专利名称：一种用于稻米的抗性淀粉含量测定方法
技术领域：
本发明涉及测定方法的技术领域，具体地说是一种用于稻米的抗性淀粉含量测定方法。
背景技术：
抗性淀粉(Resistant starch, RS)的概念最早由恩格里斯特(Englyst)提出，指不能在健康人体小肠中消化吸收的淀粉及其降解物的总称。抗性淀粉具有非常重要的生理功能，降低糖尿病患者饭后血糖值、降血脂以及控制体重、能预防肠道疾病、促进微量元素的吸收。目前关于RS的测定方法主要有酶-直接法(Englyst法、Champ法)、超声波-酶法(Berry法)、微波-酶法(Goni法)、体外测定法(McCleary法)等。其中体外测定法 (McCleary)法已经获得美国官方分析化学师协会(AOAC)首选方法，并获得了美国谷物化学家协会(AACC)的承认。该方法测定原理为，37°C恒温震荡16h，水解快消化淀粉和慢消化淀粉，经过离心洗涤，氢氧化钾溶解抗性淀粉后，再使用糖化酶(AGM)水解已被破坏的抗性淀粉，最后测定水解液中葡萄糖的浓度以计算抗性淀粉的含量。体外测定法(McCleary 法)是在详细研究各种参数的基础上制定的，与其他方法比较，该方法简便可靠、重复性好的优点，是目前最为可靠、常用的一种测定抗性淀粉含量的方法。但该方法使用胰α-淀粉酶在1 摇床孵育期间，淀粉水解液出现不同程度的发酵，而抗性淀粉不能被淀粉酶水解， 却可以被细菌发酵，影响测定结果的准确性。
发明内容
本发明的目的在于提供一种改进的用于稻米的抗性淀粉含量测定方法，它可克服现有技术中因淀粉水解过程中杂菌干扰，影响测定结果的准确性的一些不足。为了实现上述目的，本发明的技术方案是一种用于稻米的抗性淀粉含量测定方法，其特征在于所述的测定方法包括如下步骤a、称取0. IOOOg米粉，加入40mg α -淀粉酶(Sigma A-3176)，搅拌均勻；b、再加入4mL马来酸钠缓冲溶液和10 μ L淀粉葡萄糖糖苷酶(AGM)，混合后配置成淀粉水解混合液；C、在4 μ L淀粉水解混合液中加入15-35 μ L抗生素溶液或抗生素混合液；d、在常温条件下酶解8小时以上，然后检测葡萄糖含量。使用时，本发明在淀粉水解液中加入不同类型的抗生素，探讨抗生素对淀粉水解效果，以及对抗性淀粉含量测定结果的影响，为准确、客观测定稻米中抗性淀粉含量提供有效的方法。通过比较抗生素对淀粉水解效果和被检测样品抗性淀粉含量的影响，结果表明抗生素能有效抑制淀粉水解过程中的杂菌的发酵作用，而不影响影响淀粉酶的活性； 最有效的抗生素为混合抗生素(O. 40-0. 52mg/mL青霉素、15000-1700UI/mL硫酸庆大霉素、 0.8-1. 2mg/mL头孢氨苄、0.85-1. 30mg/mL乳糖酸红霉素4种抗生素按1.2 1 1. 2 1 比例混合)，其最佳剂量为35 μ L。本研究为高抗性淀粉含量的水稻品种育种和基础研究奠定实验技术基础。
具体实施例方式下面结合表格和实施例对本发明作进一步的描述。本发明所述的测定方法包括如下步骤a、称取0. IOOOg米粉，加入40mg α -淀粉酶(SigmaA-3176)，搅拌均勻；b、再加入4mL马来酸钠缓冲溶液和10 μ L淀粉葡萄糖糖苷酶 (AGM)，混合后配置成淀粉水解混合液；C、在4 μ L淀粉水解混合液中加入15-35 μ L抗生素溶液或抗生素混合液；d、在常温条件下酶解8小时以上，然后检测葡萄糖含量。常温条件是指温度35-38°C，酶解时间为8-16小时。b步骤中，在4 μ L淀粉水解混合液中加入35 μ L抗生素溶液或抗生素混合液。b步骤中，抗生素溶液是指下列溶液中的一种0. 48mg/mL的青霉素、1600UI/mL的硫酸庆大霉素、1. Omg/mL的乳糖酸红霉素、1. Omg/mL的头孢氨苄、1. Omg/mL的头孢曲松钠或0. 5mg/mL 的氯霉素。b步骤中，抗生素混合液是指青霉素、硫酸庆大霉素、头孢氨苄和乳糖酸红霉素混合液，上述各成分的混合比为1 :1:1: 1、1.2 1 1.2 1或1.5 :1:1: 1。抗生素混合液中采用0. 40-0. 52mg/mL的青霉素、15000_1700UI/mL的硫酸庆大霉素、0. 8-1. 2mg/ mL的头孢氨苄和0. 85-1. 30mg/mL的乳糖酸红霉素这4种抗生素。实施例1A、抗生素对慢消化淀粉水解的影响。从表1可以看出，在α -淀粉酶的37°C水解体系中，处理及对照组水解液中的葡萄糖浓度均随水解时间延长而呈增大趋势。处理组反应16小时均高于8小时。在相同的水解时间下，加入抗生素组的水解液葡萄糖含量，均明显高于对照组。同时发现，在水解反应16小时，头孢氨苄组的水解液葡萄糖含量最高，其次青霉素G组，第三高的是乳糖酸红霉素组，硫酸庆大霉素组葡萄糖含量最低。另外，不同剂量的抗生素浓度，对水解液葡萄糖含量有明显的差异。不同种类的抗生素淀粉水解中葡萄糖浓度(mg/mL)CN 102533938 A
说
权利要求
1.一种用于稻米的抗性淀粉含量测定方法，其特征在于所述的测定方法包括如下步骤a、称取0. IOOOg米粉，加入40mg α -淀粉酶(Sigma A-3176)，搅拌均勻；b、再加入4mL 马来酸钠缓冲溶液和10 μ L淀粉葡萄糖糖苷酶(AGM)，混合后配置成淀粉水解混合液；C、在 4 μ L淀粉水解混合液中加入15-35 μ L抗生素溶液或抗生素混合液；d、在常温条件下酶解8 小时以上，然后检测葡萄糖含量。
2.根据权利要求1所述的一种用于稻米的抗性淀粉含量测定方法，其特征在于a步骤中，米粉的颗粒大小为80-150目。
3.根据权利要求1所述的一种用于稻米的抗性淀粉含量测定方法，其特征在于b步骤中，马来酸钠缓冲溶液的浓度为0. 1 mol/L，pH值为6. 0，淀粉葡萄糖糖苷酶(AGM)的浓度为 3300UI/mL。
4.根据权利要求1所述的一种用于稻米的抗性淀粉含量测定方法，其特征在于c步骤中，在4 μ L淀粉水解混合液中加入35 μ L抗生素溶液或抗生素混合液。
5.根据权利要求1所述的一种用于稻米的抗性淀粉含量测定方法，其特征在于c步骤中，抗生素溶液是指下列溶液中的一种0. 48mg/mL的青霉素、1600UI/mL的硫酸庆大霉素、 1. Omg/mL的乳糖酸红霉素、1. Omg/mL的头孢氨苄、1. Omg/mL的头孢曲松钠或0. 5mg/mL的氯霄素。
6.根据权利要求1所述的一种用于稻米的抗性淀粉含量测定方法，其特征在于c步骤中，抗生素混合液是指青霉素、硫酸庆大霉素、头孢氨苄和乳糖酸红霉素混合液，上述各成分的混合比为 1 1 1 :1、1· 2 1 1. 2 :1 或 1. 5 :1 1 :1。
7.根据权利要求6所述的一种用于稻米的抗性淀粉含量测定方法，其特征在于 抗生素混合液中采用0. 40-0. 52mg/mL的青霉素、15000_1700UI/mL的硫酸庆大霉素、 0. 8-1. 2mg/mL的头孢氨苄和0. 85-1. 30 mg/mL的乳糖酸红霉素这4种抗生素。
8.根据权利要求1所述的一种用于稻米的抗性淀粉含量测定方法，其特征在于d步骤中，常温条件是指温度35-38°C，酶解时间为8-16小时。
全文摘要
本发明在淀粉水解液中加入不同类型的抗生素，探讨抗生素对淀粉水解效果，以及对抗性淀粉含量测定结果的影响，为准确、客观测定稻米中抗性淀粉含量提供有效的方法。通过比较抗生素对淀粉水解效果和被检测样品抗性淀粉含量的影响，结果表明抗生素能有效抑制淀粉水解过程中的杂菌的发酵作用，而不影响影响淀粉酶的活性；最有效的抗生素为混合抗生素(0.40-0.52mg/mL青霉素、15000-1700UI/mL硫酸庆大霉素、0.8-1.2mg/mL头孢氨苄、0.85-1.30mg/mL乳糖酸红霉素4种抗生素按1.2∶1∶1.2∶1比例混合)，其最佳剂量为35μL。
文档编号C12Q1/40GK102533938SQ20101059135
公开日2012年7月4日 申请日期2010年12月16日 优先权日2010年12月16日
发明者朱辉明, 朴钟泽, 白建江 申请人:上海市农业科学院