专利名称：一种商陆种子快速萌发的方法以及该方法在无菌苗培养中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及植物组织培养领域，具体是涉及一种商陆种子快速萌发的方法以及该方法 在无菌苗培养中的应用。
背景技术：
商陆是具有诸多功效的多年生草本植物，目前人们对商陆的利用主要是采摘野生资源， 这主要是因为商陆繁殖困难，不利于大规模种植。商陆一般采用种子繁殖，但由于种皮硬度 大、结构致密、休眠期长等原因，致使商陆种子的萌发往往长达一到数月，并且萌发率不高， 这使商陆的生长周期很长，要数月乃至数年才能获得人们想要的代谢产物。针对商陆萌发难 的问题， 一些人试图通过光照处理、变温处理、硝酸钾溶液浸泡以及赤霉素溶液浸泡等方法 来打破商陆种子的休眠状态，促使其快速萌发。但是大都效果甚微。实验结果不是无法促进 商陆种子的快速萌发，就是萌发率过低，不能大规模应用。因此，解决商陆种子萌发难的问 题成为了大规模种植、应用和研究商陆的关键问题。
发明内容
为了克服商陆萌发困难和生长周期长的难题，本发明提供一种商陆种子快速萌发及无菌苗培 养的方法，有效地解决了问题。
本发明所依据的原理是商陆是种子繁殖植物，其繁殖困难、休眠期长的原因并不是 许多人猜想的那样商陆种子含有抑制种子萌发的物质，而是由于商陆种皮过硬且结构致密， 不利于种子的吸涨，致使商陆种子萌发缓慢。针对商陆种皮过硬的问题，本发明采用浓硫 酸浸泡商陆种子一定的时间，使其破坏商陆种皮的结构(但同时不能损害种子的内含物)， 打破种子休眠状态，这样种子就能迅速吸涨进入萌发状态。同时我们利用浓硫酸的杀菌作 用对商陆进行消毒，获得无菌种子，经无菌繁殖得到无菌苗。
本发明所采用的技术方案是
一种商陆种子快速萌发的方法，是在商陆种子萌发培养前，用浓硫酸浸泡种子5 30min，然后冲洗去除残留浓硫酸。
本发明还提供了上述快速萌发方法在商陆无菌苗培养中的应用。所说的应用，是将用浓硫酸 浸泡处理的种子，用无菌蒸馏水冲洗去除残留浓硫酸后，将种子接入培养基，进行无菌培 养，获得商陆无菌苗。
上述所说的培养基优选MS培养基+20g/L蔗糖+7g/L琼脂。 具体的操作步骤是-
1、 商陆种子的促萌及表面消毒
取成熟饱满的商陆种子，在流水中冲洗3小时，沥干水分，将商陆种子浸泡于浓硫酸 中5 30min，然后倾倒出浓硫酸溶液，用无菌蒸馏水冲洗种子6 8次，去除残留浓硫酸。 将经浸泡冲洗的种子置于无菌滤纸上沥干水分，备用。
2、 商陆试管苗的培养
将经过上述处理的商陆种子接种于装入50mLMS固体培养基的150mL培养瓶中，每瓶 4 5粒，每种处理接种6 7瓶；于26士rC下暗培养，三天后种子开始萌发， 一周后种子 完成萌发过程，然后将培养瓶转入26士rC，光照强度1500 2000LUX的光照培养箱中培养， 大约两周后可以获得商陆无菌苗。
采用本发明方法能快速打破商陆种子的休眠状态，大大缩短了商陆种子的萌发以及成 苗时间。并且给实验室研究提供了一个商陆无菌苗培养的方法。
具体实施例方式
在本发明中所使用的术语，除非有另外说明， 一般具有本领域普通技术人员通常理解的 含义。
下面结合具体的实施例，并参照数据进一步详细地描述本发明。应理解，这些实施例只 是为了举例说明本发明，而非以任何方式限制本发明的范围。
在以下的实施例中，未详细描述的各种过程和方法是本领域中公知的常规方法。所用 试剂的来源、商品名以及有必要列出其组成成分者，均在首次出现时标明，其后所用相同 试剂如无特殊说明，均以首次标明的内容相同。实施例l
于9月底商陆果实和种子成熟季节釆摘商陆果实，选取完全成熟且无虫害的果实在 太阳下晾晒，待商陆果实完全干瘪后，用手揉搓使种子从果实中脱落出来。然后进行分拣， 分拣后将种子继续晾晒直至其干燥。将凉晒好的种子装于透气性好的袋子中存于阴凉处。
取成熟饱满的商陆种子，在流水中冲洗3小时，沥干水分。从中取200粒种子装入lOOmL 的试剂瓶中，倒入50mL浓硫酸，轻轻晃匀，浸泡15min。然后倾倒出浓硫酸，用水冲洗种 子8次，去除残留的浓硫酸。将经浸泡冲洗的种子置于滤纸上沥干水分，备用。
将经上述处理的商陆种子撒种于装有一定量土壤的花盆中，室温保持在25"左右，一 周后大部分种子开始萌发，商陆芽并迅速伸长， 一月后，商陆苗可以达到15cm高。
实施例2
取成熟饱满的商陆种子，在流水中冲洗3小时，沥干水分。从中取100粒种子装入无菌 的100mL的试剂瓶中，倒入30mL浓硫酸，轻轻晃匀，浸泡15min。然后倾倒出浓硫酸， 用无菌蒸馏水冲洗种子8次，去除残留的浓硫酸。将经浸泡冲洗的种子置于无菌滤纸上沥 干水分，备用。
在无菌条件下将经上述处理的商陆种子接种于装入50 m L MS固体培养基(MS培养基 +2%蔗糖+0.7%琼脂)的150mL培养瓶中，每瓶5粒，接种6瓶；然后将它们置于26±1°C 下暗培养， 一周后统计种子的萌发率，然后将培养瓶转入26士rC，光照强度2000LUX的光 照培养箱中培养，两周后可以获得商陆无菌苗。
数据处理以及统计方法
(1) 萌发率(°/。)=(发芽种子数/种子总数>100%
(2) 污染率(％)=(污染数/接种总数)xlOO%
(3) 未污染率(％)=(未污染数/接种总数)xlOO%
(4) 成苗率(％)=(成苗数/萌发数)xlOO%通过数据统计处理，我们得到结果，采用上述方法处理和培养商陆种子，最早萌发时间 为3天， 一周后的商陆种子的萌发率可以达到96.7%，污染率为0。三周后商陆无菌苗可以达到 10cm高，成苗率为100%。
权利要求
1、一种商陆种子快速萌发的方法，其特征在于，用浓硫酸浸泡商陆种子5～30min后，冲洗种子去除残留浓硫酸，然后进行萌发培养。
2、 权利要求1所说的商陆种子快速萌发的方法在商陆无菌苗培养中的应用。
3、 根据权利要求2所说的应用，其特征在于，具体方法是将用浓硫酸浸泡处理的种 子，用无菌蒸馏水冲洗去除残留浓硫酸后，将种子接入培养基，进行无菌培养，获得商陆 无菌苗。
4、 根据权利要求2所说的应用，其特征在于，其中所说的培养基是MS培养基+20g/L 蔗糖+7g/L琼脂。
全文摘要
本发明涉及植物组织培养领域，具体是涉及一种商陆种子快速萌发的方法以及该方法在无菌苗培养中的应用。本发明的方法是采用浓硫酸浸泡商陆种子一定的时间，使其破坏商陆种皮的结构，打破种子休眠状态，使种子迅速吸涨进入萌发状态。与此同时利用浓硫酸自身的杀菌功能对商陆种子进行了消毒处理。随后将无菌的商陆种子接种在我们实验选定的培养基上，调整一定的温度、光照等条件使其快速萌发，并最终获取了商陆无菌实生苗。采用本发明方法能快速打破商陆种子的休眠状态，大大缩短了商陆种子的萌发以及成苗时间。并且给实验室研究提供了一个商陆无菌苗培养的方法。
文档编号C12N5/04GK101451119SQ20081024323
公开日2009年6月10日 申请日期2008年12月26日 优先权日2008年12月26日
发明者郑铁松, 静 陈 申请人:南京师范大学