一种用于治疗阿尔茨海默病的中药组合物及其制备方法和应用

一种用于治疗阿尔茨海默病的中药组合物及其制备方法和应用
【专利摘要】本发明公开了一种用于治疗阿尔茨海默病的中药组合物及其制备方法和应用。本发明的一种用于治疗阿尔茨海默病的中药组合物，由以下重量份的各原料药组成：白术8?18份，龙眼肉10?20份，阿胶3?13份，鱼鳔15?25份，败酱草3?13份，地锦草5?20份，地肤子5?20份，夏枯草5?20份，莲米5?20份，皂刺3?13份，白蒺藜3?15份以及威灵仙3?13份。本发明的中药组合物具有益气养血、补血补肾、清热利湿、补脾消毒、祛风通络等功效。同时，本发明通过研究该中药组合物对阿尔茨海默病动物模型的综合治疗效果，证明该中药组合物对阿尔茨海默病治疗有效并且无副作用，因此本发明的提出为阿尔茨海默病的治疗提供了一种新的有效技术手段，在阿尔茨海默病的治疗领域将具有广阔的应用前景。
【专利说明】
-种用于治疗阿尔茨海默病的中药组合物及其制备方法和 应用
技术领域
[0001] 本发明设及一种中药组合物及其制备方法和应用，特别设及一种用于治疗阿尔茨 海默病的中药组合物及其制备方法和应用，本发明属于中药技术领域。
【背景技术】
[0002] 阿尔茨海默病(Alzheimer'S disease，AD)是一种老年性、退行性、进行性的中枢 神经系统（Cental Nervous System,CNS)常见疾病之一（Gontier G,George C,Qiaker Z, et al.Blocking IGF Signaling in Adult Neurons Alleviates Alzheimer's Disease Pathology trough Amyloid-0Clearance[J].J 化urosci,2015,35(33):11500-11513.)。 AD主要表现为患者学习能力、记忆能力、分析能力、推理能力及其判断能力减退，还可W伴 有精神障碍及其意识模糊等等。AD影响患者的生活质量，甚至威胁患者的生命安全，AD对家 庭、社会和国家都带来了极大的挑战性。目前，AD已经成为屯、脑血管疾病、肿瘤、脑中风之 后，死亡率排在第四位的重要疾病。随着全球人口老龄化的必然趋势，AD理所当然成为国家 和社会常见的老年性、神经性、退行性疾病之一。AD几乎分布于世界的各个角落，在发展中 国家和较不富裕发达国家内，AD的发病率和死亡率也在迅速地增加。我们国家人口较多，老 龄人口也较多，因此探寻AD的发病机制和防治AD的新药组方就显得尤为重要。
[0003] AD病理特征包括很多，例如AD脑组织出现老年斑(Seni 1 e Plaques，SP)沉积，SP核 屯、主要是β-淀粉样蛋白（β-amyloid,Αβ)、小胶质细胞（Microglia，MG)、星形胶质细胞 (As化ocytes，As)和变性的轴索等;神经元信息传递部位突触出现损伤或者数量减少;MG、 As产生介导炎症反应的炎症介质;神经元内部神经原纤维不规则排列形成神经原纤维缠结 (Neurof ibrilla巧tangles，NFTs);海马锥体细胞出现桃红色平野小体;脑组织神经元数 量减少，颗粒空泡变性（Granulo vacuolar degeneration，GVDKLatta CH,Sudduth TL, Weekman EM,et al.Determining the role of IL-4induced neuroinflammation in microglial activity and amyloid-Pusing BV2microglial cells and APP/ PSltransgenic mice[J].J Neuroin flammation,2015,4(12):41.;Tang Z, Io ja E, Bereczki E,et al.mTor mediates tau localization and secretion: Implication for Alzheimer's disease[J].Biochim Biophys Acta,2015,1853(7):1646-1657.;Agosta F, Dalla Libera D,Spinelli EG,et al.Myeloid microvesicles in cerebrospinal fluid are associated with myelin damage and neuronal loss in mild cognitive impairment and Alzheimer disease[J] .Ann Neurol ,2014,76(6) :813-825.)等等。
[0004] AD发病机制还不清楚，研究者们提出多种关于AD的学说或者假说，例如Αβ蛋白学 说、炎症介质学说、神经血管假说、自由基损伤学说等等。Αβ蛋白学说是AD发病机制中最重 要的学说之一。在正常的情况下，脑组织Αβ是β-淀粉样蛋白前体蛋白（Amyloid-化recursor 口1'〇16；[]1，4??)通过0、丫-分泌酶水解产生的一种多肤，40主要包括401-4日和401-42。401-42是脑 组织内A的冗淀物形成的最关键组成部分，Αβι-42参与构成SP的核屯、成分(Yang H，Yang H， Xie Z，et al.Self-assembling nanofibers alter the processing of amyloid precursorprotein ina transgenic mouse model of Alzheimer's disease[J].Neurol 民es，2015,37(1) :84-91 .)dA目1-42对神经元产生神经毒性，A目1-42还可W形成可溶性、扩散性A β寡聚体（Am^doid beta-derived diffusible ligands，ADDLs)，脑组织A抓Ls(Liu X，Teng Z，Cui C，et al.Amyloid beta-derived diffusible ligands(ADDLs)induce abnormal expression of insulin receptors in rat hippocampal neurons[J].J Mol Neurosci, 2014,52(1) :124-130.)具有更大的神经毒性，A目1-42和ADDLs均可W引起脑组织神经元损 伤，造成神经元数量减少，尤其是海马神经元侵犯最为严重，A目1-42和AM)Ls还可W降化AD动 物模型的学习记忆水平。研究表明，AD模型小赢学习记忆能力下降化i T，Yu Y，Cai Η.Effects of brain-derived neurotrophic factor-pretreated neuron stem cell transplantation on Alzheimer's diseasemodel mice[J].Int J Clin Exp Med,2015,8 (11) :21947-21955.),基于这些，评价AD的治疗效果需要检测脑组织海马APP、A目i-42、A目1-40 和血清A目1-40水平，并观察脑组织海马的超微结构。
[0005] 炎症介质学说与A目蛋白学说密切相关，AD中脑组织A目少量增加时，脑组织16可^ 吞瞻少量A目，而当脑组织A目大量增加时，Αβ就会激活脑组织MG及As的分泌功能，脑组织A目促 进MG及As产生大量炎症介质，例如肿瘤坏死因子-a(Tumor necrosis factor-a，TNF-c〇、白 介素-lβ(Interleukin-lβ，Iレlβ)、白介素-6(Interleukin-6，Iレ6)等等（GaoJ，HΘH， Jiang W，et al.Salidroside ameliorates cognitive impairment in a d-galactose- induced rat model of Alzheimer's disease[J].Behav Brain 民es，2015，15(293):27- 33.;Zhao L,Zhao Q，Zhou Y，et al.Atorvastatin May Correct Dyslipidemia in Adult Patients at 民isk for Alzheimer's Disease Through an Anti-Inflammatory Pathway [J].CNS Neurol Disord Drug Targets,2016，15(l):80-85·)。另外，AD伴有脑组织抗氧化 水平的化下、自由基产生增加、氧化产物积聚等等(Wang C，He L，Yan M，et al.Effects of polyprenols from pine needles of Pinus massoniana on ameliorating cognitive impairment in a D-galactose induced mouse model[J].Age(Dordr)，2014，36(4): 9676.)，例如六0可1^表现为总抗氧化能力（Total antioxidative capacity，T-A0C)、超氧 化物歧化酶（Super oxide dismutase，SOD)、谷脫甘版过氧化物酶（Glutathione peroxidase，G細-PX)含量降化及氧化产物丙二酸(Malondialde的de，MDA)含量增加，基于 这些，评价AD治疗效果需要检测脑组织海马比-1目、TNF-a、化-6、T-A0C、S0D、G細-PX和MDA水 平。
[0006] 神经血管假说与Αβ蛋白学说也是密切相关的，血脑屏障（Blood-Brain Barrier， BBB)通透性的改变可^影响Αβ的清除和转运(Zlokovic BV.Neuro vascular pathways to neurodegeneration in Alzheimer's disease and other disorders[J].Nat Rev Neurosci ,2011,12(12) :723-738.)，改善脑组织BBB通透性有助于AD的治疗（Makani V， Jang YG,Christopher K，et al.BBB-Permeable，Neuroprotective，and Neuro trophic Polysaccharide，Midi-GAGR[J].PLoS One,2016,11(3) :θ0149715·)ηΑβ降解与脑组织对Αβ 转运密切相关，晚期糖基化终末产物受体（Receptor for advanced glycation end- products, RAGE) 可1^表达于脑组织神经元、 MG、 血管 内皮细胞等， 脑组织 RAGE 可与配体 Αβ 结 合，促进NF-kB通路活化，加速Αβ进入脑组织;脑组织八目可^和载脂蛋白J(Apolipoprotein J，Apo J)、载脂蛋白EUpolipoprotein Ε,Αρο E)等多种蛋白结合，Αβ的运种结合可W被低 密度脂蛋白相关蛋白1 (Lipoprotein receptor-related proteinl，LRP1)识别，从而介导A β 转出脑组织（Kim DK,化rk JD,Choi BS.Mercury-induced amyloid-beta(AP) accumulation in the brain is mediated by disruption of APtransport[J].J Toxicol Sci,2014,39(4):625-635.;Wan W,Chen H,Li Y.The potential mechanisms of Αβ-receptor for advanced glycation end-products interaction disrupting tight junctions of the blood-brain barrier in Alzheimer's disease[J].Int J Neurosci ,2014,124(2): 75-81.)。研究表明，脑组织RAGE通过NF-kB信号通路介导机体的脑 组织神经性、无菌性炎症反应，引起TNF-a和比-1β等炎症介质含量增加 (Wang SY，Liu肝， Ji WW,e t al.Qifu-Yin attenuates AGE s induced Alzheimer-like pathophysiological changes through the RAGE/NF-kB pathway[J].Chin J Nat Med, 2014,12(12) :920-928.)，脑组织RAGE/NF-kB通路还介导D-半乳糖诱导的脑组织记忆障碍 和神经变性（Ali T,Badshah H,Kim TH,et al.Melatonin attenuates D-galactose- induced memory impairment,neuroinflammation and neurodegeneration via RAGE/ NF-kB/JNK signaling pathway in aging mouse model[J].J Pineal Res,2015,58(1): 71-85.)，另外AD伴有脑组织线粒体细胞调亡途径相关的Bd-2和Bax表达异常，引起脑组织 Bcl-2/Bax比值改变，促进脑组织神经元细胞调亡(Cai C,Dai X,Zhu Y,et al.A specific RAGE-binding peptide biopanning from phage display random peptide library that ameliorates symptoms in amyloidPpeptide-mediated neuronal disorder[J] .Appl Microbiol Biotechnol,2016,100(2):825-35.)。基于运些，评价AD治疗效果需要检 测脑组织BBB通透性，脑组织海马RAGE、NF-K化65、LRPl、Apo J、Apo E、Bcl-2和Bax等表达水 平。
[0007] 随着科学技术的迅速发展，临床上出现了许多治疗AD的药物，但是并没有特别有 效的药物，很多药物都是改善AD学习记忆能力化earning and memcxry)，例如乙酷胆碱醋酶 (Acetylcholin esterase，A化E)抑制剂、抗神经元细胞调亡(Apoptosis)药物、抗氧化剂、 抗精神病药物、雌激素、神经营养因子(Neuro化ophic化ctor)、神经干细胞(Neural stem cells)和抗Αβ药物等等。虽然运些药物的治疗效果较好，但是运些药物具有一定的不良反 应，对机体身屯、健康造成一定的影响，因此探寻不良反应小并且有效的药物十分重要。祖国 中医药的明显优势是中医药成分较多、成分之间存在协同作用、不良反应较小，同时还具有 整体调节等等，因此，祖国中医药的中药组合物(化inese medicinal composition)在AD治 疗中就具有独特优势。基于此，寻找中医药新组方且有效的中药组合物开展AD的治疗就显 得尤为重要。

【发明内容】

[0008] 针对现有问题，本发明所要解决的技术问题是提供一种能够用于治疗AD的中药组 合物及其制备方法，该中药组合物具有益气养血、补血补肾、清热利湿、补脾消毒、桂风通络 等功效，并且无副作用。
[0009] 为了达到上述目的，本发明所采用的技术手段为：
[0010] 本发明中药组合物包括十二种药材，分别是中药材白术、龙眼肉、阿胶、鱼饌、败酱 草、地锦草、地肤子、夏枯草、莲米、皂刺、白裝襲和威灵仙。其中白术(A化actylodes)，性溫， 味苦、甘，归脾经、胃经，具有益气健脾、燥湿利水等功效;龙眼肉化ongan )，性溫，味甜，具有 补益屯、脾、养血安神等功效;阿胶(Gelatin),味微甘，具有补血滋阴、润燥止血等功效;鱼饌 (Maw),性平，味甘，归肾经，具有补肾益精、滋养筋脉、散疲消肿等功效;败酱草(Patrina)， 性凉，味辛、苦，具有清热解毒、桂疲排脈等功效;地锦草化umi化sa)，性平，味辛，归肺经、肝 经、胃经、大肠经、膀脫经，具有清热解毒、利湿退黄、活血止血等功效;地肤子(Fructus)，性 寒，味辛、苦，归肾经、膀脫经，具有清热利湿、桂风止痒等功效;夏枯草(Prunella),性寒，味 辛、苦，归肝经、胆经，具有清热泻火、明目散结、消肿等功效;莲米化otus seeds),性平，味 甘、涩，归脾经、肾经、屯、经，具有补脾止泻、补肾涩精、养屯、安神等功效;皂刺(Soap thorn)， 性溫，味辛，归肝经、肺经，具有消毒、透脈等功效；白裝襲(Tribulus terrestris)，性平，味 苦、辛，入肝经，具有桂风明目、平肝解郁等功效;威灵仙(Clematis),性溫，味辛、咸，归膀脫 经、肝经，具有桂风除湿、通络止痛等功效。本发明中药组合物具有益气养血、补血补肾、清 热利湿、补脾消毒、桂风通络等基本功效，说明中药组合物可W补气、补脾、补肾、补血、活 血，促进气旺血行，还可W散结清热、通络养阴，尤其是针对AD的本虚标实、气虚血疲，就会 有较好的治疗效果。
[0011] 基于W上的综合分析，本发明选择中药材白术、龙眼肉、阿胶、鱼饌、败酱草、地锦 草、地肤子、夏枯草、莲米、皂刺、白裝襲和威灵仙，共十二种药材组成中药组合物。具体的， 本发明的一种用于治疗AD的中药组合物，由W下重量份的各原料药组成：白术8-18份，龙眼 肉10-20份，阿胶3-13份，鱼饌15-25份，败酱草3-13份，地锦草5-20份，地肤子5-20份，夏枯 草5-20份，莲米5-20份，皂刺3-13份，白裝襲3-15份W及威灵仙3-13份。
[0012] 在本发明中，优选的，所述的中药组合物由W下重量份的各原料药组成：白术13 份，龙眼肉15份，阿胶8份，鱼饌20份，败酱草8份，地锦草12份，地肤子12份，夏枯草12份，莲 米12份，皂刺8份，白裝襲9份W及威灵仙8份。
[0013] -种临床上适宜的用于防治AD的中药制剂，其由本发明所述的中药组合物加入制 剂成型所需的辅料，按照制备药物制剂的常规方法制成。
[0014] 其中，优选的，所述的制剂为水煎剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂、片剂或日服液。
[0015] 进一步的，本发明还提出了一种制备所述的中药组合物的方法，其特征在于包括 W下步骤：
[0016] (1)按照本发明所述的重量份称取各原料药，将各原料药混合均匀后放入高颈圆 底烧瓶中，加入药物重量8-15倍的蒸馈水，浸泡1-化后，煎煮1-化，冷却；
[0017] (2)将步骤(1)冷却后的药液用纱布过滤，得到第一次滤液；
[0018] (3)步骤(2)剩余的药物残渣放入高颈圆底烧瓶中，重复步骤（1)和(2)得到第二次 滤液，合并二次滤液；
[0019] (4)干燥，得到所述中药组合物的干膏。
[0020] 其中，优选的，还包括将得到的干膏放在粉碎机内粉碎，研磨，分子筛处理，得到所 述中药组合物的干粉。
[0021] 为了说明本发明中药组合物的使用效果，本发明使用免疫组织化学方法和Real- time-PCR方法测定了与AD密切相关的脑组织海马RAGE、NF-K化65、LRP1、Apo J和Apo E蛋白 的表达量，W此评价中药组合物防治AD的效果及其相关分子作用机制。实验结果表明，模型 组AD小鼠脑组织海马LRPl、Apo J和Apo E蛋白平均光密度值和mRNA的相对表达量降低，预 示模型组AD小鼠脑组织海马LRP1、Apo J和Apo E蛋白和基因表达减少，说明模型组AD小鼠 脑组织海马可W与Αβ结合的蛋白质减少，降低了 Αβ转出脑组织，A的冗积于脑组织，同时脑组 织海马RAGE、NF-K化65蛋白平均光密度值和mRNA的相对表达量增加，预示模型组AD小鼠脑 组织海马RAGE、NF-K化65蛋白和基因表达上调，利于Αβ从血清中进入脑组织，增加脑组织Αβ 与神经元RAGE的结合，激活多种通路加重脑组织神经元的损伤，W此促进AD的发展。经过中 药组合物治疗后，中药组合物高、中剂量可W增加 AD小鼠 LRPUApo J和Apo E平均光密度值 和mRNA的相对表达量，预示中药组合物高、中剂量增加小鼠脑组织海马LRP1、Apo J和Apo E 蛋白和基因表达，减少脑组织Αβ的积聚，同时中药组合物高、中剂量可W使小鼠脑组织海马 RAGE、NF-K化65蛋白平均光密度值和mRNA相对表达量减少，预示中药组合物高、中剂量可W 使小鼠脑组织海马RAGE、NF-K化65蛋白和基因表达下调，减少脑组织Αβ与神经元RAGE的结 合，减弱多种通路的活化，减轻脑组织神经元的损伤，W此治疗AD。但是中药组合物低剂量 对AD小鼠脑组织海马RAGE、NF-K化65、LRP1、Apo J和Apo E蛋白和mRNA相对表达量的改变不 明显，预示中药组合物低剂量对AD小鼠脑组织海马RAGE、NF-K化65、LRP1、Apo J和Apo E表 达的影响不明显。本实验免疫组织化学方法和Real-time-PCR方法测得的脑组织海马RAGE、 NF-K化65、LRPl、Apo J和Apo E蛋白和基因表达实验结果的变化趋势与AD小鼠学习记忆能 力，海马超微结构，海马APP、Αβι-42、Αβι-40和血清Αβι-40水平，海马炎症介质IL-10、TNF-a和 比-6水平，海马Be 1-2、Bax水平、海马T-A0C、SOD、G甜-PX和MDA水平，脑组织BBB通透性等等 变化趋势有关，运提示脑组织海马RAGE、NF-K化65、LRP1、Apo J和Apo E是防治AD的祀点蛋 白。本实验预示中药组合物通过下调海马RAGE、NF-K化65表达且上调海马LRPUApo J、Apo E表达，W此改善AD小鼠学习记忆能力，海马超微结构，海马APP、Αβι-42、Αβι-4〇和血清Αβι-4〇水 平，海马炎症介质化-ie、TNF-a和比-6水平，海马Bd-2、Bax水平、海马T-A0C、S0D、GSH-PX和 MDA水平及其BBB通透性等等。
[0022] AD伴有机体免疫功能的低下及其脑组织的萎缩。免疫器官脾产生B细胞和巨隧细 胞等等，其中B细胞可转化成浆细胞后分泌大量抗体，抗体参与体液免疫;免疫器官胸腺可 W产生T细胞和胸腺素等等，其中T细胞参与细胞免疫。另外AD还伴有脑组织神经元数量减 少，脑组织相对质量减轻，进而出现脑组织萎缩。因此本发明测定了小鼠的脾、胸腺和脑指 数，W此评价中药组合物对AD小鼠免疫功能和脑萎缩程度的影响。实验结果表明，模型组小 鼠脾、胸腺和脑指数降低，预示模型组脾和胸腺相对质量降低，参与体液免疫的浆细胞(B细 胞转化)和参与细胞免疫的T细胞减少，进而预示模型组小鼠免疫力降低；同时脑组织相对 质量降低，预示模型组AD小鼠脑萎缩，脑组织的基本功能可能退化。经过中药组合物治疗 后，中药组合物高、中剂量改善小鼠的脾、胸腺和脑指数，预示中药组合物高、中剂量脾和胸 腺相对质量增加，参与体液免疫的浆细胞(B细胞转化)和参与细胞免疫的T细胞增加，中药 组合物高、中剂量可W使小鼠免疫功能增强；同时中药组合物高、中剂量小鼠脑组织相对质 量增加，说明脑萎缩程度得到改善，提示脑组织的基本功能可能部分恢复。但是中药组合物 低剂量对小鼠的脾、胸腺和脑指数的影响不明显，预示中药组合物低剂量对小鼠的免疫功 能和脑萎缩程度改善效果较差。W上显示中药组合物高、中剂量可W增强AD小鼠的免疫功 能并改善AD小鼠脑组织萎缩的程度。
[0023] 为了初步评价中药组合物高、中、低剂量对小鼠的副作用，本发明还使用电子天平 测定了小鼠的屯、、肺、肝、肾指数和小鼠的体重变化。实验结果表明，与对照组比较，模型组 小鼠屯、、肺、肝、肾指数和体重改变不明显，预示对照组和模型组小鼠的重要器官指数和体 重变化不明显。经过中药组合物治疗后，与模型组比较，中药组合物高、中、低剂量组小鼠的 屯、、肺、肝、肾指数和体重改变也不明显，提示中药组合物高、中、低剂量治疗AD不会改变小 鼠的屯、、肺、肝、肾指数和体重，预示中药组合物高、中、低剂量组小鼠的重要器官指数和体 重变化不明显，说明中药组合物高、中、低剂量对小鼠无副作用。
[0024] 综上所述，本发明提出了一种能够有效治疗AD的中药组合物，实验证明该中药组 合物对AD治疗有效并且无副作用。本发明的提出为进一步研发治疗AD的中药新药提供了客 观依据。
【附图说明】
[0025] 图巧中药组合物对AD小鼠潜伏期的影响；
[0026] 图2为中药组合物对AD小鼠游泳距离的影响；
[0027] 图3为中药组合物对AD小鼠目标象限停留时间和跨平台次数的影响；
[002引注:与对照组比较，中<0.05;与模型组比较，咕<0.05，咕>0.05;
[0029] 图4为中药组合物对AD小鼠脑组织海马CAI区神经元超微结构的影响（TEM，X 2550)的影响；
[0030] 图5为中药组合物对AD小鼠海马CA1区神经元细胞质超微结构影响（TEM，X 16500)；
[00川图6为中药组合物对AD小鼠脑组织海马APP、A执-42、Αβι-40和血清Αβι-40的影响；
[0032] 注:与对照组比较，*Ρ<0.05;与模型组比较，咕<0.05，咕>0.05;
[0033] 图7为中药组合物对AD小鼠脑组织海马IL-lf3、TNF-a和IL-6含量的影响；
[0034] 注:与对照组比较，中<0.05;与模型组比较，咕<0.05，咕>0.05;
[0035] 图8为中药组合物对AD小鼠脑组织海马Bd-2/Bax比值的影响；
[0036] 注:与对照组比较，中<0.05;与模型组比较，咕<0.05，咕>0.05;
[0037] 图9为中药组合物对AD小鼠脑组织海马T-A0C含量的影响；
[003引注:与对照组比较，中<0.05;与模型组比较，咕<0.05，咕>0.05;
[0039] 图10为中药组合物对AD小鼠脑组织海马SOD含量的影响；
[0040] 注:与对照组比较，*P<0.05;与模型组比较，咕<0.05，咕>0.05;
[0041 ]图11为中药组合物对AD小鼠脑组织海马GSH-PX含量的影响；
[00创注:与对照组比较，*P<0.05;与模型组比较，咕<0.05，咕>0.05;
[0043] 图12为中药组合物对AD小鼠脑组织海马MDA含量的影响；
[0044] 注:与对照组比较，中<0.05;与模型组比较，咕<0.05，咕>0.05;
[0045] 图13为中药组合物对AD小鼠脑组织BBB通透性的影响；
[0046] 注:与对照组比较，中<0.05;与模型组比较，咕<0.05，咕>0.05;
[0047] 图14为中药组合物对海马RAGE、NF-K化65、LRPl、Apo J和Apo E蛋白表达影响；
[004引注:与对照组比较，中<0.05;与模型组比较，咕<0.05，咕>0.05;
[0049] 图15为中药组合物对海马RAGE、NF-K化65、LRPl、Apo J和Apo E mRNA影响；
[0050] 注:与对照组比较，中<0.05;与模型组比较，咕<0.05，咕>0.05;
[0051 ]图16为中药组合物对AD小鼠脾、胸腺和脑指数的影响；
[005^ 注:与对照组比较，*P<0.05;与模型组比较，咕<0.05，咕>0.05;
[0053]图17为中药组合物对AD小鼠屯、、肺、肝和肾指数的影响；
[0化4] 注:与对照组比较，中>0.05;与模型组比较，咕>0.05;
[0化5]图18为中药组合物对AD小鼠体重的影响。
[0化6] 注:与对照组比较，中>0.05;与模型组比较，咕>0.05。
【具体实施方式】
[0057]下面结合具体实施例来进一步描述本发明，本发明的优点和特点将会随着描述而 更为清楚。但实施例仅是范例性的，并不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人员应 该理解的是，在不偏离本发明的精神和范围下可W对本发明技术方案的细节和形式进行修 改或替换，但运些修改和替换均落入本发明的保护范围内。
[005引实施例1 一种用于防治AD的中药组合物的制备
[0059] 由W下重量的各原料药组成：白术13g，龙眼肉15g，阿胶8g，鱼饌20g，败酱草8g，地 锦草12g，地肤子12g，夏枯草12g，莲米12g，皂刺8g，白裝襲9gW及威灵仙8g。
[0060] 实施例2-种用于防治AD的中药组合物的制备
[0061] 由W下重量的各原料药组成：白术lOg，龙眼肉15g，阿胶8g，鱼饌22g，败酱草lOg， 地锦草12g，地肤子15g，夏枯草12g，莲米13g，皂刺lOg，白裝襲lOgW及威灵仙9g。
[0062] 实施例3-种用于防治AD的中药组合物的制备
[0063] 由W下重量的各原料药组成：白术8g，龙眼肉lOg，阿胶3g，鱼饌15g，败酱草7g，地 锦草lOg，地肤子lOg，夏枯草12g，莲米lOg，皂刺lOg，白裝襲lOgW及威灵仙lOg。
[0064] 实施例4 一种用于防治AD的中药组合物的制备
[0065] 由W下重量的各原料药组成：白术12g，龙眼肉15g，阿胶lOg，鱼饌18g，败酱草lOg， 地锦草lOg，地肤子12g，夏枯草lOg，莲米lOg，皂刺7g，白裝襲8gW及威灵仙8g
[0066] 实施例5-种用于防治AD的中药组合物的制备
[0067] 由W下重量的各原料药组成：白术15g，龙眼肉20g，阿胶lOg，鱼饌25g，败酱草12g， 地锦草12g，地肤子14g，夏枯草12g，莲米12g，皂刺8g，白裝襲12gW及威灵仙9g。
[006引实施例6-种用于防治AD的中药组合物(干膏）的制备
[0069] (1)分别称取原药材白术13g、龙眼肉15g、阿胶8g、鱼饌20g、败酱草8g、地锦草12g、 地肤子12g、夏枯草12g、莲米12g、皂刺8g、白裝襲9g和威灵仙8g，每份中药组合物的原药材 重量137g。
[0070] (2)配制4倍中药组合物的原药材，即548g中药组合物，将548g中药组合物放入 20000ml高颈圆底烧瓶中，加入蒸馈水7000ml，将中药组合物浸泡化，煎煮中药组合物化，10 层白色纱布过滤后得到第一次中药组合物滤液；
[0071] (2)中药组合物残渣放到20000ml高颈圆底烧瓶中，加入蒸馈水7000ml，浸泡中药 组合物残渣化，煎煮中药组合物化，10层白色纱布过滤后得到第二次中药组合物残渣滤液；
[0072] (3)合并第一次中药组合物滤液和第二次中药组合物残渣滤液，干燥箱70°C干燥 5d后，得到中药组合物的干膏148.75g。
[0073] 中药组合物出膏率=(干膏/中药组合物）X 100%，经过计算得到（148.75/548) X 100% =27.14%，显示该中药组合物出膏率为27.14%。
[0074] 实施例7-种用于防治AD的中药组合物(干粉)的制备
[0075] 使用粉碎机将实施例6制备得到的中药组合物干膏粉碎，研磨，分子筛处理，得到 中药组合物干粉145.36g，中药组合物出粉率=(干粉/中药组合物）X 100%，经过计算得到 (145.36/548) X 100 % = 26.53 %，显示该中药组合物出粉率为26.53 %。
[0076] 实验配制中药组合物原药材重量为548g，最终得到中药组合物干粉145.36g，经过 计算可W知道，Ig中药组合物干粉相当于中药组合物原药材3.77g;分装中药组合物干粉， 20g/袋，-80°C冰箱内保存用于W下研究。
[0077] 实施例8本发明的中药组合物在治疗AD中的应用 [007引 1材料
[0079] 1.1实验动物
[0080] 7月龄清洁级雄性巧7BL/6小鼠，体重（22±2)g，购买于北京维通利华实验动物技 术有限公司，动物合格证:SCXK(京）2012-0001。C57化/6小鼠由黑龙江中医药大学实验动物 中屯、李宝龙副主任、博±后负责日常管理和处理。
[0081] 1.2主要仪器设备
[0082] Morris水迷宫（安徽淮北正华生物仪器设备有限公司），6100型RT-雷杜酶标仪(美 国RT公司），脑立体定位SN-2(日本仪器公司），组织脱水机和展片机（德国Leica公司）， TECNAI G2型透射电子显微镜(阳1/化ilips公司），101-0AB型电热恒溫鼓风干燥箱(天津市 泰斯特仪器有限公司），歷IAS高清晰度彩色医学图文分析系统(武汉千屏影像技术有限公 司），SIMF124制冰机、-80°C冰箱（日本SANYO)，PLZ0Z-S电子天平(梅特勒-托利多仪器有限 公司），TGkl6G台式离屯、机(上海安亭科学仪器厂)等等。
[0083] 2 方法
[0084] 2.1复制AD小鼠模型
[0085] 抓取健康7月龄巧7BL/6小鼠，10%水合氯醒麻醉小鼠，小鼠头部固定于脑立体定 位仪器SN-2(日本仪器公司），剪去毛发，消毒，剪开皮肤，暴露烦骨，无菌微量加样器于小鼠 双侧脑室一次性注入扣1凝聚态Αβι-42 ( 80ρπιο1/μ1)，留下针头2min，封闭烦骨孔，滴庆大霉 素消毒，包扎小鼠，消毒，肌肉注射青霉素10万/d，小鼠单笼饲养，避免小鼠感染和相互撕 咬。小鼠苏醒后，第2d开始，每d小鼠腹腔注射D-半乳糖（180mg/kg)和灌胃给予Ξ氯化侣 (AICl3)17mg/kg，持续42cLW此A&-42、D-半乳糖、AICI3S个因素综合处理C57BL/6小鼠，复 审IJAD模型小鼠。同时对照组巧7BL/6小鼠双侦顺室、腹腔注射和灌胃等量的生理盐水。
[00化]2.2药物剂量的设定 [0087] 2.2.1中药组合物剂量的设定
[008引中药组合物包括白术13g、龙眼肉15g、阿胶8g、鱼饌20g、败酱草8g、地锦草12g、地 肤子12g、夏枯草12g、莲米12g、皂刺8g、白裝襲9g和威灵仙8g，每份中药组合物137g/成人标 准体重。经过评定后，137g/成人标准体重是该中药组合物临床患者安全有效剂量。另外，依 据小鼠和人的体表面积比值0.0026:1，求得标准体重小鼠的中药组合物剂量是[(137gX 0.0026)/20g小鼠 ]X 50，即（17.8Ig/kg小鼠）。17.81 g/kg为中药组合物中剂量，中药组合物 高剂量是中药组合物中剂量的两倍，而中药组合物低剂量是中药组合物中剂量的二分之 一。因此本实验设定了中药组合物的高、中、低剂量分别是35.62g/kg、17.81g/kg、8.91g/ kg ο
[0089] 2.2.2阳性药物剂量的设定
[0090] 临床上AD患者使用多奈赃齐安全有效剂量是(5-10 )mg，依据小鼠和人的体表面积 比值为0.0026:1，得到小鼠给予多奈赃齐进行治疗的多奈赃齐安全有效剂量是(5 X 0.0026 X 50-10 X 0.0026 X 50 )mg/kg，即（0.65-1.3)mg/kg，换算成分子是单位g，即（0.00065- 0.0013)g/kg，经过黑龙江中医药大学附属第一医院内分泌科栗明副主任医师、博±后评 定，本实验选择0.0 Olg/kg多奈赃齐治疗AD模型小鼠。
[0091 ] 2.3实验动物分组及其给药
[00刮实验选择A&-42、D-半乳糖和AICI3制备AD模型小鼠，确定40只AD模型小鼠，将AD模 型小鼠随机分成模型组，治疗组，中药组合物高、中、低剂量组(分别简称高、中、低剂量组）， 每组8只。另设定同月龄、同背景、健康巧7BL/6小鼠8只为对照组。对照组、模型组小鼠分别 给予生理盐水灌胃，治疗组给予多奈赃齐0.OOlg/kg灌胃，按照Ig中药组合物干粉相当于中 药组合物原药材3.77g计算，中药组合物高、中、低剂量组分别给予相当于中药组合物原药 材35.62邑/1^、17.81邑/1^、8.91邑/4邑的中药组合物干粉(实施例7制备)灌胃，灌胃时将干粉 溶解于与对照组、模型组等量的生理盐水中，灌胃持续42d。
[0093] 2.4定位航行能力实验
[0094] 定位航行能力实验用于检测小鼠学习能力，采用Morris水迷宫(MWM)仪器进行测 定定位航行能力。MWM主要结构包括圆形水池、水下平台、电脑、摄像机和数据分析软件系 统。实验设定实验室内的基本条件包括水溫(23±2)°C，水深20cm，水下平台放于第IV象限， 室内外参照物一致，无外界噪音干扰，水池内放上奶粉及白色素，每次MWM测试后需用吹干 机吹干小鼠，避免小鼠生病，MWM水池边缘标记四个象限如第I象限、第II象限、第III象限、 第IV象限，实验者不要说话等等。MWM实验设定的时间是5d，其中第l-4d为小鼠的训练时间， 第5d为小鼠的巧聯时间。每次小鼠训练时间为60s，若小鼠60s内未找到第IV象限水下平台， 则将小鼠引至第IV象限水下平台停留15s，此时小鼠潜伏期为60s。第5d开始测试小鼠的学 习能力，记录小鼠到达第IV象限水下平台位置的潜伏期，W此评价小鼠学习能力。
[0095] 2.5空间探索能力实验
[0096] 空间探索能力实验用于检测各组小鼠记忆能力，实验过程及其注意事项同上 (2.4) ，在测试第5d时候撤去第IV象限水下平台，测试在60s内小鼠找到第IV象限水下平台 的游泳距离，W此来评价小鼠记忆能力。
[0097] 2.6跨越平台试验
[0098] 跨越平台实验用于检测小鼠学习记忆保持能力，MWM实验过程及注意事项同上 (2.4) ，在测试第5加寸撤去第IV象限水下平台，测试在60s内小鼠跨越平台所在位置次数(跨 平台次数)及其小鼠在原第IV象限移动平台所在象限的游泳时间（目标象限停留时间），W 此来评价小鼠学习记忆保持能力。
[0099] 2.7透射电子显微镜巧61)观察海马〔41区结构
[0100] MWM实验结束后，小鼠水合氯醒（10%)腹腔注射麻醉后，固定小鼠四肢和头部，剪 开胸腔，暴露屯、脏，输液器针头直接刺入小鼠左屯、室屯、尖搏动最明显的地方，剪开右屯、耳， 缓慢匀速点滴生理盐水90ml，小鼠肝脏逐渐变白为止，且右屯、耳流出白色清亮液体，使用 2.5%戊二醒溶液缓慢匀速灌注约80ml，直到各组小鼠四肢及其尾己僵硬为止，确定小鼠屯、 脏灌注成功。将小鼠放到超净工作台上，取材各组小鼠脑组织，寻找海马，将小鼠脑组织海 马CA1区切成l-3mm3小块，2.5 %戊二醒固定小鼠脑组织海马CA1区、四氧化饿固定、脱水、包 埋、CM1900冰冻切片机切片、染色，TECNAI G2型TEM(FEI/曲ilips公司）观察各组小鼠脑组 织海马CA1区的超微结构，W此评价中药组合物对AD小鼠脑组织海马超微结构的影响。
[0101] 2.8酶联免疫吸附法化1^54)巧憶4〇小鼠脑组织海马4口口、4&-42、4&-4日、比-10、了册- α、比-6、Be 1 -2、Bax和血清Αβι-4日水平
[0102] iWM实验结束后，抓取各组小鼠，眼科綴子快速摘除小鼠眼球，获得小鼠眼眶的混 合血。断头处死小鼠，使用超净工作台迅速在冰上取材小鼠脑组织，去除小脑和脑干，取材 小鼠脑组织海马，匀浆，4 °C冰箱静置匀浆液1 h。TCL-16G台式离屯、机3000巧m/mi η离屯、 20min，取上清液，分装，检测小鼠脑组织海马样品蛋白和血清样品蛋白含量。余下小鼠脑组 织海马样品蛋白和小鼠血清样品蛋白保存于-80°C冰箱备用。设置空白孔、标准品孔及样品 孔。各孔中加入相应的物质。采用6100型RT-雷杜酶标仪进行测定450nm的波长下的吸光度 值。根据标准曲线的方程及其各孔的吸光度值计算出小鼠脑组织海马APP、A&-42、A&-4〇、Ik 1β、TNF-a、化-6、Be 1-2、Bax和血清Αβι-4〇含量，W此评价中药组合物对AD小鼠脑组织海马 APP相关蛋白、炎症介质、细胞调亡的影响。
[0103] 2.9测定脑组织 T-A0C、S0D、GSH-PX 和 MDA 含量
[0104] iWM实验结束后，水合氯醒（10% )麻醉小鼠，取材小鼠脑组织，分离小鼠脑组织海 马，匀浆，静置海马化，TGkl6G台式离屯、机300化pm/min离屯、20min，取上清液，分装，按照试 剂盒说明书测定小鼠脑组织海马T-A0C、SOD、G細-ra和MDA含量，W此评价中药组合物对AD 小鼠抗氧化能力的影响。
[0105] 2.10测定小鼠脑组织BBB通透性
[0106] 小鼠脑组织BBB通透性用脑组织伊文氏蓝化B)渗出量进行表示，按照倍比稀释方 法依次配成8、4、2、1、0.5、0.254旨/1111的邸标准溶液，45°(：避光解育72}1，使用6100型1^-雷杜 酶标仪检测630nm的吸光度值(A)dW邸浓度为横坐标，吸光度值(A)为纵坐标，求出EB浓度 的标准曲线方程。MWM实验结束后，小鼠尾静脉注射2%EB，麻醉各组小鼠，输液器针头扎入 左屯、室屯、尖搏动最明显的部位，缓慢灌注生理盐水约90ml，剪开右屯、耳，将小鼠放到超净工 作台迅速解剖，取小鼠脑组织，记录小鼠脑组织重量为脑组织湿重，浸泡甲酯胺溶液，45 °C 避光解育72h，匀浆脑组织，T化-16G台式离屯、机3000巧m/min离屯、lOmin。使用6100型RT-雷 杜酶标仪63化m处测定脑组织上清液吸光度值(A)。根据邸标准曲线求出EB含量，EB含量计 算公式为:邸含量(yg/g)=邸浓度/脑组织湿重。
[0107] 2.11免疫组织化学（IHC)测定小鼠脑组织海马RAGE、NF-K化65、LRPl、Apo J和Apo E蛋白表达
[010引 2.11.1屯、脏灌注
[0109] 实验结束后，水合氯醒麻醉小鼠，剪开胸腔，暴露屯、脏，剪开右屯、耳，左屯、室屯、 尖处搏动最明显的地方缓慢匀速点滴生理盐水lOOml，直到小鼠肝脏组织完全变白为止， 4%多聚甲醒缓慢匀速灌注大约50ml，小鼠四肢及尾己僵硬，确定各组小鼠屯、脏灌注成功。
[0110] 2.11.2石蜡切片
[0111] 小鼠屯、脏灌注好后，超净工作台上准备取材全脑，去除小鼠的小脑和脑干，将小鼠 脑组织修整齐后，放到含有4%多聚甲醒的固定容器中2地。使用从低浓度逐渐过渡到高浓 度的乙醇进行脱水，二甲苯透明，小鼠脑组织放到融化的液态石蜡中，液态石蜡凝固后，石 蜡块放到冷水30min，切片机对小鼠脑组织进行连续切片，脑组织切片的厚度是扣m，切片棟 于经过多聚赖氨酸处理过的玻片上，切片烘烤化，保存于4°C冰箱中。
[0112] 2.11.3 I肥测定小鼠脑组织海马RAGE、NF-K化65、LRPl、Apo J和Apo E蛋白的表达
[0113] 采用IHC测定海马RAGE、NF-K化65、LRPl、Apo J和Apo E蛋白表达。IHC基本过程包 括石蜡切片脱蜡、3 %出化处理、加入一抗、4°C冰箱过夜、PBS洗涂、加入二抗、37 °C解育、PBS 洗涂、MB显色、光学显微镜下观察切片、蒸馈水冲洗、苏木精复染、PBS洗涂、分化、蓝化、脱 水、透明、封片等基本过程。同时设立阴性对照组和阳性对照组排除本实验假阳性和假阴 性，采用HMIAS高清晰度彩色医学图文分析系统进行分析切片，计数各组小鼠脑组织海马平 均光密度值，比较分析小鼠脑组织海马RAGE、NF-K化65、LRP1、Apo J和Apo E蛋白的平均光 密度值，W此评价中药组合物对RAGE、NF-K化65、LRPl、Apo J和Apo E蛋白的表达水平。
[0114] 2.12实时定量-PCR(RT-PCR)测定小鼠脑组织海马RAGE、NF-K化65、LRPl、Apo J和 Apo E mRNA的表达
[0115] 取新鲜小鼠脑组织海马化ippocampus)样品放入预冷的研鉢中，加入液氮进行充 分的研磨，将小鼠脑组织海马粉末移入EP管中，提取总RNA。检测提取的小鼠脑组织海马总 RNA浓度，测定0D260/280的值为1.8-2.0之间，说明所提取的小鼠脑组织海马RNA纯度符合 要求，同时将总RNA进行琼脂糖(Agarose)电泳，验证小鼠脑组织海马总RNA的完整性(28S、 18S两条带）。将小鼠脑组织海马总RNA于冰箱中进行保存，W备后面的实验使用。使用 TaKaRa反转录试剂盒，按组成配制RT-PCR的反转录反应液，进行检测小鼠脑组织（Brain tissue)海马样品。设定引物序列，包括RAGE、NF-K化65、LRPl、Apo J、Apo E和β-actin的正 反向引物(表1所示）。
[01W 表1引物名称和序列 「01171
[0118] RT-PCR反应参数为：50°C2min，95°C lOmin，1切Cle。50°C 2min，95 °C lOmin，95°C 15s，60°C Imin，40切cles。本实验的所有数据均采用Aet法计算。A cti =(中药组合物未 处理样品）基因 Mean Ct值一β-actin基因 Mean Ct值。ACt2=(中药组合物处理样品）基因 Mean Ct值一β-actin基因 Mean Ct值。Δ ACt=ACti(中药组合物处理样品）一ACt2(中药 组合物未处理样品），本实验采用法评价小鼠脑组织(Br曰in tissue)海马目的基因表 达的水平，法表示的RT-PCR实验结果数值越大，则目的基因表达越强，W此评价中药 组合物对小鼠脑组织海马RAGE、NF-K化65、LRPl、Apo J和Αρο Ε mRNA的表达水平。
[0119] 2.13测定小鼠体重和脏器指数
[0120] 中药组合物给药过程中，平均每7d使用电子天平测定小鼠体重。mm实验结束后， 断头处死小鼠，超净工作台上解剖各组小鼠，取材小鼠脾、胸腺、脑、屯、、肺、肝和肾，洗涂小 鼠的脾、胸腺、脑、屯、、肺、肝和肾，吸干脏器水分，电子天平称量小鼠脾、胸腺、脑、屯、、肺、肝 和肾脏器质量，计算小鼠脾、胸腺、脑、屯、、肺、肝和肾指数，比较各组小鼠的体重和脏器指数 差异，W此评价中药组合物的副作用。脏器指数(mg/g)=脏器质量(mg)/小鼠体重(g)。
[0121] 2.14统计学分析
[0122] 采用统计学软件SPSS19.0分析处理实验数据，实验数据使用?±8进行表示，实验数 据符合正态分布(Normal Distribution)及其方差齐等统计学的基本标准，单因素方差分 析(化e way AN0VA)多组间的实验数据，P<0.05表示差异有统计学意义，P>0.05表示差异 无统计学意义。
[0123] 3 结果
[0124] 3.1中药组合物对AD小鼠潜伏期的影响
[0125] 实验使用潜伏期评价小鼠定位航行能力，随着各组小鼠训练时间延长，各组小鼠 的潜伏期均表现出下降趋势，预示各组小鼠寻找第IV象限水下平台的能力逐渐增强，说明 小鼠定位航行能力逐渐增强。统计分析训练第4d和测试第5d潜伏期，实验结果表明，与对照 组比较，模型组AD小鼠潜伏期明显延长(P<0.05)，差异有统计学意义，预示模型组AD小鼠 寻找第IV象限水下平台比较困难，说明AD模型小鼠学习能力下降，模型建立成功，适合选择 该模型开展抗AD的实验研究；与模型组比较，治疗组、中药组合物高剂量组、中药组合物中 剂量组小鼠潜伏期明显缩短(P<〇.05)，差异有统计学意义，预示中药组合物高、中剂量可 W促进小鼠较快地寻找到第IV象限水下平台，捜寻第IV象限水下平台的时间缩短，说明中 药组合物高、中剂量可W改善各组小鼠的学习能力；与模型组比较，中药组合物低剂量组小 鼠潜伏期改变不明显(P>〇.05)，差异无统计学意义，预示中药组合物低剂量组小鼠寻找第 IV象限水下平台的能力较弱，说明中药组合物低剂量改善AD模型小鼠的学习能力较差。见 表2、图1。
[0126] 表2中药组合物对AD小鼠潜伏期的影响店±S，n = 8) Γ01271
[0128] 注:与对照组比较，冲<0.05;与模型组比较，咕<0.05，中>0.05 [0129 ] 3.2中药组合物对AD小鼠游泳距离的影响
[0130] 实验使用小鼠的游泳距离评价小鼠的空间探索能力，随着小鼠训练时间的延长， 各组小鼠的游泳距离均表现出下降的趋势，预示第IV象限移动平台的位置在小鼠脑组织内 部已经存储、加工、提取，说明小鼠的空间探索能力逐渐增强。统计分析训练第3-4d和测试 第5d游泳距离，结果表明，对照组比较，模型组AD小鼠游泳距离明显增加(P<0.05)，差异有 统计学意义，预示小鼠寻找第IV象限水下移动平台比较困难，说明模型组小鼠的记忆能力 不佳，提示AD模型稳定;与模型组比较，治疗组、中药组合物高剂量组、中药组合物中剂量组 小鼠游泳距离明显减少(P<〇.05)，差异有统计学意义，预示中药组合物高、中剂量可W促 进小鼠较快寻找到第IV象限水下平台，提示第IV象限水下平台的位置已经在小鼠的脑组织 记忆脑区存储、加工、提取，说明小鼠的记忆能力逐渐得到改善;与模型组比较，中药组合物 低剂量组小鼠游泳距离改变不明显(P>〇.05)，差异无统计学意义，预示中药组合物低剂量 改善AD模型小鼠的记忆能力较差。见表3、图2。
[0131] 表3中药组合物对AD小鼠游泳距离的影响G±s，n = 8)
[0132]
[0134] 注:与对照组比较，冲<0.05;与模型组比较，咕<0.05，咕>0.05
[0135] 3.3中药组合物对AD小鼠目标象限停留时间和跨平台次数的影响
[0136] 通过检测小鼠的目标象限停留时间和跨平台次数，W此评价各组小鼠的学习记忆 保持能力。实验结果表明，与对照组比较，模型组AD小鼠目标象限停留时间明显缩短，且跨 平台次数明显降低(P<〇.05)，差异有统计学意义，预示模型组AD小鼠对第IV象限移动平台 的学习记忆保持能力不佳，说明模型组AD小鼠的学习记忆保持能力较弱；与模型组比较，治 疗组、中药组合物高剂量组、中药组合物中剂量组小鼠目标象限停留时间明显延长，且跨平 台次数明显增加(P<〇.05)，差异有统计学意义，预示中药组合物高、中剂量组小鼠的学习 记忆保持能力逐渐改善;与模型组比较，中药组合物低剂量组小鼠目标象限停留时间和跨 平台次数改变不明显(P>〇.05)，差异无统计学意义，预示中药组合物低剂量对小鼠学习记 忆保持能力影响不明显。见表4、图3。
[0137]表4中药组合物对AD小鼠目标象限停留时间和跨平台次数的影响(王±8，11 = 8)
[013 引
[0139] 注:与对照组比较，中<0.05;与模型组比较，咕<0.05，咕>0.05
[0140] 3.4中药组合物对AD小鼠脑组织海马CA1区超微结构的影响
[0141] ??Μ观察对照组小鼠脑组织海马CA1区神经元形态较规则，胞体较大，核楠圆形且 清晰，线粒体和粗面内质网丰富，核膜较清晰，预示对照组小鼠脑组织海马CA1区神经元结 构正常;模型组AD小鼠脑组织海马CA1区神经元不规则，细胞器不丰富，细胞核小而楠圆，粗 面内质网较少，高尔基复合体较少，预示模型组小鼠脑组织海马CA1区神经元结构欠佳;治 疗组、中药组合物高剂量组、中药组合物中剂量组小鼠脑组织海马CA1区神经元形态规则， 胞体较大，核较大且楠圆形，粗面内质网、高尔基复合体较多，预示中药组合物高、中剂量改 善小鼠脑组织海马CA1区神经元的基本结构；中药组合物低剂量组小鼠脑组织海马CA1区神 经元细胞核圆形，细胞质内线粒体较少，预示中药组合物低剂量对小鼠脑组织海马CA1区神 经元的结构影响不明显。见图4、图5。
[0142] 3.5中药组合物对AD小鼠脑组织海马APP含量的影响
[0143] 结果表明，与对照组比较，模型组AD小鼠脑组织海马APP含量明显增加(P<0.05)， 差异有统计学意义，预示模型组AD小鼠脑组织产生Αβ的原材料APP增加，有利于脑组织APP 生成Αβ;与模型组比较，治疗组、中药组合物高剂量组、中药组合物中剂量组小鼠脑组织海 马ΑΡΡ含量明显降低(Ρ<0.05)，差异有统计学意义，预示中药组合物高、中剂量可W减少脑 组织Αβ的原材料，减少脑组织Αβ的生成，进而减轻AD的症状和体征；与模型组比较，中药组 合物低剂量组小鼠脑组织海马ΑΡΡ含量改变不明显(Ρ>0.05)，差异无统计学意义，说明中 药组合物低剂量对小鼠脑组织海马ΑΡΡ含量影响较弱。见表5、图6。
[0144] 表5中药组合物对AD小鼠脑组织海马APP含量的影响侣超）
[0145]
[0146] 注:与对照组比较，吁<0.05;与模型组比较，咕<0.05，中>0.05
[0147] 3.6中药组合物对AD小鼠脑组织海马A执-4洽量的影响
[0148] 结果表明，与对照组比较，模型组AD小鼠脑组织海马Αβι-42含量明显增加（P< 0.05)，差异有统计学意义，预示模型组AD小鼠脑组织可W形成SP和A孤Ls的Αβ水平增加，有 利于模型组AD小鼠脑组织SP和A孤Ls的形成，加重AD的症状和体征；与模型组比较，治疗组、 中药组合物高剂量组、中药组合物中剂量组小鼠脑组织海马Αβ?-42含量明显降低（P< 0.05)，差异有统计学意义，预示中药组合物高、中剂量可W减少小鼠脑组织SP和A孤Ls的形 成，有利于AD的治疗；与模型组比较，中药组合物低剂量组小鼠脑组织海马Αβ?-42含量改变 不明显(Ρ>0.05)，差异无统计学意义，预示中药组合物低剂量对小鼠脑组织海马Αβι-42含 量影响较弱。见表6、图6。
[0149] 表6中药组合物对AD小鼠脑组织海马A执-4洽量的影响(V±S)
[0150]
[0151] 注:与对照组比较，*P<0.05;与模型组比较，咕<0.05,中>0.05
[0152] 3.7中药组合物对AD小鼠脑组织海马A执-4倫量的影响
[0153] 结果表明，与对照组比较，模型组AD小鼠脑组织海马Αβι-4〇含量明显增加（P< 0.05)，差异有统计学意义，预示模型组AD小鼠脑组织可W进行跨BBB转运的Αβ含量增加，脑 组织容易形成SP;与模型组比较，治疗组、中药组合物高剂量组、中药组合物中剂量组小鼠 脑组织海马Αβι-4〇含量明显降低(Ρ<〇.05)，差异有统计学意义，预示中药组合物高、中剂量 可W减少小鼠脑组织族-40含量;与模型组比较，中药组合物低剂量组小鼠脑组织海马族-40 含量改变不明显(P>〇.05)，差异无统计学意义。见表7、图6。
[0154] 表7中药组合物对AD小鼠脑组织海马A执-4倫量的影响(；±S)
[0155]
[0156] 注:与对照组比较，*P<0.05;与模型组比较，咕<0.05，咕>0.05
[0157] 3.8中药组合物对AD小鼠血清A执-4倫量的影响
[015引结果表明，与对照组比较，模型组AD小鼠血清Αβι-40含量明显增加(P<0.05)，差异 有统计学意义，预示肝、肾、脾、胃等器官对施-40代谢较少，或者血清中可W结合施-40的可 溶性LRP1蛋白含量减少而导致游离的Αβι-40水平增加；与模型组比较，治疗组、中药组合物 高剂量组、中药组合物中剂量组小鼠血清Αβι-40含量明显减少(Ρ<0.05)，差异有统计学意 义，预示肝、肾、脾、胃等器官对施-40代谢较多，或者血清中可W结合施-40的可溶性LRP1蛋 白含量增加而导致游离的Αβι-40水平减少；与模型组比较，中药组合物低剂量组小鼠血清A 01-40含量改变不明显(P>0.05)，差异无统计学意义，预示中药组合物低剂量干扰肝、肾、 脾、胃等器官对Αβι-40代谢不明显。见表8、图6。
[0159] 表8中药组合物对AD小鼠血清A执-40含量的影响(Τ±?〇
[0160]
[0161 ] 注:与对照组比较，吁<0.05;与模型组比较，咕<0.05，中>0.05
[0162] 3.9中药组合物对AD小鼠脑组织海马IL-10含量的影响
[0163] 结果表明，与对照组比较，模型组AD小鼠脑组织海马IL-1 β含量明显增加 （Ρ < 0.05)，差异有统计学意义，预示模型组AD小鼠脑组织海马MG活跃，分泌大量炎症介质IL-1 β，介导脑组织神经性、无菌性炎症反应;与模型组比较，治疗组、中药组合物高剂量组、中药 组合物中剂量组小鼠脑组织海马IL-Ιβ含量明显降低(Ρ<0.05)，差异有统计学意义，预示 中药组合物高、中剂量可W降低脑组织海马MG的活跃程度，减少炎症介质IL-Ιβ释放，进而 减轻小鼠脑组织海马神经性、无菌性炎症反应;与模型组比较，中药组合物低剂量组小鼠脑 组织海马IL-Ιβ含量改变不明显(P>0.05)，差异无统计学意义，预示中药组合物低剂量对 小鼠脑组织海马MG的活跃程度影响不明显。见表9、图7。
[0164] 表9中药组合物对AD小鼠脑组织海马IL-10含量的影响G±S)
[01 化]
[0167] 注:与对照组比较，吁<0.05;与模型组比较，咕<0.05,中>0.05
[016引 3.10中药组合物对AD小鼠脑组织海马TNF-a含量的影响
[0169] 结果表明，与对照组比较，模型组AD小鼠脑组织海马TNF-α含量明显增加 （P < 0.05 )，差异有统计学意义，预示模型组AD小鼠脑组织神经胶质细胞释放炎症介质TNF-a增 加，加重脑组织海马区域的神经性、无菌性炎症反应;与模型组比较，治疗组、中药组合物高 剂量组、中药组合物中剂量组小鼠脑组织海马TNF-a含量明显降低(P<0.05)，差异有统计 学意义，预示中药组合物高、中剂量可W降低脑组织神经胶质细胞的活跃程度，降低小鼠脑 组织海马TNF-a水平，从而减轻小鼠脑组织海马神经性炎症反应;与模型组比较，中药组合 物低剂量组小鼠脑组织海马TNF-a含量改变不明显(P>〇.05)，差异无统计学意义，预示中 药组合物低剂量对小鼠脑组织海马神经胶质细胞的活跃程度影响不明显。见表10、图7。
[0170] 表10中药组合物对AD小鼠脑组织海马TNF-a含量的影响片±s)
[0171]
[01巧注:与对照组比较，*P<0.05;与模型组比较，咕<0.05，咕>0.05
[0173] 3.11中药组合物对AD小鼠脑组织海马IL-6含量的影响
[0174] 结果表明，与对照组比较，模型组AD小鼠脑组织海马IL-6含量明显增加 （P < 0.05)，差异有统计学意义，预示模型组AD小鼠海马神经性、无菌性炎症反应明显;与模型组 比较，治疗组、中药组合物高剂量组、中药组合物中剂量组小鼠脑组织海马IL-6含量明显降 低(P<0.05)，差异有统计学意义，预示中药组合物高、中剂量可W改善脑组织海马神经性、 无菌性炎症反应；与模型组比较，中药组合物低剂量组小鼠脑组织海马IL-6含量改变不明 显(P>0.05)，差异无统计学意义，预示中药组合物低剂量对小鼠脑组织海马神经性、无菌 性炎症反应的影响不明显。见表11、图7。
[0175] 表11中药组合物对AD小鼠脑组织海马IL-6含量的影响G±S)
[0176]
[0177] 注:与对照组比较，吁<0.05;与模型组比较，巧<0.05,中>0.05
[017引 3.12中药组合物对AD小鼠脑组织海马Bd-2和Bax含量的影响
[0179] 实验采用化ISA方法检测小鼠脑组织海马Bd-2和Bax含量。实验结果表明，与对照 组比较，模型组小鼠脑组织海马Bcl-2/Bax的比值明显降低(P<0.05)，提示Bd-2-Bax异二 聚体减少，Bax-Bax同二聚体增加，预示AD小鼠脑组织海马神经元的线粒体细胞调亡较为明 显。与模型组比较，治疗组、中药组合物高剂量组、中药组合物中剂量组小鼠脑组织海马 Bcl-2/Bax的比值明显升高(P<0.05)，显示小鼠脑组织海马抗调亡蛋白表达明显上调，而 促调亡蛋白表达改变不明显，预示Bd-2-Bax异二聚体增加，Bax-Bax同二聚体减少，进而导 致了Bcl-2/Bax的比值升高，预示不同剂量中药组合物可通过增加小鼠脑组织海马Bcl-2/ Bax的比值来发挥抗调亡的积极作用。见表12、图8。
[0180] 表12中药组合物对AD小鼠脑组织海马Bcl-2/Bax比值的影响G±s，n = 8)
[0181]
[0183] 注:与对照组比较，冲<0.05;与模型组比较，咕<0.05，中>0.05
[0184] 3.13中药组合物对AD小鼠脑组织海马T-A0C含量的影响
[01化]结果表明，与对照组比较，模型组AD小鼠脑组织海马T-A0C含量明显降低（P< 0.05)，差异有统计学意义，预示模型组AD小鼠脑组织海马的抗氧化能力减弱，导致脑组织 自由基的产生增加；与模型组比较，治疗组、中药组合物高剂量组、中药组合物中剂量组小 鼠脑组织海马T-A0C含量明显升高(P<0.05)，差异有统计学意义，说明中药组合物高、中剂 量可W增强AD小鼠脑组织海马的抗氧化能力，减轻自由基对机体脑组织的干扰;与模型组 比较，中药组合物低剂量组小鼠脑组织海马T-A0C含量改变不明显(P>0.05)，差异无统计 学意义，预示中药组合物低剂量对小鼠脑组织海马的抗氧化能力影响不明显。见表13、图9。
[0186] 表13中药组合物对AD小鼠脑组织海马T-A0C含量的影响(；±S)
[0187]
[018引注:与对照组比较，中<0.05;与模型组比较，咕<0.05，咕>0.05
[0189] 3.14中药组合物对AD小鼠脑组织海马SOD含量的影响
[0190] 结果表明，与对照组比较，模型组AD小鼠脑组织海马SOD含量明显降低(P<0.05)， 差异有统计学意义，预示模型组AD小鼠脑组织海马自由基的清除能力减弱;与模型组比较， 治疗组、中药组合物高剂量组、中药组合物中剂量组小鼠脑组织海马SOD含量明显升高(P< 0.05)，差异有统计学意义，预示中药组合物高、中剂量组小鼠脑组织海马清除自由基的能 力增强；与模型组比较，中药组合物低剂量组小鼠脑组织海马SOD含量改变不明显（P> 0.05)，差异无统计学意义，说明中药组合物低剂量对小鼠脑组织海马自由基的清除能力影 响不明显。见表14、图10。
[0191] 表14中药组合物对AD小鼠脑组织海马SOD含量的影响G±s)
[0192]
[0194] 注:与对照组比较，吁<0.05;与模型组比较，咕<0.05，中>0.05
[0195] 3.15中药组合物对AD小鼠脑组织海马GSH-PX含量的影响
[0196] 结果表明，与对照组比较，模型组AD小鼠脑组织海马GSH-PX含量明显降低（P< 0.05)，差异有统计学意义，预示模型组AD小鼠脑组织海马抗氧化能力减弱；与模型组比较， 治疗组、中药组合物高剂量组、中药组合物中剂量组小鼠脑组织海马GSH-PX含量明显增加 (P<0.05)，差异有统计学意义，预示中药组合物高、中剂量明显提高小鼠脑组织清除自由 基的能力，增强小鼠脑组织海马抗氧化能力；与模型组比较，中药组合物低剂量组小鼠脑组 织海马GSH-PX含量改变不明显(P>0.05)，差异无统计学意义，预示中药组合物低剂量对小 鼠脑组织海马的抗氧化能力影响不明显。见表15、图11。
[0197] 表15中药组合物对AD小鼠脑组织海马GSH-PX含量的影响 [019 引
[0199] 注:与对照组比较，*P<0.05;与模型组比较，咕<0.05，咕>0.05
[0200] 3.16中药组合物对AD小鼠脑组织海马MDA含量的影响
[0201] 结果表明，与对照组比较，模型组AD小鼠脑组织海马MDA含量明显增加(P<0.05)， 差异有统计学意义，预示模型组AD小鼠脑组织海马氧化产物增加，抗氧化能力减弱；与模型 组比较，治疗组、中药组合物高剂量组、中药组合物中剂量组小鼠脑组织海马MDA含量明显 降低(P<〇.05)，差异有统计学意义，预示中药组合物高、中剂量组小鼠脑组织海马氧化产 物减少，抗氧化能力增强，说明中药组合物高、中剂量可W改善小鼠脑组织海马氧化产物的 堆积，增强抗氧化能力；与模型组比较，中药组合物低剂量组小鼠脑组织海马MDA含量改变 不明显(P>0.05)，差异无统计学意义，预示中药组合物低剂量不能改善小鼠脑组织海马氧 化产物的堆积。见表16、图12。
[0202] 表16中药组合物对AD小鼠脑组织海马MDA含量的影响(T±S)
[0203]
[0204] 注:与对照组比较，吁<〇. 05;与模型组比较，咕<0.05，中>0.05 [02化]3.17中药组合物对AD小鼠脑组织BBB通透性的影响
[0206] 小鼠脑组织BBB的通透性使用小鼠脑组织EB浓度和邸含量来表示，实验测定小鼠 脑组织EB浓度的标准曲线方程为Υ = 0.2414X+0.1997，R2 = 0.9874。结果表明，与对照组比 较，模型组AD小鼠脑组织邸浓度和邸含量明显增加(Ρ<0.05)，差异有统计学意义，预示模 型组AD小鼠脑组织邸的渗出量增加，说明模型组AD小鼠脑组织ΒΒΒ的通透性增加，促进异常 的小分子物质进入脑组织；与模型组比较，治疗组、中药组合物高剂量组、中药组合物中剂 量组小鼠脑组织邸浓度和邸含量明显降低(Ρ<〇.05)，差异有统计学意义，预示脑组织邸的 渗出量减少，说明中药组合物高、中剂量可W改善AD小鼠脑组织的ΒΒΒ通透性，减少异常的 小分子物质进入脑组织；与模型组比较，中药组合物低剂量组小鼠脑组织ΕΒ浓度和邸含量 改变不明显(Ρ>〇.05)，差异无统计学意义，预示中药组合物低剂量对小鼠脑组织的ΒΒΒ通 透性影响不明显。见表17、图13。
[0207] 表17中药组合物对AD小鼠脑组织ΒΒΒ通透性的影响(?±8)
[020引
[0209]
[0210] 注:与对照组比较，*P<〇.05;与模型组比较，咕<0.05,中>0.05
[0211] 3.18中药组合物对AD小鼠脑组织海马RAGE蛋白表达的影响
[0212] RAGE表达于海马神经元细胞膜和/或细胞质内，统计分析小鼠脑组织海马RAGE平 均光密度值，结果表明，与对照组比较，模型组AD小鼠脑组织海马RAGE平均光密度值明显增 加(P<0.05)，差异有统计学意义，预示模型组AD小鼠脑组织海马RAGE蛋白表达增加，提示 模型组AD小鼠脑组织海马神经元与Αβ结合较多，模型组AD小鼠脑组织海马神经性炎症反 应、氧化应激反应和细胞调亡较强，加重了模型组AD小鼠脑组织海马的损伤；与模型组比 较，治疗组、中药组合物高剂量组、中药组合物中剂量组小鼠脑组织海马RAGE平均光密度值 明显减少（P<〇. 05)，差异有统计学意义，预示中药组合物高、中剂量组小鼠脑组织海马 RAGE蛋白表达减弱，提示中药组合物高、中剂量组小鼠脑组织海马神经元与Αβ结合较少，海 马神经性炎症反应、氧化应激反应和细胞调亡较弱，说明中药组合物高、中剂量可W改善小 鼠脑组织海马的神经性、无菌性炎症反应等，进而减轻了小鼠脑组织海马的损伤;与模型组 比较，中药组合物低剂量组小鼠脑组织海马RAGE平均光密度值改变不明显(Ρ>0.05)，差异 无统计学意义，预示中药组合物低剂量对小鼠脑组织海马RAGE蛋白表达影响不明显。见表 18、图14。
[0213] 表18中药组合物对AD小鼠脑组织海马RAGE蛋白表达的影响朽±S) 「02141
[0215] 注:与对照组比较，*P<〇.05;与模型组比较，咕<0.05,中>0.05
[0216] 3.19中药组合物对AD小鼠脑组织海马NF-KBp65蛋白表达的影响
[0217] NF-K化65表达于小鼠脑组织海马神经元细胞质和/或细胞核等等，统计分析小鼠 脑组织海马NF-K化65的平均光密度值，实验结果表明，与对照组比较，模型组AD小鼠脑组织 海马NF-K化65的平均光密度值明显增加 （P < 0.05)，预示模型组AD小鼠脑组织海马NF-K 化65表达增加，提示模型组AD小鼠脑组织海马神经性炎症反应、氧化应激反应、细胞调亡明 显，进而导致脑血流量减少，促进小鼠脑组织损伤;与模型组比较，治疗组、中药组合物高剂 量组、中药组合物中剂量组小鼠脑组织海马NF-K化65平均光密度值明显减少(P<0.05)，预 示中药组合物高、中剂量小鼠脑组织海马NF-K化65表达减弱，提示中药组合物高、中剂量可 W改善小鼠脑组织海马神经性炎症反应和脑组织血流量等等；与模型组比较，中药组合物 低剂量组小鼠脑组织海马NF-K化65平均光密度值改变不明显(P > 0.05 )，预示中药组合物 低剂量对小鼠脑组织海马NF-K化65蛋白表达影响不明显。见表19、图14。
[0218] 表19中药组合物对AD小鼠脑组织海马NF-KBp65蛋白表达的影响(；±S)
[0219]
[0220] 注:与对照组比较，*P<0.05;与模型组比较，咕<0.05,中>0.05
[0221 ] 3.20中药组合物对AD小鼠脑组织海马LRP1蛋白表达的影响
[0222] LRP1表达于小鼠脑组织海马神经元、血管内皮细胞等细胞质和/或细胞核内，统计 分析小鼠脑组织海马LRP1平均光密度值，结果表明，与对照组比较，模型组AD小鼠脑组织海 马LRP1平均光密度值明显减少(P<0.05)，差异有统计学意义，预示模型组AD小鼠脑组织海 马LRP1表达减弱，提示模型组AD小鼠脑组织海马清除Αβ的能力减弱，容易造成海马A財只聚， 促进AD的发生发展；与模型组比较，治疗组、中药组合物高剂量组、中药组合物中剂量组小 鼠脑组织海马LRP1平均光密度值明显增加(P<0.05)，差异有统计学意义，预示中药组合物 高、中剂量组小鼠脑组织海马LRP1表达增强，说明中药组合物高、中剂量小鼠脑组织海马清 除Αβ的能力增强，有利于治疗AD;与模型组比较，中药组合物低剂量组小鼠脑组织海马LRP1 平均光密度值改变不明显(Ρ>〇.05)，差异无统计学意义，预示中药组合物低剂量对小鼠脑 组织海马清除Αβ的能力影响不明显。见表20、图14。
[0223] 表20中药组合物对AD小鼠脑组织海马LRP1蛋白表达的影响(之±8)
[0224]
[02巧]注:与对照组比较，*P<0.05;与模型组比较，咕<0.05,中>0.05
[0226] 3.21中药组合物对AD小鼠脑组织海马Apo J蛋白表达的影响
[0227] Apo J蛋白表达于小鼠脑组织海马神经元细胞核内，统计分析小鼠脑组织海马Apo J平均光密度值，结果表明，与对照组比较，模型组AD小鼠脑组织海马Apo J平均光密度值明 显减少(P<〇.05)，差异有统计学意义，预示模型组AD小鼠脑组织海马Apo J表达减弱，提示 模型组AD小鼠脑组织海马Αβ清除率降低；与模型组比较，治疗组、中药组合物高剂量组、中 药组合物中剂量组小鼠脑组织海马Apo J平均光密度值明显增加(Ρ<0.05)，差异有统计学 意义，预示中药组合物高、中剂量组小鼠脑组织海马Apo J表达增强，提示中药组合物高、中 剂量组小鼠脑组织海马Αβ清除率增加；与模型组比较，中药组合物低剂量组小鼠脑组织海 马Apo J平均光密度值改变不明显(Ρ>0.05)，差异无统计学意义，预示中药组合物低剂量 对小鼠脑组织海马Αβ清除率影响不明显。见表21、图14。
[022引表21中药组合物对AD小鼠脑组织海马Apo J蛋白表达的影响保:±句
[0229]
[0230] 注:与对照组比较，吁<0.05;与模型组比较，咕<0.05,中>0.05
[0231] 3.22中药组合物对AD小鼠脑组织海马Apo E蛋白表达的影响
[0232] 统计分析小鼠脑组织海马Apo E平均光密度值，结果表明，与对照组比较，模型组 AD小鼠脑组织海马Apo E平均光密度值明显减少(P<0.05)，预示模型组AD小鼠脑组织海马 Apo E表达减弱，不利于小鼠脑组织Αβ清除；与模型组比较，治疗组、中药组合物高剂量组、 中药组合物中剂量组小鼠脑组织海马Apo Ε平均光密度值明显增加(Ρ<0.05)，预示中药组 合物高、中剂量可W增强小鼠脑组织海马Apo E表达，有利于小鼠脑组织Αβ清除；与模型组 比较，中药组合物低剂量组小鼠脑组织海马Αρο Ε平均光密度值改变不明显(Ρ>0.05)，预 示中药组合物低剂量对小鼠脑组织海马Αρο Ε的表达改变不明显。见表22、图14。
[0233] 表22中药组合物对AD小鼠脑组织海马Αρο Ε蛋白表达的影响(i±S)
[0234]
[0Z3引注:与对照组比较，吁<0.05;与模型组比较，咕<0.05,中>0.05
[0236] 3.23中药组合物对AD小鼠脑组织海马RAGE mRNA表达的影响
[0237] 统计分析小鼠脑组织海马RAGE mRNA相对表达量，结果表明，与对照组比较，模型 组AD小鼠脑组织海马RAGE mRNA相对表达量明显增加(P<0.05)，预示模型组AD小鼠脑组织 海马RAGE基因表达增强，加重模型组AD小鼠脑组织海马的神经性炎症反应等等；与模型组 比较，治疗组、中药组合物高剂量组、中药组合物中剂量组小鼠脑组织海马RAGE mRNA相对 表达量明显降低（P<〇.05)，预示中药组合物高、中剂量减弱小鼠脑组织海马RAGE基因表 达，减轻小鼠脑组织海马的神经性炎症反应等等;与模型组比较，中药组合物低剂量组小鼠 脑组织海马RAGE mRNA相对表达量改变不明显(P>0.05)，预示中药组合物低剂量对小鼠脑 组织海马RAGE基因影响不明显。见表23、图15。
[023引表23中药组合物对AD小鼠脑组织海马RAGE mRNA表达的影响(i±s，n = 8)
[0239]
[OW] 注:与对照组比较，中<0.05;与模型组比较，咕<0.05，咕>0.05
[0242] 3.24中药组合物对AD小鼠脑组织海马NF-K化65mRNA表达的影响
[0243] 统计分析小鼠脑组织海马NF-K化65mRNA相对表达量，结果表明，与对照组比较，模 型组AD小鼠脑组织海马NF-K化65mRNA相对表达量明显增加(P<0.05)，预示模型组AD小鼠 脑组织海马NF-K化65基因表达增加，提示模型组AD小鼠脑组织海马出现神经性炎症反应和 细胞调亡等等；与模型组比较，治疗组、中药组合物高剂量组、中药组合物中剂量组小鼠脑 组织海马NF-K化65mRNA相对表达量明显降低(P<0.05)，预示中药组合物高、中剂量改善小 鼠脑组织海马神经性炎症反应和细胞调亡等等；与模型组比较，中药组合物低剂量组小鼠 脑组织海马NF-K化65mRNA相对表达量改变不明显(P>0.05)，预示中药组合物低剂量对小 鼠脑组织海马NF-K化65基因的影响不明显，说明中药组合物低剂量对小鼠脑组织海马神经 性炎症反应和细胞调亡等影响不明显。见表24、图15。
[0244] 表24中药组合物对AD小鼠脑组织海马NF-K化65mRNA表达的影响（?±s，n = 8)
[0245]
[0246] 注:与对照组比较，*P<0.05;与模型组比较，咕<0.05，中>0.05
[0247] 3.25中药组合物对40小鼠脑组织海马〇?口11111?^4表达的影响
[024引统计分析小鼠脑组织海马LRP1 mRNA相对表达量，结果表明，与对照组比较，模型 组AD小鼠脑组织海马LRP1 mRNA相对表达量明显降低(P<0.05)，预示模型组AD小鼠脑组织 海马LRP1基因表达增加，不利于神经元代谢Αβ，减少脑组织Αβ外流，促进AD的发生发展;与 模型组比较，治疗组、中药组合物高剂量组、中药组合物中剂量组小鼠脑组织海马LRP1 mRNA相对表达量明显增加(Ρ<0.05)，差异有统计学意义，预示中药组合物高、中剂量组小 鼠脑组织海马LRP1表达上调，利于神经元代谢Αβ，增加脑组织Αβ外流，减缓AD的发生发展； 与模型组比较，中药组合物低剂量组小鼠脑海马LRP1 mRNA相对表达量改变不明显（Ρ> 0.05 )，预示中药组合物低剂量对小鼠脑海马LRP1基因表达影响不明显。见表25、图15。 [0249] 表25中药组合物对AD小鼠脑组织海马LRP1 mRNA表达的影响(?化，η = 8)
[0巧0]
[ο巧1 ] 注:与对照组比较，*Ρ<0.05;与模型组比较，咕<0.05，中>0.05 [0巧2] 3.26中药组合物对40小鼠脑组织海马49〇11111?酷表达的影响 [0巧3]统计分析小鼠脑组织海马Apo J mRNA相对表达量，结果表明，与对照组比较，模型 组AD小鼠脑组织海马Apo J mRNA相对表达量明显降低(P<0.05)，差异有统计学意义，预示 模型组AD小鼠脑组织海马Apo J基因表达减弱，降低了小鼠脑组织海马Αβ的清除率;与模型 组比较，治疗组、中药组合物高剂量组、中药组合物中剂量组小鼠脑组织海马Apo J mRNA相 对表达量明显增加(P<〇.05)，差异有统计学意义，预示中药组合物高、中剂量组小鼠脑组 织海马Apo J基因表达增强，增加了小鼠脑组织海马Αβ的清除率;与模型组比较，中药组合 物低剂量组小鼠脑组织海马Apo J mRNA相对表达量改变不明显(Ρ>0.05)，差异无统计学 意义，预示中药组合物低剂量对小鼠脑组织海马Apo J基因表达影响不明显。见表26、图15。 [0254] 表26中药组合物对AD小鼠脑组织海马Apo J mRNA表达的影响（；±s，n = 8)
[0 巧5]
[0巧7] 注:与对照组比较，吁<0.05;与模型组比较，咕<0.05,中>0.05
[0巧引 3.27中药组合物对AD小鼠脑组织海马Apo E mRNA表达的影响
[0259]统计分析小鼠脑组织海马Apo E mRNA相对表达量，结果表明，与对照组比较，模型 组AD小鼠脑组织海马Apo E mRNA相对表达量明显降低(P<0.05)，差异有统计学意义，预示 模型组AD小鼠脑组织海马Apo E基因表达减弱，不利于小鼠脑组织海马Αβ清除；与模型组比 较，治疗组、中药组合物高剂量组、中药组合物中剂量组小鼠脑组织海马Apo Ε mRNA相对表 达量明显增加(P<〇.05)，差异有统计学意义，预示中药组合物高、中剂量组小鼠脑组织海 马Apo E基因表达增强，有利于小鼠脑组织海马Αβ清除；与模型组比较，中药组合物低剂量 组小鼠脑组织海马Apo Ε mRNA相对表达量改变不明显(Ρ>0.05)，差异无统计学意义，预示 中药组合物低剂量不利于小鼠脑组织海马Αβ的清除。见表27、图15。
[0260] 表27中药组合物对AD小鼠脑组织海马Apo Ε mRNA表达的影响G±s，n = 8)
[0261]
[0%^ 注:与对照组比较，*P<0.05;与模型组比较，咕<0.05,中>0.05
[0263] 3.28中药组合物对AD小鼠脾、胸腺和脑指数的影响
[0264] 统计分析各组小鼠脾、胸腺和脑指数，结果表明，与对照组比较，模型组AD小鼠脾、 胸腺和脑指数明显降低(P<〇.05)，差异有统计学意义，预示模型组AD小鼠脾、胸腺和脑相 对质量减轻，产生B细胞和T细胞水平低下，体液免疫和细胞免疫较弱，伴有脑组织相对质量 减轻而出现脑萎缩，说明模型组AD小鼠免疫功能降低和脑组织出现萎缩;与模型组比较，治 疗组、中药组合物高剂量组、中药组合物中剂量组小鼠脾、胸腺和脑指数明显增加（P< 0.05)，预示中药组合物高、中剂量可W增加脾、胸腺和脑的相对质量，促进B细胞和T细胞水 平上调，说明中药组合物高、中剂量可W改善小鼠的免疫功能，并且减轻脑萎缩的程度;与 模型组比较，中药组合物低剂量组小鼠脾、胸腺和脑指数改变不明显(P>〇.05)，预示中药 组合物低剂量对小鼠的免疫功能和脑萎缩的影响不明显。见表28、图16。
[0265] 表28中药组合物对AD小鼠脾、胸腺和脑指数的影响(別S>n = 8)
[0%6]
[Ο%7] 注:与对照组比较，*Ρ<0.05;与模型组比较，咕<0.05，咕>0.05 [0%引3.29中药组合物对AD小鼠屯、、肺、肝和肾指数的影响
[0269] 统计分析小鼠的屯、、肺、肝和肾指数，结果表明，与对照组比较，模型组AD小鼠的 屯、、肺、肝和肾指数改变不明显(Ρ>〇.05)，差异无统计学意义，提示模型组AD小鼠的重要脏 器指数改变不明显，预示模型组与对照组重要脏器的相对质量改变不明显；与模型组比较， 治疗组、中药组合物高剂量组、中药组合物中剂量组、中药组合物低剂量组小鼠的屯、、肺、肝 和肾指数改变不明显(Ρ>〇.05)，差异无统计学意义，说明中药组合物高、中、低剂量对各组 小鼠无副作用。见表29、图17。
[0270] 表29中药组合物对AD小鼠屯、、肺、肝和肾指数的影响G巧，η = 8)
[0271]
[0的引注:与对照组比较，吁>0.05;与模型组比较，咕>0.05
[0274] 3.30中药组合物对AD小鼠体重的影响
[0275] 中药组合物不同剂量给药处理小鼠过程中，每7d测定各组小鼠体重，并且得到各 组小鼠的体重变化，显示中药组合物不同剂量给药42加寸间内，小鼠体重逐渐增加，预示中 药组合物不同剂量对小鼠无副作用。统计分析各组间小鼠体重的实验数据，实验结果表明， 与对照组比较，模型组AD小鼠体重改变不明显(P>0.05)，差异无统计学意义；与模型组比 较，治疗组、中药组合物高剂量组、中药组合物中剂量组、中药组合物低剂量组小鼠体重改 变不明显(P>〇.05)，差异无统计学意义，预示中药组合物不同剂量对小鼠无副作用。见表 30、表 31、图 18。
[0276] 表30中药组合物对AD小鼠0、7、14、21d体重的影响G主s，n = 8)
[0277]
[0的引注:与对照组比较，中>0.05;与模型组比较，咕>0.05
[0279] 表31中药组合物对AD小鼠28、35、42d体重的影响(J±s、n = 8)
[0280]
[02W] 注:与对照组比较，吁>0.05;与模型组比较，咕>0.05
[0282] W上实验综合表明，中药组合物高、中剂量可W提高AD小鼠学习记忆能力，改善AD 小鼠海马超微结构，降低AD小鼠脑组织海马APP、Αβι-42、Αβι-4〇及血清Αβι-4〇水平，降低海马炎 症介质化-lf3、TNF-a和IL-6水平，增强AD小鼠脑组织海马Bcl-2表达且减弱Bax表达，增加海 马T-A0C、SOD、G甜-ra水平且降低MDA水平，改善AD小鼠脑组织BBB的通透性，减弱AD小鼠脑 组织海马RAGE和NF-K化65表达且增强海马LRPUApo J和Apo E表达，改善AD模型小鼠脾、胸 腺和脑指数，而中药组合物不同剂量对AD小鼠其他脏器指数和体重无影响，基于运些，说明 中药组合物高、中剂量治疗AD有效并且无副作用。
【主权项】
1. 一种用于治疗阿尔茨海默病的中药组合物，其特征在于该中药组合物由以下重量份 的各原料药组成：白术8-18份，龙眼肉10-20份，阿胶3-13份，鱼鳔15-25份，败酱草3-13份， 地锦草5-20份，地肤子5-20份，夏枯草5-20份，莲米5-20份，皂刺3-13份，白蒺藜3-15份以及 威灵仙3-13份。2. 如权利要求1所述的中药组合物，其特征在于该中药组合物由以下重量份的各原料 药组成：白术13份，龙眼肉15份，阿胶8份，鱼鳔20份，败酱草8份，地锦草12份，地肤子12份， 夏枯草12份，莲米12份，皂刺8份，白蒺藜9份以及威灵仙8份。3. -种临床上适宜的用于防治阿尔茨海默病的中药制剂，其特征在于由权利要求1或2 所述的中药组合物加入制剂成型所需的辅料，按照制备药物制剂的常规方法制成。4. 如权利要求3所述的中药制剂，其特征在于所述的制剂为水煎剂、胶囊剂、丸剂、颗粒 剂、片剂或口服液。5. -种制备权利要求1或2所述的中药组合物的方法，其特征在于包括以下步骤： (1) 按照权利要求1或2所述的重量份称取各原料药，将各原料药混合均匀后放入高颈 圆底烧瓶中，加入药物重量8-15倍的蒸馏水，浸泡1-2h后，煎煮1-2h，冷却； (2) 将步骤(1)冷却后的药液用纱布过滤，得到第一次滤液； (3) 步骤(2)剩余的药物残渣放入高颈圆底烧瓶中，重复步骤（1)和（2)得到第二次滤 液，合并二次滤液； (4) 干燥，得到所述中药组合物的干膏。6. 如权利要求5所述的方法，其特征在于还包括将得到的干膏放在粉碎机内粉碎，研 磨，分子筛处理，得到所述中药组合物的干粉。7. 权利要求1-3任一项所述的中药组合物在制备治疗阿尔茨海默病药物中的应用。
【文档编号】A61K35/36GK105998316SQ201610343999
【公开日】2016年10月12日
【申请日】2016年5月23日
【发明人】费洪新, 张晓杰, 李春旭, 张英博
【申请人】齐齐哈尔医学院