专利名称：他莫昔芬用药靶向位点检测试剂盒的制作方法
技术领域：
本发明涉及分子生物学和医学领域，更具体的，本发明涉及一种检测他莫昔芬用 药靶向位点检测试剂盒。
背景技术：
他莫昔芬(Tamoxifen，ΤΑΜ)是一种非留体抗雌激素药物，在临床已广泛应用于乳 腺癌的预防和治疗。其结构与雌激素相似，在靶器官内竞争雌激素受体(ER)，减少细胞质 内ER的含量，阻止核内雌激素生成、基因转录和ER再合成。在组织培养中可见ER阳性细 胞的生长可直接被TAM所抑制。TAM还通过作用于信号转导过程的MAPK通路、阻断蛋白激 酶C介导的ERK激活、激活TGF-β (转化生长因子来抑制肿瘤细胞的生长。CYP2D6基因参与约25%临床常用药物的代谢，包括β受体阻滞剂、抗抑郁药物、 抗精神病药物及化疗药物等。由于CYP2D6基因存在遗传多态性导致个体之间CYP2D6酶活 性有差异，出现药物代谢能力的多态性，导致病人用药时很难获得最佳血药浓度，如血药浓 度过低无法有效发挥药物疗效或浓度过高出现毒副作用。他莫西芬作为无活性的前药，在 体内主要由CYP2D6催化形成有活性的化学成分Endoxifen，发挥药物疗效，因此CYP2D6基 因多态性导致的酶活性改变将直接影响他莫西芬用药效果。所以CYP2D6基因的分型检测 对于临床他莫西芬用药指导有重要意义。CYP2D6基因呈现高度多态性，目前已知有63种主要的等位基因，导致酶活性增 加、降低或缺失。CYP2D6等位基因活性的改变是由于基因突变造成表达产物酶分子的改变， 从而产生代谢缺陷。基因突变的主要方式是碱基缺失或替换引起读码框架移位，或者大片 段基因的丢失。
发明内容
本发明提供一种检测他莫昔芬用药靶向位点的试剂盒。该试剂盒包括检测CYP2D6基因多态性位点的特异性引物对及特异性荧光探针 对、Taq酶、dNTP混合液、MgCl2溶液、反应缓冲液、去离子水。本试剂盒中所述的特异性荧光探针对是能够轻易完成设计的，特异性荧光探针对 可用常规的探针合成技术进行合成。
具体实施例方式下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。下列实施例中未注明具体条件的实验 方法，通常按照常规条件，或按照厂商所建议的条件。实施例检测试剂盒的使用步骤1:DNA模板的抽取用硅胶吸附法抽提口腔上皮细胞的基因组DNA。步骤2 荧光定量PCR反应
使用检测试剂盒中的荧光定量PCR套装，进行荧光定量PCR反应，反应的体系为总 体积10 μ 1，包含浓度为20ng/ μ 1的DNA模板2 μ 1、1 μ 1 IOX荧光定量PCR反应缓冲液、 0. 1 μ 1 25mM dNTP 混合液、0. 6 μ 1 25mMMgCl2 溶液、0. 025 μ 1 (5units/ μ 1) Taq DNA 聚合 酶、20 μ M的有义引物和反义引物各0. 225 μ 1、10 μ M的带VIC荧光探针和带FAM荧光探针 各0. 25μ 1，去离子水5. 325 μ 1。在PCR扩增仪上进行反应，反应条件为50°C、2分钟，95°C、10分钟，进行60个循环 的95°C、30秒，60°C、1分钟。反应结束后在荧光定量PCR仪上读取样品荧光量。步骤3:基因型分析根据试剂盒使用说明书标示的基因分型图示对SNP位点进行基因型分析。熟悉荧光定量PCR技术的本领域技术人员能够通过辨识荧光定量PCR仪上显示 的最终样品荧光量，根据不同序列探针荧光信号的强弱即可确定所检测的SNP位点的基因 型。
权利要求
1. 一种检测他莫昔芬用药靶向位点检测试剂盒，包括特异性引物对及特异性荧光探针 对、Taq酶、dNTP混合液、MgCl2溶液、荧光定量PCR反应缓冲液、去离子水，其特征在于所 述的特异性引物对及特异性荧光探针对是针对CYP2D6基因多态性位点设计的。
全文摘要
本发明公开了一种检测他莫昔芬用药靶向位点检测试剂盒。该试剂盒包括检测他莫昔芬用药靶向位点CYP2D6基因多态性位点的特异性引物对及特异性荧光探针对、Taq酶、dNTP混合液、MgCl2溶液、反应缓冲液、去离子水。
文档编号C12Q1/68GK102108386SQ200910200490
公开日2011年6月29日 申请日期2009年12月23日 优先权日2009年12月23日
发明者冯哲民, 贺宪民, 邹祖烨 申请人:上海主健生物工程有限公司