专利名称：一种大豆肽的酶法制备方法
技术领域：
本发明涉及大豆肽的制备工艺，特别是指一种大豆肽的酶法制备方法。
背景技术：
利用大豆蛋白经酶水解后，得到由多种肽分子组成的混合水解产物，称其为大豆肽。大豆肽与大豆蛋白具有完全相同的氨基酸组成，一般由2 10个氨基酸残基构成，必需氨基酸平衡良好。与大豆蛋白相比，大豆肽具备良好的加工特性和独特的生理活性，可用于多种食品乃至化妆品的生产中。
大豆蛋白水解物的研究最初采用酸碱化学试剂在一定温度下进行水解反应，但在研究中发现，化学法制备大豆肽存在种种弊端，如水解过程不易控制、水解无特异性、副反应多、营养成分损失及水解产物感官性能差、苦臭味等问题未能解决等，大豆低聚肽的研究进展缓慢。
随着酶学工业的发展，酶法水解大豆蛋白逐渐成为了研究的主流。酶法制备大豆多肽的工艺条件一般都比较温和，但因酶理化特性的差异，其反应条件必须限制在某个最适温度和pH范围内，否则酶就会失活，而且不同酶水解时的作用位点和作用机理也不一样。如国内外研究最多的Alcalase是一种非特异性碱性蛋白酶,属于内切酶，主要作用于含疏水性羧基的肽键，催化部位是丝氨酸；复合蛋白酶Protamex的活性中心是丝氨酸残基，同时具有内切酶和外切酶的特性，在大豆肽酶解中使用较多；研究发现，Flavourzyme复合风味蛋白酶可减少疏水性氨基酸所引起的苦味，可以使大豆肽在食品工业生产中获得更为广泛的应用，近年来，国内对大豆肽的有关生产工艺也有所发展，一般的制备方法为利用完全脱腥大豆蛋白粉作为原料，使用Asl.398蛋白酶、胰蛋白酶、菠萝蛋白酶中的一种，于30-50°C、不同pH下处理，取上清液再与氨基酸、蛋白质等复合成氨基酸口服液；采用中性蛋白酶Asl.398与木瓜蛋白酶双酶复合水解的方法，可获得比单独使用一种酶更高的水解度，获得分子量在2000以下的大豆肽；采用胰蛋白酶与中性蛋白酶Asl.398复合水解大豆分离蛋白，也获得了良好的效果，水解度可达到30%以上，大豆肽平均链长为2-4个氨基酸，相对分子量小于1000，但是，常规的采用单一酶法水解的水解度通常较低，为40-50%，虽然多酶水解能有一定提高，但仍然有限，而且多酶水解对于工艺条件的控制要求更加严格。
蚯蚓丝氨酸蛋白酶是从蚯蚓体内提取得到的一种酸性蛋白酶，属于胰蛋白酶，它能水解蛋白质底物(如酪蛋白)，碱性氨基酸的酯及酰胺。PI3-4 ;20-50°C范围稳定；是一种糖蛋白酶类。
蚯蚓丝氨酸蛋白酶作为一组蛋白水解酶，对其酶学性质的研究还不够深入。多数蚯蚓丝氨酸蛋白酶组分受3种丝氨酸蛋白酶抑制剂苯甲磺酰氟、甲苯磺酰苯丙氨酰氯甲基酮、N-对甲苯磺酰赖氨酰氯甲基酮的抑制，但不同组分对不同种类的蛋白酶抑制剂的敏感性存在差异；蚯蚓丝氨酸蛋白酶直接切割纤溶酶原及降解纤维蛋白原是其同时具有激酶和纤溶酶活性的分子基础；对不同合成底物具有专一性说明其具有不同活性中心；蚯蚓丝氨酸蛋白酶能对组织纤溶酶原激活剂(t-P A)的专一性底物S-2288有水解作用，说明其对纤溶酶原的激活方式与t-P A相似。发明内容
本发明提出一种大豆肽的酶法制备方法，极大的提高了水解的效率，同时得到的产物分离更加彻底，收率高。
本发明的技术方案是这样实现的:一种大豆肽的酶法制备方法，包括以下步骤:
(I)称取植物蛋白，按照物料比1:20至1:60 (w/v)加入纯化水，75_85°C灭菌20-40min，冷却至 40°C ；
(2)按植物蛋白重量0.5-2%。加入蚯蚓丝氨酸蛋白酶；
(3)酶解工艺条件:通过缓冲液使得PH控制在6.0-7.8的范围内，37_42°C保温水解20-30h，75-85 °C灭活30min，然后进行过滤，取过滤清液；
(4)使用截留分子量为10000的超滤膜进行超滤，补加2-3次纯化水继续超滤；
(5)将超滤透出液进行干燥，得大豆肽粉。
优选的，步骤(1)中，所述物料比为1:40，灭菌温度为801:，301^11。温度如果过高容易导致蛋白质的变性。
优选的，步骤(2)中，加入蚯蚓丝氨酸蛋白酶的重量为植物蛋白重量的1%。。
优选的，步骤(3)中，PH控制在6.5，保温水解的温度为40°C，水解24h，灭活温度为 80。。。
优选的，步骤(3)中，所述过滤步骤包括:多层纱布过滤，取过滤清液；滤饼再加入纯化水洗涤，多层纱布过滤，将两次过滤清液合并；
优选的，步骤(4)中，所述超滤膜为中空纤维膜或者卷式膜或者管式膜或者陶瓷膜，当然，可用的超滤设备并不限于此，只要能达到同样效果的超滤设备，均可以使用。
优选的，步骤(5)中，所述干燥采用冷冻干燥或喷雾干燥，采用冷冻干燥或喷雾干燥可以防止蛋白质发生变性。
优选的，步骤(I)中，所述植物蛋白为大豆分离蛋白或者小麦蛋白，但不限于此，选用不同的植物蛋白主要的不同在于产物得率的差异，同时肽的名称随植物名称而改变。
其他常规工艺控制采用现有技术。
本发明的有益效果为:本发明创造性的利用蚯蚓丝氨酸蛋白酶作为酶法水解植物蛋白，尤其是大豆分离蛋白的酶原，其水解效率显著提高，达到80%以上，明显高于其他已知酶类(一般为40-50%)，产物肽含量高，达到80%以上；本发明中还通过在制备环节中添加使用超滤技术，使酶解产物分离彻底，收率高，制得的大豆肽分子量小、生物活性高，更易于人体吸收；本发明一种大豆肽的酶法制备方法的整个工艺过程条件温和，对环境友好。
具体实施方式
为更好地理解本发明，下面通过以下实施例对本发明作进一步具体的阐述，但不可理解为对本发明的限定，对于本领域的技术人员根据上述发明内容所作的一些非本质的改进与调整，也视为落在本发明的保护范 围内。
我们采用本发明公开的方法，进行以下操作:
(I)称取大豆分离蛋白500g，采自不二富吉(北京)科技有限公司，食品级，按照物料比1:40 (w/v)加入纯化水2000ml，80°C灭菌30min (温度不能过高，防止蛋白质变性)冷却至400C ；
(2)按植物蛋白重量1%。加入蚯蚓丝氨酸蛋白酶0.5g (来源:珠海博康药业有限公司)；
(3) PH控制在6.5，40°C保温水解24h，80°C灭活30min ;多层纱布过滤，取过滤清液；滤饼再加入500ml纯化水洗涤，多层纱布过滤，将两次过滤清液合并得1400ml溶液；
(4)使用截留分子量为10000的中空纤维超滤膜进行超滤，补加3次纯化水继续超滤，得2000ml滤液；
(5)将超滤透出液进行冷冻干燥，得大豆肽粉17.28g，重量回收率为35.56%。。
我们对得到的大豆肽份进行检测，其中，肽含量为86.0%，高于已知其他酶类的水解后的肽含量。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、 等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
权利要求
1.一种大豆肽的酶法制备方法，其特征在于，包括以下步骤: (1)称取植物蛋白，按照物料比1:20至1:60(w/v)加入纯化水，75-85°C灭菌20_40min，冷却至40°C ； (2)按植物蛋白重量0.5-2%。加入蚯蚓丝氨酸蛋白酶； (3)酶解工艺条件:PH控制在6.0-7.8，37-42°C保温水解20_30h，75_85°C灭活30min，然后进行过滤，取过滤清液； (4)使用截留分子量为10000的超滤膜进行超滤，补加2-3次纯化水继续超滤； (5)将超滤透出液进行干燥，得大豆肽粉。
2.如权利要求1中所述的大豆肽的酶法制备方法，其特征在于:步骤(I)中，所述物料比为1:40，灭菌温度为80°C，持续30min。
3.如权利要求1中所述的大豆肽的酶法制备方法，其特征在于:步骤(2)中，加入蚯蚓丝氨酸蛋白酶的重量为大豆分离蛋白重量的1%。。
4.如权利要求1中所述的大豆肽的酶法制备方法，其特征在于:步骤(3)中，PH控制在6.5，保温水解的温度为40°C并水解24h，灭活温度为80°C。
5.如权利要求1中所述的大豆肽的酶法制备方法，其特征在于:步骤(3)中，所述过滤步骤包括:多层纱布过滤，取过滤清液；滤饼再加入纯化水洗涤，多层纱布过滤，将两次过滤清液合并。
6.如权利要求1中所述的大豆肽的酶法制备方法，其特征在于:步骤(4)中，所述超滤膜为中空纤维膜或者卷式膜或者管式膜或者陶瓷膜。
7.如权利要求1中所述的大豆肽的酶法制备方法，其特征在于:步骤(5)中，所述干燥采用冷冻干燥或喷雾干燥。
8.如权利要求1中所述的大豆肽的酶法制备方法，其特征在于:步骤(I)中，所述植物蛋白为大豆分离蛋白或者 小麦蛋白。
全文摘要
本发明提出了一种大豆肽的酶法制备方法，通过创造性的采用蚯蚓丝氨酸蛋白酶作为酶原来酶解大豆分离蛋白，小麦蛋白等，水解效率高，并在制备工艺中采用了超滤技术，使得到的酶解产物大豆肽分离的更加彻底，收率高，整个工艺过程条件温和，对环境友好。
文档编号C12P21/06GK103146788SQ201310064520
公开日2013年6月12日 申请日期2013年2月28日 优先权日2013年2月28日
发明者陈东, 黄家升, 方启舟 申请人:珠海博康药业有限公司