专利名称：具有调节肠道菌群失调和增强免疫的功能营养剂及其制备方法
技术领域：
本发明涉及一种功能营养剂，特别涉及一种具有调节肠道菌群失调和增强免疫的 功能营养剂，还涉及该功能营养剂的制备方法。
背景技术：
发明人在前期研究工作中以水面和水下长航作业的舰艇或潜艇艇员为对象，系统 调查和比较了水面和水下长航条件对艇员细胞免疫、体液免疫、全血细胞成分、血液流变 学、外周血甲状腺轴、肾上腺轴、性腺轴激素水平以及肠道正常菌群和心理健康状况的影 响。调查结果显示，舰艇或潜艇艇员长航后上述指标中的大部分发生了明显异常，其中免疫 功能和肠道微生态失调、全血细胞质量和血流性能变差、内分泌激素水平稳定性下降尤为 突出。因此，需要针对长航舰艇或潜艇艇员以及其它类似特殊作业和生活环境下的人群，研 制适合其需要的功能营养剂，以调节机体的重要生理功能，维持多种生理功能间的平衡和 稳定，保障身体健康。
四君子汤是由党参、白术、茯苓、炙甘草四味中药组成的古方剂，为治疗脾胃气虚 证的基础方，後世众多补脾益气方剂多从此方衍化而来。方中党参为君，甘温益气，健脾养 胃；臣以苦温之白术，健脾燥湿，加强益气助运之力；佐以甘淡茯苓，健脾渗湿，苓术相配， 则健脾祛湿之功益著；使以炙甘草，益气和中，调和诸药；四药配伍，共奏益气健脾之功。因 四味中药皆为平和之品，温而不燥，补而不峻，故名四君子汤。现代研究表明，该方能调节 胃肠运动，既能抑制胃肠推进运动，减轻腹泻，又能使运动降低的小肠恢复正常；能减少胃 液分泌，降低其PH值，有利于胃肠溃疡的愈合；能提高胃蛋白酶活性，改善消化吸收功能； 能增加红细胞、血红蛋白、网织红细胞数而促进机体的造血功能；还具有增强免疫功能、促 进代谢、护肝、增强垂体-肾上腺皮质系统功能、抗肿瘤与抗突变、改善微循环、抗血小板聚 集、延缓衰老、抗应激反应等作用。
螺旋藻为天然药物，蛋白质含量高达60-70%且组成合理，富含人体必需而又不能 自行合成的八种氨基酸，在降血脂、抗癌、抗衰老、抗辐射、护肝、提高机体免疫力与造血功 能、调节代谢机能等方面均具有良好功效。此外研究表明，螺旋藻具有益生元作用，能明显 促进肠道乳杆菌和双歧杆菌的增殖。目前，市售的螺旋藻制剂主要是螺旋藻粉或将螺旋藻 粉按常规制剂方法制成的片剂或胶囊剂，其制备方法存在以下问题①螺旋藻所含蛋白质 主要存在于螺旋藻细胞内，而螺旋藻细胞壁较厚，内壁含有肽聚糖、外壁含有脂蛋白和脂多 糖以及胶质鞘，简单粉碎方法不能破坏螺旋藻的细胞壁，难以释放出胞内蛋白质；②螺旋藻 所含蛋白质大多数为分子量在5万以上的高蛋白，其只有被消化成有生理功能的寡肽后才 能被人体吸收利用，而人体自身的消化率很低；③某些生物活性肽是以非活性状态存在于 蛋白质的多肽链中，只有当其通过蛋白酶的作用被释放出来，才可能发挥生物活性。
迄今为止，除发明人课题组自身研究成果外，国内外尚未见将四君子汤和螺旋藻 组合制成功能营养剂，以及将其用于长航舰艇或潜艇艇员及其它类似特殊作业和生活环境下的人群以调节肠道菌群失调和增强免疫功能的相关研究报道。 发明内容
有鉴于此，本发明的目的之一在于提供一种具有调节肠道菌群失调和增强免疫的 功能营养剂；目的之二在于提供所述具有调节肠道菌群失调和增强免疫的功能营养剂的制 备方法。
为达到上述目的，本发明采用如下技术方案
1、具有调节肠道菌群失调和增强免疫的功能营养剂，由党参、白术、茯苓、炙甘草 四味中药和螺旋藻制成，其中党参、白术、茯苓和炙甘草的重量比为2 :2:2: 1，四味中 药的总重量和螺旋藻的重量之比为1 6 1 6。
进一步，所述四味中药的总重量和螺旋藻的重量之比为4 1。
本发明对四味中药的总重量和螺旋藻的重量之比为6 1、5 1、4 1、3 1、 2 1、1 1、1 2、1 3、1 4、1 5、1 6共11组处方分别进行了研究，结果发现这 11组处方均具有调节肠道菌群失调和增强免疫的功能。但由于党参、白术、甘草等根茎类中 药富含木质素和纤维素，其对有效成分释出的结构阻隔作用明显，且有效部位占全重的比 例不超过30%;而螺旋藻为单细胞生物，多层细胞膜均由肽聚糖构成，没有纤维素和木质素 构成的细胞壁，对胞内生理活性物质的释放几乎没有结构阻隔作用，且全株均可作为营养 成分和活性成分的来源，故本发明处方中以四味中药的总重量大于螺旋藻的重量为宜，特 别优选处方为四味中药的总重量和螺旋藻的重量之比为4 1。
2、所述具有调节肠道菌群失调和增强免疫的功能营养剂的制备方法，包括以下步 骤
A、四君子汤发酵液的制备将党参、白术、茯苓和炙甘草加水煎煮，煎煮液滤过，滤 液浓缩后加入发酵辅助营养成分，制得四君子汤发酵原液；将四君子汤发酵原液接种乳杆 菌进行厌氧液体深层发酵，制得四君子汤发酵液；
B、螺旋藻发酵液的制备将螺旋藻进行细粉化处理，制得螺旋藻细粉体；再将螺 旋藻细粉体进行超微粉化处理，制得螺旋藻超微粉体；在螺旋藻超微粉体中加入发酵辅助 营养成分和水，制得螺旋藻发酵原液；将螺旋藻发酵原液接种双歧杆菌进行厌氧液体深层 发酵，制得螺旋藻发酵液；
C、功能营养剂的制备将步骤A所得的四君子汤发酵液和步骤B所得的螺旋藻发 酵液混合，离心去除菌体，超声去除上清液残留菌体，合并上清液和药泥，高温灭酶，干燥， 即得功能营养剂。
进一步，所述乳杆菌为保藏号为CCTCC No. M207026的植物乳杆菌(LactcAacillus ρlantarum) ODK-LR1 ；所述双歧杆菌为保藏号为CCTCC No. M207027的长双歧杆菌 (Bifidobacterium longum)ODK-BS1；
进一步，所述四君子汤发酵液的制备方法为将党参、白术、茯苓和炙甘草加水煎 煮1 3次，每次加6 10倍量水煎煮20 60分钟，首次煎煮前加水浸泡20 40分钟， 合并煎煮液，滤过，滤液浓缩至原体积的1/3，再加入多价蛋白胨和质量百分浓度为5%的 猪肝浸液，使多价蛋白胨的终浓度为5 20g/L，质量百分浓度为5%的猪肝浸液的终浓度 为30 50mL/L，制得四君子汤发酵原液；将四君子汤发酵原液接种乳杆菌进行厌氧液体深层发酵发酵菌种种龄为M 48小时，接种量为5 15mL/L，发酵温度为观 40°C，初始 PH值为5. 0 7. 0，发酵时间为48 96小时，制得四君子汤发酵液；
进一步，所述四君子汤发酵液的制备方法为将党参、白术、茯苓和炙甘草加水煎 煮3次，每次加10倍量水煎煮20分钟，首次煎煮前加水浸泡40分钟，合并煎煮液，滤过， 滤液浓缩至原体积的1/3，再加入多价蛋白胨和质量百分浓度为5%的猪肝浸液，使多价蛋 白胨的终浓度为20g/L，质量百分浓度为5%的猪肝浸液的终浓度为40mL/L，制得四君子汤 发酵原液；将四君子汤发酵原液接种乳杆菌进行厌氧液体深层发酵发酵菌种种龄为M小 时，接种量为10mL/L，发酵温度为35°C，初始pH值为6. 0，发酵时间为72小时，制得四君子 汤发酵液；
进一步，所述螺旋藻发酵液的制备方法为将螺旋藻粉碎过60目筛，制得平均粒 径为150 250 μ m的螺旋藻细粉体；再将螺旋藻细粉体深低温冷冻至玻璃点后进行气流粉 碎，制得平均粒径为60 80 μ m的螺旋藻超微粉体；在螺旋藻超微粉体中加入水苏糖和水， 按质量百分浓度计的组分配比为螺旋藻超微粉体5 15%、水苏糖3 7%、余量为水，制 得螺旋藻发酵原液；将螺旋藻发酵原液接种双歧杆菌进行厌氧液体深层发酵发酵菌种种 龄为34 48小时，接种量为5 30mL/L，发酵温度为28 40°C，初始pH值为6. 0 7. 0， 发酵时间为48 96小时，制得螺旋藻发酵液；
进一步，所述螺旋藻发酵原液按质量百分浓度计的组分配比为螺旋藻超微粉体 10%、水苏糖5%、余量为水；所述螺旋藻发酵原液的厌氧液体深层发酵条件为发酵菌种 种龄为34小时，接种量为20mL/L，发酵温度为35°C，初始pH值为6. 5，发酵时间为72小时。
本发明的有益效果在于本发明将党参、白术、茯苓、炙甘草四味中药和螺旋藻合 理组方，并进行以益生菌为媒介的体外生物转化，制得一种新的功能营养剂。药效学研究结 果显示，该功能营养剂不仅能够有效纠正肠道菌群失调和增强免疫功能，还能够在保护造 血机能和血液流动性、平衡微量元素代谢、改善内分泌功能等多方面发挥效能。经长航作业 的潜艇艇员试用，该功能营养剂具有防止和纠正艇员肠道菌群失调及相关机体功能代谢紊 乱的保健作用。因此，本发明的功能营养剂适用于长航作业的舰艇或潜艇艇员以及其它类 似特殊作业和生活环境下的人群，也可供其他有需要的人群服用。
生物材料样品保藏
植物乳杆菌(LactcAacillus plantarum) ODK-LR1 保藏单位为中国典型培养物保 藏中心(CCTCC)，地址为武汉市武汉大学，保藏日期为2007年3月23日，保藏编号为CCTCC No. M207026 ；
长双歧杆菌(Bifidobacterium longum) ODK-BS1 保藏单位为中国典型培养物保 藏中心(CCTCC)，地址为武汉市武汉大学，保藏日期为2007年3月23日，保藏编号为CCTCC No.M207027。
为了使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合附图对本发明作进 一步的详细描述，其中
图1为本发明功能营养剂的制备方法流程图2为长双歧杆菌ODK-BS1的生长曲线图3为螺旋藻寡肽含量与活菌生物量的关联度分析图4为植物乳杆菌ODK-LR1的生长曲线图。
具体实施方式
以下将参照附图，对本发明的优选实施例进行详细的描述。
一、本发明功能营养剂的制备工艺研究及工艺条件优化
1、发酵处理对螺旋藻寡肽得率的影响
取螺旋藻发酵原液和螺旋藻发酵液，测定总氮含量和氨基酸态氮含量。结果见表 1，与发酵原液比较，螺旋藻发酵液的总氮含量明显增加，而氨基酸态氮含量几乎不变，表明 发酵处理提高了螺旋藻的蛋白质提取率且提取的高分子蛋白均有效转化为寡肽而非游离 氨基酸，使螺旋藻寡肽得率增加。
表1、螺旋藻发酵前后总氮、氨基酸态氮含量测定结果
权利要求
1.具有调节肠道菌群失调和增强免疫的功能营养剂，其特征在于由党参、白 术、茯苓、炙甘草四味中药和螺旋藻制成，其中党参、白术、茯苓和炙甘草的重量比为 2:2:2: 1，四味中药的总重量和螺旋藻的重量之比为1 6 1 6。
2.根据权利要求1所述具有调节肠道菌群失调和增强免疫的功能营养剂，其特征在 于所述四味中药的总重量和螺旋藻的重量之比为4 1。
3.权利要求1或2所述具有调节肠道菌群失调和增强免疫的功能营养剂的制备方法， 其特征在于包括以下步骤A、四君子汤发酵液的制备将党参、白术、茯苓和炙甘草加水煎煮，煎煮液滤过，滤液浓 缩后加入发酵辅助营养成分，制得四君子汤发酵原液；将四君子汤发酵原液接种乳杆菌进 行厌氧液体深层发酵，制得四君子汤发酵液；B、螺旋藻发酵液的制备将螺旋藻进行细粉化处理，制得螺旋藻细粉体；再将螺旋藻 细粉体进行超微粉化处理，制得螺旋藻超微粉体；在螺旋藻超微粉体中加入发酵辅助营养 成分和水，制得螺旋藻发酵原液；将螺旋藻发酵原液接种双歧杆菌进行厌氧液体深层发酵， 制得螺旋藻发酵液；C、功能营养剂的制备将步骤A所得的四君子汤发酵液和步骤B所得的螺旋藻发酵液 混合，离心去除菌体，超声去除上清液残留菌体，合并上清液和药泥，高温灭酶，干燥，即得 功能营养剂。
4.根据权利要求3所述具有调节肠道菌群失调和增强免疫的功能营养剂的制备方法， 其特征在于所述乳杆菌为保藏号为CCTCC No. M207026的植物乳杆菌(LactcAacillus ρlantarum) ODK-LR1 ；所述双歧杆菌为保藏号为CCTCC No. M207027的长双歧杆菌 (Bifidobacterium longum)ODK-BS10
5.根据权利要求4所述具有调节肠道菌群失调和增强免疫的功能营养剂的制备方法， 其特征在于所述四君子汤发酵液的制备方法为将党参、白术、茯苓和炙甘草加水煎煮 1 3次，每次加6 10倍量水煎煮20 60分钟，首次煎煮前加水浸泡20 40分钟，合 并煎煮液，滤过，滤液浓缩至原体积的1/3，再加入多价蛋白胨和质量百分浓度为5%的猪 肝浸液，使多价蛋白胨的终浓度为5 20g/L，质量百分浓度为5%的猪肝浸液的终浓度为 20 60mL/L，制得四君子汤发酵原液；将四君子汤发酵原液接种乳杆菌进行厌氧液体深层 发酵发酵菌种种龄为M 48小时，接种量为5 15mL/L，发酵温度为观 40°C，初始pH 值为5. 0 7. 0，发酵时间为48 96小时，制得四君子汤发酵液。
6.根据权利要求5所述具有调节肠道菌群失调和增强免疫的功能营养剂的制备方法， 其特征在于所述四君子汤发酵液的制备方法为将党参、白术、茯苓和炙甘草加水煎煮3 次，每次加10倍量水煎煮20分钟，首次煎煮前加水浸泡40分钟，合并煎煮液，滤过，滤液浓 缩至原体积的1/3，再加入多价蛋白胨和质量百分浓度为5%的猪肝浸液，使多价蛋白胨的 终浓度为15g/L，质量百分浓度为5%的猪肝浸液的终浓度为40mL/L，制得四君子汤发酵原 液；将四君子汤发酵原液接种乳杆菌进行厌氧液体深层发酵发酵菌种种龄为M小时，接 种量为10mL/L，发酵温度为35°C，初始pH值为6. 0，发酵时间为72小时，制得四君子汤发酵 液。
7.根据权利要求4所述具有调节肠道菌群失调和增强免疫的功能营养剂的制备方法， 其特征在于所述螺旋藻发酵液的制备方法为将螺旋藻粉碎过60目筛，制得平均粒径为150 250 μ m的螺旋藻细粉体；再将螺旋藻细粉体深低温冷冻至玻璃点后进行气流粉碎， 制得平均粒径为60 80 μ m的螺旋藻超微粉体；在螺旋藻超微粉体中加入水苏糖和水，按 质量百分浓度计的组分配比为螺旋藻超微粉体5 12%、水苏糖3 8%、余量为水，制得 螺旋藻发酵原液；将螺旋藻发酵原液接种双歧杆菌进行厌氧液体深层发酵发酵菌种种龄 为34 48小时，接种量为5 30mL/L，发酵温度为28 40°C，初始pH值为6. 0 7. 0，发 酵时间为48 96小时，制得螺旋藻发酵液。
8.根据权利要求7所述具有调节肠道菌群失调和增强免疫的功能营养剂的制备方 法，其特征在于所述螺旋藻发酵原液按质量百分浓度计的组分配比为螺旋藻超微粉体 10%、水苏糖5%、余量为水；所述螺旋藻发酵原液的厌氧液体深层发酵条件为发酵菌种 种龄为34小时，接种量为20mL/L，发酵温度为35°C，初始pH值为6. 5，发酵时间为72小时。
全文摘要
本发明公开了具有调节肠道菌群失调和增强免疫的功能营养剂及其制备方法，该功能营养剂由党参、白术、茯苓、炙甘草四味中药和螺旋藻制成，其中党参、白术、茯苓和炙甘草的重量比为2∶2∶2∶1，四味中药的总重量和螺旋藻的重量之比为1～6∶1～6；其制备方法是将四味中药的水煎液浓缩后接种乳杆菌进行发酵，得四君子汤发酵液；将螺旋藻经超微粉碎后接种双歧杆菌进行发酵，制得螺旋藻发酵液；再将四君子汤发酵液和螺旋藻发酵液混合，离心去除菌体，灭酶，干燥，即得；该功能营养剂能够防止和纠正肠道菌群失调、增强免疫功能，还能够保护造血机能和血液流动性、平衡微量元素代谢、改善内分泌功能，适用于长航作业的舰艇或潜艇艇员。
文档编号A23L1/29GK102028197SQ20101018017
公开日2011年4月27日 申请日期2010年5月21日 优先权日2010年5月21日
发明者吴力克, 张娟 申请人:中国人民解放军第三军医大学第一附属医院