一种霍乱弧菌的检测方法
【专利摘要】本发明公开一种霍乱弧菌的检测方法，包括采集和处理待测标本，对待测样本进行加样；对加样后的待测样本进行分子信标实时定量PCR检测，然后记录各样本的CT值，并根据阴性对照和阳性对照的CT值以及检测样本CT值来判断检测样本为阳性还是阴性。该霍乱弧菌的检测方法具有闭管操作，准确性高，步骤简单，检测时间短的优点。
【专利说明】一种霍乱弧菌的检测方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种霍乱弧菌的检测方法。
【背景技术】
[0002]霍乱弧菌是人类霍乱的病原体，霍乱是一种古老且流行广泛的烈性传染病之一。曾在世界上引起多次大流行，主要表现为剧烈的呕吐，腹泻，失水，死亡率甚高。属于国际检疫传染病。由于霍乱流行迅速，且在流行期间发病率及死亡率均高，危害极大，因此早期迅速和正确的诊断，对治疗和预防本病的蔓延有重大意义。目前霍乱弧菌的检测方法主要有以下几种。直接镜检:采取病人“米泔水样”大便或呕吐物。镜检(涂片染色及悬滴法检查)观察细菌形态，动力特征。此种方法的准确性不高；细菌分离培养:可将材料接种至碱性蛋白胨水37°C培养6~8小时后，取生长物作形态观察，并转种于碱性平板作分离培养，取可疑菌落作玻片凝集，阳性者再作生化反应及生物型别鉴定试验。此种方法检测时间长；特异性制动试验:取检材或新鲜碱性蛋白胨水培养物一滴，置于载玻片上，再加霍乱弧菌多价诊断血清，加盖玻片，用暗视野镜观察，3分钟内运动被抑制的即为阳性。此种方法必须有数量较多的弧菌才检出。
【发明内容】
[0003]本发明要解决的技术问题是提供一种具有闭管操作，准确性高，步骤简单，检测时间短的霍乱弧菌的检测方法。 [0004]为解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案:包括以下步骤:
[0005]I)用直接涂片的方式采集样本，待测；
[0006]2)处理待测样本，对待测样本进行加样，通过衍生化反应得到待测样本的转化物，备用;
[0007]3)取步骤2)中所得转化物，对该转化物进行分子信标实时定量PCR检测，并记录各样本的CT值；
[0008]4)将步骤3)中记录的CT值与阴性对照和阳性对照的CT值对照，判断检测样本为阳性还是阴性。
[0009]本发明的一种霍乱弧菌的检测方法及其制备方法的有益效果是:具有闭管操作，准确性高，步骤简单，检测时间短。
【具体实施方式】
[0010]为能进一步了解本发明的特征、技术手段及所达到的具体功能，下面以【具体实施方式】对本发明做详细描述。
[0011]实施例:
[0012]一种霍乱弧菌的检测方法，
[0013]所述霍乱弧菌的检测方法的制备方法过程如下:[0014]I)用直接涂片的方式采集样本，待测；
[0015]2)处理待测样本，对待测样本进行加样，通过衍生化反应得到待测样本的转化物，备用;
[0016]3)取步骤2)中所得转化物，对该转化物进行分子信标实时定量PCR检测，并记录各样本的CT值；
[0017]4)将步骤3)中记录的CT值与阴性对照和阳性对照的CT值对照，判断检测样本为阳性还是阴性。
[0018]实验例:
[0019]实验对象:200名感染霍乱弧菌程度不同的患者。
[0020]实验方法:200名患者全部用本发明的霍乱弧菌的检测方法检测。
[0021]实验结果:通过本发明的霍乱弧菌的检测方法检测，所有患者都成功地检测出来丙型霍乱弧菌。
[0022]由实验结果可知，使用本霍乱弧菌的检测方法闭管操作，准确性高，步骤简单，检测时间短。
[0023]以上已将本发明做一详细说明，以上所述，仅为本发明之较佳实施例而已，当不能限定本发明实施范围 ，即凡依本申请范围所作均等变化与修饰，皆应仍属本发明涵盖范围内。
【权利要求】
1.一种霍乱弧菌的检测方法，其特征在于:包括以下步骤: 1)用直接涂片的方式采集样本，待测； 2)处理待测样本，对待测样本进行加样，通过衍生化反应得到待测样本的转化物，备用； 3)取步骤2)中所得转化物，对该转化物进行分子信标实时定量PCR检测，并记录各样本的CT值； 4)将步骤3)中记录的CT值与阴性对照和阳性对照的CT值对照，判断检测样本为阳性还是阴性 。
【文档编号】C12Q1/68GK104032009SQ201410261852
【公开日】2014年9月10日 申请日期:2014年6月12日 优先权日:2014年6月12日
【发明者】江崇才, 李作臻, 仇彩霞 申请人:江崇才