专利名称：一种利用球形节杆菌进行强心苷苷元类化合物c16,17位脱氢的方法
技术领域：
本发明属于微生物制药及医药工程领域，是一种利用球形节杆菌 (ArthrobacterGlobiformis) ATCC31250生物转化进行强心苷苷元类化合物C16，17位脱氢 的方法。
背景技术：
强心苷苷元类化合物的结构比较复杂，含有多个手性中心，用化学方法进行结构 修饰选择性差，易发生氧化、环化和聚合等副反应，一些特殊位点的结构改造难以进行，获 得结构多样的新化合物的难度大。球形节杆菌ATCC31250是常用于甾体类药物中间体C1>2 脱氢反应的菌株，而球形节杆菌ATCC31250对转化底物留体类药物中间体在C16，17脱氢的 反应还从未发现有相关研究报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一种目的产物的产量高、副产物少、反应条件温和的利用 球形节杆菌生物转化进行留体类化合物C16，17位脱氢的方法。本发明的目的是通过以下技术方案实现的一种利用球形节杆菌进行强心苷苷元类化合物C16，17位脱氢的方法，步骤是(1)种子与发酵培养取球形节杆菌ATCC31250菌种接种于一级种子培养基中， 140-180r/min、30-34°C、培养20_30h，得到种子培养液，以5% -10%接种量转接于新鲜的 发酵培养基，进行二级发酵培养，得到菌体发酵液；(2)转化在菌体发酵液中加入强心苷苷元类化合物，30-35°C，150-200r/min转 化70-80h后终止反应；(3)产物的提取与精制步骤(2)转化反应结束后，抽滤，分离菌丝体和发酵液，分 别用有机溶剂萃取菌丝体和发酵液数次，合并萃取液，干燥，减压浓缩，浓缩后采用硅胶色 谱柱分离得到强心苷苷元类化合物C16，17位脱氢产物；所述的球形节杆由美国典型微生物菌种保藏中心保存，编号为ATCC 31250。而且，所述一级种子培养基和二级发酵培养采用的培养基组成(g/L)葡萄糖 5-20，玉米浆5-15，蛋白胨2-8，磷酸二氢钾2-5, ρΗ7· 0-7. 4。而且，所述强心苷苷元类化合物投入的终浓度为0. 1-lg/L。而且，所述强心苷苷元类化合物为异羟基洋地黄毒苷元、3-氧代异羟基洋地黄毒 苷元或1，2-烯-3-氧代异羟基洋地黄毒苷元之一。而且，所述强心苷苷元类化合物结构式如下
权利要求
1.一种利用球形节杆菌进行强心苷苷元类化合物C16，17位脱氢的方法，其特征在于 步骤是(1)种子与发酵培养取球形节杆菌ATCC31250菌种接种于一级种子培养基中， 140-180r/min、30-34°C、培养20-30h，得到种子培养液，以5% -10%接种量转接于新鲜的 发酵培养基，进行二级发酵培养，得到菌体发酵液；(2)转化在菌体发酵液中加入强心苷苷元类化合物，30-35°C，150-200r/min转化 70-80h后终止反应；(3)产物的提取与精制步骤(2)转化反应结束后，抽滤，分离菌丝体和发酵液，分别用 有机溶剂萃取菌丝体和发酵液数次，合并萃取液，干燥，减压浓缩，浓缩后采用硅胶色谱柱 分离得到强心苷苷元类化合物C16，17位脱氢产物；所述的球形节杆由美国典型微生物菌种保藏中心保存，编号为=ATCC 31250。
2.根据权利1所述的利用球形节杆菌进行强心苷苷元类化合物C16，17位脱氢的方法， 其特征在于所述一级种子培养基和二级发酵培养采用的培养基组成(g/L)葡萄糖5-20， 玉米浆5-15，蛋白胨2-8，磷酸二氢钾2-5，ρΗ7· 0-7. 4。
3.根据权利1所述的利用球形节杆菌进行强心苷苷元类化合物C16，17位脱氢的方法， 其特征在于所述强心苷苷元类化合物投入的终浓度为0. 1-lg/L。
4.根据权利1所述的利用球形节杆菌进行强心苷苷元类化合物C16，17位脱氢的方法， 其特征在于所述强心苷苷元类化合物为异羟基洋地黄毒苷元、3-氧代异羟基洋地黄毒苷 元或1，2-烯-3-氧代异羟基洋地黄毒苷元之一。
5.根据权利1所述的利用球形节杆菌进行强心苷苷元类化合物C16，17位脱氢的方法， 其特征在于所述强心苷苷元类化合物结构式如下
全文摘要
本发明涉及一种利用球形节杆菌的生物脱氢反应对强心苷苷元类化合物C16，17位进行结构改造的生物学方法。步骤为将强心苷苷元类化合物为底物，采用球形节杆菌为菌种，经过一级种子培养和二级发酵培养，在菌体发酵液中投入底物进行转化反应，经有机溶剂萃取和硅胶分离与纯化得到C16，17脱氢产物。本发明采用工业微生物球形节杆菌对强心苷苷元类化合物进行生物脱氢转化，高效、专一地在强心苷苷元类化合物母核D环C16，17位点形成新的双键，扩大了球形节杆菌ATCC31250的应用范围，得到新型转化反应和具有新颖结构的强心苷类化合物。
文档编号C12P33/20GK102071241SQ20101026762
公开日2011年5月25日 申请日期2010年8月31日 优先权日2010年8月31日
发明者付玉婉, 刘增兵, 孙华, 王敏 申请人:天津科技大学