瓜类细菌性果斑病菌lamp检测引物的制作方法
【专利摘要】本发明涉及瓜类细菌性果斑病菌LAMP检测引物，属于生物【技术领域】。本研究根据瓜类细菌性果斑病菌菌株AAC00-1的全基因组序列信息，在Aave_4063和Aave_4064基因序列设计了1套果斑菌LAMP检测的特异性引物，基于该引物建立的LAMP检测方法具有强特异性和高灵敏度，低成本、快速易于操作等特点。
【专利说明】瓜类细菌性果斑病菌LAMP检测引物
(—)【技术领域】
[0001]本发明涉瓜类细菌性果斑病菌(Acidovorax citrulli)LAMP引物及检测方法,属于生物【技术领域】。
(二)【背景技术】
[0002]瓜类细菌性果斑病(Bacterial fruit blotch, BFB)是西甜瓜等葫芦科作物上重要的细菌病害，由西瓜曬酸菌(Acidovorax citrulli)引起。该病为典型的种传病害(Schaad N W，1978)，发病后侵染叶片、果实和种子，严重影响果实的品质和产量，对瓜类生产及相关产业构成了极大的威胁(Richard Latin, 1995 ；ffalcott R R，2003)，上世纪90年代在我国首次报道，随后在新疆、海南、内蒙古、宁夏、北京、河北、山东、吉林、福建、湖南等地发生，并呈上升趋势，造成大田西瓜和甜瓜减产甚至绝收，给西甜瓜生产带来巨大损失(蔡学清等，2005 ;薛莉等，2009 ;任小平等，2010 ;胡俊等，2006 ;赵廷昌等，2001 ;金岩等，2004)。因此建立西瓜噬酸菌的快速、准确、便捷的检测技术是防止该病害发生的重要举措。
[0003]有关西瓜噬酸菌国内外已有多篇PCR特异性检测的研究报道(Minsavage G V etal, 1995 ；Walcott et al,2000 ；Schaad N W et al,2003 ；Song W Y et al,2003 ；Bahar etal，2008)，但均存在诸如灵敏度不高或特异性不强等缺点。目前，一种最新的检测技术开始被广泛应用一环介导等温扩增法(LAMP)。环介导等温扩增技术是由NOTOMI等于2000年报道的一种新型核酸扩增技术，它针对目的基因其特点是针对靶序列的6个特异性区域设计两对引物，利用一种具有链置换活性的DNA聚合酶(Bst DNA polymerase)在等温条件下(65°C左右)保温30~60min，即可实现核酸的大量扩增，并且伴有肉眼可见的副产物白色焦磷酸酶沉淀产生(Notomi et al，2000)。此方法的产生后，已被广泛应用于病毒、细菌、原生动物和真菌等领域的检测中(Endo et al, 2004 ；0kafuji et al, 2005) ?
[0004]本实验基于LAMP技术建立了瓜类细菌性果斑病菌的检测体系，并对市售的瓜种子进行了检测。
[0005]参考文献
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(三)
【发明内容】
[0023]技术问题
[0024]发明的目的是解决现有技术中瓜类细菌性果斑病的LAMP检测方法，意在避免常规检测方法如PCR等方法易受检测样品中杂质干扰、以及假阳性的现象。LAMP技术可对瓜类细菌性果斑病进行有效检测，且存在特异性强、灵敏度高、成本低等特点。
[0025]技术方案
[0026]本研究的技术路线如下所示:
[0027]
【权利要求】
1.用于检测瓜类细菌性果斑病菌的LAMP引物AC-F3，Ac_B3，Ac_FIP，和Ac_BIP，其特征在于，所述引物Ac-F3，Ac-B3，Ac-FIP JPAc-BIP的序列为: Ac-F3:5’ -ACCTGCTTCCGTTCTTCATG-3’
Ac-B3:5， -GTCAGGAGGGTGAGTAGCA-3，
Ac-FIP:5’ -TCACGCACTGCACGCCTTCC-CCCTCCTGCCCATGCT-3’
Ac-BIP:5’ -CAGGCGATCGAAGGCCGCT-TGGGGCGACAGATGGTG-3’。
【文档编号】C12R1/01GK103866029SQ201410122468
【公开日】2014年6月18日 申请日期:2014年3月28日 优先权日:2014年3月28日
【发明者】赵玉强, 朱建华, 朱恩, 罗金燕, 陈磊, 姚红梅, 余慧, 胡白石 申请人:上海市农业技术推广服务中心