一种应用丝状免疫捕获载体分离纯化细菌的方法
【专利摘要】本发明涉及一种应用丝状免疫捕获载体分离纯化细菌的方法。该方法应用丝状聚合材料作为载体，将捕获目标病原菌的抗体包被在丝状载体上，经过缓冲液洗涤，将包被好抗体的丝状载体放入样品抽提缓冲液中进行捕获反应，捕获反应完成后，用无菌水洗涤丝状载体，之后将丝状载体放置于培养基上，根据捕获目标病原菌的生长条件进行培养，24小时-72小时后观察到丝状载体边缘有菌落生长，根据目标病原菌菌落特征进行分离纯化。本方法灵敏、高效、操作简便、成本低，在植物样品材料、食品材料、环境体系中细菌的分离应用中，尤其在植物检疫领域有很大的利用空间，该方法作为核心技术还能够开发相关的细菌分离纯化试剂盒，因此具有推广应用价值。
【专利说明】一种应用丝状免疫捕获载体分离纯化细菌的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及植物病原细菌检疫、食品和环境微生物检测方法，尤其涉及一种应用丝状免疫捕获载体分离纯化细菌的方法。
【背景技术】
[0002]以目前植物病原细菌检疫工作为例。植物病原细菌的检疫工作有三个步骤:1、样品的症状观察；2、植物病原细菌的分离；3、病原菌鉴定。其中，第二个步骤即病菌的分离是工作的重点和难点，是植物病原细菌检疫工作的关键。只有拿到分离纯化的病原菌，这样才能进行之后的鉴定工作。目前对植物病原细菌样品进行初筛通常采取一些分子检测方法(如常规PCR、荧光PCR、ELISA、基因芯片、液相芯片等)，这些方法只用于样品的初筛，即初步判定样品是否携带某些病原细菌，但不作为结果判定的最终依据。所以，分离获得目标病原菌是检验结果的证据，也是植物病原细菌检疫工作的关键。
[0003]目前虽然病原菌分离的方法较多，通过分析，均不适应当前植物检疫工作需要具有快速、准确等特点。若干不同分离方法的比较见表1。目前来看，基于免疫吸附技术的分离方法是植物病原细菌检疫中的最有效手段。虽然免疫磁珠法具有自动化程度高，分离效果较好的优点，但是方法中采用的设备成本高。因此探寻一种新的分离方法，以适应当前植物检疫工作需要快速、准确的要求势在必行。
[0004]表1
【权利要求】
1.一种应用丝状免疫捕获载体分离纯化细菌的方法，其特征在于，该方法应用丝状聚合材料作为载体，将捕获目标病原菌的抗体包被在丝状载体上，经过包被缓冲液洗涤，将包被好抗体的丝状载体放入样品抽提缓冲液中进行捕获反应，捕获反应完成后，用无菌水洗涤丝状载体，之后将丝状载体放置于培养基上，根据捕获目标病原菌的生长条件进行培养，24小时-72小时后观察到丝状载体边缘有菌落生长，根据目标病原菌菌落特征进行分离纯化。
2.根据权利要求1所述的一种应用丝状免疫捕获载体分离纯化细菌的方法，其特征在于，该方法应用钓鱼线作为丝状载体`。
【文档编号】C12N1/20GK103740620SQ201410004439
【公开日】2014年4月23日 申请日期:2014年1月6日 优先权日:2014年1月6日
【发明者】刘鹏, 牛春敬, 郭京泽, 张莹, 冯洁, 林宇, 罗加凤, 廖芳 申请人:天津出入境检验检疫局动植物与食品检测中心