一种屎肠球菌及其制备方法
【专利摘要】一种屎肠球菌及其制备方法，涉及微生物领域，具体涉及一种屎肠球菌及其应用。从屠宰的山羊瘤胃中采集菌样，外采用37±5℃、厌氧、避光的条件进行定向培育，通过琼脂平板分区反复划线分离纯化后取得屎肠球菌L-01。屎肠球菌L-01可作为动物微生物饲料添加剂应用，能有效抑制动物消化道致病菌，改善消化道微生态环境；增强动物体的免疫功能，并可作为抗生素替代品，可有效解决当前所面临的严重局面。
【专利说明】一种屎肠球菌及其制备方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及微生物领域，具体涉及一种屎肠球菌及其应用。
【背景技术】
[0002]当前由于抗生素滥用以及超级细菌的出现等等一系列问题，使人类不可回避的面临由此所造成的严重局面，当务之急，必须尽快研发抗生素替代品，为绿色、安全、高效的动物饲料和人类食品生产提供可靠的技术保障。益生素是近20年发展起来的一种新型饲料添加剂，它具有抗生素和酶的功能。益生素可以补充有益菌群，改善消化道菌群平衡，预防和治疗菌群失调症；可以刺激机体免疫系统，提高动物机体免疫能力；能够参与菌群生存竞争，协助机体消除毒素和代谢产物；可改善机体代谢，补充机体营养成分，促进畜禽生长。
[0003]屎肠球菌{Enterococcus faecium)是目前农业部令(2013年2045号)动物微生物饲料添加剂栏所允许使用的益生菌种类，研究表明该菌可作为动物微生物饲料添加剂应用，能有效抑制动物消化道致病菌，改善消化道微生态环境；增强动物体的免疫功能。
【发明内容】
[0004]本发明目的是为了解决当前抗生素的滥用以及超级细菌的出现等等一系列问题，提出一种利于改善动物机体代谢、补充机体营养成分、促进畜禽生长的屎肠球菌L-01。
[0005]本发明提出的屎肠球菌L-01 (Enterococcus faecium L-OI)于 2012 年 5 月 30保藏于位于中国武汉大学 的中国典型培养物保藏中心，保藏编号是CCTCC NO:M 2012194。
[0006]本发明还提出以上屎肠球菌L-Ol的制备方法，即从屠宰的山羊瘤胃中采集菌样，外采用37±5°C、厌氧、避光的条件进行定向培育，通过琼脂平板分区反复划线分离纯化后取得屎肠球菌L-OI。
[0007]本发明从健康山羊屠宰后的瘤胃分离、纯化、培育、鉴定到I株屎肠球菌并保种，可作为动物微生物饲料添加剂应用，能有效抑制动物消化道致病菌，改善消化道微生态环境；增强动物体的免疫功能，并可作为抗生素替代品，可有效解决当前所面临的严重局面。
[0008]本发明筛选得到的菌株，与中国工业微生物菌种保藏管理中心等国家保种机构现存菌种来源及生物学特性不同。经过中国工业微生物菌种保藏管理中心鉴定，该菌株为屎肠球菌，且在中国工业微生物菌种保藏管理中心进行了遗传稳定性试验，证明该菌株性状可稳定遗传。在8_12h的酶活力动态变化过程中，α-淀粉酶活力与α-葡萄糖转苷酶活力均达到峰值并维持在较高水平。
[0009]本菌株分离源自屠宰后的健康山羊瘤胃，其发酵产物作为动物微生物饲料添加剂应用于养殖动物，尤其是对改善反刍动物，其相容性和功效最为理想，此外，对于仔猪消化道微生态环境稳态的建立也具有积极的调控作用。
【专利附图】
【附图说明】
[0010]图1为本发明屎肠球菌L-Ol的菌株菌落照片。[0011]图2、图3分别为本发明屎肠球菌L-Ol的菌株场发射扫描电镜照片。
[0012]图4为本发明屎肠球菌L-Ol菌株MRS培养基菌体形态照片。
[0013]图5为本发明屎肠球菌L-Ol菌株MRS培养基菌落形态照片。
[0014]图6为39°C淀粉酶(AMS)活力随时间变化的关系图。
[0015]图7为对硝基苯酚的标准曲线图。
[0016]图8为58°C α -葡萄糖转苷酶活力随时间变化的关系图。
[0017]图9为屎肠球菌L-Ol与相关种的16S rDNA序列系统发育树。
[0018]图10为屎肠球菌L-Ol与相关种的基因序列系统发育树。
【具体实施方式】
[0019]一、菌株的筛选
1.筛选过程
从饲养的山羊屠宰的瘤胃中采集菌样，体外采用37±5°C、厌氧、避光的特定条件进行定向培育，通过琼脂平板分区反复划线分离纯化至单菌株L-Ol并驯化，研究其形态学及生物学特性。通过琼脂平板培养观察菌落特征、电子显微镜观察单菌株形态及相关关键酶活力测定。
[0020]1.1工作母液的配置:
先以下表比例配备营养底物:_
【权利要求】
1.屎肠球菌L-Ol {Enterococcus faecium L_01)，其保藏编号是 CCTCC M 2012194。
2.如权利要求1所述屎肠球菌L-Ol的制备方法，其特征在于从屠宰的山羊瘤胃中采集菌样，体外采用37±5°C、厌氧、避光的条件进行定向培育，通过琼脂平板分区反复划线分离纯化后取得屎肠球 菌L-OI。
【文档编号】C12N1/20GK103865846SQ201410067604
【公开日】2014年6月18日 申请日期:2014年2月27日 优先权日:2014年2月27日
【发明者】潘林福 申请人:扬州绿保生物科技有限公司