以沼气池废液为原料培养直舟形藻的培养基及培养方法
【专利摘要】本发明公开了一种利用沼气池废液培养直舟形藻的方法，属水产养殖领域。直舟形藻是鲍、海参、海胆、扇贝、贻贝、舔食螺类等海洋名贵动物重要饵料，传统采用f/2培养基配方且采用塑料薄膜袋培养，生长慢，易污染，易划破，成本高，效益低，操作费力，现采用白塑料桶充气培养并在培养基中添加了沼气池废液，硅酸钠，磷酸二氢钾，苹果酸钠，柠檬酸铁，量元素，吲哚乙酸，D-异抗坏血酸钠，P-胡萝卜素，萘乙酸，海泥浸出液等，废物利用，变废为宝，且可获得有重要饵料价值的直舟形藻，有机和无机肥混合使用，营养更全面、均衡，操作方便，灵活掌握，塑料桶可重复利用，成本低，效益高，产量提高340%。
【专利说明】以沼气池废液为原料培养直舟形藻的培养基及培养方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于水产养殖领域，尤其涉及一种利用沼气池废液培养直舟形藻的方法。
【背景技术】
[0002] 畜禽养殖中，大量粪、尿直接排放会导致周围环境严重污染，为此，以沼气生产为 主的能源生态型沼气工程在养殖业中得到广泛应用。尽管沼气工程大大减少了养殖废弃物 直接排放，但在实际应用中发现，沼气生产中会产生大量沼气废液（简称沼液），如果不能 充分有效利用，会给周围环境尤其是对水环境造成严重污染。沼液富含氮、磷等营养元素， 它的过度排放是造成水体富营养化和水环境污染的一个重要因素。
[0003] 沼液是有机物经沼气池制取沼气后的液体残留物，不仅含作物生长所必需的氮、 磷、钾、微量元素、氨基酸等，而且含丁酸、吲哚乙酸、维生素B12等活性物质，有促进作物生 长和控制病害发生双重作用。沼液含有丰富有机质和较多的腐殖酸，既是一种优质基肥，也 是良好的土壤改良剂。沼液的施用可增加土壤团粒结构，增加土壤中的空隙度，协调土壤中 水、肥、气、热条件；同时沼液养分全面，缓急相济，可协调植株内激素平衡。沼液用作有机肥 的优点有：有机营养与无机营养结合；大量元素与微量元素结合；肥效与药效结合；速效与 缓效结合；植物体内酶激活与土壤肥力有效性结合。大量实验结果表明：与施用等价化肥 比较，施用沼液，蔬菜增产15-30%，粮食作物增产5-15%，经济作物增产15-20%，且作物 抗逆性增强，病虫害降低，品质提高，耐贮存。如种植蔬菜，可得环保型无公害蔬菜，深受广 大菜农和市民欢迎。随着全球有机农业发展，绿色食品市场需求量猛增，价格居高不下，沼 肥将有更广阔的市场。
[0004] 另外，沼液用作淡水养殖肥料，不仅营养丰富，加快鱼池浮游生物繁殖，耗氧量减 少，改善水质，而且水面能保持茶褐色，易吸收光热，提高水温，加之沼液pH值为中性偏碱， 能使鱼池保持中性，促进鱼类更好生长。总之，沼液是一种很好的养鱼肥料。
[0005] 虽然沼液在作物种植和渔业上得到了广泛应用，但在海洋微藻特别是饵料微藻的 培养上的应用极少，这限制了沼液的进一步开发利用，而我的实验研究表明，沼液对海洋饵 料微藻直舟形藻的生长发育、产量提高有极好的效果，这为沼液的开发应用开辟了新的道 路。
[0006] 饵料微藻是指需要借助显微镜才能观察到的一类可以被海水动物摄食并能满足 它们营养需要的微型藻类。目前世界上常用的饵料微藻有20多种。我国海水育苗中常用 馆料微藻主要有：娃藻门的牟氏角刺藻Cheatoceros muelleri、三角褐指藻Phaeodactylum trecornutum、中肋骨条藻Skeletonema costatum、底栖舟形藻Navicula sp·、底栖卵形藻 Cocconeis sp.;金藻类的绿光等鞭藻Isochrysis galbana及其3011品系和8701品系；绿 藻类的亚心形四片藻Tetraselmis subcordiformis、小球藻Chlorella sp.和蓝藻类的纯 顶螺旋藻Spirulina platensis，以及裸藻类的纤细裸藻Euglena gracilis等。其中直舟 形藻是鲍、海参、海胆、扇贝、泥蚶、魁蚶、贻贝、杂色蛤、舔食螺类等底栖性海洋名贵经济动 物的重要饵料，特别是在、海参、海胆、扇贝育苗过程中，直舟形藻是海参、海胆、扇贝幼体最 重要、最喜食的开口饵料，对育苗成功与否有决定性作用。
[0007] 直舟形藻Navicula sp.隶属硅藻门、羽纹纲、舟形藻目、舟形藻科、舟形藻属。细胞 舟形至椭圆形，中部宽，两端尖。壳面中线上有壳缝，能自由行动。纵轴左右对称，横轴和壳 环轴也是左右对称。纵轴最长，横轴短，壳环轴一般短于横轴，壳面花纹左右对称，呈点纹。 壳中央有中央结节，两端各有一端结节，向壁内凸出，起加强硅质细胞壁作用。没有船骨突， 有复大孢子。色素体2-4个，板状或块状。舟形藻属是硅藻门种类最多的一个属，有1850 种，中国有100多种。细胞单独生活，也有少数群居于自己分泌的胶质管内，淡水、海水、半 咸水均有。本属最早发现于新生代第三纪古新世，古老种类中尚有两个种一直生活到现在。
[0008] 直舟形藻传统上采用f/2培养基配方且采用塑料薄膜袋培养，生长慢，易污染，易 划破，成本高，效益低，操作费力，工作量大。为了克服直舟形藻传统培养方法的缺点，本 发明采用白塑料桶充气培养并在培养基中添加了沼气池废液，硅酸钠，磷酸二氢钾，硝酸 铵，甘露醇，生长素贮液，碳酸氢钠，苹果酸钠，柠檬酸铁，P 1微量元素溶液，吲哚乙酸，乙酸 钠，谷氨酸钠，苯甲酸钠，硬脂酸镁，羧甲基纤维素钠，D-异抗坏血酸钠，海藻酸丙二醇酯， β_胡萝卜素，α-萘乙酸，土壤浸出液，海泥浸出液等营养成分，不仅可以废物利用，变废 为宝，而且可获得有重要饵料价值的直舟形藻，一举多得，实在巧妙。有机肥和无机肥混合 使用，营养更加全面、均衡，操作方便，灵活掌握，塑料桶可重复利用，成本低，效益高，直舟 形藻生长速度和产量大幅提高，培养周期缩短，产量提高340%。
【发明内容】
[0009] 为了克服直舟形藻传统培养方法的缺点，本发明提供了一种以沼气池废液为主要 原料培养直舟形藻的方法，配方如下：
[0010] 沼气池废液85毫升，硅酸钠5毫克，磷酸二氢钾8毫克，硝酸铵6毫克，甘露醇3毫 克，生长素液2晕升，碳酸氢钠200晕克，苹果酸钠2晕克，朽 1檬酸铁5晕克，P1微量兀素 溶液3毫升，吲哚乙酸1毫克，乙酸钠5毫克，谷氨酸钠10毫克，苯甲酸钠5毫克，硬脂酸镁 8毫克，羧甲基纤维素钠12毫克，D-异抗坏血酸钠3毫克，海藻酸丙二醇酯5毫克，β-胡 萝卜素12晕克，α -萘乙酸〇. 2晕克，土壤浸出液1晕升，海泥浸出液1. 2晕升，二氧化氯 消毒海水1000毫升；
[0011] 其中，生长素贮液配方：生物素1毫克，维生素B1IOO毫克，烟酸0. 1毫克，对氨基 苯甲酸10毫克，蒸馏水1000毫升；
[0012] P1微量元素溶液配方：乙二胺四乙酸1000毫克，氯化钴1毫克，氯化锌5毫克，氯 化铜40微克，氯化锰40毫克，氯化铁10毫克，蒸馏水1000毫升；
[0013] 一种利用沼液为主要原料养殖直舟形藻方法，具体步骤如下：
[0014] 培养容器为容积25升白塑料桶，市场有售，食品级聚乙烯材料制成，无缝一体式 结构，坚固耐用，有良好透光性，以利直舟形藻进行光合作用。水桶顶部有一圆形盖子，上有 旋丝，可旋转而密封，盖子打上3个孔，一个孔插入充气管，另一个孔插入排气管，充气管和 排气管都是玻璃管，内径6毫米。还有一个孔穿入一根金属导线，导线末端接一个25w节能 灯。将白塑料桶先用砂滤海水洗净，再用工业用盐酸浸泡、消毒10-15分钟，然后用冷开海 水冲洗3遍，装入所述的培养基15升，充气混合10分钟，选择生命力旺盛、无污染的直舟形 藻接种，接种密度6 X 104cell/mL ;盖子上插入两根干净玻璃管，一根较长，35厘米，顶端露 出盖子10厘米，下端通过料管与散气石连接，用以充气（散气石的作用是形成很小的气泡， 避免大气泡或翻滚的波浪打碎藻细胞）；另一根较短，14厘米，两端露出盖子即可，用以排 气；两根玻璃管同样粗细；用干净的透明胶带将两根玻璃管固定；长的玻璃管上端用料管 与充气泵相连，充入混合气体，混合气体成分和体积比例是空气：纯二氧化碳：臭氧：甲 烷=92% : 6% : 1% : 1% ;连续充气，充气量不宜太大，以藻细胞浮起不下沉即可；室外 培养，太阳光照射，最佳温度25±2°C，最佳光照强度4000-9000LUX ;夜间打开节能灯进行 照明。培养的前6天，塑料桶上方搭建一简易棚，上放置帘子遮挡光线，使光照强度维持在 2000-4000LUX，避免强烈阳光对细胞造成光伤害；第7天撤掉帘子，较强的光照有利于细胞 的生长繁殖和高不饱和脂肪酸的合成；培养至第8天，停止充气，拿开盖子，补充新鲜培养 基3升，以弥补蒸发掉的水分，盖上盖子，充气，继续培养，至第10天，直舟形藻密度增加至 500 X 104cell/mL，停止培养，将藻液倒出，将白塑料桶用砂滤海水洗净，加入消毒液消毒30 分钟，后进入下一轮培养；
[0015] 所述消毒液由以下重量比的物质组成：每100份85%乙醇中加入以下重量份的中 药材和辅料：土荆皮30?50份、杠板归15?25份、黄柏15?25份、苦参5?15份、艾叶 5?15份、辅料3-5份；消毒液制作方法：将土荆皮、杠板归、黄柏、苦参、艾叶分别切碎，于 60-70°C下烘干，再用中药材粉碎机分别粉碎至70目备用；分别称取以重量份计烘干并粉 碎的土荆皮30?50份、杠板归15?25份、黄柏15?25份、苦参5?15份、艾叶5?15 份，置于三角烧瓶中充分混合后，加入100份85%乙醇,浸泡48小时,200筛絹过滤,将清液 静置沉淀36小时，撇去液面漂浮物，取中上层的清液备用，在上述清液中加入辅料3-5份混 合搅拌均匀得到消毒液，所述辅料为半胱氨酸盐酸盐、硫酸钠、维生素C的混合物，混合比 例为重量比2 : 1 : 1;将所述消毒液密封于黑色试剂瓶中，贴上标签，置于4°C冰箱备用。
[0016] 优选地，对选用的所述白塑料桶，洗刷干净后进行消毒，使用紫外灯消毒，消毒 10-20分钟。
[0017] 优选地，对选用的所述白塑料桶，洗刷干净后进行消毒，使用高压氮气喷射消毒， 消毒5-10分钟。
[0018] 优选地，对选用的白塑料桶，洗刷干净后进行消毒，使用高压二氧化碳喷射消毒， 消毒5-6分钟。
[0019] 优选地，对选用的白塑料桶，洗刷干净后分两个阶段消毒，先使用高压氮气喷射消 毒，消毒2-3分钟，使用高压二氧化碳喷射消毒，消毒2-3分钟，消毒完毕后再进行藻类培 养。
[0020] 有益结果
[0021] 直舟形藻传统上采用f/2培养基配方且采用塑料薄膜袋培养，生长慢，易污染，易 划破，成本高，效益低，操作费力，工作量大，现在采用白塑料桶充气培养并在培养基中添加 了沼气池废液，硅酸钠，磷酸二氢钾，硝酸铵，甘露醇，生长素贮液，碳酸氢钠，苹果酸钠，柠 檬酸铁，P 1微量元素溶液，吲哚乙酸，乙酸钠，谷氨酸钠，苯甲酸钠，硬脂酸镁，羧甲基纤维素 钠，D-异抗坏血酸钠，海藻酸丙二醇酯，β-胡萝卜素， α-萘乙酸，土壤浸出液，海泥浸出液 等营养成分，不仅可以废物利用，变废为宝，而且可获得有重要饵料价值的直舟形藻，一举 多得，实在巧妙。有机肥和无机肥混合使用，营养更加全面、均衡，操作方便，灵活掌握，塑料 桶可重复利用，成本低，效益高，直舟形藻生长速度和产量大幅提高，培养周期缩短，产量提 闻 340!%。
【专利附图】
【附图说明】
[0022] 图1为直舟形藻形态结构图；
[0023] 其中附图标记为：1端结节，2中央结节，3细胞壁，4线纹，5壳缝；
[0024] 图2为利用沼气池废液培养直舟形藻方法图；
[0025] 其中附图标记为：6排气管，7白塑料桶，8藻液，9散气石，10节能灯，11充气管。
【具体实施方式】
[0026] 沼气池废液预处理方法：沼液使用前应进行预处理，方法是：取沼液原液5000毫 升，100目筛絹过滤，取清液，用离心机离心4分钟，转速4500转/分钟，弃残渣，取上清液， 加热，煮沸30分钟，杀死其中细菌、病毒等微生物，冷却、静置、沉淀24小时，再取上清液即 为沼液，装入磨口塞试剂瓶，贴上标签，置于4°C冰箱或冷库保存备用。
[0027] 白塑料桶消毒方法：白塑料桶先用砂滤海水洗净，再用工业用盐酸浸泡、消毒 10-15分钟,然后用冷开海水冲洗3遍。
[0028] 二氧化氯消毒海水的方法：海水用脱脂棉过滤，按每立方米海水加三氧化氯水剂 5毫升的量加入三氧化氯水剂，充分搅拌，溶解、消毒3小时，后用空气压缩机强力充气，使 海水充分翻滚60分钟，即可用于养藻。
[0029] 土壤浸出液制备方法：取树林中松散、富含有机质的上层土壤1公斤，加纯水2000 毫升，煮沸30分钟，在暗处放置2天，过滤，滤液600毫升加纯水400毫升使用。
[0030] 因柠檬酸铁（FeC6H5O7 ·5Η20)较难溶解，可加少量自来水在火炉上微热至80-90°C， 并不断搅拌至全部融化。
[0031] 接种用的直舟形藻预先进行提纯（本领域常规方法，只要可实现提纯即可，例如 凯氏提取法），以确保接种时藻种处于生长旺盛的指数生长期。
[0032] 各种营养盐要按配方中提供的顺序加入，以免发生化学反应。
[0033] 各种无机营养盐和维生素需预先配成母液且置于4°C冰箱冷藏保存备用，放置时 间不要超过45天。
[0034] 海泥抽取液制备方法：取比较肥沃又不於黑的海泥，以1份泥加2份淡水，充分 搅拌均匀，静置1-2分钟，取上层泥浆于铝锅中，按每1000毫升泥浆加1克NaOH的量加入 NaOH，煮沸25分钟。煮时需不断搅拌均匀，煮后静置24小时取上清液，密封，置于4°C冰箱 或冷库备用。
[0035] 所用化学药品纯度均需化学纯级别。
[0036] 实施例1 :为了克服直舟形藻传统培养方法的缺点，一种以沼气池废液为主要原 料培养直舟形藻的方法，配方如下：
[0037] 沼气池废液85毫升，硅酸钠5毫克，磷酸二氢钾8毫克，硝酸铵6毫克，甘露醇3毫 克，生长素液2晕升，碳酸氢钠200晕克，苹果酸钠2晕克，朽 1檬酸铁5晕克，P1微量兀素 溶液3毫升，吲哚乙酸1毫克，乙酸钠5毫克，谷氨酸钠10毫克，苯甲酸钠5毫克，硬脂酸镁 8毫克，羧甲基纤维素钠12毫克，D-异抗坏血酸钠3毫克，海藻酸丙二醇酯5毫克，β-胡 萝卜素12晕克，α -萘乙酸〇. 2晕克，土壤浸出液1晕升，海泥浸出液1. 2晕升，二氧化氯 消毒海水1000毫升；
[0038] 其中，生长素贮液配方：生物素1毫克，维生素B1IOO毫克，烟酸0. 1毫克，对氨基 苯甲酸10毫克，蒸馏水1000毫升；
[0039] P1微量元素溶液配方：乙二胺四乙酸1000毫克，氯化钴1毫克，氯化锌5毫克，氯 化铜40微克，氯化锰40毫克，氯化铁10毫克，蒸馏水1000毫升；
[0040] 一种利用沼液为主要原料养殖直舟形藻方法，具体步骤如下：
[0041] 培养容器为容积25升白塑料桶，市场有售，食品级聚乙烯材料制成，无缝一体式 结构，坚固耐用，有良好透光性，以利直舟形藻进行光合作用。水桶顶部有一圆形盖子，上有 旋丝，可旋转而密封，盖子打上3个孔，一个孔插入充气管，另一个孔插入排气管，充气管和 排气管都是玻璃管，内径6毫米。还有一个孔穿入一根金属导线，导线末端接一个25w节能 灯。将白塑料桶先用砂滤海水洗净，再用工业用盐酸浸泡、消毒10-15分钟，然后用冷开海 水冲洗3遍，装入所述的培养基15升，充气混合10分钟，选择生命力旺盛、无污染的直舟形 藻接种，接种密度6X 104cell/mL ;盖子上插入两根干净玻璃管，一根较长，35厘米，顶端露 出盖子10厘米，下端通过料管与散气石连接，用以充气（散气石的作用是形成很小的气泡， 避免大气泡或翻滚的波浪打碎藻细胞）；另一根较短，14厘米，两端露出盖子即可，用以排 气；两根玻璃管同样粗细；用干净的透明胶带将两根玻璃管固定；长的玻璃管上端用料管 与充气泵相连，充入混合气体，混合气体成分和体积比例是空气：纯二氧化碳：臭氧：甲 烷=92% : 6% : 1% : 1% ;连续充气，充气量不宜太大，以藻细胞浮起不下沉即可；室外 培养，太阳光照射，最佳温度25±2°C，最佳光照强度4000-9000LUX ;夜间打开节能灯进行 照明。培养的前6天，塑料桶上方搭建一简易棚，上放置帘子遮挡光线，使光照强度维持在 2000-4000LUX，避免强烈阳光对细胞造成光伤害；第7天撤掉帘子，较强的光照有利于细胞 的生长繁殖和高不饱和脂肪酸的合成；培养至第8天，停止充气，拿开盖子，补充新鲜培养 基3升，以弥补蒸发掉的水分，盖上盖子，充气，继续培养，至第10天，直舟形藻密度增加至 500 X 104cell/mL，停止培养，将藻液倒出，将白塑料桶用砂滤海水洗净，加入消毒液消毒30 分钟，后进入下一轮培养；
[0042] 所述消毒液由以下重量比的物质组成：每100份85%乙醇中加入以下重量份的中 药材和辅料：土荆皮30份、杠板归15份、黄柏15份、苦参5份、艾叶5份、辅料3份；消毒液 制作方法：将土荆皮、杠板归、黄柏、苦参、艾叶分别切碎，于60°C下烘干，再用中药材粉碎 机分别粉碎至70目备用；分别称取以重量份计烘干并粉碎的土荆皮30份、杠板归15份、黄 柏15份、苦参5份、艾叶5份，置于三角烧瓶中充分混合后，加入100份85 %乙醇，浸泡48 小时，200筛絹过滤，将清液静置沉淀36小时，撇去液面漂浮物，取中上层的清液备用，在上 述清液中加入辅料3份混合搅拌均匀得到消毒液，所述辅料为半胱氨酸盐酸盐、硫酸钠、维 生素C的混合物，混合比例为重量比2 : 1 : 1;将所述消毒液密封于黑色试剂瓶中，贴上 标签，置于4°C冰箱备用。
[0043] 优选地，对选用的所述白塑料桶，洗刷干净后进行消毒，使用紫外灯消毒，消毒10 分钟。
[0044] 优选地，对选用的所述白塑料桶，洗刷干净后进行消毒，使用高压氮气喷射消毒， 消毒5分钟。
[0045] 优选地，对选用的白塑料桶，洗刷干净后进行消毒，使用高压二氧化碳喷射消毒， 消毒5分钟。
[0046] 优选地，对选用的白塑料桶，洗刷干净后分两个阶段消毒，先使用高压氮气喷射消 毒，消毒2分钟，使用高压二氧化碳喷射消毒，消毒2分钟，消毒完毕后再进行藻类培养。
[0047] 实施例2
[0048] 其他步骤同于实施例1，区别在于所述消毒液由以下重量比的物质组成：每100份 85%乙醇中加入以下重量份的中药材和辅料：土荆皮40份、杠板归20份、黄柏20份、苦参 10份、艾叶10份、辅料4份；消毒液制作方法：将土荆皮、杠板归、黄柏、苦参、艾叶分别切 碎，于65°C下烘干，再用中药材粉碎机分别粉碎至70目备用；分别称取以重量份计烘干并 粉碎的土荆皮40份、杠板归20份、黄柏20份、苦参10份、艾叶10份，置于三角烧瓶中充分 混合后，加入100份85 %乙醇，浸泡48小时，200筛絹过滤，将清液静置沉淀36小时，撇去 液面漂浮物，取中上层的清液备用，在上述清液中加入辅料4份混合搅拌均匀得到消毒液， 所述辅料为半胱氨酸盐酸盐、硫酸钠、维生素C的混合物，混合比例为重量比2 : 1 : 1;将 所述消毒液密封于黑色试剂瓶中，贴上标签，置于4°C冰箱备用。
[0049] 优选地，对选用的所述白塑料桶，洗刷干净后进行消毒，使用紫外灯消毒，消毒15 分钟。
[0050] 优选地，对选用的所述白塑料桶，洗刷干净后进行消毒，使用高压氮气喷射消毒， 消毒7. 5分钟。
[0051] 优选地，对选用的白塑料桶，洗刷干净后进行消毒，使用高压二氧化碳喷射消毒， 消毒5. 5分钟。
[0052] 优选地，对选用的白塑料桶，洗刷干净后分两个阶段消毒，先使用高压氮气喷射消 毒，消毒2. 5分钟，使用高压二氧化碳喷射消毒，消毒2. 5分钟，消毒完毕后再进行藻类培 养。
[0053] 实施例3
[0054] 其他步骤同于实施例1，区别在于所述消毒液由以下重量比的物质组成：每100份 85%乙醇中加入以下重量份的中药材和辅料：土荆皮50份、杠板归25份、黄柏25份、苦参 15份、艾叶15份、辅料5份；消毒液制作方法：将土荆皮、杠板归、黄柏、苦参、艾叶分别切 碎，于70°C下烘干，再用中药材粉碎机分别粉碎至70目备用；分别称取以重量份计烘干并 粉碎的土荆皮50份、杠板归25份、黄柏25份、苦参15份、艾叶15份，置于三角烧瓶中充分 混合后，加入100份85 %乙醇，浸泡48小时，200筛絹过滤，将清液静置沉淀36小时，撇去 液面漂浮物，取中上层的清液备用，在上述清液中加入辅料5份混合搅拌均匀得到消毒液， 所述辅料为半胱氨酸盐酸盐、硫酸钠、维生素C的混合物，混合比例为重量比2 : 1 : 1;将 所述消毒液密封于黑色试剂瓶中，贴上标签，置于4°C冰箱备用。
[0055] 优选地，对选用的所述白塑料桶，洗刷干净后进行消毒，使用紫外灯消毒，消毒20 分钟。
[0056] 优选地，对选用的所述白塑料桶，洗刷干净后进行消毒，使用高压氮气喷射消毒， 消毒10分钾。
[0057] 优选地，对选用的白塑料桶，洗刷干净后进行消毒，使用高压二氧化碳喷射消毒， 消毒6分钟。
[0058] 优选地，对选用的白塑料桶，洗刷干净后分两个阶段消毒，先使用高压氮气喷射消 毒，消毒3分钟，使用高压二氧化碳喷射消毒，消毒3分钟，消毒完毕后再进行藻类培养。
[0059] 最后应说明的是：以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽 管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然 可以对前述实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换； 而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明实施例技术方案的精神和范 围。
【权利要求】
1. 一种以沼气池废液为主要原料培养直舟形藻的培养基，其特征在于配方如下： 沼气池废液85毫升，硅酸钠5毫克，磷酸二氢钾8毫克，硝酸铵6毫克，甘露醇3毫克， 生长素液2晕升，碳酸氢钠200晕克，苹果酸钠2晕克，朽1檬酸铁5晕克，P1微量兀素溶液 3毫升，吲哚乙酸1毫克，乙酸钠5毫克，谷氨酸钠10毫克，苯甲酸钠5毫克，硬脂酸镁8毫 克，羧甲基纤维素钠12毫克，D-异抗坏血酸钠3毫克，海藻酸丙二醇酯5毫克，β -胡萝卜 素12毫克，α -萘乙酸〇. 2毫克，土壤浸出液1毫升，海泥浸出液1. 2毫升，二氧化氯消毒 海水1000毫升； 其中，生长素贮液配方：生物素1毫克，维生素B1IOO毫克，烟酸0. 1毫克，对氨基苯甲 酸10毫克，蒸馏水1000毫升A微量元素溶液配方：乙二胺四乙酸1000毫克，氯化钴1毫 克，氯化锌5毫克，氯化铜40微克，氯化锰40毫克，氯化铁10毫克，蒸馏水1000毫升。
2. -种以沼气池废液为主要原料养殖直舟形藻的方法，其特征在于具体步骤如下： 培养容器为容积25升白塑料桶，市场有售，食品级聚乙烯材料制成，无缝一体式结构， 坚固耐用，有良好透光性，以利直舟形藻进行光合作用，水桶顶部有一圆形盖子，上有旋丝， 可旋转而密封，盖子打上3个孔，一个孔插入充气管，另一个孔插入排气管，充气管和排气 管都是玻璃管，内径6毫米。还有一个孔穿入一根金属导线，导线末端接一个25w节能灯，将 白塑料桶先用砂滤海水洗净，再用工业用盐酸浸泡、消毒10-15分钟，然后用冷开海水冲洗 3遍，装入权利要求1所述的培养基15升，充气混合10分钟，选择生命力旺盛、无污染的直 舟形藻接种，接种密度6 X 104cell/mL，盖子上插入两根干净玻璃管，一根较长，35厘米，顶 端露出盖子10厘米，下端通过料管与散气石连接，用以充气，（散气石的作用是形成很小的 气泡，避免大气泡或翻滚的波浪打碎藻细胞）；另一根较短，14厘米，两端露出盖子即可，用 以排气，两根玻璃管同样粗细，用干净的透明胶带将两根玻璃管固定，长的玻璃管上端用料 管与充气泵相连，充入混合气体，混合气体成分和体积比例是空气：纯二氧化碳：臭氧： 甲烷=92% : 6% : 1% : 1%，连续充气，充气量不宜太大，以藻细胞浮起不下沉即可；室 外培养，太阳光照射，最佳温度25±2°C，最佳光照强度4000-9000LUX，夜间打开节能灯进 行照明，培养的前6天，塑料桶上方搭建一简易棚，上放置帘子遮挡光线，使光照强度维持 在2000-4000LUX，避免强烈阳光对细胞造成光伤害，第7天撤掉帘子，较强的光照有利于细 胞的生长繁殖和高不饱和脂肪酸的合成，培养至第8天，停止充气，拿开盖子，补充新鲜培 养基3升，以弥补蒸发掉的水分，盖上盖子，充气，继续培养，至第10天，直舟形藻密度增加 至500X 104cell/mL，停止培养，将藻液倒出，将白塑料桶用砂滤海水洗净，加入消毒液消毒 30分钟，后进入下一轮培养； 所述消毒液由以下重量比的物质组成：每100份85 %乙醇中加入以下重量份的中药 材和辅料：土荆皮30?50份、杠板归15?25份、黄柏15?25份、苦参5?15份、艾叶 5?15份、辅料3-5份；消毒液制作方法：将土荆皮、杠板归、黄柏、苦参、艾叶分别切碎，于 60-70°C下烘干，再用中药材粉碎机分别粉碎至70目备用；分别称取以重量份计烘干并粉 碎的土荆皮30?50份、杠板归15?25份、黄柏15?25份、苦参5?15份、艾叶5?15 份，置于三角烧瓶中充分混合后，加入100份85%乙醇,浸泡48小时,200筛絹过滤,将清液 静置沉淀36小时，撇去液面漂浮物，取中上层的清液备用，在上述清液中加入辅料3-5份混 合搅拌均匀得到消毒液，所述辅料为半胱氨酸盐酸盐、硫酸钠、维生素C的混合物，混合比 例为重量比2 : 1 : 1;将所述消毒液密封于黑色试剂瓶中，贴上标签，置于4°C冰箱备用。
3. 根据权利要求2所述的一种以沼气池废液为主要原料养殖直舟形藻的方法，其特征 在于，对选用的所述白塑料桶，洗刷干净后进行消毒，使用紫外灯消毒，消毒10-20分钟。
4. 根据权利要求2所述的一种以沼气池废液为主要原料养殖直舟形藻的方法，其特征 在于，对选用的所述白塑料桶，洗刷干净后进行消毒，使用高压氮气喷射消毒，消毒5-10分 钟。
5. 根据权利要求2所述的一种以沼气池废液为主要原料养殖直舟形藻的方法，其特征 在于，对选用的白塑料桶，洗刷干净后进行消毒，使用高压二氧化碳喷射消毒，消毒5-6分 钟。
6. 根据权利要求2所述的一种以沼气池废液为主要原料养殖直舟形藻的方法，其特征 在于，对选用的白塑料桶，洗刷干净后分两个阶段消毒，先使用高压氮气喷射消毒，消毒2-3 分钟，使用高压二氧化碳喷射消毒，消毒2-3分钟，消毒完毕后再进行藻类培养。
【文档编号】C12N1/12GK104212719SQ201410436473
【公开日】2014年12月17日 申请日期:2014年9月1日 优先权日:2014年9月1日
【发明者】王培磊 申请人:临沂大学