本发明属于饲料添加剂领域，更具体地，涉及高蛋白高核酸酵母水解物的制备工艺及其应用。
背景技术：
：目前，制约养猪业发展的关键是母猪生产能力及繁殖能力低下。母乳是仔猪初生到断奶期间的主要营养物质来源，母乳的质和量决定了仔猪的成活率和生长速度。母猪的低泌乳能力可直接导致仔猪营养缺乏、生长滞缓、死亡率增高，影响仔猪断奶体重，加剧仔猪断奶应激并影响后续生长发育。因此，母猪泌乳期间的基本目标是保证母猪摄入足够的营养，分泌充足的乳汁，保持适当的体况，使母猪在仔猪断奶后能正常发情与排卵，进入下一个繁殖周期。因此，开发一种提高哺乳母猪泌乳水平及再繁殖能力的饲料添加剂非常有现实意义。酵母水解物是酵母的酶解产物，含有丰富的蛋白、核酸、细胞壁多糖等，是通过自溶、化学处理、机械破壁法或额外加酶水解得到。然而，自溶法通常反应时间较长，而蛋白质提取率却较低；化学处理法通常会引起蛋白质变性；机械破壁法需要消耗较大能量，效率较低；酶解法应用最广，然而仅仅采用酶解法的酵母破壁率低，酶解产物含量不高。小肽一般是指由2－3个氨基酸组成的寡肽，小肽能完整地被吸收，并以二、三肽形式进入血液循环，在蛋白质营养中有着重要的作用。小肽的参与可节省生产耗能，不需分解直接满足需要，且能对消化道产生保护作用，并协调各种养分的利用，更有利于最大限度发挥生产性能。已有研究发现植物小肽能提高母猪的泌乳量及免疫能力。谷胱甘肽是一种三肽，能帮助保持正常的免疫系统的功能，并具有抗氧化作用和整合解毒作用，其还可以作为功能性食品的基料，在延缓衰老、增强免疫力、抗肿瘤等功能性食品广泛应用，目前并没有应用至哺乳母猪饲料添加剂中。技术实现要素：本发明的一个目的在于提供高蛋白高核酸酵母水解物的制备工艺；本发明的另一个目的在于提供高蛋白高核酸酵母水解物在制备哺乳母猪用饲料添加剂的应用。本发明所采取的技术方案是：高蛋白高核酸酵母水解物的制备工艺，包括如下步骤：(1)将酵母接种至发酵培养基中，于28～35℃发酵至发酵液中生物量为50～70g/l；(2)发酵得到的酵母离心洗涤后，浓缩得到含酵母干物质100～150g/l的发酵液；(3)调节发酵液ph值为4.5～6.5，在超声功率为400～600w，温度为30～40℃的条件下，超声处理40～60min；(4)停止超声处理后，45℃～55℃保温6～8小时，随后升温至100℃煮沸10～30min，得到自溶酵母液；(5)待自溶酵母液温度降至55℃～60℃后，调整ph值至5.5～6.5，加入自溶酵母液重量的0.05～0.1％的复合木瓜蛋白酶，50～60℃酶解16～20小时，(6)煮沸10～30min灭酶，随后经浓缩、干燥，获得高蛋白高核酸酵母水解物。作为上述制备工艺的优选，复合木瓜蛋白酶由下述活性成分按质量份组成：木瓜蛋白酶75～85份、中性蛋白酶8～12份、风味酶8～12份。作为上述制备工艺的优选，步骤(6)中，所述干燥为喷雾干燥。一种哺乳母猪用饲料添加剂，其由下述原料组成：高蛋白高核酸酵母水解物、小肽、壳寡糖、载体；所述高蛋白高核酸酵母水解物是通过上述制备工艺获得。作为上述饲料添加剂配方的限定，由下述原料按质量百分比组成：高蛋白高核酸酵母水解物20～60％、小肽2.5～13％、壳寡糖0.5～7％、余量为载体。作为上述饲料添加剂配方的优选，由下述原料按质量百分比组成：高蛋白高核酸酵母水解物30～50％、小肽5～10％、壳寡糖1～5％、余量为载体。作为上述饲料添加剂配方的优选，高蛋白高核酸酵母水解物中粗蛋白的含量≥50wt％，核酸的含量≥10wt％，酵母细胞壁多糖≥15wt％。作为上述饲料添加剂配方的优选，小肽为谷胱甘肽、甘氨酸-赖氨酸二肽、酪蛋白磷酸肽、谷氨酰胺二肽中的至少一种。作为上述饲料添加剂配方的优选，载体为麸皮、玉米芯粉、麦芽糊精、米糠粉中的至少一种。作为上述饲料添加剂配方的优选，哺乳母猪用饲料添加剂在常规饲料中的添加量为1～5kg/吨。本发明的有益效果是：本发明的高蛋白高核酸酵母水解物的制备工艺，是将酵母菌株通过高密度液体发酵、洗涤、超声、自溶、酶解、浓缩及喷雾干燥等工艺生产获得高蛋白高核酸酵母水解物，其粗蛋白的含量≥50wt％，核酸的含量≥10wt％，酵母细胞壁多糖≥15wt％，灰分含量≤6wt％，纯度较高。本发明的哺乳母猪用饲料添加剂，是将制备的高蛋白高核酸酵母水解物与谷胱甘肽、壳寡糖，并配合载体进行合理组方，以一定量添加到日粮中，可提高哺乳母猪泌乳水平及再繁殖能力。具体实施方式高蛋白高核酸酵母水解物的制备工艺，包括如下步骤：(1)将酵母接种至发酵培养基中，于28～35℃发酵至发酵液中生物量为50～70g/l；(2)发酵得到的酵母离心洗涤后，浓缩得到含酵母干物质100～150g/l的发酵液；(3)调节发酵液ph值为4.5～6.5，在超声功率为400～600w，温度为30～40℃的条件下，超声处理40～60min；(4)停止超声处理后，45℃～55℃保温6～8小时，随后升温至100℃煮沸10～30min，得到自溶酵母液；(5)待自溶酵母液温度降至55℃～60℃后，调整ph值至5.5～6.5，加入自溶酵母液重量的0.05～0.1％的复合木瓜蛋白酶，50～60℃酶解16～20小时；其中复合木瓜蛋白酶由下述活性成分按质量份组成：木瓜蛋白酶75～85份、中性蛋白酶8～12份、风味酶8～12份。(6)煮沸10～30min灭酶，随后经浓缩、干燥，获得高蛋白高核酸酵母水解物。其中，复合木瓜蛋白酶由下述活性成分按质量份组成：木瓜蛋白酶75～85份、中性蛋白酶8～12份、风味酶8～12份；该复合木瓜蛋白酶能有效酶解酿酒酵母。其中，步骤(6)中，所述干燥优选为喷雾干燥，也可采用真空冷冻干燥、流化床干燥等常规干燥方式。一种哺乳母猪用饲料添加剂，其由下述原料组成：高蛋白高核酸酵母水解物、小肽、壳寡糖、载体；所述高蛋白高核酸酵母水解物是通过上述制备工艺获得。作为上述饲料添加剂配方的优选，由下述原料按质量百分比组成：高蛋白高核酸酵母水解物20～60％、小肽2.5～13％、壳寡糖0.5～7％、余量为载体。作为上述饲料添加剂配方的优选，由下述原料按质量百分比组成：高蛋白高核酸酵母水解物30～50％、小肽5～10％、壳寡糖1～5％、余量为载体。其中，高蛋白高核酸酵母水解物中粗蛋白的含量≥50wt％，核酸的含量≥10wt％，酵母细胞壁多糖≥15wt％。其中，小肽为2～3个氨基酸组成的肽，可选自谷胱甘肽、甘氨酸-赖氨酸二肽、酪蛋白磷酸肽、谷氨酰胺二肽，优选为谷胱甘肽。其中，载体为常规饲料添加剂载体，可选自麸皮、玉米芯粉、麦芽糊精、米糠粉等，优选为麸皮。以下结合实施例来进一步解释本发明，但实施例并不对本发明做任何形式的限定。在未作说明的情况下，本发明中所涉及到的方法均为常规方法，所涉及的原料均为市售原料。如无特殊说明，以下实施例中的“％”均指质量百分比。本发明所用酵母为酿酒酵母gabc1003株，已于2011年12月20日提交至中国典型培养物保藏中心保藏，保藏编号为：cctccm2011474。本发明所用的斜面培养基、种子培养基均为常规的ypd培养基；所用的100l液体发酵培养基配方为：糖蜜34l、维生素b10.55g、维生素b60.15g、泛酸钙0.25g、生物素0.005g、氨水2.1l、磷酸1.5l、硫酸镁112.5g、硫酸锌12.5g、水60l；固体培养基是在液体培养基的基础上添加2％的琼脂。实施例所用的复合木瓜蛋白酶由下述活性成分按质量份组成：木瓜蛋白酶80份、中性蛋白酶10份、风味酶10份。所用的谷胱甘肽产自陕西森弗天然制品有限公司，含量大于99％，粒度为80～120目。所用的壳寡糖，产自浙江金壳药业有限公司，食品级，分子量≤2000da，壳寡糖是自然界中唯一带正电荷阳离子碱性氨基低聚糖，水溶性好，具有多方面的生物活性。实施例1、高蛋白高核酸酵母水解物的制备工艺1高蛋白高核酸酵母水解物的制备工艺1，包括如下步骤：1)斜面菌种：将酵母接种至固体斜面培养基中，28℃培养20h，得斜面酵母菌种；2)一级液体种子培养：取2～3环斜面酵母菌种至200ml的液体种子培养基中，28℃，200rpm培养20h，即得一级种子；3)二级液体种子培养：将一级种子按2％的接种量接入装有10l液体种子培养基的发酵罐中，28℃搅拌培养20h，即得二级种子；4)发酵罐发酵：将二级种子培养液按10％的接种量接入装有100l液体发酵培养基的发酵罐中，28℃搅拌培养至发酵液中生物量为60g/l；以上发酵过程适当补充消泡剂ppe；5)将步骤4)发酵得到的发酵液通过碟式离心机离心(3500r/min)洗涤，最终浓缩成含酵母干物质100～150g/l的发酵液；6)调节发酵液ph值至5.5，置于超声水浴装置中，设置超声功率为500w，温度为35℃，超声处理50min；7)停止超声处理后，50℃保温7小时，随后升温至100℃煮沸20min，得到自溶酵母液；8)待自溶酵母液温度降至55℃后，调整ph值至6，加入自溶酵母液重量的0.07％的复合木瓜蛋白酶，55℃酶解18小时，9)煮沸20min灭酶，随后经薄膜蒸发器浓缩、喷雾干燥，获得高蛋白高核酸酵母水解物。实施例2、高蛋白高核酸酵母水解物的制备工艺2高蛋白高核酸酵母水解物的制备工艺2，包括如下步骤：1)斜面菌种：将酵母接种至固体斜面培养基中，28℃培养20h，得斜面酵母菌种；2)一级液体种子培养：取2～3环斜面酵母菌种至200ml的液体种子培养基中，28℃，200rpm培养20h，即得一级种子；3)二级液体种子培养：将一级种子按2％的接种量接入装有10l液体种子培养基的发酵罐中，28℃搅拌培养20h，即得二级种子；4)发酵罐发酵：将二级种子培养液按10％的接种量接入装有100l液体发酵培养基的发酵罐中，28℃搅拌培养至发酵液中生物量为60g/l；以上发酵过程适当补充消泡剂ppe；5)将步骤4)发酵得到的发酵液通过碟式离心机离心(3500r/min)洗涤，最终浓缩成含酵母干物质100～150g/l的发酵液；6)调节发酵液ph值至4.5，置于超声水浴装置中，设置超声功率为500w，温度为35℃，超声处理40min；7)停止超声处理后，50℃保温8小时，随后升温至100℃煮沸20min，得到自溶酵母液；8)待自溶酵母液温度降至55℃后，调整ph值至5.5，加入自溶酵母液重量的0.1％的复合木瓜蛋白酶，55℃酶解16小时，9)煮沸30min灭酶，随后经薄膜蒸发器浓缩、喷雾干燥，获得高蛋白高核酸酵母水解物。实施例3、高蛋白高核酸酵母水解物的制备工艺3高蛋白高核酸酵母水解物的制备工艺3，包括如下步骤：1)斜面菌种：将酵母接种至固体斜面培养基中，28℃培养20h，得斜面酵母菌种；2)一级液体种子培养：取2～3环斜面酵母菌种至200ml的液体种子培养基中，28℃，200rpm培养20h，即得一级种子；3)二级液体种子培养：将一级种子按2％的接种量接入装有10l液体种子培养基的发酵罐中，28℃搅拌培养20h，即得二级种子；4)发酵罐发酵：将二级种子培养液按10％的接种量接入装有100l液体发酵培养基的发酵罐中，28℃搅拌培养至发酵液中生物量为60g/l；以上发酵过程适当补充消泡剂ppe；5)将步骤4)发酵得到的发酵液通过碟式离心机离心(3500r/min)洗涤，最终浓缩成含酵母干物质100～150g/l的发酵液；6)调节发酵液ph值6.5，置于超声水浴装置中，设置超声功率为500w，温度为35℃，超声处理60min；7)停止超声处理后，50℃保温6小时，随后升温至100℃煮沸20min，得到自溶酵母液；8)待自溶酵母液温度降至55℃后，调整ph值至6.5，加入自溶酵母液重量的0.05％的复合木瓜蛋白酶，55℃酶解20小时，9)煮沸20min灭酶，随后经薄膜蒸发器浓缩、喷雾干燥，获得高蛋白高核酸酵母水解物。酵母水解物成分分析实施例1～3制备工艺对酵母破壁率达到90％以上，对酵母水解物中的主要成分含量进行测定分析；其中，粗蛋白按国标gb/t6432测定，核酸参考《饲料中总磷的测定分光光度法》(gb/t6437)测定，酵母细胞壁多糖以甘露聚糖和葡聚糖为主要指标，采用液相色谱进行测定，粗灰分按国标gb/t6438测定，水分按常规测定方法。表1、酵母水解物的主要成分含量指标实施例1实施例2实施例3市售酵母水解物粗蛋白wt％51.852.052.246.4核酸wt％12.411.912.78.1酵母细胞壁多糖wt％17.516.817.222.7粗灰分wt％5.85.35.77.5水分wt％5.65.85.67.4从表1可以看出，本发明的制备工艺获得的酵母水解物的粗蛋白的含量≥50wt％，核酸的含量≥10wt％，酵母细胞壁多糖≥15wt％，灰分含量≤6wt％，纯度较高。实施例4、哺乳母猪用饲料添加剂1一种哺乳母猪用饲料添加剂1，由下述原料按质量份组成：高蛋白高核酸酵母水解物40份、谷胱甘肽7份、壳寡糖3份、麸皮50份；其中高蛋白高核酸酵母水解物为实施例1制备工艺所制备。实施例5、哺乳母猪用饲料添加剂2一种哺乳母猪用饲料添加剂2，由下述原料按质量份组成：高蛋白高核酸酵母水解物30份、谷胱甘肽9份、壳寡糖1份、麸皮60份；其中高蛋白高核酸酵母水解物为实施例1制备工艺所制备。实施例6、哺乳母猪用饲料添加剂3一种哺乳母猪用饲料添加剂3，由下述原料按质量份组成：高蛋白高核酸酵母水解物50份、谷胱甘肽5份、壳寡糖5份、麸皮40份；其中高蛋白高核酸酵母水解物为实施例1制备工艺所制备。实施例7、哺乳母猪用饲料添加剂4一种哺乳母猪用饲料添加剂4，由下述原料按质量份组成：高蛋白高核酸酵母水解物20份、谷胱甘肽2.5份、壳寡糖0.5份、麸皮77份；其中高蛋白高核酸酵母水解物为实施例1制备工艺所制备。实施例8、哺乳母猪用饲料添加剂5一种哺乳母猪用饲料添加剂5，由下述原料按质量份组成：高蛋白高核酸酵母水解物60份、谷胱甘肽13份、壳寡糖7份、麸皮20份；其中高蛋白高核酸酵母水解物为实施例1制备工艺所制备。哺乳母猪用饲料添加剂效果验证实验(1)实验分组：实验组1～5在喂饲基础日粮中分别对应添加实施例4～8的哺乳母猪用饲料添加剂，添加量按基础日粮重量的3kg/吨添加；对照组不添加哺乳母猪用饲料添加剂，仅喂饲基础日粮。(2)动物喂饲试验将胎次一致、分娩时间相近、仔猪初生窝重相近的哺乳母猪60头随机分成6组喂饲相应的饲料，试验期间猪群自由采食和饮水，饲养管理和免疫、保健程序按照猪场常规程序进行，统计仔猪平均初生窝重、仔猪断奶平均窝重、21日龄母猪泌乳量、母猪断奶后再发情时间。(3)结果分析表2、饲料添加剂对母猪生产及繁殖性能的影响指标实验组1实验组2实验组3实验组4实验组5对照组仔猪平均初生窝重/kg12.5512.6912.7312.3512.9812.47仔猪断奶平均窝重/kg57.7554.9958.1148.5850.6444.8021日龄母猪泌乳量/kg每头9.459.229.168.138.517.69母猪断奶后再发情时间/d5.405.275.847.046.227.14由表2可以看出，在哺乳母猪基础日粮中加入一定量本发明所述的饲料添加剂，可显著增加仔猪断奶平均窝重、21日龄哺乳母猪泌乳量，缩短母猪断奶后再发情时间。其中，实验组1～3的效果较佳，以实验组1为例，与对照组相比，仔猪断奶平均窝重多28.9％、21日龄母猪泌乳量多22.9％、母猪断奶后再发情时间缩短24.4％。以上结果说明：将高蛋白高核酸酵母水解物、谷胱甘肽、壳寡糖进行合理组方，可以获得优良的提高母猪泌乳水平及再繁殖能力的哺乳母猪饲料添加剂。当前第1页12