本发明属于家畜饲料制备领域，具体地说，涉及一种含柠檬酸铜的生长猪微量元素预混料及其制备方法与应用。
背景技术：
微量元素是动物体必需的营养素。长期以来，为了迎合市场对皮毛、粪便等外观性状的片面要求而在生长猪饲料中高剂量添加无机微量元素，尤其是硫酸铜的现象非常普遍，对动物自身、生态环境和动物产品品质造成了巨大的威胁。
随着人们对食品安全和环境保护的意识增强，动物饲料中限制无机铜用量的呼声越来越高。我国农业部发布第1224号公告《饲料添加剂安全使用规范》已对饲料中铜的使用作出明确限制和限量。因此，研究应用安全优质高效的新型铜源是当今饲料行业的发展趋势。
近年来，国内饲料和养殖企业应用的新型铜源主要有氨基酸络(螯)合铜、蛋白铜、酵母铜、碱式氯化铜等，其中氨基酸络(螯)合铜、蛋白铜、酵母铜属于有机铜，而碱式氯化铜为无机铜。目前只有饲料添加剂蛋氨酸铜和饲料添加剂碱式氯化铜具有国家标准(gb/t20802-2006，gb/t21696-2008)。关于碱式氯化铜对动物的促生长效果尚未得到一致的结论。多年来，大部分研究结果都证实，有机铜的生物学利用率高于无机铜，并且可以减少动物排泄物中粪铜含量，降低重金属对环境的污染。但是，现有的氨基酸络(螯)合铜、蛋白铜、酵母铜在实际应用中存在的主要问题是缺乏化学特性或作用机制的直接试验证据，很难解释试验结果不一致的现象；另外价格因素也限制了其作为动物高效铜源的进一步推广。
柠檬酸铜化学结构稳定、生物学效价高，在动物饲粮中应用柠檬酸铜，不但不会影响生长，而且可以减少养殖环境中铜的排放量。目前，柠檬酸铜在我国主要作为食品营养强化剂的铜源使用(gb/t14880-2012)，还没有用作动物饲料添加剂。我国饲料工业发展规划明确指出：研发低微量元素饲料配方技术，推广环保型饲料产品，促进养殖污染物减排是行业的主要任务。因此，在养殖生产中推广应用柠檬酸铜替代高剂量无机铜是发展安全优质畜牧业的理想选择。
技术实现要素：
有鉴于此，本发明针对生长猪饲料中高剂量硫酸铜对动物自身、生态环境和动物产品品质带来的安全隐患的问题，提供了一种含柠檬酸铜的生长猪微量元素预混料及其制备方法与应用。
为了解决上述技术问题，本发明公开了一种含柠檬酸铜的生长猪微量元素预混料，所述柠檬酸铜在预混料中的重量份数为3.68-14.71份。
进一步地，还包括下列重量份数的原料：一水硫酸亚铁14.5-15.5份、一水硫酸锌10-11份、一水硫酸锰2-5份、亚硒酸钠3-5份、碘化钾0.5-1份、石粉53.01-64.04份。
进一步地，包括下列重量份数的原料：一水硫酸亚铁15份、一水硫酸锌10.14份、一水硫酸锰3.14份、亚硒酸钠3.33份、碘化钾0.66份、石粉53.01-64.04份。
本发明还公开了一种含柠檬酸铜的生长猪微量元素预混料的制备方法，包括以下步骤：
步骤1、称量：按照以下重量份称量以下组分：一水硫酸亚铁14.5-15.5份、一水硫酸锌10-11份、一水硫酸锰2-5份、亚硒酸钠3-5份、碘化钾0.5-1份、柠檬酸铜3.68-14.71份、石粉53.01-64.04份；
步骤2、预处理：将石粉分别亚硒酸钠和碘化钾混合制成亚硒酸钠预混剂和碘化钾预混剂；
步骤3、预混合：将称量好的一水硫酸亚铁、一水硫酸锌、一水硫酸锰、柠檬酸铜混合并粉碎，加入部分石粉预混；
步骤4、扩大混合：将亚硒酸钠和碘化钾预混剂与预混后的一水硫酸亚铁、一水硫酸锌、一水硫酸锰和柠檬酸铜加入剩余的石粉扩大混合，制成微量元素预混料；
步骤5、过筛：制成的微量元素预混料全部通过16目分子筛，30目分析筛筛上物不大于10％；
步骤6、质检：微量元素预混料变异系数不大于5％，水分不高于10％。
进一步地，步骤2中的亚硒酸钠预混剂中的硒含量为0.5％；碘化钾预混剂中碘含量为3.8％。
进一步地，步骤3中的石粉占称量好的石粉质量总量的20％-30％。
进一步地，步骤4中的扩大混合时间为3-8min。
本发明还公开了一种上述含柠檬酸铜的生长猪微量元素预混料在制备生长猪配合饲料中的应用。
本发明还公开了一种生长猪配合饲料，含有上述生长猪微量元素预混料。
进一步地，所述生长猪微量元素预混料的质量百分含量为0.1％-0.5％。
与现有技术相比，本发明可以获得包括以下技术效果：
1)与硫酸铜相比，添加柠檬酸铜可以使生长猪饲料中铜用量降低50％以上；
2)与硫酸铜相比，添加柠檬酸铜可以显著降低生长猪粪铜含量；
3)与硫酸铜相比，添加柠檬酸铜可以显著提高生长猪采食量。
当然，实施本发明的任一产品并不一定需要同时达到以上所述的所有技术效果。
具体实施方式
以下将配合实施例来详细说明本发明的实施方式，藉此对本发明如何应用技术手段来解决技术问题并达成技术功效的实现过程能充分理解并据以实施。
本发明公开了一种含柠檬酸铜的生长猪微量元素预混料，按照质量份由以下组分构成：一水硫酸亚铁14.5-15.5份、一水硫酸锌10-11份、一水硫酸锰2-5份、亚硒酸钠3-5份、碘化钾0.5-1份、柠檬酸铜3.68-14.71份、石粉53.01-64.04份；
进一步地，该生长猪微量元素预混料，按照质量份由以下组分构成：一水硫酸亚铁15份、一水硫酸锌10.14份、一水硫酸锰3.14份、亚硒酸钠3.33份、碘化钾0.66份、柠檬酸铜3.68-14.71份、石粉53.01-64.04份。
本发明还公开了一种含柠檬酸铜的生长猪微量元素预混料的制备方法，包括以下步骤：
步骤1、称量：按照以下重量份称量以下组分：一水硫酸亚铁14.5-15.5份、一水硫酸锌10-11份、一水硫酸锰2-5份、亚硒酸钠3-5份、碘化钾0.5-1份、柠檬酸铜3.68-14.71份、石粉53.01-64.04份；
步骤2、预处理：将石粉分别亚硒酸钠和碘化钾混合制成亚硒酸钠预混剂和碘化钾预混剂，其中，亚硒酸钠预混剂中的硒含量为0.5％；碘化钾预混剂中碘含量为3.8％；
步骤3、预混合：将称量好的一水硫酸亚铁、一水硫酸锌、一水硫酸锰、柠檬酸铜混合并粉碎，加入部分石粉预混，其中，石粉占称量好的石粉质量总量的20％-30％；
步骤4、扩大混合：将亚硒酸钠和碘化钾预混剂与预混后的一水硫酸亚铁、一水硫酸锌、一水硫酸锰和柠檬酸铜加入剩余的石粉扩大混合3-8min，制成微量元素预混料；基于逐级扩大原则，石粉分开添加，这样能够使各个组分混合得更加均匀。
步骤5、过筛：将步骤4制成的微量元素预混料全部通过16目分子筛，30目分析筛筛上物不大于10％；
步骤6、质检：微量元素预混料变异系数不大于5％，水分不高于10％。
本发明还公开了一种生长猪配合饲料，含有上述生长猪微量元素预混料。所述生长猪微量元素预混料的质量百分含量为0.1％-0.5％。
实施例1
一种含柠檬酸铜的生长猪微量元素预混料，包括以下重量份数的组分：一水硫酸亚铁15份、一水硫酸锌10.14份、柠檬酸铜3.68份、一水硫酸锰3.14、亚硒酸钠3.33份、碘化钾0.66份和石粉64.04份。
通过以下方法制备得到：
步骤1、称量：按照以下重量份称量以下组分：一水硫酸亚铁15份、一水硫酸锌10.14份、柠檬酸铜3.68份、一水硫酸锰3.14、亚硒酸钠3.33份、碘化钾0.66份和石粉64.04份；
步骤2、预处理：将石粉分别亚硒酸钠和碘化钾混合制成亚硒酸钠预混剂和碘化钾预混剂，其中，亚硒酸钠预混剂中的硒含量为0.5％；碘化钾预混剂中碘含量为3.8％；
步骤3、预混合：将称量好的一水硫酸亚铁、一水硫酸锌、一水硫酸锰、柠檬酸铜混合并粉碎，加入部分石粉预混，其中，石粉占称量好的石粉质量总量的25％；
步骤4、扩大混合：将亚硒酸钠和碘化钾预混剂与预混后的一水硫酸亚铁、一水硫酸锌、一水硫酸锰和柠檬酸铜加入剩余的石粉扩大混合5min，制成微量元素预混料；
步骤5、过筛：将步骤4制成的微量元素预混料全部通过16目分子筛，30目分析筛筛上物不大于10％；
步骤6、质检：微量元素预混料变异系数不大于5％，水分不高于10％。
该生长猪微量元素预混料占生长猪配合饲料的质量百分含量为0.2％。
实施例2
一种含柠檬酸铜的生长猪微量元素预混料，包括以下重量份数的组分：一水硫酸亚铁15份、一水硫酸锌10.14份、柠檬酸铜7.35份、一水硫酸锰3.14、亚硒酸钠3.33份、碘化钾0.66份和石粉60.37份。
通过以下方法制备得到：
步骤1、称量：按照以下重量份称量以下组分：一水硫酸亚铁15份、一水硫酸锌10.14份、柠檬酸铜7.35份、一水硫酸锰3.14、亚硒酸钠3.33份、碘化钾0.66份和石粉60.37份；
步骤2、预处理：将石粉分别亚硒酸钠和碘化钾混合制成亚硒酸钠预混剂和碘化钾预混剂，其中，亚硒酸钠预混剂中的硒含量为0.5％；碘化钾预混剂中碘含量为3.8％；
步骤3、预混合：将称量好的一水硫酸亚铁、一水硫酸锌、一水硫酸锰、柠檬酸铜混合并粉碎，加入部分石粉预混，其中，石粉占称量好的石粉质量总量的20％；
步骤4、扩大混合：将亚硒酸钠和碘化钾预混剂与预混后的一水硫酸亚铁、一水硫酸锌、一水硫酸锰和柠檬酸铜加入剩余的石粉扩大混合5min，制成微量元素预混料；
步骤5、过筛：将步骤4制成的微量元素预混料全部通过16目分子筛，30目分析筛筛上物不大于10％；
步骤6、质检：微量元素预混料变异系数不大于5％，水分不高于10％。
该生长猪微量元素预混料占生长猪配合饲料的质量百分含量为0.1％。
实施例3
一种含柠檬酸铜的生长猪微量元素预混料，包括以下重量份数的组分：一水硫酸亚铁15份、一水硫酸锌10.14份、柠檬酸铜11.03份、一水硫酸锰3.14、亚硒酸钠3.33份、碘化钾0.66份和石粉56.69份。
通过以下方法制备得到：
步骤1、称量：按照以下重量份称量以下组分：一水硫酸亚铁15份、一水硫酸锌10.14份、柠檬酸铜11.03份、一水硫酸锰3.14、亚硒酸钠3.33份、碘化钾0.66份和石粉56.69份；
步骤2、预处理：将石粉分别亚硒酸钠和碘化钾混合制成亚硒酸钠预混剂和碘化钾预混剂，其中，亚硒酸钠预混剂中的硒含量为0.5％；碘化钾预混剂中碘含量为3.8％；
步骤3、预混合：将称量好的一水硫酸亚铁、一水硫酸锌、一水硫酸锰、柠檬酸铜混合并粉碎，加入部分石粉预混，其中，石粉占称量好的石粉质量总量的30％；
步骤4、扩大混合：将亚硒酸钠和碘化钾预混剂与预混后的一水硫酸亚铁、一水硫酸锌、一水硫酸锰和柠檬酸铜加入剩余的石粉扩大混合5min，制成微量元素预混料；
步骤5、过筛：将步骤4制成的微量元素预混料全部通过16目分子筛，30目分析筛筛上物不大于10％；
步骤6、质检：微量元素预混料变异系数不大于5％，水分不高于10％。
该生长猪微量元素预混料占生长猪配合饲料的质量百分含量为0.5％。
实施例4
一种含柠檬酸铜的生长猪微量元素预混料，包括以下重量份数的组分：一水硫酸亚铁15份、一水硫酸锌10.14份、柠檬酸铜14.71份、一水硫酸锰3.14、亚硒酸钠3.33份、碘化钾0.66份和石粉53.01份。
通过以下方法制备得到：
步骤1、称量：按照以下重量份称量以下组分：一水硫酸亚铁15份、一水硫酸锌10.14份、柠檬酸铜14.71份、一水硫酸锰3.14、亚硒酸钠3.33份、碘化钾0.66份和石粉53.01份；
步骤2、预处理：将石粉分别亚硒酸钠和碘化钾混合制成亚硒酸钠预混剂和碘化钾预混剂，其中，亚硒酸钠预混剂中的硒含量为0.5％；碘化钾预混剂中碘含量为3.8％；
步骤3、预混合：将称量好的一水硫酸亚铁、一水硫酸锌、一水硫酸锰、柠檬酸铜混合并粉碎，加入部分石粉预混，其中，石粉占称量好的石粉质量总量的23％；
步骤4、扩大混合：将亚硒酸钠和碘化钾预混剂与预混后的一水硫酸亚铁、一水硫酸锌、一水硫酸锰和柠檬酸铜加入剩余的石粉扩大混合5min，制成微量元素预混料；
步骤5、过筛：将步骤4制成的微量元素预混料全部通过16目分子筛，30目分析筛筛上物不大于10％；
步骤6、质检：微量元素预混料变异系数不大于5％，水分不高于10％。
该生长猪微量元素预混料占生长猪配合饲料的质量百分含量为0.3％。
实施例5
一种含柠檬酸铜的生长猪微量元素预混料，包括以下重量份数的组分：一水硫酸亚铁14.5份、一水硫酸锌11份、一水硫酸锰2份、亚硒酸钠5份、碘化钾0.5份、柠檬酸铜14.71份、石粉53.01份。
通过以下方法制备得到：
步骤1、称量：按照以下重量份称量以下组分：一水硫酸亚铁14.5份、一水硫酸锌11份、一水硫酸锰2份、亚硒酸钠5份、碘化钾0.5份、柠檬酸铜14.71份、石粉53.01份；
步骤2、预处理：将石粉分别亚硒酸钠和碘化钾混合制成亚硒酸钠预混剂和碘化钾预混剂，其中，亚硒酸钠预混剂中的硒含量为0.5％；碘化钾预混剂中碘含量为3.8％；
步骤3、预混合：将称量好的一水硫酸亚铁、一水硫酸锌、一水硫酸锰、柠檬酸铜混合并粉碎，加入部分石粉预混，其中，石粉占称量好的石粉质量总量的28％；
步骤4、扩大混合：将亚硒酸钠和碘化钾预混剂与预混后的一水硫酸亚铁、一水硫酸锌、一水硫酸锰和柠檬酸铜加入剩余的石粉扩大混合3min，制成微量元素预混料；
步骤5、过筛：将步骤4制成的微量元素预混料全部通过16目分子筛，30目分析筛筛上物不大于10％；
步骤6、质检：微量元素预混料变异系数不大于5％，水分不高于10％。
该生长猪微量元素预混料占生长猪配合饲料的质量百分含量为0.4％。
实施例6
一种含柠檬酸铜的生长猪微量元素预混料，包括以下重量份数的组分：一水硫酸亚铁15.5份、一水硫酸锌10份、一水硫酸锰5份、亚硒酸钠3份、碘化钾1份、柠檬酸铜3.68份、石粉64.04份。
通过以下方法制备得到：
步骤1、称量：按照以下重量份称量以下组分：一水硫酸亚铁15.5份、一水硫酸锌10份、一水硫酸锰5份、亚硒酸钠3份、碘化钾1份、柠檬酸铜3.68份、石粉64.04份；
步骤2、预处理：将石粉分别亚硒酸钠和碘化钾混合制成亚硒酸钠预混剂和碘化钾预混剂，其中，亚硒酸钠预混剂中的硒含量为0.5％；碘化钾预混剂中碘含量为3.8％；
步骤3、预混合：将称量好的一水硫酸亚铁、一水硫酸锌、一水硫酸锰、柠檬酸铜混合并粉碎，加入部分石粉预混，其中，石粉占称量好的石粉质量总量的24％；
步骤4、扩大混合：将亚硒酸钠和碘化钾预混剂与预混后的一水硫酸亚铁、一水硫酸锌、一水硫酸锰和柠檬酸铜加入剩余的石粉扩大混合8min，制成微量元素预混料；
步骤5、过筛：将步骤4制成的微量元素预混料全部通过16目分子筛，30目分析筛筛上物不大于10％；
步骤6、质检：微量元素预混料变异系数不大于5％，水分不高于10％。
该生长猪微量元素预混料占生长猪配合饲料的质量百分含量为0.2％。
下面结合具体的实验过程来说明本发明的技术效果：
1.材料与方法
1.1受试物
柠檬酸铜：柠檬酸铜≥98.0％，铜≥34.0％，实测值为34.4％，由四川省畜科饲料有限公司生产。
五水硫酸铜：五水硫酸铜≥98.0％，铜≥24.0％，实测值为24.5％，由四川省畜科饲料有限公司提供。
1.2试验动物与分组
试验选用216头健康的杜长大三元杂交生长猪，初始体重为36.44±4.28kg，按体重一致、公母各半的原则，随机分为6个处理，每个处理6个重复，每个重复6头猪，试验期为30天。基础日粮为玉米-豆粕型日粮，在基础日粮中分别添加100mg/kg硫酸铜(对照组)和0(阴性对照组)、25、50、75、100mg/kg柠檬酸铜，添加量均以铜计。
1.3试验日粮
试验采用玉米-豆粕型基础日粮，基础日粮营养水平参考nrc猪饲养标准(2012版)配合而成，试验基础日粮的组成及营养水平见表1。
表1试验基础日粮组成及营养水平(％)
注：1)、复合预混料给每千克配合饲料提供：维生素a，6,000iu；维生素d3，1,500iu；维生素e，15iu；维生素k3，1.5mg；维生素b1，0.9mg；维生素b2，3mg；维生素b6，1.5mg；维生素b12，10μg；烟酸，17mg；泛酸，9mg；叶酸，0.32mg；生物素，0.02mg；氯化胆碱，350mg。
2)、营养水平除消化能外均为实测值。
1.4饲养管理
试验前对猪舍进行彻底消毒，并清洗料槽、饮水器。猪舍温度控制在
1.5样品采集
于试验第30天，每处理每重复选取1头体重接近该圈平均值的猪(每处理6头猪)进行前腔静脉采血10ml，于室温下倾斜放置0.5h，2000rpm离心10min制备血清，于
1.6测定指标及方法
1.6.1生长性能
于试验开始、第30天对猪进行空腹称重，在整个试验期结算耗料量，记录死亡情况。以重复为单位，计算平均日采食量(adfi)、平均日增重(adg)、耗料增比(f:g)、死亡率。
1.6.2抗氧化指标
血清抗氧化指标包括丙二醛(mda)含量、铜锌超氧化物歧化酶(cu/zn-sod)、谷胱甘肽过氧化物酶(gsh-px)、铜蓝蛋白(cup)活性。按照试剂盒的说明进行测定。
1.6.3血清和粪便微量元素含量
血清和粪便铜含量采用电感耦合等离子体质谱仪测定。
1.7数据处理与统计分析
试验数据以重复(圈)为统计单位，采用sas9.2统计软件处理，进行glm分析、duncan多重比较，p<0.05时差异显著。
2.结果与分析
2.1生长性能
日粮添加不同水平柠檬酸铜对生长猪生长性能的影响见表2。由表2可知，日粮添加25和50mg/kg柠檬酸铜的adg显著高于阴性对照组(p<0.05)，但与对照组比差异不显著(p>0.05)。日粮添加柠檬酸铜组的adfi显著高于阴性对照组(p<0.05)，且25和50mg/kg柠檬酸铜组的adfi显著高于对照组(p<0.05)。试验各组间的f：g及死亡率差异不显著(p>0.05)。
表2日粮添加不同水平柠檬酸铜对生长猪生长性能的影响
注：1同行数据中肩标不同小写字母表示差异显著(p<0.05)；未标明字母或相同字母表示差异不显著(p>0.05)。
2adg为平均日增重，adfi为平均日采食量，f:g为耗料增重比。
2.2抗氧化性能
日粮添加不同水平柠檬酸铜对生长猪抗氧化性能的影响见表3。由表3可知，日粮添加100mg/kg柠檬酸铜的血清mda含量显著低于阴性对照组(p<0.05)，但与对照组比差异不显著(p>0.05)。血清cu/zn-sod、gsh-px和cup活性各组间均无显著差异(p>0.05)。
表3日粮添加不同水平柠檬酸铜对生长猪抗氧化性能的影响
注：1同行数据中肩标不同小写字母表示差异显著(p<0.05)；未标明字母或相同字母表示差异不显著(p>0.05)。
2mda为丙二醛，cu/zn-sod为铜锌超氧化物歧化酶，gsh-px为谷胱甘肽过氧化物酶，cup为铜蓝蛋白。
2.3血液和粪便铜含量
日粮添加不同水平柠檬酸铜对生长猪血液和粪便铜的影响见表4。由表4可知，试验各组间的血清cu含量无显著差异(p>0.05)。日粮添加0、25、50和75mg/kg柠檬酸铜的粪便cu含量显著低于对照组和100mg/kg柠檬酸铜组(p<0.05)，并随着柠檬酸铜添加量的提高而提高(p<0.05)。
表4日粮添加不同水平柠檬酸铜对生长猪血液和粪便铜含量的影响
注：1同行数据中肩标不同小写字母表示差异显著(p<0.05)；未标明字母或相同字母表示差异不显著(p>0.05)。
3.小结
3.1日粮添加25和50mg/kg柠檬酸铜的adg显著高于阴性对照组(p<0.05)，但与对照组比差异不显著(p>0.05)，adfi显著高于对照组和阴性对照组(p<0.05)；
3.2日粮添加0、25、50和75mg/kg柠檬酸铜的粪便cu含量显著低于对照组和100mg/kg柠檬酸铜组(p<0.05)；
3.3生长猪日粮中柠檬酸铜推荐的适宜添加量为25～50mg/kg。
上述说明示出并描述了发明的若干优选实施例，但如前所述，应当理解发明并非局限于本文所披露的形式，不应看作是对其他实施例的排除，而可用于各种其他组合、修改和环境，并能够在本文所述发明构想范围内，通过上述教导或相关领域的技术或知识进行改动。而本领域人员所进行的改动和变化不脱离发明的精神和范围，则都应在发明所附权利要求的保护范围内。