专利名称：含有刺五加苷类活性成分的组合物及其制备方法和用途的制作方法
技术领域：
本发明属于中药制药技术领域，具体涉及一种含有刺五加苷类活性成分的组合物及其制备方法。
背景技术：
刺五力口 Acanthopanax senticosus (Rupr. et Maxim. ) Harm,又名——百针(河北)， 为五加科五加属植物，生长于海拔500-2000m的落叶阔叶林、针阔混交林的林下或林缘。广泛分布于东北及河北、山西等地。其根茎呈结节状不规则圆柱形，直径1. 4-4. 2cm，有分支； 表面灰棕色，有纵皱，弯曲处常有密集的横皱纹，皮孔横长，微突起而色淡。刺五加根含刺五加苷(eleutheroside)A、B、Bi、C、D、Ε,刺五加苷A即是胡萝卜苷(daucosterol)，刺五加苷B即是丁香苷(syringin)；根还含芥子醛葡萄糖苷(sinapaldehyde glucoside)，鹅掌揪苷(Iiriodemdrin)，苦杏仁苷(amydalin), 3 β-
-0-β-D-吡喃葡萄糖醛酸基]-16α-羟基-13β，28_环氧齐墩果烷， 3 β -
-0- β -D-吡喃葡萄糖基-(1 — χ) -0- β -D-吡喃葡萄糖醛酸基]-16 α -羟基-13 β，28-环氧齐墩果烷。刺五加用于治疗和调节神经衰弱、失眠多梦症状由来已久，刺五加苷对体外培养大鼠脊髓运动神经元缺氧损伤的保护作用也取代较好的结果，提示刺五加苷可以提高体外缺氧损伤的运动神经元的细胞活性，对细胞的缺氧损伤有明显的保护作用。刺五加根的提取物及刺五加苷对多种疲劳动物模型均有抗疲劳作用，苷的作用较根的提取物强，其中刺五加苷E的效果最好。刺五加lmg/kg能显著降低抓握颈背部悬吊24h应激法所致大鼠组织中过氧化脂质的含量，并使几乎耗竭的生育酚含量恢复，其中作用以刺五加苷E最强。 Steinmann等研究结果显示，刺五加苷E、B以及它们的混合体，刺五加乙醇提取液均能够诱导产生和提高IL-I和IL-6，说明刺五加提取物及其成分刺五加苷E、B均具有较好的免疫药理活性。现有刺五加苷制备工艺多采用水或含醇水提取，然后经醇沉或水沉处理后经大孔吸附树脂柱吸附，用适当浓度的含水醇洗脱、浓缩干燥制得。由此工艺的得到含有刺五加苷类活性成分的组合物含有鞣质等杂质，并且苷的含量低于50%。另一方面，现有技术对产品中刺五加苷的成份组成并不确定，因而实际生产中难以获得组成稳定、工艺可控性好的产品。刺五加B和刺五加E在刺五加中的含量极低，同时富集这两种成分需要较高的技术条件；现代药理研究表明，刺五加B和刺五加E具有显著的药理活性，如何制得富含高纯度的刺五加B和刺五加E的组合物显得尤为迫切。
发明内容
本发明目的在于提供一种含有刺五加苷类活性成分的组合物，解决了现有技术中刺五加苷内苷的含量低、刺五加B和刺五加E含量低等问题。为了解决现有技术中的这些问题，本发明提供的技术方案是一种含有刺五加苷类活性成分的组合物，其特征在于所述组合物包括刺五加苷B 和刺五加苷E，所述刺五加苷B和刺五加苷E在组合物中的含量在60% 100%范围内。优选的，所述刺五加苷B和刺五加苷E在组合物中的含量在60% 90%范围内。更优选的， 所述刺五加苷B和刺五加苷E在组合物中的含量在70 % 90 %范围内。优选的，所述组合物中刺五加苷B含量在40% 80%范围内；刺五加苷E含量在 20% 40%范围内。优选的，所述组合物中刺五加苷B含量在40% 70%范围内；刺五加苷E含量在20 % 35%范围内。更优选的，所述组合物中刺五加苷B含量在40% 70 % 范围内；刺五加苷E含量在20% 30%范围内。本发明还提供了一种含有刺五加苷类活性成分的组合物的制备方法，其特征在于所述方法包括以下步骤(1)以刺五加药材为原料经水提，浓缩，低温静置6-M小时，过滤，滤液备用得到刺五加提取液；(2)将刺五加提取液通过预处理好的AB-8大孔树脂进行吸附，依次经纯水洗脱除去杂质，再用10% 100%乙醇梯度洗脱，收集洗脱液，浓缩，干燥，得刺五加苷粗品；(3)刺五加苷粗品通过预处理好的小孔树脂(MCI)进行吸附，先用水洗，弃去杂质；继用5% 20%甲醇洗脱，回收溶剂得浸膏A ；最后用20% 40%甲醇梯度洗脱，回收溶剂得浸膏B ；(4)浸膏A采用ODS填料进行柱层析，经20%甲醇、30%甲醇梯度洗脱，收集30% 甲醇洗脱部位，回收溶剂，得组分A ；浸膏B采用ODS填料进行柱层析，经30%甲醇、40%甲醇梯度洗脱，收集40%甲醇洗脱部位，回收溶剂，得组分B ；(5)把组分A和组分B按1 1勾兑，即得含有刺五加苷类活性成分的组合物。优选的，步骤O)中所述大孔树脂选用非极性或弱极性苯乙烯型大孔树脂，所述乙醇-水混合溶媒选用按水、70 %乙醇梯度洗脱。优选的，步骤中所述反相碳18填料粒径为10-120 μ m。优选的，步骤(4)中所述反相碳18填料粒径为40-100 μ m。优选的，步骤中所述柱层析采用加压方式进行；压力范围在1 lObar。本发明还提供了一种含有刺五加苷类活性成分的组合物作为制备具有癌症化疗增效作用或减毒作用的食品或药物中的应用。本发明含有刺五加苷类活性成分的组合物由刺五加经常规提取和大孔树脂柱精制后，再经反相柱层析等工序处理获得。本发明所述含有刺五加苷类活性成分的组合物保留了原植物中苷类成分，并提高了产品纯度，可应用于相关药品和食品领域。本发明的组合物中含有刺五加苷B和刺五加苷E，两种苷总含量大于60%。优选的，该组合物中刺五加苷B含量大于40%。更优选的，该组合物中刺五加苷E含量大于 20%。含有刺五加苷类活性成分的组合物的制备方法如下(1)选取刺五加药材，水提，浓缩，低温静置6-M小时，过滤，滤液备用。(2)由(1)所得刺五加提取溶液，采用预处理好的AB-8大孔树脂进行吸附，先用水洗，再用10% 100%乙醇梯度洗脱，收集洗脱液，浓缩，干燥，得刺五加粗苷。(3)由(2)所得刺五加粗苷，采用预处理好的小孔树脂(MCI)进行吸附，先用水洗， 弃去；继用5% 20%甲醇洗脱，回收溶剂得浸膏A(主要含刺五加苷B)；最后用20% 40%甲醇梯度洗脱，回收溶剂得浸膏B (主要含刺五加苷E)。(4)由(3)所得浸膏A，采用ODS填料进行柱层析，经20%甲醇、30%甲醇梯度洗脱，收集30%甲醇洗脱部位，回收溶剂，得组分A (主要含刺五加苷B)。(5)由(3)所得浸膏B，采用ODS填料进行柱层析，经30%甲醇、40%甲醇梯度洗脱，收集40%甲醇洗脱部位，回收溶剂，得组分B (主要含刺五加苷E)。(6)把组分A和组分B按1 1勾兑，即得类白色刺五加苷。优选的，其制备方法步骤(1)中所选取刺五加药材为五加科植物刺五加 Acanthopanax senticosus (Rupret Maxim.) Harms 的干燥根或根莲或莲。优选的，其制备方法步骤O)中所述大孔树脂优选非极性或弱极性苯乙烯型大孔树脂，所述乙醇-水混合溶媒优选按水、70%乙醇梯度洗脱。优选的，其制备方法步骤(4)和(5)中所述柱层析采用加压方式进行。本发明还提供了一种含有刺五加苷类活性成分的组合物在制备食品或药物中的应用，可作为食品或药物的组份或组合物之一。该食品或药物具有癌症化疗增效作用或癌症化疗减毒作用。本发明的目的是提供一种组成成份稳定、工艺和质量可控的含有刺五加苷类活性成分的组合物，组合物中刺五加苷B和刺五加苷E总含量大于60%。本发明的另一目的是提供含有刺五加苷类活性成分的组合物的制备工艺，具体工艺步骤如下1、药材提取500kg刺五加药材切成l-2cm的小段，8倍量水回流提取三次，分别为3小时、2小时、1小时。合并提取液，回收溶剂，调整体积为250L。置冷库中Mh，取上清液用滤纸过滤， 滤液备用。2、AB_8树脂纯化树脂用量药材质量/树脂质量=3 1上样速度lml/min. cm2洗脱速度2-3ml/min.cm2树脂床的径高比1 5提取液上样两次，静态吸附12h。先用水洗:3BV，弃去；再用70%乙醇洗!3BV，合并。3、小孔树脂纯化树脂质量/浸膏质量=30 1上样速度lml/min. cm2洗脱速度2-3ml/min.cm2树脂床的径高比1 10浸膏用适量水溶解，上样两次，静态吸附12h。先用水洗:3BV，弃去；再用10%甲醇洗:3BV，浓缩得浸膏A (主要含刺五加苷B)；最后用30 %甲醇洗;3BV，浓缩得浸膏B (主要含刺五加苷E)。
4、中压ODS柱分离ODS 粒径40-60 μ mODS 孔径1 aimODS质量/浸膏质量=50/1上样速度2ml/min洗脱速度20ml/min浸膏A用适量20%甲醇溶解后，经0.45 μ m有机膜过滤，上样；先用20%乙醇洗 3BV,弃去，再用30%甲醇洗;3BV，收集30%甲醇部位，回收溶剂得组分A(主要含刺五加苷 B)。浸膏B用适量30%甲醇溶解后，经0.45 μ m有机膜过滤，上样；先用30%乙醇洗 3BV,弃去，再用40%甲醇洗;3BV，收集40%甲醇部位，回收溶剂得组分B (主要含刺五加苷 E)。把组分A和组分B按1 1勾兑，即得类白色刺五加苷。提取溶媒可采用常规的水提取，提取液合并，常法浓缩得浓缩液，再加适量水稀释，过滤，得刺五加提取溶液。为进一步提高提取液中苷含量，可优选采用冷藏处理，即浓缩液冷藏条件下静置6-M小时(优选8-16小时)，再过滤，得刺五加粗苷溶液。所述工艺步骤O)中，所述大孔树脂优选非极性或弱极性大孔树脂，更优选弱极性大孔树脂。大孔树脂柱梯度洗脱时更优选按水、70%乙醇梯度洗脱并收集70%乙醇洗脱部位洗脱液获得。
权利要求
1.一种含有刺五加苷类活性成分的组合物，其特征在于所述组合物包括刺五加苷B和刺五加苷E，所述刺五加苷B和刺五加苷E在组合物中的总含量在609Γ100%范围内。
2.根据权利要求1所述的含有刺五加苷类活性成分的组合物，其特征在于所述组合物中刺五加苷B含量在40% 80%范围内；刺五加苷E含量在20% 40%范围内。
3.—种权利要求1所述的含有刺五加苷类活性成分的组合物的制备方法，其特征在于所述方法包括以下步骤(1)以刺五加药材为原料经水提，浓缩，低温静置6-Μ小时，过滤，滤液备用得到刺五加提取液；(2)将刺五加提取液通过预处理好的ΑΒ-8大孔树脂进行吸附，依次经纯水洗脱除去杂质，再用10% 100%乙醇梯度洗脱，收集洗脱液，浓缩，干燥，得刺五加苷粗品；(3)刺五加苷粗品通过预处理好的小孔树脂(MCI)进行吸附，先用水洗，弃去杂质；继用5% 20%甲醇洗脱，回收溶剂得浸膏A ；最后用20% 40%甲醇梯度洗脱，回收溶剂得浸膏B ；(4)浸膏A采用ODS填料进行柱层析，经20%甲醇、30%甲醇梯度洗脱，收集30%甲醇洗脱部位，回收溶剂，得组分A ；浸膏B采用ODS填料进行柱层析，经30%甲醇、40%甲醇梯度洗脱，收集40%甲醇洗脱部位，回收溶剂，得组分B ；(5)把组分A和组分B按1 1勾兑，即得含有刺五加苷类活性成分的组合物。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于步骤(2)中所述大孔树脂选用非极性或弱极性苯乙烯型大孔树脂，所述乙醇-水混合溶媒选用按水、70%乙醇梯度洗脱。
5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于步骤(4)中所述反相碳18填料粒径为 10-120 μm。
6.根据权利要求3所述的方法，其特征在于步骤(4)中所述反相碳18填料粒径为 40-100 μm0
7.根据权利要求3所述的方法，其特征在于步骤(4)中所述柱层析采用加压方式进行； 压力范围在Γ10 bar。
8.—种权利要求1所述的含有刺五加苷类活性成分的组合物作为制备具有癌症化疗增效作用或减毒作用的食品或药物中的应用。
全文摘要
本发明公开了一种含有刺五加苷类活性成分的组合物，其特征在于所述组合物包括刺五加苷B和刺五加苷E，所述刺五加苷B和刺五加苷E在组合物中的总含量在60%~100%范围内。所述含有刺五加苷类活性成分的组合物保留了原植物中苷类成分，并提高了产品纯度，可应用于相关药品和食品领域。
文档编号A23L1/29GK102283875SQ20111020722
公开日2011年12月21日 申请日期2011年7月25日 优先权日2011年7月25日
发明者刘江云, 刘艳丽, 张苗苗, 杨世林, 许琼明, 贾丹, 陈重 申请人:苏州大学