或HEK293FT)上。
[0085]在本发明的一个优选实施方案中，用于降低至少一种AD相关蛋白浓度的方法包括使LRP / LR与IgGl-1S18或其任意片段接触，以使LRP / LR与IgGl_iS18或其任意片段之间发生结合，导致Αβ浓度降低。从实用的角度来看，当为了治疗和/或预防AD而实施该降低Αβ浓度的方法时，抗体(通常为IgGl-1S18或其任意片段)配制成药物组合物，并进一步配制成药物剂型，以向需要治疗的人或动物施用。药物组合物可以包含赋形剂。剂型可以配制成通过口服和/或肠胃外方式递送药物组合物。
[0086]根据本发明的第二方面，提供了用于降低由β和/或Y分泌酶对APP进行蛋白水解切割造成的Αβ脱落的方法，所述方法包括使上述细胞表面蛋白与上述细胞表面蛋白特异性抗体接触，以使细胞表面蛋白的表面表位与细胞表面蛋白特异性抗体之间发生结合，从而阻碍β和/或Y分泌酶对APP的蛋白水解切割。
[0087]Αβ脱落的降低可以是相对于正常健康人或动物中Αβ脱落的降低，或者其可以是相对于患有AD的人或动物中A β脱落的降低。
[0088]要理解的是，细胞表面蛋白的表面表位与细胞表面蛋白特异性抗体之间的结合至少阻碍(优选阻止)所述至少一种AD相关蛋白(ΑΡΡ、β和Y分泌酶以及Αβ)与细胞表面蛋白的结合。需要进一 步理解的是，正是该结合导致Aβ脱落的降低。[0089]正如在本发明第一方面中所述，在本发明的一个优选实施方案中，细胞表面蛋白是层粘连蛋白受体蛋白，优选地，层粘连蛋白受体是人和/或动物的LRP / LR。细胞表面蛋白也可以是与层粘连蛋白受体蛋白示出至少80%或更高同源性(优选地与LRP / LR示出至少80%或更高同源性)的蛋白。
[0090]细胞表面蛋白特异性抗体可以是针对细胞表面蛋白产生的任意抗体或其片段。在一个优选实施方案中，所述抗体是针对LRP / LR或与LRP / LR具有80%或更高同源性的蛋白产生的。所述抗体或其片段可以是F(ab’)2片段、Fab片段scFv、双特异性scFv、三特异性scFv、单链或串联双抗体、单结构域抗体(dAb)、微型抗体或分子识别单元(MRU)。此外，所述抗体或其片段可以是单价、二价或多价的。所述抗体或其片段还可以包含至少一个另外的抗原相互作用位点和/或至少一个另外的效应结构域。
[0091 ] 在本发明的一个优选实施方案中，所述抗体或其片段可以是抗层粘连蛋白受体特异性抗体，优选抗LRP / LR特异性抗体，更优选IgGl-1S18。
[0092]在本发明的一个优选实施方案中，细胞表面蛋白和/或细胞表面蛋白特异性抗体是人或动物细胞表面蛋白和/或细胞表面蛋白特异性抗体。细胞表面蛋白可以位于鼠神经元细胞(N2a)、人神经元细胞(SH-SY5Y)、幼仓鼠肾细胞(BHK)和人胚肾细胞(HEK293和/或 HEK293FT)上。
[0093]在本发明的一个优选实施方案中，用于降低由β和Y分泌酶对APP进行蛋白水解切割造成的Αβ脱落的方法包括使LRP / LR与IgGl-1S18或其任意片段接触，以使LRP / LR与IgGl-1S18或其任意片段之间发生结合，导致Αβ脱落降低。正如上述本发明第一方面所述，IgGl-1S18 通常配制成药物组合物，其配制成药物剂型，其向需要治疗AD的人或动物施用。
[0094]根据本发明的第三方面，提供了用于降低至少一种选自包括但不限于ΑΡΡ、β和Y分泌酶以及Αβ的组之AD相关蛋白之浓度的方法，所述方法包括使细胞表面蛋白(优选细胞外基质糖蛋白)与核苷酸序列(优选RNA序列，更优选短发夹RNA (shRNA)序列或短干扰RNA (siRNA)序列或微RNA (miRNA)序列)接触，以使细胞表面蛋白的mRNA与核苷酸序列之间发生结合，导致细胞表面蛋白的下调，进而导致所述至少一种AD相关蛋白之浓度的降低。
[0095]至少一种AD相关蛋白浓度的降低是相对于正常健康人或动物中AD相关蛋白之量的降低，或者相对于患有AD的人或动物的降低。
[0096]细胞表面蛋白可以是层粘连蛋白受体蛋白，优选如上述发明第一和第二方面所述的LRP / LR。优选地，当核苷酸序列与mRNA之间发生结合时，所述结合是在核苷酸序列与LRP mRNA 之间。
[0097]在本发明的一个优选实施方案中，其浓度通过本发明方法降低的AD相关蛋白是如上所述的Aβ。
[0098]核苷酸序列优选为shRNA，更优选为分别具有SEQ ID NO:1和2所示序列之shRNAl和shRNA7中的至少一种。
[0099]在本发明的一个优选实施方案中，用于降低至少一种选自包括但不限于ΑΡΡ、β和Y分泌酶以及Αβ之组的AD相关蛋白之浓度的方法包括使LRP / LR与分别具有SEQ IDNO:1和2所示序列的shRNAl和/或shRNA7接触，以使LRP mRNA与shRNAl和/或shRNA7之间发生结合，导致A β浓度降低。
[0100]根据本发明的第四方面，提供了用于降低由β和Y分泌酶对淀粉样前体蛋白(APP)进行蛋白水解切割造成的Αβ脱落的方法，所述方法包括使细胞表面蛋白(优选细胞外基质糖蛋白)与核苷酸序列(优选RNA序列，更优选短发夹RNA (shRNA)序列或短干扰RNA(siRNA)序列或微RNA(miRNA)序列)接触，以使细胞表面蛋白的mRNA与核苷酸序列之间发生结合，导致细胞表面蛋白的下调，进而导致β和Y分泌酶对APP的蛋白水解切割的降低。
[0101]细胞表面蛋白可以是层粘连蛋白受体蛋白，优选如上述发明第一和第二方面所述的LRP / LR。优选地，当核苷酸序列与mRNA之间发生结合时，所述结合是在核苷酸序列与LRP mRNA 之间。
[0102]Αβ脱落的降低可以是相对于正常健康人或动物中Αβ脱落的降低，或者其可以是相对于患有AD的人或动物中A β脱落的降低。
[0103]核苷酸序列优选为shRNA，更优选为分别具有SEQ ID NO:1和2所示序列之shRNAl和shRNA7中的至少一种。
[0104]在本发明的一个优选实施方案中，用于降低由β和Y分泌酶对APP进行蛋白水解切割造成的Aβ脱落的方法包括使LRP / LR与分别具有SEQID NO:1和2所示序列的shRNAl和/或shRNA7接触，以使LRP mRNA与shRNAl和/或shRNA7之间发生结合，导致细胞表面LRP / LR水平的降低，因此Αβ脱落降低。
[0105]根据本 发明的第五方面，提供了用于降低至少一种选自包括但不限于ΑΡΡ、β和Y分泌酶以及Αβ之组的AD相关蛋白之浓度的方法，所述方法包括使本发明第一方面的细胞表面蛋白与本发明第一方面的抗体以及本发明第三方面的核苷酸序列接触。基本上，LRP / LR被shRNA (shRNAl或7或二者)下调，并被抗LRP / LR特异性抗体基本上阻断，由此进一步降低Αβ的浓度。
[0106]根据本发明的第六方面，提供了用于降低由β和Y分泌酶对APP进行蛋白水解切割造成的Αβ脱落的方法，所述方法包括使本发明第二方面的细胞表面蛋白与本发明第二方面的抗体以及本发明第四方面的核苷酸序列接触。基本上，LRP / LR被shRNA (shRNAl或7或二者)下调，并被抗LRP / LR特异性抗体基本上阻断，由此进一步降低A β脱落。
[0107]根据本发明的第七方面，提供了抗层粘连蛋白受体特异性抗体在制备治疗AD的药物组合物中的用途。通常，抗层粘连蛋白受体特异性抗体是IgGl-1S18。
[0108]根据本发明的第八方面，提供了抗层粘连蛋白受体特异性抗体，其用于治疗AD。通常，抗层粘连蛋白受体特异性抗体是IgGl-1S18。
[0109]根据本发明的第九方面，提供了核苷酸序列在制备治疗AD的药物组合物中的用途。通常，核苷酸序列可以是RNA，优选shRNA，更优选分别具有SEQ ID NO:1和2所示序列之shRNAl和shRNA7中的至少一种。所述用途还可包括上述抗层粘连蛋白受体特异性抗体。
[0110]根据本发明的第十方面，提供了核苷酸序列，其用于治疗AD。通常，核苷酸序列可以是RNA，优选shRNA，更优选分别具有SEQ ID NO:1和2所示序列之shRNAl和shRNA7中的至少一种。提供了与上述抗层粘连蛋白受体特异性抗体一起使用用于治疗AD的核苷酸序列。[0111]根据本发明的第十一方面，提供了治疗AD的方法，其包括向有此需求的人或动物施用抗层粘连蛋白受体特异性抗体，优选抗LRP / LR特异性抗体,更优选IgGl-1S18。
[0112]根据本发明的第十二方面，提供了治疗AD的方法，其包括向有此需求的人或动物施用核苷酸，优选RNA序列，更优选shRNA，更优选分别具有SEQ ID NO:1和2所示序列之shRNAl和shRNA7中的至少一种。所述方法可进一步包括向人或动物施用抗层粘连蛋白受体特异性抗体，优选抗LRP / LR特异性抗体，更优选IgGl-1S18。
实施例
[0113]以下描述和/或举例说明和/或例示本发明的代表性实施例，其不应被视作对本发明范围的限制。本文所附序列表通过引用并入。[0114]在以下举例说明和例示的本发明的实施例中，表明37kDa / 67kDa层粘连蛋白受体(LRP / LR)与阿尔茨海默病(AD)相关蛋白(淀粉样前体蛋白(ΑΡΡ)、β-和Y -分泌酶以及淀粉样β肽(Αβ))结合。Αβ被发现与LRP / LR结合，该相互作用会导致Aβ诱发的细胞毒性。此外，抗体阻断(或基本上阻断)和shRNA下调LRP / LR被证明降低Αβ脱落，这归因于妨碍分泌酶活性，而非改变ΑΡΡ、β-和Y-分泌酶水平。这些发现表明，LRP / LR可与AD发病相关，并会产生在接受AD治疗的人或动物中用于调节LRP / LR和/或调节AD相关蛋白(ΑΡΡ、β-和Y-分泌酶以及Αβ)之浓度的新的治疗性干预。
[0115]细胞外基质糖蛋白(层粘连蛋白)表现出Αβ结合位点，即定位于三肽的α链上的IKAV肽序列15。然而，层粘连蛋白与Αβ间的结合据报道会促进神经突生长16，并抑制原纤维生成15，从而阻碍Αβ致病。先前的研究并未揭示LRP / LR在决定上述AD相关蛋白(尤其是Αβ)的浓度中发挥重要作用，现有技术也未表明LRP / LR可在妨碍β-分泌酶活性中发挥任何作用。
[0116]LRP / LR(又名LAMR、RPSA和ρ40)是一种多功能蛋白，其定位于质膜富含胆固醇的脂筏区域、细胞质及细胞核内17。已有报道LRP / LR与众多胞外(层粘连蛋白和弹性蛋白)及胞内(细胞骨架蛋白、组蛋白，硫酸乙酰肝素蛋白聚糖(heparan sulfateproteoglycan, HSPG))组分缔合，并具有生理学意义18。
[0117]下文所述实验方案显示LRP / LR与AD中产生淀粉的途径(amyloidgenicpathway)之间的关联(nexus),更具体地,LRP / LR与Αβ脱落进入胞外空间之间的关联。
[0118]为了探讨上述关联，使用间接免疫荧光显微术分析AD相关蛋白，即ΑΡΡ、β -和Y-分泌酶以及A β的细胞分布。LRP / LR示出与APP (图la，1-1v)、β-分泌酶(图la，v-viii)、Y-分泌酶(图la, ix-xii)以及Αβ (图la, xii1-xvi)在未经通透的人胚肾细胞(HEK293)表面上共定位。另一种层粘连蛋白结合受体极迟抗原6 (Very Late Antigen,VLA6)用作阴性对照(图la，xvi1-xx)0对于鼠成神经细胞瘤(N2a)细胞获得了相似的结果(图1b) ο
[0119]大体上，图1a示出LRP / LR与AD相关蛋白ΑΡΡ、β -分泌酶、Y -分泌酶以及A β在人胚肾细胞(ΗΕΚ293和/或HEK293FT)细胞表面上的共定位。图1a示出ΗΕΚ293细胞上的细胞表面受体经间接免疫标记，以允许使用Olympus 1X71免疫荧光显微镜和Analysis GetItResearch软件进行检测。特别地，图1a示出(i)APP(由抗APP (兔多克隆IgG) (Abcam)检测)，(V)，β -分泌酶(使用抗BACE (Μ-83)(兔多克隆 IgG) (Santa Cruz Biotechnology)检测)，(ix)，Y-分泌酶(由抗 PEN-2 (FL-1Ol)(兔多克隆 IgG) (Santa Cruz Biotechnology)检测)，(xii)，Αβ(使用抗β淀粉样蛋白(22-35) (Sigma)检测),以及(xvii), VLA6 (由抗极迟抗原6 (VLA6) Q)49-f (兔单克隆IgG) (Immunotech)检测)由Alexaf lour633间接标记，LRP / LR 由抗人 FITC 偶联抗体(Cell Lab)标记(ii, vi, x, xiv, xviii) ?
[0120]图la示出LRP / LR与AD相关蛋白的合并(iii, vii, xi, xv, xix),并包括相应的2D-细胞荧光图(2D-cyt0fluOT0gram)(使用CellSens软件获得)，以确定共定位的程度(iv, viii, xii, xvi, xx)。
[0121]图1b与上述图1a所示相同，但是是在N2a细胞表面所见。图中的比例尺是10 μ m。
[0122]细胞表面上AD相关蛋白的接近表明LRP / LR与AD相关蛋白之间可能存在缔合/相互作用，并且该受体可能的确与AD发病相关。2D-细胞荧光图(图1a和b，iv, viii,xii, xvi)示出红、绿突光的共同分布,斜行物(diagonal)表明目的细胞表面蛋白之间的共定位。图1aa和Ibb不出图1a和Ib的黑白重现版本，斜行物再次表明目的细胞表面蛋白之间的共定位。如下表1中所示的共定位的皮尔森相关系数(Pearson’s Correlationco-efficient)用于进一步确证所观察到的结果。
[0123]表1示出LRP / LR与AD相关蛋白共定位的皮尔森相关系数
[0124]
【权利要求】
1.用于降低至少一种选自以下的阿尔茨海默病(AD)相关蛋白之浓度的方法:淀粉样前体蛋白(APP)、β和Y分泌酶以及淀粉样β肽(Αβ)，所述方法包括: 使细胞表面蛋白与细胞表面蛋白特异性抗体或抗体片段接触，以使所述细胞表面蛋白的表面表位与所述细胞表面蛋白特异性抗体之间发生结合，导致所述至少一种AD相关蛋白之浓度的降低。
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述细胞表面蛋白是层粘连蛋白受体蛋白。
3.根据权利要求2所述的方法，其中所述层粘连蛋白受体蛋白是37kDa/ 67kDa层粘连蛋白受体(LRP / LR)或者与LRP / LR具有至少80%或更高同源性的蛋白。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中所述抗体或其片段是针对所述细胞表面蛋白产生的。
5.根据权利要求4所述的方法，其中所述抗体或其片段是抗层粘连蛋白受体特异性抗体或其片段。
6.根据权利要求5所述的方法，其中所述抗层粘连蛋白受体特异性抗体或其片段是抗LRP / LR特异性抗体或其片段或者与抗LRP / LR特异性抗体或其片段具有至少80%或更高同源性的抗体或其片段。
7.根据权利要求6所述的方法，其中所述抗LRP/ LR特异性抗体或其片段是IgGl-1S18或其片段。
8.根据权利要求1所述的方法，其中所述AD相关蛋白是Αβ，所述细胞表面蛋白是37kDa / 67kDa层粘连蛋白受体(LRP / LR)，并且所述细胞表面蛋白特异性抗体是IgGl-1S18或其片段。
9.降低由β和Y分泌酶对淀粉样前体蛋白(APP)进行蛋白水解切割造成的淀粉样β肽(Αβ)脱落的方法，所述方法包括: 使细胞表面蛋白与细胞表面蛋白特异性抗体或其任意片段接触，以使所述细胞表面蛋白的表面表位与所述细胞表面蛋白特异性抗体之间发生结合，从而阻碍β和Y分泌酶对APP的蛋白水解切割。
10.根据权利要求9所述的方法，其中所述细胞表面蛋白是层粘连蛋白受体蛋白。
11.根据权利要求10所述的方法，其中所述层粘连蛋白受体蛋白是37kDa/ 67kDa层粘连蛋白受体(LRP / LR)或者与LRP / LR具有至少80%或更高同源性的蛋白。
12.根据权利要求9至11中任一项所述的方法，其中所述抗体或其片段是针对所述细胞表面蛋白产生的。
13.根据权利要求12所述的方法，其中所述抗体或其片段是抗层粘连蛋白受体特异性抗体或其片段。
14.根据权利要求13所述的方法，其中所述抗层粘连蛋白受体特异性抗体或其片段是抗LRP / LR特异性抗体或其片段或者与抗LRP / LR特异性抗体或其片段具有至少80%或更高同源性的抗体或其片段。
15.根据权利要求6所述的方法，其中所述抗LRP/ LR特异性抗体或其片段是IgGl-1S18或其片段。
16.根据权利要求9所述的方法，其中所述AD相关蛋白是Αβ，所述细胞表面蛋白是37kDa / 67kDa层粘连蛋白受体(LRP / LR)，并且所述细胞表面蛋白特异性抗体是lgGl-1S18或其片段。
17.用于降低至少一种选自以下的阿尔茨海默病(AD)相关蛋白之浓度的方法:淀粉样前体蛋白(APP)、β和Y分泌酶以及淀粉样β肽(Αβ)，所述方法包括: 使细胞表面蛋白与核苷酸序列接触，以使所述细胞表面蛋白的mRNA与所述核苷酸序列之间发生结合，导致所述细胞表面蛋白的下调，进而导致所述至少一种AD相关蛋白之浓度的降低。
18.根据权利要求17所述的方法，其中所述核苷酸序列是RNA。
19.根据权利要求18所述的方法，其中所述RNA是短发夹RNA(shRNA)，或小干扰RNA (siRNA)，或微RNA (miRNA)，或上述的任意组合。
20.根据权利要求19所述的方法，其中所述RNA是shRNA，并且是分别具有SEQID NO:1和2所示序列之shRNAl和shRNA7中的至少一种。
21.根据权利要求17至20中任一项所述的方法，其中所述细胞表面蛋白是层粘连蛋白受:体蛋白。
22.根据 权利要求21所述的方法，其中所述层粘连蛋白受体蛋白是37kDa/ 67kDa层粘连蛋白受体(LRP / LR)或者与LRP / LR具有至少80%或更高同源性的蛋白。
23.根据权利要求17所述的方法，其中所述细胞表面蛋白是37kDa/ 67kDa层粘连蛋白受体(LRP / LR)并且所述核苷酸序列是分别具有SEQ ID NO:1和2所示序列之shRNAl和shRNA7中的至少一种，并且结合发生在LRP mRNA与shRNAl和shRNA7中至少一种之间。
24.用于降低由β和Y分泌酶对淀粉样前体蛋白(APP)进行蛋白水解切割造成的淀粉样β肽(Αβ)脱落的方法，所述方法包括: 使细胞表面蛋白与核苷酸序列接触，以使所述细胞表面蛋白的mRNA与所述核苷酸序列之间发生结合，导致所述细胞表面蛋白的下调，进而导致β和Y分泌酶对淀粉样前体蛋白(APP)的蛋白水解切割的降低。
25.根据权利要求24所述的方法，其中所述核苷酸序列是RNA。
26.根据权利要求25所述的方法，其中所述RNA是短发夹RNA(shRNA)，或小干扰RNA (siRNA)，或微RNA (miRNA)，或上述的任意组合。
27.根据权利要求26所述的方法，其中所述RNA是shRNA，并且是分别具有SEQID NO:1和2所示序列之shRNAl和shRNA7中的至少一种。
28.根据权利要求24至27中任一项所述的方法，其中所述细胞表面蛋白是层粘连蛋白受:体蛋白。
29.根据权利要求28所述的方法，其中所述层粘连蛋白受体蛋白是37kDa/ 67kDa层粘连蛋白受体(LRP / LR)或者与LRP / LR具有至少80%或更高同源性的蛋白。
30.根据权利要求24所述的方法，其中所述细胞表面蛋白是37kDa/ 67kDa层粘连蛋白受体(LRP / LR)并且所述核苷酸序列是分别具有SEQ ID NO:1和2所示序列之shRNAl和shRNA7中的至少一种，并且结合发生在LRP mRNA与shRNAl和shRNA7中至少一种之间。
31.用于降低至少一种选自以下的阿尔茨海默病(AD)相关蛋白之浓度的方法:淀粉样前体蛋白(APP)、β和Y分泌酶以及淀粉样β肽(Αβ)，所述方法包括: 使根据权利要求1至8中任一项所述的细胞表面蛋白与根据权利要求1至8中任一项所述的抗体和根据权利要求17至23中任一项所述的核苷酸序列接触。
32.用于降低由β和Y分泌酶对淀粉样前体蛋白(APP)进行蛋白水解切割造成的淀粉样β肽(Αβ)脱落的方法，所述方法包括: 使根据权利要求9至16中任一项所述的细胞表面蛋白与根据权利要求9至16中任一项所述的抗体和根据权利要求24至30中任一项所述 的核苷酸序列接触。
33.抗层粘连蛋白受体特异性抗体在制备治疗阿尔茨海默病(AD)的药物组合物中的用途。
34.根据权利要求33所述的用途，其中所述抗层粘连蛋白受体特异性抗体是抗37kDa / 67kDa层粘连蛋白受体(LRP / LR)特异性抗体。
35.根据权利要求34所述的用途，其中所述抗LRP/ LR特异性抗体是IgGl-1S18。
36.抗层粘连蛋白受体特异性抗体，其用于治疗阿尔茨海默病(AD)。
37.根据权利要求36所述的抗层粘连蛋白受体特异性抗体，其中所述抗层粘连蛋白受体特异性抗体是抗37kDa / 67kDa层粘连蛋白受体(LRP / LR)特异性抗体。
38.根据权利要求37所述的抗层粘连蛋白受体特异性抗体，其中所述抗LRP/ LR特异性抗体是IgGl-1S18。
39.核苷酸序列在制备治疗阿尔茨海默病(AD)的药物组合物中的用途。
40.根据权利要求39所述的用途，其中所述核苷酸序列是RNA序列。
41.根据权利要求40所述的用途，其中所述RNA序列是小发夹RNA(shRNA)序列，或小干扰RNA (siRNA)序列，或微RNA (miRNA)序列，或上述的组合。
42.根据权利要求41所述的用途，其中所述RNA序列是shRNA序列，并且是分别具有SEQ ID NO:1和2所示序列之shRNAl和shRNA7中的至少一种。
43.根据权利要求39至42中任一项所述的用途，其还包括抗层粘连蛋白特异性受体抗体。
44.根据权利要求43所述的用途，其中所述抗层粘连蛋白特异性受体抗体是抗LRP/LR特异性抗体。
45.根据权利要求44所述的用途，其中所述抗LRP/ LR特异性抗体是IgGl-1S18。
46.核苷酸序列，其用于治疗阿尔茨海默病(AD)。
47.根据权利要求46所述的核苷酸序列，其中所述核苷酸序列是RNA序列。
48.根据权利要求47所述的核苷酸序列，其中所述核苷酸序列是短发夹RNA(shRNA)序列，或小干扰RNA (siRNA)序列，或微RNA (miRNA)序列，或上述序列的组合。
49.根据权利要求48所述的核苷酸序列，其中所述RNA序列是shRNA序列，并且是分别具有SEQ ID NO:1和2所示序列之shRNAl和shRNA7中的至少一种。
50.根据权利要求46至49中任一项所述的核苷酸序列，其中所述核苷酸序列与抗层粘连蛋白特异性受体抗体一起使用。
51.根据权利要求50所述的核苷酸序列，其中所述抗层粘连蛋白特异性受体抗体是抗LRP / LR特异性抗体。
52.根据权利要求51所述的核苷酸序列，其中所述抗LRP/ LR特异性抗体是IgGl-1S18。
53.治疗阿尔茨海默病(AD)的方法，其包括向有此需求的人或动物施用抗层粘连蛋白特异性受体抗体。
54.根据权利要求53所述的方法，其中所述抗层粘连蛋白特异性受体抗体是抗37kDa / 67kDa层粘连蛋白受体(LRP / LR)特异性抗体。
55.根据权利要求54所述的方法，其中所述抗LRP/ LR特异性抗体是IgGl-1S18。
56.治疗阿尔茨海默病(AD)的方法，其包括向有此需求的人或动物施用核苷酸序列。
57.根据权利要求56所述的方法，其中所述核苷酸序列是RNA序列。
58.根据权利要求57所述的方法，其中所述RNA序列是shRNA序列，或小干扰RNA (siRNA)序列，或微RNA (miRNA)序列，或上述的组合。
59.根据权利要求58所述的方法，其中所述RNA序列是shRNA序列，并且是分别具有SEQ ID NO:1和2所示序列之shRNAl和shRNA7中的至少一种。
60.根据权利要求56至59中任一项所述的方法，其还包括向有此需求的人或动物施用抗层粘连蛋白特异性受体抗体。
61.根据权利要求60所述的方法，其中所述抗层粘连蛋白特异性受体抗体是抗LRP/LR特异性抗体。
62.根据权利要求61所述的方法，其中所述抗LRP/ LR特异性抗体是IgGl-1S18。
【文档编号】A61K39/395GK103957937SQ201280051702
【公开日】2014年7月30日 申请日期:2012年9月19日 优先权日:2011年9月19日
【发明者】斯特凡·弗朗茨·托马斯·魏斯, 卡塔琳娜·约万诺维奇, 达尼埃尔·贡萨夫莱斯, 比安卡·达科斯塔迪亚斯, 斯特凡·克纳克穆斯, 乌韦·罗伊施, 梅尔文·利特尔, 马克·索尔·魏因贝格 申请人:约翰内斯堡威特沃特斯兰德大学