改善的动物饲料组合物及使用方法与流程

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背景技术：
：：动物饲料可以分为两类：(1)精饲料或复合饲料，和(2)粗饲料。精饲料或复合饲料的能量值高，包括脂肪、谷物及其副产品(大麦、玉米、燕麦、黑麦、小麦)，高蛋白油粕或油饼(大豆、低芥酸菜籽、棉籽、花生等)，以及能以颗粒或碎屑的形式生产的甜菜、甘蔗、动物和鱼的加工副产品。精饲料或复合饲料可以是全面的，因为它们可以提供所有日常需要的食物需求，或者它们可以提供日粮的一部分，补充可能作为食物日粮提供的任何其他物质。粗饲料包括牧草、干草、青贮饲料、根作物、禾秆和秸秆(玉米秆)。对于食物生产来说，饲料构成饲养动物的最大成本。因此，本发明针对用于改善动物性能和/或动物饲料利用效率从而降低生产成本的组合物和方法。技术实现要素：本发明的一个方面提供了包含微生物α-淀粉酶的动物饲料组合物。在一些方面，微生物α-淀粉酶包含与seqidno:1的氨基酸序列具有至少约80％同一性的多肽或由与seqidno:2、seqidno:3、seqidno:4和/或seqidno:5的核苷酸序列具有至少约80％同一性的核苷酸序列编码的多肽。本发明的另一方面提供了包含植物材料的动物饲料组合物，其中该植物材料包含表达的异源α-淀粉酶。在一些特定实施例中，表达的异源α-淀粉酶由与seqidno:2、seqidno:3、seqidno:4和/或seqidno:5的核苷酸序列具有至少约80％同一性的核苷酸序列编码或包含与seqidno:1的氨基酸序列具有至少约80％同一性的多肽。本发明还提供了包含来自转基因植物或植物部分的植物材料的动物饲料组合物，该转基因植物或植物部分包含由与seqidno:2、seqidno:3、seqidno:4和/或seqidno:5的核苷酸序列具有至少约80％同一性的核苷酸序列编码的重组α-淀粉酶或包含与seqidno:1的氨基酸序列具有至少约80％同一性的多肽。在其他方面，本发明提供了包含来自转基因玉米植物或植物部分的植物材料的玉米日粮，该转基因玉米植物或植物部分用由与seqidno:2、seqidno:3、seqidno:4和/或seqidno:5的核苷酸序列具有至少约80％同一性的核苷酸序列编码的重组α-淀粉酶稳定地转化。本发明的另外的方面提供了包含本发明的玉米日粮的动物饲料组合物。本发明还涵盖包含含有编码重组α-淀粉酶的多核苷酸的转基因玉蜀黍植物材料的玉蜀黍青贮饲料(如本文所述)。本发明的另外的方面提供了增加动物的平均日增重的方法，该方法包括向该动物饲喂本发明的动物饲料组合物，任选地其中该动物的平均日增重增加约0.05磅/天至约10磅/天。任选地，该动物是为肉而饲养的动物，例如肉用牛(beefcattle)。在实施例中，该肉用牛是饲养场动物。在实施例中，该动物是生长中的肉用犊牛(growingbeefcalf)(例如，育前牛/架子牛(backgrounder/stocker)动物)。本发明的另一方面提供了增加动物的生长速率(增重)的方法，该方法包括向该动物饲喂本发明的动物饲料组合物，任选地其中该动物的生长速率增加约0.05磅/天至约10磅/天。任选地，该动物是为肉而饲养的动物，例如肉用牛。在实施例中，该肉用牛是饲养场动物。在实施例中，该动物是生长中的肉用犊牛(growingbeefcalf)(例如，育前牛/架子牛(backgrounder/stocker)动物)。本发明的再另外的方面提供了减少动物达到所希望重量而需要的天数的方法，该方法包括向该动物饲喂本发明的动物饲料组合物，从而减少达到所希望重量而需要的天数。在其他方面，提供了提高动物的饲料利用效率的方法，该方法包括以有效提高该动物(例如，在产肉、产乳、产蛋和/或产毛中)的饲料利用效率的量向该动物饲喂本发明的动物饲料组合物。任选地，该动物是为肉而饲养的动物，例如肉用牛。在实施例中，该肉用牛是饲养场动物。在实施例中，该动物是生长中的肉用犊牛(growingbeefcalf)(例如，育前牛/架子牛(backgrounder/stocker)动物)。在实施例中，该动物是乳畜。本发明还考虑了提高乳畜产生的乳量(例如，如通过重量和/或体积所确定)的方法，该方法包括以有效提高该乳畜产生的乳量的量向该乳畜饲喂本发明的动物饲料组合物。在实施例中，该乳畜是乳牛或乳山羊。在另外的方面中，本发明提供了提高乳畜在产乳中的饲料利用效率的方法，该方法包括以有效提高该乳畜的饲料利用效率的量向动物饲喂本发明的动物饲料组合物。现在，就本文所述的其他实施例而言，将更详细地描述本发明的上述以及其他方面。应当理解的是，本发明可以体现为不同的形式，并且不应当被解释为对本文所述的实施例的限制。更确切地说，提供这些实施例以使得本披露内容将是彻底的且完整的，并将向本领域的普通技术人员充分传达本发明的范围。附图说明图1是示出了feed青贮饲料与不含有α淀粉酶性状的玉米青贮饲料相比的特征的条形图。通过分析化学法确定瘤胃中总淀粉(“淀粉”)、小颗粒淀粉(可以通过50μm孔扩散)、和7小时原位淀粉消化率(“issd7”；瘤胃中淀粉在7小时内消失)。图2是示出了feed青贮饲料与不含有α淀粉酶性状的玉米青贮饲料相比的糖特征的条形图。乙醇可溶性碳水化合物(“糖esc”)代表可以溶解并在80％乙醇中提取的碳水化合物。水可溶性碳水化合物(“糖wsc”)是可以溶解并在水中提取的碳水化合物。糖esc和糖wsc均通过近红外反射(nir)光谱确定。总糖使用分析化学法测量，并且反映了总的葡萄糖、果糖、乳糖、蔗糖和甘露醇的总量。图3是示出了feed青贮饲料与不含有α淀粉酶性状的玉米青贮饲料相比的中性洗涤纤维消化率(ndfd)的图。通过从30到240小时的时间段内的nir评估ndfd。差异在所有时间点都显著不同。具体实施方式除非上下文另外指示，否则明确地预期本文所述的本发明的不同特征能以任何组合使用。此外，本发明还考虑到在本发明的一些实施例中，本文陈述的任何特征或特征的组合可以被排除或省略。举例说明，如果本说明书陈述组合物包含组分a、b和c，明确地预期a、b或c的任何一种或其组合可单一地或以任何组合被省略和放弃。除非另外定义，否则本文所用的所有技术和科学术语均具有与本发明所属领域的普通技术人员通常所理解的相同的含义。在本文的发明的说明中使用的术语是仅出于描述特定实施例的目的，且并不旨在限制本发明。如在本发明的说明书和所附的权利要求中所使用的，单数形式“一个/一种(a/an)”和“该/所述(the)”旨在也包括复数形式，除非上下文清楚地另外指示。如本文所用的，“和/或”是指并且涵盖一个或多个相关的列出项的任何及全部可能组合，连同当以可替代性(“或”)解释时组合的缺少。如本文所用的，术语“约”当是指可测量的值如剂量、量或时间段等时意在涵盖±20％、±10％、±5％、±1％、±0.5％、或甚至±0.1％的指定量(例如，所增加的重量或所提供的饲料的量)的变化。如本文所用的，短语例如“在x和y之间”和“在约x和y之间”应被解释为包括x和y。如本文所用的，短语例如“在约x和y之间”意指在约x和约y之间。如本文所用的，短语例如“从约x到y”意指在“从约x到约y”。如本文所用的，术语“包含(comprise、comprises和comprising)”指示所说明的特征、整数、步骤、操作、要素、和/或组分的存在，但并不排除一个或多个其他特征、整数、步骤、操作、要素、组分、和/或其组的存在或添加。如本文所用的，过渡短语“基本上由……组成”意指权利要求的范围将被解释为涵盖该权利要求中所提到的指定材料或步骤以及不实质上影响要求保护的发明的一个或多个基本特征和新特征的那些材料或步骤。因此，当用于本发明的权利要求中时，术语“基本上由……组成”并不旨在被解释为等同于“包含(comprising)”。本发明针对用于改善动物性能(例如，提高动物饲料利用效率、增加为肉而饲养的动物的增重、增加乳畜的产乳、增加家禽的产蛋和/或增加为毛或发而饲养的动物的产毛或产发)从而降低生产成本的组合物和方法。诸位发明人已经取得了出人意料的发现，即饲喂了包含微生物α-淀粉酶的动物饲料组合物的动物与未饲喂该动物饲料组合物的动物相比，可以具有平均日增重或生长速率的增加、产乳的增加、饲料利用效率的增加、产蛋的增加、产毛或产发的增加和/或达到所希望重量而需要的天数减少。因此，在本发明的一个方面，提供了包含微生物α-淀粉酶的动物饲料组合物。在本发明的另外的方面，微生物α-淀粉酶包含与seqidno:1的氨基酸序列具有至少80％同一性的多肽或由与seqidno:2、seqidno:3、seqidno:4和/或seqidno:5的核苷酸序列具有至少80％同一性的核苷酸序列编码的多肽。在一些实施例中，α-淀粉酶是液体。因此，在本发明的一些实施例中，本发明的动物饲料组合物可以是可添加到提供给动物的饲料中的补充剂，其包含液体微生物α-淀粉酶。在另一方面，本发明提供了包含植物材料的动物饲料组合物，其中该植物材料包含表达的重组α-淀粉酶。在一些特定实施例中，表达的重组α-淀粉酶由与seqidno:2、seqidno:3、seqidno:4和/或seqidno:5的核苷酸序列具有至少约80％同一性的核苷酸序列编码或包含与seqidno:1的氨基酸序列具有至少约80％同一性的多肽。因此，在另外的实施例中，本发明提供了包含来自转基因植物或植物部分的植物材料的动物饲料组合物，该转基因植物或植物部分包含由与seqidno:2、seqidno:3、seqidno:4和/或seqidno:5的核苷酸序列具有至少约80％同一性的核苷酸序列编码或包含与seqidno:1的氨基酸序列具有至少约80％同一性的多肽的重组α-淀粉酶。在特定实施例中，转基因植物或植物部分可以包含按重量计约1％至约100％的植物材料。因此，例如，转基因植物或植物部分可以包含按重量计约1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、31％、32％、33％、34％、35％、36％、37％、38％、39％、40％、41％、42％、43％、44％、45％、46％、47％、48％、49％、50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、100％的植物材料等，或其中的任何范围。因此，在一些实施例中，植物材料可以包含一种或多种不同类型的植物。因此，例如，植物材料可以来自表达重组或异源(例如，微生物)α-淀粉酶的植物。在其他实施例中，植物材料包含来自其中表达有重组或异源(例如，微生物)α-淀粉酶的植物的材料和来自不表达该重组或异源α-淀粉酶的植物(例如，商品植物)的材料，基本上由其组成，或由其组成。因此，在一些实施例中，当植物材料包含来自其中表达有重组或异源(例如，微生物)α-淀粉酶的植物的材料和来自不表达该重组或异源α-淀粉酶的植物(例如，商品植物)的材料时，来自其中表达有重组或异源(例如，微生物)α-淀粉酶的植物的材料可以构成按重量计从约1％至约99％的植物材料，并且来自不表达该重组或异源α-淀粉酶的植物的材料可以构成按重量计从约99％至约1％的植物材料。在另外的实施例中，植物材料可以构成按重量计从约5％至约100％的动物饲料组合物。因此，例如，植物材料可以构成按重量计约5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、31％、32％、33％、34％、35％、36％、37％、38％、39％、40％、41％、42％、43％、44％、45％、46％、47％、48％、49％、50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、100％的动物饲料组合物等，和/或其中的任何范围。本发明的动物饲料可以处于对本发明有用的任何形式。因此，在一些实施例中，动物饲料的形式可以是但不限于颗粒，谷物(包括混合的一种或多种类型的谷物(即混合谷物))，谷物和颗粒的混合物，青贮饲料，干轧、蒸汽压片的全籽粒，粗裂籽粒(例如，粗裂玉米)，高水分玉米和/或其任何组合。在一些实施例中，动物饲料可以包含其他组分，包括但不限于粗裂籽粒、湿酒糟、干酒糟、玉米青贮饲料、补充剂/液体补充剂、玉米谷蛋白饲料和/或碎干草。如本文所用的，术语“植物材料”包括任何植物部分，包括但不限于胚乳、胚(胚芽)、果皮(麸皮)、肉茎(尖端根冠)、花粉、胚珠、种子(谷物)、叶、花、枝、茎、果实、籽粒、穗、穗轴、壳、茎秆、根、根尖、花药、植物细胞(包括在植物和/或植物的部分中完整的植物细胞)、植物原生质体、植物组织、植物细胞组织培养物、植物愈伤组织、植物团(plantclumps)等。此外，如本文所用的，“植物细胞”是指植物的结构和生理单位，包括细胞壁并且也可以指原生质体。本发明的植物细胞可以处于分离的单细胞形式，或者可以是培养的细胞，或者可以是较高级的组织单位(例如像，植物组织或植物器官)的一部分。“原生质体”是分离的植物细胞，没有细胞壁或仅具有部分细胞壁。因此，在本发明的一些实施例中，包含由本发明的核苷酸序列编码的重组α-淀粉酶的转基因植物或植物部分包含如下细胞，该细胞包含由本发明的核苷酸序列编码的重组α-淀粉酶，其中该细胞是任何植物或植物部分的细胞，包括但不限于根细胞、叶细胞、组织培养细胞、种子细胞、花细胞、果实细胞、花粉细胞等。在代表性实施例中，植物材料可以是种子或谷物。植物材料可以来自任何植物。在一些实施例中，植物材料来自其中可以表达有重组或异源(例如，微生物)α-淀粉酶的植物。此外，如本文所讨论的，在其他实施例中，植物材料可以是来自其中表达有重组或异源(例如，微生物)α-淀粉酶的植物和来自不表达重组或异源α-淀粉酶的植物(例如，商品植物)的植物材料的混合物。因此，在代表性实施例中，植物材料可以是正常“商品”植物材料(例如，商品玉米)和来自本发明的表达重组或异源α-淀粉酶的转基因植物的植物材料的混合物。因此，在一些实施例中，植物材料可以来自玉米植物、高粱植物、小麦植物、大麦植物、黑麦植物、燕麦植物、水稻植物和/或粟植物。在代表性实施例中，植物材料可以来自玉米植物。在其他实施例中，植物材料可以是来自玉米植物的种子、籽粒或谷物。在实施例中，植物材料可以来自表达热稳定的α淀粉酶(例如α淀粉酶797gl3或d45)的玉米植物。α淀粉酶797gl3描述于美国专利公开us2010/0240082(作为seqidno:1)和richardson等人,(2002)j.biol.chem[生物化学杂志].277:26501-26507。α淀粉酶d45已经描述于美国专利公开us2010/0240082(作为seqidno:2)和atichokudomchai等人(2006)carbohydratepolymers[碳水化合物聚合物]64:582-588。在特定实施例中，植物材料可以是来自包含玉米事件3272(参见美国专利号8,093,453)的玉米植物。在实施例中，α淀粉酶不是热稳定的淀粉酶。在实施例中，α淀粉酶可以耐受宽ph范围(例如，在宽ph范围(包括酸性ph)内有活性)。在代表性实施例中，动物饲料是包含编码α淀粉酶的多核苷酸的玉米青贮饲料，该α淀粉酶是热稳定的和/或在宽ph值范围内有活性，例如α淀粉酶797gl3和/或d45。不希望被本发明的任何特定理论所束缚，在青贮之前切碎玉米植物材料的过程可以激活热稳定的酶。此外，在青贮饲料的生产中，在宽ph范围内(例如，包括在酸性范围)有活性的α淀粉酶可能是有利的，因为植物材料的ph随着发酵的进行而降低。当植物材料是青贮饲料(例如，玉米青贮饲料)时，该青贮饲料可以任选地在微生物接种剂和/或化学稳定剂的存在下发酵。在本领域中已知接种剂(例如乳酸菌和/或化学稳定剂)可以增加青贮饲料的有氧稳定性，从而减少腐败。合适的接种剂的实例包括但不限于同型发酵和/或异型发酵的乳酸菌，例如：乳杆菌属物种(lactobacillusspp.)(例如，布赫内氏乳杆菌(l.buchneri)、植物乳杆菌(l.plantarum)、干酪乳杆菌(l.casei)、短乳杆菌(l.brevis)和/或嗜酸乳杆菌(l.acidophilus))、片球菌属物种(pediococcusspp.)(例如，戊糖片球菌(p.pentosaceus)和/或乳酸片球菌(p.acidilactici))、乳球菌属物种(lactococcusspp.)、肠球菌属物种(enterococcusspp)(例如，粪肠球菌(e.faecium))、链球菌属物种(streptococcusspp.)和/或明串珠菌属物种(leuconostocspp.)。可从拉曼动物营养公司(lallemandanimalnutrition)获得命名为lb500的可商购的接种剂。化学稳定剂包括但不限于有机酸和/或无机酸(例如，乙酸、甲酸、丁酸、乳酸、丙酸、挥发性脂肪酸、硫酸和/或盐酸)、氯化钠、碳酸氢钠、蔗糖和/或尿素等。因此，在实施例中，青贮饲料包含微生物接种剂和/或化学稳定剂。此外，在本领域中已知的是，在青贮之前的籽粒加工(例如，粉碎玉米)增加了玉米青贮饲料的营养价值。然而，籽粒加工可能会减慢收获/青贮的速度并消耗能量，从而可能产生额外费用。在实施例中，本发明的玉米青贮饲料(例如，由表达α淀粉酶的转基因玉米植物制备)可以实现与常规玉米青贮饲料(不含外源α淀粉酶)相同或比其更好的营养价值，和/或可以在不进行籽粒加工或减少籽粒加工的情况下支持与常规玉米青贮饲料相同或比其更好水平的动物性能(例如，产乳、产肉等)。因此，在实施例中，本发明的玉米青贮饲料是由没有或基本上没有籽粒加工、或具有比工业上常规使用的更少的籽粒加工的玉米植物制成的。在实施例中，籽粒被加工成大于约2mm(例如，至少3mm或更大、4mm或更大,5mm或更大、6mm或更大、7mm或更大、8mm或更大、9mm或更大、10mm或更大等)。在一些实施例中，本发明提供了包含动物饲料的“全混合日粮”。在实施例中，全混合日粮包含动物饲料，该动物饲料包含来自转基因植物(例如，转基因玉米植物)或植物部分的植物材料，该转基因玉米植物或植物部分用任选地由与seqidno:2、seqidno:3、seqidno:4和/或seqidno:5的核苷酸序列具有约80％同一性的核苷酸序列编码或包含与seqidno:1的氨基酸序列具有至少约80％同一性的多肽的重组α-淀粉酶稳定地转化。如本文所用的，“全混合日粮”是指将所有喂养料(例如，谷物、粗饲料/草料、蛋白质、矿物质、维生素和/或饲料添加剂等)组合成完整的日粮并且配制成单一饲料混合物中的特定养分浓度(通常根据单个动物的24小时营养需求进行计算)的日粮。在实施例中，全混合日粮包括例如玉米谷物(例如，玉米籽粒、粗裂玉米等)、补充剂和添加剂(例如，维生素和矿物质)和/或“粗饲料”(例如，牧草、干草、青贮饲料、根作物、禾秆和秸秆(玉米秆))。在实施例中，玉米谷物(例如，玉米谷物)和/或粗饲料(例如，玉米青贮饲料)组分来自转基因植物材料(例如，转基因玉米植物材料)且包含编码α淀粉酶的多核苷酸。在一些实施例中，来自转基因玉米植物或植物部分(例如，玉米谷物和/或玉米青贮饲料)的植物材料构成基于干物质按重量计从约1％至约100％的全混合日粮。因此，例如，转基因植物或植物部分可以包含基于干物质按重量计至少约1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、31％、32％、33％、34％、35％、36％、37％、38％、39％、40％、41％、42％、43％、44％、45％、46％、47％、48％、49％、50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、或甚至100％的植物材料等，和/或其中的任何范围。在再另外的实施例中，本发明提供了包含来自转基因玉米植物或植物部分的植物材料的玉米日粮，该转基因玉米植物或植物部分用任选地由与seqidno:2、seqidno:3、seqidno:4和/或seqidno:5的核苷酸序列具有约80％同一性的核苷酸序列编码或包含与seqidno:1的氨基酸序列具有至少约80％同一性的多肽的重组α-淀粉酶稳定地转化。如本文所用的，“玉米日粮”意指单个动物的玉米允许量(例如，24小时玉米允许量)。在一些实施例中，来自转基因玉米植物或植物部分的植物材料构成基于干物质按重量计从约1％至约100％的玉米日粮。因此，例如，转基因植物或植物部分可以包含基于干物质按重量计至少约1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、31％、32％、33％、34％、35％、36％、37％、38％、39％、40％、41％、42％、43％、44％、45％、46％、47％、48％、49％、50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、或甚至100％的植物材料等，和/或其中的任何范围。在其他实施例中，提供了包含本发明的玉米日粮的动物饲料组合物。在一些实施例中，玉米日粮可以构成基于干物质按重量计约5％至约100％的动物饲料组合物。因此，例如，玉米日粮可以构成基于干物质按重量计至少约5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、31％、32％、33％、34％、35％、36％、37％、38％、39％、40％、41％、42％、43％、44％、45％、46％、47％、48％、49％、50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、100％的动物饲料组合物等，和/或其中的任何范围。在代表性实施例中，动物饲料组合物包含至少约50％。在一些实施例中，全混合日粮可以包含湿玉米谷蛋白饲料，其可以为基于干物质按重量计约10％至约40％的动物饲料组合物。在另外的实施例中，全混合日粮可以包含湿玉米谷蛋白饲料，其可以为基于干物质按重量计约至少10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、31％、32％、33％、34％、35％、36％、37％、38％、39％、40％或更多的动物饲料组合物。在其他实施例中，全混合日粮可以包含具有可溶物的改性酒糟，其可以为基于干物质按重量计约5％至约25％的动物饲料组合物。在另外的实施例中，全混合日粮可以包含具有可溶物的改性酒糟，其可以为基于干物质按重量计至少约5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％的动物饲料组合物。在另外的实施例中，全混合日粮可以包含具有可溶物的湿酒糟，其可以为基于干物质按重量计约5％至约25％的动物饲料组合物。在另外的实施例中，全混合日粮可以包含具有可溶物的湿酒糟，其可以为基于干物质按重量计至少约5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％的动物饲料组合物。另外，在表达α淀粉酶的转基因玉米植物材料的情况下，总玉米谷物日粮可以全部或基本上全部由表达α淀粉酶的转基因玉米植物材料构成，或玉米谷物日粮的仅一部分可以来自表达α淀粉酶的转基因玉米植物，例如，基于干物质按重量计至少约1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、31％、32％、33％、34％、35％、36％、37％、38％、39％、40％、41％、42％、43％、44％、45％、46％、47％、48％、49％、50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％的玉米谷物日粮来自包含编码α淀粉酶的多核苷酸的转基因玉米植物。玉米谷物日粮的剩余部分可以来自任何其他合适的来源，包括但不限于不表达α淀粉酶的常规玉米谷物。在实施例中，饲喂给动物的粗饲料/草料包含玉米青贮饲料。动物的每日粗饲料日粮可以全部或基本上全部由来自转基因玉米植物材料的青贮饲料构成，或粗饲料日粮的仅一部分可以是来自表达α淀粉酶的转基因玉米植物的青贮饲料，例如，基于干物质按重量计至少约1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、31％、32％、33％、34％、35％、36％、37％、38％、39％、40％、41％、42％、43％、44％、45％、46％、47％、48％、49％、50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％的粗饲料日粮是来自包含编码α淀粉酶的多核苷酸的转基因玉米植物的青贮饲料。粗饲料组分的剩余部分可以来自任何合适的来源，包括但不限于不表达α淀粉酶的常规玉米青贮饲料、其他常规青贮饲料(例如，苜蓿青贮饲料)、牧草等。在实施例中，饲喂给动物的玉米青贮饲料中基于干物质按重量计至少约1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、31％、32％、33％、34％、35％、36％、37％、38％、39％、40％、41％、42％、43％、44％、45％、46％、47％、48％、49％、50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％、或甚至100％来自包含编码α淀粉酶的多核苷酸的转基因玉蜀黍植物。具有同源性的不同核酸或蛋白质本文被称作“同源物”。术语同源物包括来自相同物种和其他物种的同源序列以及来自相同物种和其他物种的直向同源序列。“同源性”是指就位置同一性(即，序列相似性或同一性)百分比而言，两个或更多个核酸和/或氨基酸序列之间的相似性水平。同源性也是指不同核酸或蛋白质之间相似功能特性的概念。因此，本发明的组合物和方法还包含本发明的核苷酸序列和多肽序列(例如，seqidno:1、seqidno:2、seqidno:3、seqidno:4、seqidno:5)的同源物。如本文所用的，“直向同源”是指在物种形成过程中由共同的祖先基因产生的不同物种中的同源核苷酸序列和/或氨基酸序列。本发明的同源物与seqidno:1、seqidno:2、seqidno:3、seqidno:4或seqidno:5具有显著序列同一性(例如，70％、75％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％和/或100％)。seqidno:1、seqidno:2、seqidno:3、seqidno:4和/或seqidno:5的同源物可以与本发明的任何饲料组合物或方法一起使用，单独或彼此组合，和/或与seqidno:1、seqidno:2、seqidno:3、seqidno:4和/或seqidno:5一起。如本文所用的“序列同一性”是指两个最佳比对的多核苷酸或肽序列在组分(例如，核苷酸或氨基酸)的整个比对窗口内不变的程度。可以通过包括但不限于描述于以下的那些已知方法容易地计算“同一性”：computationalmolecularbiology[计算分子生物学](lesk,a.m.编辑)oxforduniversitypress[牛津大学出版社],纽约(1988)；biocomputing:informaticsandgenomeprojects[生物运算：信息学和基因组项目](smith,d.w.编辑)academicpress[学术出版社],纽约(1993)；computeranalysisofsequencedata,parti[序列数据的计算机分析，第i部分](griffin,a.m.和griffin,h.g.编辑)humanapress[胡马纳出版社],新泽西州(1994)；sequenceanalysisinmolecularbiology[分子生物学中的序列分析](vonheinje,g.编辑)academicpress[学术出版社](1987)；以及sequenceanalysisprimer[序列分析引物](gribskov,m.和devereux,j.编辑)stocktonpress[斯托克顿出版社],纽约(1991)。如本文所用的，术语“序列同一性百分比”或“同一性百分比”是指在最佳比对两个序列时，与测试(“主题”)多核苷酸分子(或其互补链)相比，参考(“查询”)多核苷酸分子(或其互补链)的线性多核苷酸序列中的同一核苷酸的百分比。在一些实施例中，“同一性百分比”可以是指氨基酸序列中同一氨基酸的百分比。在两个核酸分子、核苷酸序列或蛋白质序列的上下文中的短语“基本上同一”是指当比较并比对最大对应性时具有至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约81％、至少约82％、至少约83％、至少约84％、至少约85％、至少约86％、至少约87％、至少约88％、至少约89％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、或至少约99％核苷酸或氨基酸残基同一性的两个或更多个序列或子序列，如使用以下序列比较算法之一(本文所述的和本领域已知的)或通过目测检查所测量的。在本发明的一些实施例中，在长度为至少约50个残基至约200个残基、约50个残基至约150个残基等的序列区域上存在基本同一性。因此，在本发明的一些实施例中，在长度为至少约50、约60、约70、约80、约90、约100、约110、约120、约130、约140、约150、约160、约170、约180、约190、约200或更多个残基的序列区域上存在基本同一性。在另外的实施例中，序列在编码区的整个长度上是基本上同一的。此外，在代表性实施例中，基本上同一的核苷酸或蛋白质序列执行基本上相同的功能(例如，α-淀粉酶活性)。因此，在一些特定实施例中，这些序列在至少约150个残基上是基本上同一的并具有α-淀粉酶活性。对于序列比较，典型地，一个序列充当与测试序列进行比较的参考序列。当使用序列比较算法时，将测试序列和参考序列输入到计算机中(若有必要，则指定子序列坐标)，并且指定序列算法程序的参数。然后，该序列比较算法基于所指定的程序参数来计算测试序列相对于参考序列的序列同一性百分比。用于比对比较窗口的最佳序列比对是本领域技术人员所熟知的并且可以由以下工具实施：如smith和waterman的局部同源性算法、needleman和wunsch的同源性比对算法、pearson和lipman的相似性搜索方法，并且任选地由这些算法的计算机化实现方式来实施，如作为wisconsin(材料科学软件公司(accelrysinc.)，圣地亚哥，加利福尼亚州)的部分可获得的gap、bestfit、fasta和tfasta。测试序列和参考序列的已比对区段的“同一性分数”是由两个已比对序列所共有的相同组分的数目除以参考序列区段(即，完整的参考序列或参考序列的更小限定部分)中组分的总数目。序列同一性百分比被表示为同一性分数乘以100。一个或多个多核苷酸序列的比较可以是相对于全长多核苷酸序列或其部分，或相对于较长的多核苷酸序列。出于本发明的目的，也可以使用针对翻译的核苷酸序列的2.0版blastx和针对多核苷酸序列的2.0版blastn确定“同一性百分比”。用于执行blast分析的软件可通过美国国家生物技术信息中心(nationalcenterforbiotechnologyinformation)公开地获得。这种算法涉及首先通过鉴定查询序列中具有长度w的短字码而鉴定得分高的序列对(hsp)，这些得分高的序列对当与数据库序列中具有相同长度的字码(word)进行比对时匹配或满足一些正值阈值的得分t。t被称为邻近字码得分阈值(altschul等人,1990)。这些初始的邻近字码命中充当种子用于起始搜索以发现含有它们的较长的hsp。然后，将这些字码命中在两个方向上沿着每个序列延伸直到累积的比对得分可以增加。对于核苷酸序列，使用参数m(对于一对匹配残基的奖赏得分；总是>0)和n(对于错配残基的罚分；总是<0)来计算累积得分。对于氨基酸序列，使用评分矩阵来计算累积得分。当累积的比对得分从它的最大达到值降低了数量x；由于累积一个或多个负得分的残基比对使累积得分趋于零或零以下；或者到达任一序列的末端时，停止这些字码命中在每个方向上的延伸。blast算法的参数w、t、以及x决定了比对的灵敏度与速度。blastn程序(对于核苷酸序列)使用字长(w)为11、期望值(e)为10、截止值(cutoff)为100、m＝5、n＝-4、以及两条链的比较作为默认值。对于氨基酸序列，blastp程序使用字长(w)为3、期望值(e)为10、以及blosum62评分矩阵作为默认值(参见henikoff和henikoff,proc.natl.acad.sci.usa[美国国家科学院院刊]89:10915(1989))。除了计算序列同一性百分之外，blast算法还进行两个序列之间相似性的统计分析(参见，例如karlin和altschul,proc.nat'l.acad.sci.usa[美国国家科学院院刊]90:5873-5787(1993))。由blast算法提供的相似性的一种量度是最小概率总和(p(n))，它提供了在两个核苷酸或氨基酸序列之间会偶然发生匹配的概率的指示。例如，如果在测试核苷酸序列与参考核苷酸序列的比较中的最小概率总和小于约0.1至小于约0.001，则该测试核酸序列被认为是与该参考序列相似的。因此，在本发明的一些实施例中，在测试核苷酸序列与参考核苷酸序列的比较中的最小概率总和小于约0.001。当两个核苷酸序列在严格条件下彼此杂交时，这两个核苷酸序列也可以被认为是基本上同一的。在一些代表性实施例中，被认为基本上同一的两个核苷酸序列在高严格条件下彼此杂交。在核酸杂交实验(如dna杂交和rna杂交)的上下文中，“严格杂交条件”和“严格杂交洗涤条件”是序列依赖性的，并且在不同的环境参数下是不同的。对核酸杂交的广泛指导见于以下：tijssenlaboratorytechniquesinbiochemistryandmolecularbiology-hybridizationwithnucleicacid[生物化学和分子生物学实验室技术-使用核酸探针的杂交]第2章第i部分“overviewofprinciplesofhybridizationandthestrategyofnucleicacidprobeassays[杂交原理和核酸探针测定策略综述]”elsevier[爱思唯尔],纽约(1993)。通常，高严格杂交和洗涤条件在限定的离子强度和ph下被选定为比特定序列的热熔点(tm)低约5℃。tm是50％的靶序列与完全匹配的探针进行杂交时的温度(在限定的离子强度和ph下)。非常严格条件被选定为等于特定探针的tm。用于互补核苷酸序列(它们在dna印迹或rna印迹中在滤器上具有超过100个互补残基)的杂交的严格杂交条件的实例是在42℃具有1mg肝素的50％甲酰胺，其中杂交是过夜进行的。高严格洗涤条件的实例是在72℃以0.15mnacl持续约15分钟。严格洗涤条件的实例是在65℃以0.2xssc洗涤持续15分钟(参见sambrook，下文，针对ssc缓冲液的描述)。通常，高严格洗涤之前会先进行低严格洗涤，以去除背景探针信号。对于例如多于100个核苷酸的双链体的中严格洗涤的实例是在45℃以1xssc持续15分钟。对于例如多于100个核苷酸的双链体的低严格洗涤的实例是在40℃以4-6xssc持续15分钟。对于短探针(例如，约10至50个核苷酸)，严格条件典型地涉及小于约1.0m的na离子的盐浓度，典型地在ph7.0至8.3下约0.01至1.0m的na离子浓度(或其他盐)，并且温度典型地是至少约30℃。还可以通过添加去稳定剂(如甲酰胺)来达到严格条件。一般而言，在特定的杂交测定中相比于不相关的探针观察到的高出2倍或更高的信噪比指示检测到特定杂交。如果在严格条件下彼此不杂交的核苷酸序列所编码的蛋白质是基本上同一的，则这些核苷酸序列仍然是基本上同一的。例如，当使用遗传密码所允许的最大密码子简并性来生成核苷酸序列的拷贝时，这种情况可能发生。以下是可以用来克隆同源核苷酸序列的杂交/洗涤条件的设置的实例，这些序列是与参考核苷酸序列(例如，seqidno:2、seqidno:3、seqidno:4、seqidno:5)基本上同一的。在一个实施例中，参考核苷酸序列在50℃在7％十二烷基硫酸钠(sds)、0.5mnapo4、1mmedta中与“测试”核苷酸序列杂交，同时在50℃在2xssc、0.1％sds中洗涤。在另一个实施例中，参考核苷酸序列在50℃在7％十二烷基硫酸钠(sds)、0.5mnapo4、1mmedta中与“测试”核苷酸序列杂交，同时在50℃在1xssc、0.1％sds中洗涤；或者在50℃在7％十二烷基硫酸钠(sds)、0.5mnapo4、1mmedta中杂交，同时在50℃在0.5xssc、0.1％sds中洗涤。在再另外的实施例中，参考核苷酸序列在50℃在7％十二烷基硫酸钠(sds)、0.5mnapo4、1mmedta中与“测试”核苷酸序列杂交，同时在50℃在0.1xssc、0.1％sds中洗涤；或者在50℃在7％十二烷基硫酸钠(sds)、0.5mnapo4、1mmedta中杂交，同时在65℃在0.1xssc、0.1％sds中洗涤。在特定实施例中，两个核苷酸序列或两个多肽序列是基本上同一的另一个指示可以是由第一核酸所编码的蛋白质与由第二核酸所编码的蛋白质具有免疫交叉反应性或与其特异性结合。因此，在一些实施例中，多肽可以是与第二多肽基本上同一的，例如其中这两种多肽仅区别于保守取代。因此，在本发明的一些实施例中，提供了与seqidno:2、seqidno:3、seqidno:4和/或seqidno:5的核苷酸序列具有显著序列同一性的核苷酸序列。“显著序列同一性”或“显著序列相似性”意指与另一个核苷酸序列有至少约70％、75％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％和/或100％同一性或相似性。因此，在另外的实施例中，“显著序列同一性”或“显著序列相似性”意指与另一个核苷酸序列有约70％至约100％、约75％至约100％、约80％至约100％、约81％至约100％、约82％至约100％、约83％至约100％、约84％至约100％、约85％至约100％、约86％至约100％、约87％至约100％、约88％至约100％、约89％至约100％、约90％至约100％、约91％至约100％、约92％至约100％、约93％至约100％、约94％至约100％、约95％至约100％、约96％至约100％、约97％至约100％、约98％至约100％和/或约99％至约100％同一性或相似性的范围。因此，在一些实施例中，本发明的核苷酸序列是与seqidno:2、seqidno:3、seqidno:4或seqidno:5的核苷酸序列具有显著序列同一性并编码具有α-淀粉酶活性的多肽的核苷酸序列。在一些实施例中，本发明的核苷酸序列是与seqidno:2、seqidno:3、seqidno:4或seqidno:5的核苷酸序列具有80％至100％同一性并编码具有α-淀粉酶活性的多肽的核苷酸序列。在代表性实施例中，本发明的核苷酸序列是与seqidno:2、seqidno:3、seqidno:4或seqidno:5的核苷酸序列具有95％同一性并编码具有α-淀粉酶活性的多肽的核苷酸序列。在一些实施例中，本发明的多肽包含与seqidno:1的氨基酸序列至少70％同一，例如至少70％、75％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％和/或100％同一的氨基酸序列，基本上由其组成，或由其组成，并且具有α淀粉酶活性。在一些实施例中，多肽或核苷酸序列可以是保守修饰的变体。如本文所用的，“保守修饰的变体”是指含有单独取代、缺失或添加的多肽或核苷酸序列，这些取代、缺失或添加在该序列中改变、添加或缺失单个氨基酸或核苷酸或小百分比的氨基酸或核苷酸，其中该改变导致氨基酸被化学上相似的氨基酸取代。提供功能上相似的氨基酸的保守取代表在本领域中是熟知的。如本文所用的，多肽的保守修饰的变体是具有生物活性的，并且因此具有如本文所述的参考多肽的所希望活性(例如，α-淀粉酶活性)。变体可以产生于例如遗传多态性或产生于人工操纵。参考多肽的生物活性变体可以与参考多肽的氨基酸序列具有至少约40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、或更大的序列同一性或相似性(例如，约40％至约99％或更大的序列同一性或相似性以及其中的任何范围)，如通过本文的其他地方所述的序列比对程序和参数所确定的。活性变体可以与参考多肽序列区别于尽可能少的1-15个氨基酸残基，尽可能少的1-10个(如6-10个)，尽可能少的5个，尽可能少的4个、3个、2个、或甚至1个氨基酸残基。天然存在的变体可以存在于群体内。此类变体可以通过使用熟知的分子生物学技术来鉴定，如使用如以下所述的聚合酶链式反应(pcr)以及杂交。合成来源的核苷酸序列，例如通过定点诱变或pcr介导的诱变生成的、编码本发明的多肽的序列，也作为变体包括在内。可以将一个或多个核苷酸或氨基酸取代、添加、或缺失引入本文所披露的核苷酸或氨基酸序列中，以使得将这些取代、添加、或缺失引入所编码的蛋白质中。这些添加(插入)或缺失(截短)可以在天然蛋白的n-末端或c-末端进行，或者在天然蛋白的一个或多个位点处进行。类似地，一个或多个核苷酸或氨基酸的取代可以在天然蛋白的一个或多个位点处进行。例如，保守的氨基酸取代可以在一个或多个预测的、优选是非必需氨基酸残基处进行。“非必需”氨基酸残基是可以与蛋白质的野生型序列不同但不改变生物活性的残基，而“必需”氨基酸是生物活性所要求的。“保守的氨基酸取代”是用具有相似侧链的氨基酸残基替换该氨基酸残基的取代。具有相似侧链的氨基酸残基家族在本领域是已知的。这些家族包括具有碱性侧链的氨基酸(例如，赖氨酸、精氨酸、组氨酸)、具有酸性侧链的氨基酸(例如，天冬氨酸、谷氨酸)、具有不带电荷的极性侧链的氨基酸(例如，甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸)、具有非极性侧链的氨基酸(例如，丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、色氨酸)、具有β-分支侧链的氨基酸(例如，苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸)、以及具有芳香族侧链的氨基酸(例如，酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸)。此类取代不会针对保守的氨基酸残基、或针对位于保守基序中的氨基酸残基进行，在这些地方此类残基对于蛋白质活性是必需的。例如，可以通过使编码酶的核苷酸序列突变来制备参考多肽的氨基酸序列变体。可以在植物中将所得到的突变体进行重组表达，并且使用本领域熟知的方法通过测定α-淀粉酶活性来筛选保留生物活性的那些。用于诱变与核苷酸序列改变的方法在本领域是已知的。参见例如，kunkel(1985)proc.natl.acad.sci.usa[美国国家科学院院刊]82:488-492；kunkel等人(1987)methodsinenzymol.[酶学方法]154:367-382；和techniquesinmolecularbiology[分子生物学技术](walker和gaastra编辑,macmillanpublishingco.[麦克米兰出版公司]1983)以及其中所引用的参考文献；以及美国专利号4,873,192。清楚的是，在编码变体的dna内所进行的突变一定不能破坏阅读框并且优选地不会生成互补区，这些互补区会产生二级mrna结构。参见，欧洲专利申请公开号75,444。关于不影响目的蛋白质的生物活性的适当氨基酸取代的指导可以见于dayhoff等人(1978)atlasofproteinsequenceandstructure[蛋白质序列与结构图谱](nationalbiomedicalresearchfoundation[国家生物医药研究基金会],washington,d.c.[华盛顿特区])的模型中，将该文献通过引用并入本文。本文所述的多肽中的缺失、插入以及取代不预期在多肽的特征(例如，多肽的活性)中产生根本性改变。然而，当在如此做之前难以预测该取代、缺失或插入的精确效果时，本领域的普通技术人员将理解，该效果可以通过能针对具体目的多肽活性(例如，α-淀粉酶活性)进行筛选的常规筛选测定来评估。在一些实施例中，本发明的组合物可以包含多肽的活性片段。如本文所用的，“片段”意指参考多肽的一部分，该部分保留了多肽的α-淀粉酶活性。片段还意指编码参考多肽的核酸分子的一部分。多肽的活性片段可以例如通过分离表达所编码的多肽片段的编码多肽的核酸分子的一部分(例如，利用体外重组表达)并评估该片段的活性来制备。编码此类片段的核酸分子可以是至少约150、200、250、300、350、400、450、500、550、600、650、700、800、900、1000、1100、1200、1300、1400、1500、1600、1700、1800、1900、2000、2100、或2200个连续核苷酸，或其中的任何范围，或高达存在于全长编码多肽的核酸分子中的核苷酸数目。这样，多肽片段可以是至少约50、60、70、80、90、100、125、150、175、200、225、250、275、300、325、350、375、400、425、450、475、500、525、550、525、550、600、625、650、675、或700个连续氨基酸残基，或其中的任何范围，或高达存在于全长多肽中的氨基酸残基总数。因此，在一些实施例中，本发明提供了如下多肽，该多肽包含本发明的多肽(例如，seqidno:1)的至少约150个连续氨基酸残基，基本上由其组成，或由其组成，并且具有α-淀粉酶活性。如本文所用的，关于核酸分子和/或核苷酸序列(例如，rna或dna)的术语“表达(express、expresses、expressed或expression)”等指示该核酸分子和/或核苷酸序列被转录并且任选地被翻译。因此，核酸分子和/或核苷酸序列可以表达或产生目的多肽或功能性的未翻译的rna。“异源”或“重组”核苷酸序列是不与该核苷酸序列所引入的宿主细胞天然地关联的核苷酸序列，包括天然存在的核苷酸序列的非天然存在的多个拷贝。“天然”或“野生型”核酸、核苷酸序列、多肽或氨基酸序列是指天然存在的或内源性的核酸、核苷酸序列、多肽或氨基酸序列。因此，例如，“野生型mrna”是天然存在于生物体中的或对生物体来说是内源性的mrna。“同源”核酸序列是与该核酸序列所引入的宿主细胞天然地关联的核苷酸序列。也如本文所用的，术语“核酸”、“核酸分子”、“核苷酸序列”以及“多核苷酸”可以互换使用并且涵盖rna和dna两者，包括cdna、基因组dna、mrna、合成的(例如，化学合成的)dna或rna、以及rna和dna的嵌合体。术语多核苷酸、核苷酸序列、或核酸是指核苷酸链而与链长无关。核酸可以是双链或单链的。在单链时，核酸可以是有义链或反义链。可以使用寡核苷酸类似物或衍生物(例如，肌苷或硫代磷酸酯核苷酸)合成核酸。此类寡核苷酸可以例如用于制备具有改变的碱基配对能力或对核酸酶的增强的抗性的核酸。本发明进一步提供了为本发明的核酸、核苷酸序列、或多核苷酸的互补序列(该互补序列可以是完全互补序列或部分互补序列)的核酸。本文提供的核酸分子和/或核苷酸序列本文以5’至3’方向从左至右呈现，并且使用代表核苷酸字符的标准代码表示，如美国序列规则37cfr§§1.821-1.825和世界知识产权组织(wipo)标准st.25中所述。在一些实施例中，本发明的重组核酸分子、核苷酸序列以及多肽是“分离的”。“分离的”核酸分子、“分离的”核苷酸序列或“分离的”多肽是通过人工方式从其天然环境中分开而存在的核酸分子、核苷酸序列或多肽并因此不是自然产物。分离的核酸分子、核苷酸序列或多肽能以纯化形式存在，即与天然存在的生物体或病毒的至少一些其他组分(例如，细胞或病毒结构组分或通常发现与该多核苷酸相关的其他多肽或核酸)至少部分地分开。在代表性实施例中，分离的核酸分子、分离的核苷酸序列和/或分离的多肽是至少约1％、5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、或更纯的。在其他实施例中，分离的核酸分子、核苷酸序列或多肽可以存在于非天然环境中，例如像重组宿主细胞。因此，例如，就核苷酸序列而言，术语“分离的”意指它从其天然存在于其中的染色体和/或细胞中分离出来。如果将多核苷酸从其天然存在于其中的染色体和/或细胞中分离出并且然后将其插入它并不天然存在于其中的遗传背景、染色体和/或细胞(例如，不同的宿主细胞、不同的调节序列和/或与自然中发现的不同的基因组位置)中，则该多核苷酸也是被分离的。因此，这些重组核酸分子、核苷酸序列以及它们所编码的多肽是“分离的”，因为它们通过人工方式从其天然环境中分开而存在并因此不是自然产物，然而，在一些实施例中，它们可以被引入到重组宿主细胞中并存在于该重组宿主细胞中。在一些实施例中，本发明的核苷酸序列和/或核酸分子可以与多种启动子可操作地关联以用于在宿主细胞(例如，植物细胞)中表达。如本文所用的，“可操作地关联”当指示可操作地连接至第二核酸序列的第一核酸序列时意指在该第一核酸序列与该第二核酸序列处于功能性关系中时的情况。例如，如果启动子影响编码序列的转录或表达，则该启动子与该编码序列可操作地关联。dna“启动子”是编码区上游的非翻译的dna序列，它含有rna聚合酶结合位点并且启动dna的转录。“启动子区”也可以包括充当基因表达的调节子的其他元件。启动子可以包括例如用于在重组核酸分子(即，嵌合基因)的制备中使用的组成型、可诱导型、时间调节型、发育调节型、化学调节型、组织优选型、以及组织特异型启动子。在特定方面，适用于本发明的“启动子”是能够在植物细胞中启动核苷酸序列的转录的启动子。“嵌合基因”是如下重组核酸分子，其中启动子或其他调节核苷酸序列与核苷酸序列可操作地关联，该核苷酸序列对mrna进行编码或者该核苷酸序列被表达为蛋白质，以使得该调节核苷酸序列能够调节所关联的核苷酸序列的转录或表达。嵌合基因的调节核苷酸序列不能如自然界中所发现的那样正常地可操作地连接至所关联的核苷酸序列上。启动子的选择将依赖于表达的时间和空间需要而变化，并且还依赖于有待转化的宿主细胞而变化。因此，例如，核苷酸序列的表达可以处于任何植物和/或植物部分中(例如，处于叶中、处于茎杆或茎中、处于穗中、处于花序(例如，穗状花序、圆锥花序、穗轴等)中、处于根、种子和/或幼苗等中)。尽管已经显示来自双子叶植物的很多启动子在单子叶植物中是可操作的并且反之亦然，但理想的是选择双子叶植物启动子用于在双子叶植物中表达，并且选择单子叶植物启动子用于在单子叶植物中表达。不过，对于所选的启动子的起源没有限制；只要它们可有效驱动核苷酸序列在所希望细胞中表达就足够了。适用于本发明的启动子包括但不限于组成性地驱动核苷酸序列的表达的那些启动子、在诱导时驱动表达的那些启动子、以及以组织或发育特异性方式驱动表达的那些启动子。这些不同类型的启动子在本领域是已知的。组成型启动子的实例包括但不限于夜香树属病毒启动子(cmp)(美国专利号7,166,770)、水稻肌动蛋白1启动子(wang等人(1992)mol.cell.biol.[分子细胞生物学]12:3399-3406；以及美国专利号5,641,876)、camv35s启动子(odell等人(1985)nature[自然]313:810-812)、camv19s启动子(lawton等人(1987)plantmol.biol.[植物分子生物学]9:315-324)、nos启动子(ebert等人(1987)proc.natl.acad.sciusa[美国国家科学院院刊]84:5745-5749)、adh启动子(walker等人(1987)proc.natl.acad.sci.usa[美国国家科学院院刊]84:6624-6629)、蔗糖合酶启动子(yang和russell(1990)proc.natl.acad.sci.usa[美国国家科学院院刊]87:4144-4148)、以及泛素启动子。源于泛素的组成型启动子积累在很多细胞类型中。已经从几种植物物种中克隆出泛素启动子以用于在转基因植物中使用，例如，向日葵(binet等人,1991.plantscience[植物科学]79:87-94)、玉蜀黍(christensen等人,1989.plantmolec.biol.[植物分子生物学]12:619-632)和拟南芥(norris等人1993.plantmolec.biol.[植物分子生物学]21:895-906)。玉蜀黍泛素启动子(ubip)已经在转基因单子叶植物系统中得到发展，并且它的序列以及构建用于单子叶植物转化的载体披露于专利公开ep0342926中。此外，由mcelroy等人(mol.gen.genet.[分子遗传学与普通遗传学]231:150-160(1991))描述的启动子表达盒可容易被修饰以用于核苷酸序列的表达并且特别适用于在单子叶植物宿主中使用。在一些实施例中，可以使用组织特异性/组织优选的启动子。组织特异性或优选的表达模式包括但不限于绿色组织特异性或优选的、根特异性或优选的、茎特异性或优选的、种子特异性或优选的、以及花特异性或优选的。适用于在绿色组织中表达的启动子包括调节涉及光合作用的基因的许多启动子，并且这些中的许多已经从单子叶植物和双子叶植物两者中得以克隆。在一个实施例中，适用于本发明的启动子是来自磷酸烯醇羧化酶基因的玉蜀黍pepc启动子(hudspeth和grula,plantmolec.biol[植物分子生物学].12:579-589(1989))。组织特异性启动子的非限制性实例包括与编码种子贮藏蛋白(如β-伴大豆球蛋白、十字花科蛋白、油菜籽蛋白和菜豆素)、玉米蛋白(例如，γ玉米蛋白)或油体蛋白(如油质蛋白)、或脂肪酸生物合成中涉及的蛋白质(包括酰基载体蛋白、硬脂酰-acp去饱和酶和脂肪酸去饱和酶(fad2-1))的基因关联以及与胚发育过程中表达的其他核酸(如bce4，参见例如kridl等人(1991)seedsci.res.[种子科学研究]1:209-219；以及欧洲专利号255378)关联的那些启动子。适用于核苷酸序列在植物(特别是玉蜀黍)中表达的组织特异性或组织优先的启动子包括但不限于直接在根、髓、叶或花粉中表达的那些启动子。此类启动子披露于例如pct公开wo93/07278中，通过引用以其全文并入本文。组织特异性或组织优选的启动子的其他非限制性实例包括披露于美国专利6,040,504中的棉花二磷酸核酮糖羧化酶(rubisco)启动子；披露于美国专利5,604,121中的水稻蔗糖合酶启动子；由deframond(febs290:103-106(1991)；授予汽巴-嘉基(ciba-geigy)的ep0452269)描述的根特异性启动子；描述于美国专利5,625,136(授予汽巴-嘉基)并驱动玉蜀黍trpa基因表达的茎特异性启动子；以及披露于pct公开wo01/73087中的夜香树属黄叶卷曲病毒启动子，将所有专利文献通过引用并入本文。组织特异性/组织优选的启动子的另外的实例包括但不限于根特异性启动子rcc3(jeong等人plantphysiol.[植物生理学]153:185-197(2010))和rb7(美国专利号5459252)、凝集素启动子(lindstrom等人(1990)der.genet.[基因技术]11:160-167；和vodkin(1983)prog.clin.biol.res.[临床生物研究进展]138:87-98)、玉米乙醇脱氢酶1启动子(dennis等人(1984)nucleicacidsres.[核酸研究]12:3983-4000)、s-腺苷基-l-甲硫氨酸合成酶(sams)(vandermijnsbrugge等人(1996)plantandcellphysiology[植物和细胞生理学],37(8):1108-1115)、玉米集光复合体启动子(bansal等人(1992)proc.natl.acad.sci.usa[美国国家科学院院刊]89:3654-3658)、玉米热激蛋白启动子(o'dell等人(1985)emboj.[欧洲分子生物学杂志]5:451-458)；和rochester等人(1986)emboj.[欧洲分子生物学杂志]5:451-458)、豌豆小亚基rubp羧化酶启动子(cashmore,“nucleargenesencodingthesmallsubunitofribulose-l,5-bisphosphatecarboxylase[编码核酮糖-1,5-二磷酸羧化酶的小亚基的核基因]”第29-39页，于geneticengineeringofplants[植物基因工程]中(hollaender编辑,plenumpress[普莱南出版社]1983；和poulsen等人(1986)mol.gen.genet.[分子遗传学与普通遗传学]205:193-200)、ti质粒甘露氨酸合酶启动子(langridge等人(1989)proc.natl.acad.sci.usa[美国国家科学院院刊]86:3219-3223)、ti质粒胭脂碱合酶启动子(langridge等人(1989),同上)、矮牵牛查尔酮异构酶启动子(vantunen等人(1988)emboj.[欧洲分子生物学杂志]7:1257-1263)、菜豆富甘氨酸蛋白1启动子(keller等人(1989)genesdev.[基因与发育]3:1639-1646)、截短camv35s启动子(o'dell等人(1985)nature[自然]313:810-812)、马铃薯糖蛋白启动子(wenzler等人(1989)plantmol.biol.[植物分子生物学]13:347-354)、根细胞启动子(yamamoto等人(1990)nucleicacidsres.[核酸研究]18:7449)、玉米醇溶蛋白启动子(kriz等人(1987)mol.gen.genet.[分子遗传学与普通遗传学]207:90-98；langridge等人(1983)cell[细胞]34:1015-1022；reina等人(1990)nucleicacidsres.[核酸研究]18:6425；reina等人(1990)nucleicacidsres.[核酸研究]18:7449；和wandelt等人(1989)nucleicacidsres.[核酸研究]17:2354)、球蛋白-1启动子(belanger等人(1991)genetics[遗传学]129:863-872)、α-微管蛋白cab启动子(sullivan等人(1989)mol.gen.genet.[分子遗传学与普通遗传学]215:431-440)、pepcase启动子(hudspeth和grula(1989)plantmol.biol.[植物分子生物学]12:579-589)、r基因复合物相关启动子(chandler等人(1989)plantcell[植物细胞]1:1175-1183)以及查尔酮合酶启动子(franken等人(1991)emboj.[欧洲分子生物学杂志]10:2605-2612)。特别可用于种子特异性表达的是豌豆球蛋白启动子(czako等人(1992)mol.gen.genet.[分子遗传学与普通遗传学]235:33-40)；以及披露在美国专利号5,625,136中的种子特异性启动子。在一些实施例中，启动子可以是胚乳特异性启动子，包括但不限于玉蜀黍γ-玉米蛋白启动子或玉蜀黍adp-gpp启动子。可用于成熟的叶中表达的启动子是当衰老开始时开启的那些启动子，如来自拟南芥属(arabidopsis)的sag启动子(gan等人(1995)science[科学]270:1986-1988)。此外，可以使用在质体中发挥作用的启动子。此类启动子的非限制性实例包括噬菌体t3基因95'utr以及其他的披露于美国专利号7,579,516中的启动子。适用于本发明的其他启动子包括但不限于s-e9小亚基rubp羧化酶启动子和kunitz胰蛋白酶抑制剂基因启动子(kti3)。在本发明的一些实施例中，可以使用诱导型启动子。因此，例如，可以使用化学调节的启动子以通过应用外源化学调节物来调节植物中的基因表达。核苷酸序列的表达经由化学调节过的启动子进行的调节使得本发明的多肽仅当用诱导的化学品处理作物植物时能被合成。取决于目的，在应用化学物诱导基因表达时启动子可以是化学诱导型启动子，或者在应用化学物阻抑基因表达时启动子可以是化学阻抑型启动子。化学诱导型启动子在本领域是已知的，并且包括但不限于玉蜀黍in2-2启动子(它是由苯磺酰胺除草剂安全剂激活)、玉蜀黍gst启动子(它是由用作发芽前除草剂的疏水亲电子化合物激活)、以及烟草pr-1a启动子(它是由水杨酸激活)(例如，pr1a系统)、类固醇反应性启动子(参见例如，schena等人(1991)proc.natl.acad.sci.usa[美国国家科学院院刊]88,10421-10425和mcnellis等人(1998)plantj.[植物杂志]14,247-257)中的糖皮质激素诱导型启动子)以及四环素诱导型启动子和四环素-阻抑型启动子(参见例如，gatz等人(1991)mol.gen.genet.[分子遗传学与普通遗传学]227,229-237和美国专利号5,814,618和5,789,156)、lac阻遏物系统启动子、铜诱导型系统启动子、水杨酸诱导型系统启动子(例如，pr1a系统)、糖皮质激素诱导型启动子(aoyama等人(1997)plantj.[植物杂志]11:605-612)以及蜕皮激素诱导型系统启动子。诱导型启动子的其他非限制性实例包括aba诱导型和细胞膨胀诱导型启动子、植物生长素结合蛋白基因启动子(schwob等人(1993)plantj.[植物杂志]4:423-432)、udp葡萄糖类黄酮糖基转移酶启动子(ralston等人(1988)genetics[遗传学]119:185-197)、mpi蛋白酶抑制剂启动子(cordero等人(1994)plantj.[植物杂志]6:141-150)以及甘油醛-3-磷酸脱氢酶启动子(kohler等人(1995)plantmol.biol.[植物分子生物学]29:1293-1298；martinez等人(1989)j.mol.biol.[分子生物学杂志]208:551-565；和quigley等人(1989)j.mol.evol.[分子进化杂志]29:412-421)。还包括苯磺酰胺诱导型(美国专利号5,364,780)和乙醇诱导型(国际专利申请公开号wo97/06269和wo97/06268)系统和谷胱甘肽s-转移酶启动子。同样地，可以使用描述于以下文献中的诱导型启动子中的任一种：gatz(1996)currentopinionbiotechnol.[生物技术新见]7:168-172和gatz(1997)annu.rev.plantphysiol.plantmol.biol.[植物生理学与植物分子生物学年度综述]48:89-108。适用于指导本发明的核苷酸序列在植物中的表达的其他化学诱导型启动子披露于美国专利5,614,395中，将该专利通过引用以其全文并入本文。基因表达的化学诱导还详述于公开申请ep0332104(授予汽巴-嘉基)和美国专利5,614,395中。在一些实施例中，用于化学诱导的启动子可以是烟草pr-1a启动子。本发明的多肽可以或可以不通过使用信号序列被靶向植物内的区室。已知多种信号肽影响多核苷酸的表达或将多核苷酸靶向到特定的区室/组织中或特定的区室/组织外。适合的信号序列和靶向启动子在本领域是已知的并且包括但不限于本文提供的那些(参见例如，美国专利号7,919,681)。靶标的实例包括但不限于液泡、内质网(er)、叶绿体、造粉体、淀粉粒、细胞壁、种子，或不限于特定的组织，例如胚乳。因此，编码本发明的多肽(例如，seqidno:1)的核苷酸序列可以可操作地连接到用于将该多肽靶向和/或保留至植物内的区室的信号序列。在一些实施例中，信号序列可以是来自waxy的n-末端信号序列、来自γ-玉米蛋白的n-末端信号序列、淀粉结合结构域、或c-末端淀粉结合结构域。在另外的实施例中，信号序列可以是er信号序列、er保留序列、er信号序列和另外的er保留序列。因此，在本发明的一些实施例中，α-淀粉酶多肽可以与一个或多个信号序列融合(和/或编码该多肽的核苷酸序列可以可操作地连接到编码该信号序列的核苷酸序列)。如本文所用的，“表达盒”意指包含目的核苷酸序列(例如，seqidno:2、seqidno:3、seqidno:4和/或seqidno:5的核苷酸序列)的核酸分子，其中该核苷酸序列与至少一个控制序列(例如，启动子)可操作地关联。因此，本发明的一些实施例提供了设计为表达seqidno:2、seqidno:3、seqidno:4和/或seqidno:5的核苷酸序列的表达盒。以这种方式，例如，可以在用以在生物体或其细胞(例如，植物、植物部分和/或植物细胞)中表达的表达盒中提供与seqidno:2、seqidno:3、seqidno:4和/或seqidno:5的核苷酸序列或与seqidno:2、seqidno:3、seqidno:4和/或seqidno:5的核苷酸序列具有显著同一性的核苷酸序列可操作地关联的一个或多个植物启动子。包含目的核苷酸序列的表达盒可以是嵌合的，意味着它的组分中的至少一种相对于它的其他组分中的至少一种而言是异源的。表达盒还可以是天然存在但已经是以适用于异源表达的重组形式获得的表达盒。然而，典型地，该表达盒相对于该宿主而言是异源的，即该表达盒的特定核酸序列不是天然存在于该宿主细胞中的，并且必须已经通过转化事件引入到该宿主细胞或该宿主细胞的祖先中。除可操作地连接至待表达的核苷酸序列的启动子之外，表达盒还可以包括其他调节序列。如本文所用的，“调节序列”意指位于编码序列的上游(5'非编码序列)、内部和/或下游(3'非编码序列)和/或影响相关编码序列的转录、rna加工或稳定性、或翻译的核苷酸序列。调节序列包括但不限于启动子、增强子、内含子、翻译前导序列、终止信号、以及聚腺苷酸化信号序列。在一些实施例中，表达盒还可以包括编码可操作地连接到本发明的多核苷酸序列的信号序列的核苷酸序列。出于本发明的目的，这些调节序列或区域相对于植物、植物部分和/或植物细胞可以是天然的/类似的，和/或这些调节序列相对于其他调节序列可以是天然的/类似的。可替代地，这些调节序列相对于植物(和/或植物部分和/或植物细胞)和/或相对于彼此(即，这些调节序列)可以是异源的。因此，例如，当启动子可操作地连接至来自一个物种的多核苷酸(该物种与多核苷酸所来源的物种不同)时，该启动子可以是异源的。可替代地，如果启动子是来自与多核苷酸所来源的物种相同/类似的物种，则该启动子相对于选定的核苷酸序列也可以是异源的，但是一者或两者(即，启动子和/或多核苷酸)是从其原始形式和/或基因组的基因座进行大致修饰的，和/或该启动子不是可操作地连接的多核苷酸的天然启动子。已知源自病毒的多个非翻译前导序列用来增强基因表达。确切地说，来自烟草花叶病毒(tmv，“ω-序列”)、玉蜀黍褪绿斑驳病毒(mcmv)以及苜蓿花叶病毒(amv)的前导序列已显示有效增强表达(gallie等人(1987)nucleicacidsres.[核酸研究]15:8693-8711；和skuzeski等人(1990)plantmol.biol.[植物分子生物]15:65-79)。本领域已知的其他前导序列包括但不限于小核糖核酸病毒前导子，如脑心肌炎(emcv)5'非编码区前导子(elroy-stein等人(1989)proc.natl.acad.sci.usa[美国国家科学院院刊]86:6126-6130)；马铃薯y病毒组前导子，如烟草蚀纹病毒(tev)前导子(allison等人(1986)virology[病毒学]154:9-20)；玉蜀黍矮花叶病毒(mdmv)前导子(allison等人(1986),同上)；人免疫球蛋白重链结合蛋白(bip)前导子(macejak和samow(1991)nature[自然]353:90-94)；来自amv的外壳蛋白mrna的非翻译前导子(amvrna4；jobling和gehrke(1987)nature[自然]325:622-625)；烟草花叶病tmv前导子(gallie等人(1989)molecularbiologyofrna[rna分子生物学]237-256)；以及mcmv前导子(lommel等人(1991)virology[病毒学]81:382-385)。还参见，della-cioppa等人(1987)plantphysiol.[植物生理学]84:965-968。表达盒还可以任选地包括在植物中发挥作用的转录和/或翻译终止区(即，终止区)。多种转录终止子是可供用于在表达盒中使用的并且负责在超出目的异源核苷酸序列时的转录终止以及正确的mrna聚腺苷酸化。终止区对于转录起始区可以是天然的，对于可操作地连接的目的核苷酸序列可以是天然的，对于植物宿主可以是天然的，或者可以是源自另一种来源(即，对于启动子、目的核苷酸序列、植物宿主、或其任何组合而言是外来的或异源的)。适当的转录终止子包括但不限于camv35s终止子、tml终止子、胭脂碱合酶终止子和/或豌豆rbcse9终止子。这些终止子可以在单子叶植物和双子叶植物两者中使用。此外，可以使用编码序列的天然转录终止子。本发明的表达盒还可以包括用于选择性标记的核苷酸序列，该选择性标记可以用于选择转化的植物、植物部分和/或植物细胞。如本文所用的，“选择性标记(selectablemarker)”意指如下核苷酸序列，当该核苷酸序列表达时向表达该标记的植物、植物部分和/或植物细胞赋予不同的表型，并且因此允许此类转化的植物、植物部分和/或植物细胞与不具有该标记的那些区别开来。这样的核苷酸序列可以编码选择性或筛选性标记，这取决于该标记是否赋予可以通过化学手段而被选择的性状，如通过使用选择剂(例如，抗生素、除草剂等)，或者取决于该标记是否仅是人们可以通过观察或测试而鉴别的性状，如通过筛选(例如，r基因座性状)。当然，适合的选择性标记的许多实例在本领域是已知的并且可以用于本文所述的表达盒中。选择性标记的实例包括但不限于编码neo或nptii的核苷酸序列，它赋予对卡那霉素、g418等的抗性(potrykus等人(1985)mol.gen.genet.[分子遗传学与普通遗传学]199:183-188)；编码bar的核苷酸序列，它赋予对草丁膦的抗性；编码改变的5-烯醇丙酮莽草酸-3-磷酸(epsp)合酶的核苷酸序列，它赋予对草甘膦的抗性(hinchee等人(1988)biotech.[生物技术]6:915-922)；编码腈水解酶(如来自臭鼻克雷白氏杆菌(klebsiellaozaenae)的bxn)的核苷酸序列，它赋予对溴草腈的抗性(stalker等人(1988)science[科学]242:419-423)；编码改变的乙酰乳酸合酶(als)的核苷酸序列，它赋予对咪唑啉酮、磺酰脲或其他als-抑制化学品的抗性(欧洲专利申请号154204)；编码甲氨蝶呤抗性的二氢叶酸还原酶(dhfr)的核苷酸序列(thillet等人(1988)j.biol.chem.[生物化学杂志]263:12500-12508)；编码茅草枯脱卤素酶的核苷酸序列，它赋予对茅草枯的抗性；编码甘露糖-6-磷酸异构酶(也称为磷酸甘露糖异构酶(pmi))的核苷酸序列，它赋予代谢甘露糖的能力(美国专利号5,767,378和5,994,629)；编码改变的邻氨基苯甲酸合酶的核苷酸序列，它赋予对5-甲基色氨酸的抗性；和/或编码hph的核苷酸序列，它赋予对潮霉素的抗性。本领域技术人员能够选择用于在本发明的表达盒中使用的适合的选择性标记。另外的选择性标记包括但不限于：编码β-葡萄糖醛酸酶或uida(gus、编码一种不同的显色底物已知的酶的核苷酸序列；编码一种调节花青素颜料(红色)在植物组织中的产生的产物的r-基因座核苷酸序列(dellaporta等人,“molecularcloningofthemaizer-njallelebytransposon-taggingwithac[通过用ac进行转座子-标记的玉蜀黍r-nj等位基因的分子克隆]”,第263-282页，于chromosomestructureandfunction:impactofnewconcepts[染色体结构和功能：新概念的影响]，18thstadlergeneticssymposium[第18次斯塔德勒遗传学研讨会]中(gustafson和appels编辑,plenumpress[普莱纽姆出版社]1988))；编码β-内酰胺酶(一种不同的显色底物(例如，padac，一种显色的头孢菌素)已知的酶)的核苷酸序列(sutcliffe(1978)proc.natl.acad.sci.usa[美国国家科学院院刊]75:3737-3741)；编码xyle(编码邻苯二酚双加氧酶)的核苷酸序列(zukowsky等人(1983)proc.natl.acad.sci.usa[美国国家科学院院刊]80:1101-1105)；编码酪氨酸酶(一种能够将酪氨酸氧化成dopa和多巴醌(它们又缩合形成黑色素)的酶)的核苷酸序列(katz等人(1983)j.gen.microbiol.[普通微生物学杂志]129:2703-2714)；编码β-半乳糖苷酶(一种存在显色底物的酶)的核苷酸序列；编码允许生物体发光检测的荧光素酶(lux)的核苷酸序列(ow等人(1986)science[科学]234:856-859)；编码可以用于钙敏感性的生物体发光检测中的水母发光蛋白的核苷酸序列(prasher等人(1985)biochem.biophys.res.comm.[生物化学与生物物理研究通讯]126:1259-1268)；或者编码绿色荧光蛋白的核苷酸序列(niedz等人(1995)plantcellreports[植物细胞报告]14:403-406)。本领域技术人员能够选择用于在本发明的表达盒中使用的适合的选择性标记。在本发明的其他方面，提供了增加动物(例如，为产肉而饲养的动物)的生长速率(增重)或平均日增重的方法，该方法包括向该动物饲喂本发明的动物饲料组合物。在实施例中，该动物的生长速率或该动物的平均日增重与未提供本发明的动物饲料组合物的对照动物的生长速率相比增加约0.05磅/天至约10磅/天。因此，在一些实施例中，生长速率或平均日增重的增加可以为至少约0.05、0.06、0.07、0.08、0.09、0.1、0.1、0.125、0.15、0.175、0.2、0.225、0.25、0.275、0.3、0.325、0.35、0.375、0.4、0.425、0.45、0.475、0.5、0.525、0.55、0.575、0.6、0.625、0.65、0.675、0.7、0.725、0.75、0.775、0.8、0.825、0.85、0.875、0.9、0.925、0.95、0.975、1、1.25、1.5、1.75、2、2.25、2.5、2.75、3、3.25、3.5、3.75、4、4.1、4.2、4.21、4.22、4.23、4.24、4.25、4.26、4.27、4.28、4.29、4.3、4.31、4.32、4.33、4.34、4.35、4.36、4.37、4.38、4.39、4.4、4.41、4.42、4.43、4.44、4.45、4.46、4.47、4.48、4.49、4.5、4.75、5、5.25、5.5、5.75、6、6.25、6.5、6.75、7、7.25、7.5、7.75、8、8.25、8.5、8.75、9、9.25、9.5、9.75、10磅/天等，和/或其中的任何范围。在一些特定实施例中，生长速率或平均日增重的增加可以是从约0.05磅/天到约0.5磅/天。在另外的实施例中，与未提供该动物饲料组合物的对照动物的生长相比，生长速率或平均日增重的增加可以是约0.1磅/天。在本发明的再另外的方面，提供了用于减少动物达到所希望重量而需要的天数的方法，该方法包括向该动物喂食本发明的动物饲料组合物，从而与未饲喂该动物饲料组合物的对照动物达到相同所希望重量而需要的天数相比，减少达到所希望重量而需要的天数。如本文所用的，“所希望重量”或“所希望育肥重量(finishedweight)”可以意指活重或热胴体重。因此，例如，对于牛，所希望的活重可以在约950至约1,600磅之间，并且所希望的热胴体重可以在约700至约1,000磅之间。通常，在断奶后且在进入饲养场之前，“肉用育前牛(backgrounderbeefcattle)”(也称为“食用牛(stockercattle)”)的大部分时间都会在放牧区或牧场上放牧度过，并且然后被运送到向它们饲喂谷物和其他精饲料的育肥饲养场。然而，根据本发明，可以用断奶后的(任选地，饲养至饲养场进行育肥后的)肉用育前牛(例如生长中的肉用犊牛(雄性和/或雌性))来实践本发明的方法。通常，牛在约600至约750磅的重量时进入饲养场。取决于安置时的重量、饲喂条件和所希望的育肥重量，在饲养场中的时间可以是在约90天至约300天的范围内。平均增加可以是从约2.5至约5磅/天。因此，在本发明的另一方面，饲喂本发明的动物饲料组合物的动物与未饲喂该动物饲料组合物的对照动物相比，达到所希望重量而需要的天数可以减少约1天至约30天。在一些实施例中，饲喂本发明的动物饲料组合物的动物与未饲喂该动物饲料组合物的对照动物相比，达到所希望重量而需要的天数可以减少约1天至约25天、约1天至约20天、约5天至约20天、约5天至约15天等。因此，在一些实施例中，饲喂本发明的动物饲料组合物的动物达到所希望重量而需要的天数可以减少约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30天等，和/或其中的任何范围。在本发明的其他方面，提供了增加动物(例如，在产肉、产乳、产蛋和/或产毛)的饲料利用效率的方法，该方法包括以与未饲喂该动物饲料组合物的对照动物相比有效于增加该动物的饲料利用效率的量向该动物喂养本发明的动物饲料组合物。饲料利用效率可以计算为干物质摄入除以动物体重增加。在一些实施例中，体重是宰杀之前的育肥体重。在另外的实施例中，提供的饲料是在约15、30、45、60或90天至约30、60、90、120、150、180、240、或300天(以及其中的任何范围，只要范围的下限值小于范围的上限值)的时间段内提供的饲料量。在一些实施例中，提供的饲料是在约100天至约275天、约125天至约250天、约150天至约225天、约180天至约200天等的时间段内提供的饲料量。因此，在一些实施例中，测量增重的时间段(天数)是15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、199、200、201、202、203、204、205、206、207、208、209、210、211、212、213、214、215、216、217、218、219、220、221、222、223、224、225、226、227、228、229、230、231、232、233、234、235、236、237、238、239、240、241、242、243、244、245、246、247、248、249、250、251、252、253、254、255、256、257、258、259、260、261、262、263、264、265、266、267、268、269、270、271、272、273、274、275、276、277、278、279、280、281、282、283、284、285、286、287、288、289、290、291、292、293、294、295、296、297、298、299、300天等，和/或其中的任何范围。在本发明的另外的方面，该动物的玉米的饲用价值与未饲喂该动物饲料组合物的对照动物相比，增加约1％至约25％。玉米的饲用价值等于本发明的饲料组合物的饲料效率和未饲喂该饲料组合物的对照动物的饲料效率的差异，除以未饲喂该饲料组合物的该对照动物的饲料效率，所有都除以该饲料组合物包括的玉米的百分比。因此，在一些实施例中，玉米的饲用价值的增加可以为约1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％等，和/或其中的任何范围。在特定实施例中，与对照相比，玉米饲料价值的增加为约1％至约10％。在代表性实施例中，与对照相比，饲料价值的增加为约5％。在本发明的另外的方面，该动物的饲料增重比与未饲喂该动物饲料组合物的对照动物相比任选地降低了约0.005至约0.1。饲料利用效率(也称为“f:g”)是每天摄入的干物质除以动物的平均日增重。因此，在一些实施例中，饲料增重比的降低可以为至少约0.005、0.006、0.007、0.008、0.009,0.01、0.011、0.012、0.013、0.014、0.015、0.016、0.017、0.018、0.019、0.02、0.021、0.022、0.023、0.024、0.025、0.026、0.027、0.028、0.029、0.03、0.035、0.04、0.045、0.05等，或其中的任何范围。在特定实施例中，与对照相比，饲料增重比的降低为约0.005、0.01,或0.015至约0.01、0.015、0.02、0.025、0.03、0.035、0.040、0.045、0.05、0.055、0.06、0.065、0.07、或0.075(包括下限值和上限值的任意组合，只要下限值小于上限值)。在另外的实施例中，本发明提供了提高乳畜在产乳中的饲料利用效率的方法，该方法包括以有效提高该乳畜的饲料利用效率的量向动物饲喂本发明的动物饲料组合物。饲料利用效率可以计算为每头每天产生的乳量(磅)除以基于干物质消耗的饲料量。在实施例中，产乳效率增加了至少约0.01、0.02、0.03、0.04、0.05、0.06、0.07、0.08、0.09或0.1。在另外的实施例中，产乳效率增加了约0.01至约0.01、0125、0.015或0.2；约0.02至约0.01、0.0125、0.015或0.2；约0.03至约0.01、0.0125、0.015或0.2；约0.04至约0.01、0.0125、0.015或0.2；或约0.05至约0.01、0.0125、0.015或0.2。在一些实施例中，饲喂动物约1磅至约30磅/动物/天的本发明的动物饲料组合物。因此，在一些实施例中，饲喂动物约1磅、2磅、3磅、4磅、5磅、6磅、7磅、8磅、9磅、10磅、11磅、12磅、13磅、14磅、15磅、16磅、17磅、18磅、19磅、20磅、21磅、22磅、23磅、24磅、25磅、26磅、27磅、28磅、29磅、30磅/动物/天的本发明的动物饲料组合物等，和/或其中的任何范围。在一些实施例中，饲喂动物约9磅至约21磅/动物/天的本发明的动物饲料组合物。在一些实施例中，可以随意饲喂动物本发明的动物饲料组合物，或约一次至约三次(例如，1、2、3)/天或其任何组合。本发明的动物饲料组合物可以饲喂给任何动物，例如农场动物、动物园动物、实验动物和/或伴侣动物。在实施例中，动物是反刍动物。在一些实施例中，动物可以是但不限于牛科动物(例如，家牛(包括普通牛(bostaurus)和/或瘤牛(b.indicus)，[例如乳牛和/或肉用牛])、野牛、水牛)、马科动物(例如，马、驴、斑马等)、禽类(例如，鸡、鹌鹑、火鸡、鸭等；例如，家禽)、绵羊、山羊、羚羊、猪科动物(例如，猪)、犬科动物、猫科动物、啮齿动物(例如，小鼠、大鼠、豚鼠)、兔、鱼等。家牛包括小牛、阉牛、小母牛和/或乳牛。在实施例中，为牛肉而饲养的驯养牛科动物(domesticatedbovine)是阉牛和/或小母牛(例如，在饲养场)。在实施例中，为牛肉而饲养的驯养牛科动物是断奶后生长中的小牛(例如，肉用育前牛或食用犊牛(stockerbeefcalf))，任选地将其饲养至饲养场进行育肥。家养乳畜包括乳牛和/或山羊。在一些实施例中，动物可以是家禽。在其他实施例中，动物可以是鸡。在另外的实施例中，动物可以是猪。在再另外的实施例中，动物可以是猪科动物。根据本发明的增加为产肉而饲养的动物的增重和/或饲料利用效率的方法，可以向动物饲喂本发明的动物饲料组合物持续任何合适的时间以达到所希望的结果。在实施例中，向动物饲喂本发明的组合物持续至少约15、30、45、60或90天至约30、60、90、120、150、180、240、或300天(以及其中的任何范围，只要下限值小于上限值)。在一些实施例中，向动物饲喂本发明的动物饲料持续约30天至约275天、约45天至约250天、约60天至约225天、约75天至约200天、约100天至约275天、约125天至约250天、约150天至约225天、约180天至约200天等的时间段。因此，在一些实施例中，向动物饲喂本发明的动物饲料组合物持续至少约15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、199、200、201、202、203、204、205、206、207、208、209、210、211、212、213、214、215、216、217、218、219、220、221、222、223、224、225、226、227、228、229、230、231、232、233、234、235、236、237、238、239、240、241、242、243、244、245、246、247、248、249、250、251、252、253、254、255、256、257、258、259、260、261、262、263、264、265、266、267、268、269、270、271、272、273、274、275、276、277、278、279、280、281、282、283、284、285、286、287、288、289、290、291、292、293、294、295、296、297、298、299、300或更多天等，和/或其中的任何范围。在肉用牛的情况下，可以在预饲阶段和/或育肥(饲养场)阶段向动物饲喂动物饲料组合物。在另外的实施例中，本发明提供了增加乳畜(例如，乳牛、山羊等)产生的乳量(例如，以体积或重量测量)的方法，该方法包括向该乳畜饲喂本发明的动物饲料组合物。在实施例中，与未提供本发明的动物饲料组合物的对照动物产生的乳量相比，该动物产生的乳量增加了约1％、2％、3％、4％、或5％至约10％、15％、20％、25％、50％、75％、100％、125％、150％或200％(包括下限值和上限值的任意组合所涵盖的范围)。在其他实施例中，该动物产生的乳量增加了约1％至约50％、约2％至约50％、约1％至约25％、约2％至约25％、约1％至约15％、约2％至约15％、约1％至约10％、约2％至约10％等。在另外的实施例中，该动物产生的乳量与未饲喂本发明的动物饲料组合物的对照动物相比，增加了至少约1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、100％、105％、110％、115％、120％、125％、130％、135％、140％、145％、150％、155％、160％、165％、170％、175％、180％、185％、190％、195％和/或200％。可以在整个泌乳周期中的任何合适的时间段内(例如每天(例如24小时)、约48小时、约72小时、每周、每月或甚至总产乳期)测量泌乳的增加。根据本发明的增加乳畜的产乳和/或饲料利用效率的方法，可以向动物饲喂本发明的动物饲料组合物持续任何合适的时间以达到所希望的结果。在实施例中，向动物饲喂本发明的组合物持续至少约15、30、45、60或90天至约30、60、90、120、150、180、240、或300天(以及其中的任何范围，只要下限值小于上限值)。在一些实施例中，向动物饲喂本发明的动物饲料持续约30天至约275天、约45天至约250天、约60天至约225天、约75天至约200天等的时间段。因此，在一些实施例中，向乳畜饲喂本发明的动物饲料组合物持续至少约15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、199、200、201、202、203、204、205、206、207、208、209、210、211、212、213、214、215、216、217、218、219、220、221、222、223、224、225、226、227、228、229、230、231、232、233、234、235、236、237、238、239、240、241、242、243、244、245、246、247、248、249、250、251、252、253、254、255、256、257、258、259、260、261、262、263、264、265、266、267、268、269、270、271、272、273、274、275、276、277、278、279、280、281、282、283、284、285、286、287、288、289、290、291、292、293、294、295、296、297、298、299、300或更多天等，和/或其中的任何范围。此外，可以在干乳期(例如，在妊娠期间，任选地至少在妊娠的最后2、3、4、6或8周内)和/或泌乳期向乳畜饲喂动物饲料组合物。本发明还考虑了治疗、预防和/或减少动物中微生物或真菌感染的发作、持续时间和/或严重程度的方法。在实施例中，动物是反刍动物(例如，如上所述的牛科动物，包括肉用牛和乳牛)。在实施例中，感染是细菌、酵母和/或原生动物感染。在实施例中，感染是肠(例如，后肠)感染。在实施例中，感染是梭菌属物种(例如，产气荚膜梭菌(c.perfringens)，任选地产气荚膜梭菌a型)的感染。不受本发明任何理论的限制，本领域已知肠(特别是后肠)中未消化的淀粉可导致微生物感染。因此，本发明的动物饲料中淀粉消化率的改善可能有利于治疗、预防和/或减少微生物感染的发作、持续时间和/或严重程度。如本文所用的，术语“增加/提高(increase、increasing、increased)”、“增强(enhance、enhanced、enhancing和enhancement)”(及其语法变体)描述了由向动物饲喂本发明的动物饲料组合物而导致的特定参数的增加，其中与不饲喂本发明的动物饲料组合物(例如，饲喂不含外源α淀粉酶的常规饲料)的动物(即，对照)相比，特定参数提高。如本文使用的，术语“减少(reduce、reduced、reducing、reduction)”、“减小”、“抑制”和“降低”(及其语法变体)描述了例如由向动物饲喂本发明的动物饲料组合物而导致的特定参数的降低或减少，其中与合适的对照动物(例如，未饲喂包含外源α淀粉酶的动物饲料组合物的对照动物)相比，特定参数变低。本发明在以下实例中进行更具体地描述，这些实例仅意在是说明性的，因为其中众多改变与变体对于本领域内的普通技术人员是明显的。实例1肉用牛育肥研究实验1在内布拉斯加州米德(mead)附近的unl农业研究开发中心(agriculturalresearchanddevelopmentcenter，ardc)饲养场，在饲养场育肥试验中利用了三百头杂交阉牛(初始bw＝658±36磅)。在开始实验之前五天，牛被限制饲喂由32％玉米湿酒糟加可溶物、32％苜蓿干草、32％干轧玉米和4％补充剂(dm基础)组成的2％bw的饮食。在第0天和第1天记录两天的初始重量，取平均值并将其用作初始bw。将阉牛按bw区组化成轻、中和重bw区组(分别为n＝3、2和1围栏重复)，按bw分层，并随机分配到30个围栏之一中，这些围栏随机分配到五种饮食处理之一。有10头/围栏和6个重复/处理。在随机化区组设计中，饮食处理包括1)商业玉米来源(con)，2)测试玉米(syn)，3)con和syn的50:50共混物，4)con与湿玉米谷蛋白饲料(con-sb)和5)syn与湿玉米谷蛋白饲料(syn-sb)(表1)。在21天的时间段内使阉牛适应玉米替代了苜蓿干草的育肥饮食，而在所有饮食中包括玉米青贮饲料、玉米湿酒糟加可溶物(wdgs)和补充剂保持不变。在含有湿玉米谷蛋白饲料(sweet(嘉吉公司(cargill))；sb)的饮食中，所有谷粒适应饮食中的浓度保持不同。饮食被配制为满足或超过蛋白质和矿物质的nrc要求。最终育肥饮食提供360mg/阉牛/天的(30g/吨的dm)和90mg/阉牛/天的(9g/吨的dm)。在第1天阉牛植入在第173天，在商业屠宰场(内布拉斯加州，奥马哈，大奥马哈包装公司(greateromahapack))收获所有的阉牛。在宰杀的那天收集最终的活bw，并采用4％的笔形收缩(pencilshrink)计算屠宰率(dressingpercentage)。在第173天供应的饲料是前一天dmi的50％，并且在下午4:00称重。然后阉牛被运送并保持直到第二天宰杀。在宰杀的那天记录热胴体重和肝脏得分。在48小时冷冻后记录脂肪厚度、lm面积和usda大理石纹得分。使用调整到常见63％屠宰率的hcw计算最终bw、adg和f:g。实验2在内布拉斯加州斯科茨布拉夫附近的unl潘汉德尔研究与推广中心(panhandleresearchandextensioncenter，phrec)饲养场，在饲养场育肥试验中利用了二百四十头杂交阉牛(初始bw＝634±34磅)。牛限制饲喂和初始bw方案与实验1相同。将阉牛按bw区组化成轻、中和重bw区组，按bw分层，并随机分配到24个围栏之一中，这些围栏随机分配到四种饮食处理之一。有10头/围栏和6个重复/处理。饮食处理包括1)con，2)syn，3)blend以及4)con，将酶(amaize；奥特奇公司(alltech,inc.))以5g/阉牛/天的比率添加到饮食中(nz；表2)。限制饲喂、称重、区组化、植入和谷粒适应程序与实验1相同。在第148、169和181天(分别)，在商业屠宰场(嘉吉肉制品公司(cargillmeatsolutions)，科罗拉多州摩根堡)收获重、中、和轻bw区组的阉牛。在最后一天，阉牛禁食饲料，并在上午8:00称重，然后运送并在同一天宰杀。作为随机化区组设计分析数据，初始bw区组作为固定效应，并且围栏作为实验单位。表1.评估含有或不含sweetbran的测试玉米和常规玉米的饮食处理(实验1)。1常规玉米，含有湿玉米谷蛋白饲料sweetbran2先正达(syngenta)测试玉米，含有湿玉米谷蛋白饲料sweetbran3由先正达在身份保留程序下提供的测试玉米。单独储存、加工和饲喂4mdgs＝具有可溶物的改性酒糟5补充剂包括30g/吨和9g/吨表2.评估含有或不含添加酶的测试玉米和常规玉米的饮食处理(实验2)。2液体补充剂含有：0.6％尿素、1.6％ca、0.3％盐、0.02％氯化钾、维生素和痕量矿物质。3通过微型机械添加(30g/吨)和(9g/吨)。4通过微型机械以5g/阉牛/天的比率添加酶表3.在不含sweetbran的情况下玉米杂种对育肥阉牛性能和胴体特征的影响(实验1)1con＝对照商业玉米杂种(hybrid)，syn＝先正达测试玉米杂种，blend＝在dm基础上con和syndm的50:50共混物。4从调整到常见63％屠宰率的hcw计算。5作为g:f分析，f:g的倒数。6大理石纹得分：300＝微量(slight)00，400＝少量(small)00。7计算为2.5+(2.5x第12肋部脂肪)+(0.2x2.5[kph])+(0.0038xhcw)–(0.32xlm面积)。a,b具有不同上标的行内平均值不同(p<0.05)。表4.玉米杂种和包括sweetbran对育肥阉牛性能和胴体特征的影响(实验1)10％sb＝不含sweetbran的饮食，25％sb＝含有25％sweetbran的饮食，con＝商业玉米杂种，syn＝先正达测试玉米。3从调整到常见63％屠宰率的hcw计算。4作为g:f分析，f:g的倒数。5大理石纹得分：300＝微量(slight)00，400＝少量(small)00。6计算为2.5+(2.5x第12肋部脂肪)+(0.2x2.5[kph])+(0.0038xhcw)–(0.32xlm面积)。a,b,c具有不同上标的行内平均值不同(p<0.05)。表5.玉米杂种和包括α淀粉酶对育肥阉牛性能和胴体特征的影响(实验2)1con＝商业玉米杂种，syn＝先正达测试玉米，blend＝在dm基础上con和syndm的50:50共混物，nz＝基于con的饮食中包括可商购的α淀粉酶。23从调整到常见63％屠宰率的hcw计算。4作为g:f分析，f:g的倒数。5大理石纹得分：300＝微量(slight)00，400＝少量(small)00。6计算为2.5+(2.5x第12肋部脂肪)+(0.2x2.5[kph])+(0.0038xhcw)–(0.32xlm面积)。a,b具有不同上标的行内平均值不同(p<0.05)。实验3在随机化区组设计中，利用多头杂交阉牛(初始bw(体重)＝685±46磅)进行173天育肥试验。在实验开始之前五天，阉牛被限制饲喂由47.5％苜蓿干草、47.5％湿玉米谷蛋白饲料和5％补充剂(dm(干物质)基础)组成的2％bw的饮食。在第0天和第1天记录两天的初始重量，并取平均值以确定初始bw。随着在第1天测量初始bw，阉牛植入将阉牛按bw区组化成轻和重bw区组，按bw分层，并随机分配到围栏中。然后将围栏以8头/围栏和6个重复/处理随机分配到饮食处理中。基于包括测试玉米或对照(或非)和副产品类型(mdgs(具有可溶物的改性酒糟)或sweetbran)在内的因子安排的饮食处理(表6)。本试验中利用的副产品作为蛋白源(18％mdgs)或作为酸中毒控制手段(35％sb(sweet(嘉吉公司)))提供。在21天的时间段内使阉牛适应玉米替代了苜蓿干草的育肥饮食，而在所有饮食中包括高粱青贮饲料、sweetbran或mdgs和补充剂保持不变。饮食被配制为满足或超过蛋白质和矿物质的nrc要求。最终育肥饮食提供330mg/阉牛/天的(30g/吨的dm)和90mg/阉牛/天的(8.18g/吨的dm)。在第174天，在商业屠宰场(内布拉斯加州，奥马哈，大奥马哈包装公司)收获所有的阉牛。在第173天供应的饲料是前一天dmi的50％，并且在下午4:00称重。然后阉牛被运送到商业屠宰场，并保持直到第二天宰杀。在宰杀的那天记录热胴体重和肝脏得分，在48小时冷冻后记录胴体特征如第12肋部脂肪厚度、lm面积和usda大理石纹得分。使用usdayg方程[yg＝2.5+2.5(脂肪厚度，英寸)–0.32(lm面积，英寸2)+0.2(kph脂肪，％)+0.0038(hcw，磅)]计算产量等级。使用调整到常见63％屠宰率的hcw(热胴体重)计算最终bw、adg(平均日增重)和g:f(增重与饲料比率)。表6：饲喂给育肥阉牛的在dm基础上的饮食组成1mdgs＝改性酒糟加可溶物2drc＝干轧玉米4补充剂包括30g/吨和9g/吨表7：测试玉米对育肥牛性能的影响1drc＝干轧玉米；5从调整到常见63％屠宰率的hcw计算6大理石纹得分：400＝少量(small)00；500＝中等(modest)007计算为2.5+(2.5x第12肋部脂肪)+(0.2x2.5[kph])+(0.0038xhcw)–(0.32xlm面积)a,b具有不同上标的行内平均值不同(p<0.10)。表8：测试玉米和副产品类型对育肥牛性能的影响1mdgs＝改性酒糟加可溶物5从调整到常见63％屠宰率的hcw计算6大理石纹得分：400＝少量(small)00；500＝中等(modest)007计算为2.5+(2.5x第12肋部脂肪)+(0.2x2.5[kph])+(0.0038xhcw)–(0.32xlm面积)实例2用feed玉米的其他育肥研究进行了两个育肥实验，以评估含有α淀粉酶性状的feed玉米(efc)与近阴性等值线的对照玉米相比，在两个地点的牛性能和胴体特征。实验：在内布拉斯加州米德附近的内布拉斯加州大学林肯分校(unl)东部内布拉斯加州研究与推广中心(easternnebraskaresearchandextensioncenter，enrec)饲养场，在育肥试验中利用了三百头杂交阉牛(初始体重[bw]＝703磅，±43)。所有的玉米(来自先正达种子有限责任公司(syngentaseeds,llc)的efc和近阴性等值线亲本对照玉米[neg]种子)都在夏季在enrec种植，在十一月收获，并在饲喂时加工成干轧玉米(drc)。在实验开始前，牛被限制饲喂2％的bw的饮食持续的5天。在第0天和第1天记录两天的初始重量，取平均值并将其用作初始bw。基于第0天的bw，将阉牛按bw区组化成轻和重两个重量区组，(分别为n＝10和5个围栏重复)，在区组内按bw分层，并随机分配到30个围栏之一中。围栏被随机分配进行处理。有10头阉牛/围栏和15个重复/处理。饮食处理包括1)efc和2)近阴性等值线亲本对照(neg；表9)。在21天的时间段内使阉牛适应玉米替代了苜蓿干草的育肥饮食，而在所有饮食中包括玉米青贮饲料、改性酒糟加可溶物(mdgs)和补充剂保持不变。饮食被配制为满足或超过蛋白质和矿物质的nrc要求。最终育肥饮食提供330mg/阉牛/天的(30g/吨的干物质[dm]；伊兰科动物健康中心(elancoanimalhealth)，印第安那州格林菲尔德)和90mg/阉牛/天的(8.2g/吨的dm；伊兰科动物健康中心，印第安那州格林菲尔德)。阉牛在第22天植入is(伊兰科动物健康中心，印第安那州格林菲尔德)，并在第92天植入s(伊兰科动物健康中心，印第安那州格林菲尔德)。在第169天，供应的饲料是前一天干物质摄入(dmi)的50％，并在1500h时称重牛以确定最终的活bw。将4％的笔形收缩应用于最终的活bw以计算屠宰率。在第170天在商业屠宰场(内布拉斯加州，奥马哈，大奥马哈公司(greateromaha))收获所有的阉牛，并在屠宰当天记录热胴体重(hcw)和肝脏得分。在48小时冷冻时间段后记录脂肪厚度、最长肌(lm)面积、和usda大理石纹得分。使用usdayg方程[yg＝2.5+2.5(脂肪厚度，英寸)–0.32(lm面积，英寸2)+0.2(肾脏、骨盆和心脏[kph]脂肪，％)+0.0038(hcw，磅)]计算产量等级(yg)。使用调整到常见63％屠宰率的hcw计算最终bw、平均日增重(adg)和饲料:谷物(f:g)。在第二项研究中，在内布拉斯加州斯科茨布拉夫附近的unl潘汉德尔研究与推广中心(prec)饲养场，在育肥试验中利用了三百头杂交阉牛(初始bw＝624磅，±34)。在试验期间，所有利用的玉米都在enrec种植并运送到prec。初始bw方案、bw区组化、处理分配、每围栏的阉牛数和每个处理的重复与上述enrec中所述的相同。在21天的时间段内使阉牛适应玉米替代了苜蓿干草的育肥饮食，而在所有饮食中包括玉米青贮饲料、湿酒糟加可溶物(wdgs)和补充剂保持不变。饮食处理与enrec相同，不同之处在于用wdgs代替mdgs，并以包括6％的补充剂代替4％的饮食dm。阉牛在第1天植入is(伊兰科动物健康中心，印第安那州格林菲尔德)，并在第91天植入s(伊兰科动物健康中心，印第安那州格林菲尔德)。在第181天，在商业屠宰场(科罗拉多州，摩根堡，嘉吉肉制品公司)收获阉牛。胴体数据收集程序和计算与上述相同。总体而言，两个地点共利用了600头阉牛，以提供总共30个重复/处理。使用sas(北卡罗来纳州，凯瑞(cary))的mixed程序作为一般随机区组设计并用围栏作为实验单元，对性能和胴体特征数据进行了分析。使用sas(北卡罗来纳州，凯瑞)的glimmix程序分析肝脓肿患病率数据，其中将受肝脓肿影响的动物数量除以围栏内的动物总数作为二项式变量。以bw区组为固定变量的模型中包括了地点、处理、和地点×处理的作用。如果地点×处理相互作用不显著(p≥0.05)，则讨论主要作用，并从模型中去除相互作用项。结果：没有观察到对初始bw、最终bw、dmi、adg、f:g和肝脓肿百分比的处理-地点相互作用(p≥0.30)(数据未显示)。饲喂efc的阉牛与饲喂neg的阉牛相比，观察到最终bw、dmi、adg、f:g或肝脓肿百分比没有显著差异(p≥0.17；表10)。饲喂efc的阉牛与饲喂neg的阉牛相比，观察到f:g数值下降(p＝0.17)很小(2％由于谷物)。观察到对最终bw、dmi、adg和f:g的地点作用，其中在prec饲喂的阉牛与在enrec饲喂的阉牛相比，最终bw、dmi、adg更高并且f:g更低(p≤0.03)(数据未显示)。先前的研究表明，用加工为drc的efc饲喂阉牛在牛性能中有阳性结果。总体而言，据报道饲喂efc的阉牛与饲喂商业玉米或neg的阉牛相比，具有更高的adg和f:g的改善(2016nebraskabeefreport[2016内布拉斯加州牛肉报告]第135页；2016nebraskabeefreport[2016内布拉斯加州牛肉报告]第143页)。饲喂efc的阉牛与饲喂neg的阉牛相比，脂肪深度和计算的yg更大(分别为p<0.01和p＝0.02)；然而，饲喂neg的阉牛的lm面积略大(p＝0.02)。先前的研究已经报道了当给阉牛饲喂efc时，脂肪深度(p≤0.03)和计算的yg增加(p≤0.03；2016nebraskabeefreport[2016内布拉斯加州牛肉报告]第135页)或无差异(分别为p≤0.22和p≤0.17；2016nebraskabeefreport[2016内布拉斯加州牛肉报告]第135页；2016nebraskabeefreport[2016内布拉斯加州牛肉报告]第143页)。观察到处理对于hcw或大理石纹得分无显著差异(p≥0.33)。先前的研究报道了饲喂syt-efc的阉牛与饲喂商业玉米或neg的阉牛相比，在大理石纹得分方面具有复杂的结果，其中观察到大理石纹得分增加(2016nebraskabeefreport[2016内布拉斯加州牛肉报告]第135页)或无差异(2016nebraskabeefreport[2016内布拉斯加州牛肉报告]第143页)。先前试验与当前试验的牛反应的差异可能归因于玉米生长条件导致年份效应(yeareffect)。总之，先前的育肥试验已经观察到，当以efc作为玉米谷物饮食的主要来源时，f:g降低。然而，该试验的结果表明，当饲喂含有α淀粉酶性状的先正达enogenfeed玉米杂种时，由于反应太小，无法检测到f:g的显著改变。f:g改变中仅1％是由饮食引起的，假定其中仅1.6％是由玉米谷物(占饮食的65％，enrec和prec的平均值)引起。表9.评估feed玉米和近阴性等值线亲本对照玉米的饮食处理1neg：近阴性等值线亲本对照玉米2syt-efc：含有α-淀粉酶的先正达enogenfeed玉米3dgs：酒糟加可溶物4东部内布拉斯加州研究与推广中心饲喂的膳食补充剂5潘汉德尔研究与推广中心饲喂的液体补充剂6配制为提供饮食dm(包括1.34％石灰岩、0.5％尿素、0.3％盐、0.2％氯化钾、30mg/kgzn、50mg/kgfe、10mg/kgcu、20mg/kgmn、0.1mg/kgco、0.5mg/kgi、0.1mg/kgse、1000iu维生素a、125iu维生素d、1.5iu维生素e)的补充剂。1饮食处理：neg＝近阴性等值线亲本对照玉米；syt-efc＝含有α淀粉酶的先正达enogenfeed玉米2从调整到常见63％屠宰率的hcw计算。3作为g:f分析，f:g的倒数。4大理石纹得分：300＝微量(slight)00，400＝少量(small)00。5计算为2.5+(2.5x第12肋部脂肪)+(0.2x2.0[kph])+(0.0038xhcw)–(0.32xlm面积)。实例3使用feed高水分玉米和干轧玉米的育肥肉用牛研究牛背景在内布拉斯加州米德附近的内布拉斯加州大学东部内布拉斯加州研究与推广中心，所有接收的阉牛都是断奶的小牛。3至4周接收小牛并喂玉米渣，并在实验前进行背景检查以确保所有小牛都健康。该实验的动物处理和空间依照guideforthecareanduseofagriculturalanimalsinagriculturalresearchandteaching[农业研究与教学中农业动物的养护和使用指南](fass[动物科学学会联合会]，第一修订版，1999年1月)。作为本研究一部分概述的所有程序均依照内布拉斯加州大学动物护理规程。设计与分配在称重之前，以预估2％的体重(bw)，用50％苜蓿、50％湿玉米蛋白饲料(wcgf)饮食来限制饲喂阉牛，持续5天。连续两天收集个体重量，以最小化肠道填充(gutfill)效应并获得准确的初始体重。此研究利用336头阉牛(8头阉牛/围栏)。根据第一天的重量，将阉牛随机分配到围栏。可以根据体重范围使用区组化标准。围栏随机分配到下述7种处理之一。本研究设计为完全随机设计(或在需要区组化标准的情况下，设计为随机区组设计)，其中7个处理安排为2×3+1因子排列处理。围栏是实验单位，并且每个简单效应处理重复6次，或总共42个围栏使用7个处理。饮食与饲喂表11描述了处理饮食组成。处理结构组织为2×3因子处理以及1个另外的比较处理。在因子排列中，因子包括含有或不含α淀粉酶表达性状的谷物，并且按高水分玉米与干轧玉米的比例饲喂。另外的处理可以用于评估将feed玉米(efc)作为干轧玉米(drc)与对照高水分玉米(hmc)饲喂。所有的饮食都含有20％的酒糟，以提供足够的饮食瘤胃不可降解蛋白质(rup)来满足蛋白质需求，并与饲料场行业中典型的副产品内含物保持一致。与5％干膳食补充剂一起饲喂的主要组分为钙、用于瘤胃可降解蛋白质的尿素、痕量矿物质预混料、维生素ade预混料和(目标水平)。膳食补充剂的载体是细磨玉米。将饮食配制为提供相似的ca和适当的ca:p比。最终饮食提供30g/吨的莫能菌素和8.8g/吨的(以干物质[dm]为基础)。每天饲喂一次阉牛，并用roto-mix饲料卡车混合饮食。表11.饲喂给生长中的阉小牛大约84天以评估efc作为drc、hmc或50:50共混物使用的饮食。1con，常规不含α-淀粉酶性状2提供以及矿物质和尿素以确保满足蛋白质、矿物质和维生素要求的补充剂。健康数据根据内布拉斯加州大学制定的标准操作程序，对观察到具有一般疾病或障碍症状的任何牛进行治疗。对于观察到的动物卫生保健标准操作程序(animalhealthcarestandardoperatingprocedures)未涵盖的状况，咨询兽医顾问。最终报告总结了动物健康的观察结果。测量在试验开始的连续两天对牛进行称重，以建立初始体重。根据它们的大小和饲喂持续时间，用常规的植入程序植入阉牛。饲喂阉牛大约145至160天。性能特征包括干物质摄入、平均日增重(使用限制饲喂初始重量和胴体调整后的最终重量)、包括活体最终体重在内的体重测量、以及胴体性状。屠宰当天要收集的重要胴体性状是热胴体重、肝脓肿得分和杀死顺序。冷却48小时后，测量脂肪厚度、最长肌(lm)面积、大理石纹得分和所谓的产量等级。在假设2％肾脏、骨盆、心脏(kph)脂肪下确定计算的产量等级标准。实例4饲喂含有feed作为玉米谷物和/或玉米青贮饲料的育肥饮食的牛的性能和胴体特征在堪萨斯州立大学(kansasstateuniversity)肉用牛研究中心(beefcattleresearchcenter)进行了一项研究，其目标如下：1.评估饲喂含青贮草料材料和压片的谷物(由含有或不含高淀粉酶表达的玉米杂种制备)的组合的饮食的育肥牛的生长性能(日增重、干物质摄入和饲料效率)。2.评估饲喂含青贮草料材料和压片的谷物(由含有或不含高淀粉酶表达的玉米杂种制备)的组合的饮食的牛的胴体特征和肝脓肿率。实验设计：随机完全区组设计，以2x2因子排列方式进行4个处理和12个重复，如下所示：因子1：由具有和不具有高淀粉酶表达的杂种制备的蒸汽压片的玉米谷物因子2：由具有和不具有高淀粉酶玉米的玉米杂种制备的玉米青贮饲料。围栏是实验单位。研究程序：测试动物：杂交肉用牛，平均初始体重在750到900磅之间。从大约1000头牛的种群中选择了一组960只研究动物。试验前处理程序：采用的研究前处理程序是研究现场使用的典型程序，但通常由确定体重、用唯一编号的耳标进行标识、施用疫苗和细菌疫苗、施用控制内部和外部寄生虫的杀虫剂以及施用甾体植入物组成。临床研究者可酌情使用可注射抗生素进行预防。饲喂和喂水：名义上动物可以随意获取饲料，并且在整个研究过程中每天饲喂一次。每天对料槽进行监控以促进饲料管理，以便名义上可以使牛随意获取饮食，但同时使第二天在料槽中剩余最少的未消耗饲料。在整个研究中，都可以从邻近围栏共享的围栏自动饮水器中获得城市用水。饮食组成：试验前的基础饮食由干草、玉米青贮饲料、蒸汽压片的玉米和补充剂的混合物组成，以提供大约等比例的精饲料和粗饲料。玉米青贮饲料由非feed玉米(efc)草料材料组成。在试验阶段期间，饲料中的草料组分完全由玉米青贮饲料组成。从实验的第1天开始，给牛饲喂具有50％精饲料和50％粗饲料的饮食(步骤1)，饲喂持续5天的时间段。精饲料的比例逐步增加，因此顺序的饮食分别饲喂5天(步骤2、3和4)。最终育肥饮食由10％玉米青贮饲料作为粗饲料来源、大约6％-8％的补充剂和其余作为压片的玉米组成，并且在第21天饲喂，直到饲喂120至150天后试验终止。饮食配制为含有33克/吨莫能菌素，并且在最后28-42天的饲料中含有25克/吨的莱克多巴胺。每天处理蒸汽压片的玉米。饮食是每天新鲜准备的，且每天早晨输送到饲料槽。谷物(商品和efc)和草料(常规商业杂种或efc)每天直接掺入全混合日粮中，并充分共混。数据收集方法和变量：体重：在第1天确定个体动物的全部预处理体重。记录围栏动物的中期体重(大约第28、56、84和112天)和末期体重。饲料消耗：实验饮食从研究的第1天开始饲喂，并且一直持续到研究终止。每天记录输送到每个围栏的饲料量。在称重日并根据需要将多余的残留饲料去除，以确保在料槽中保持新鲜的饲料。对要输送给每个围栏的草料的量进行称量。根据需要测量在料槽中剩余的未消耗饲料的重量，但最少要在中期称重日和研究的最后一天进行该测量。临床研究者还可以在其他时间酌情测量拒食次数(例如，粪便污染、变质等)。定期对未消耗饲料的复合样品进行干物质测定。计算在特定时间间隔内输送到每个围栏的饲料总量(以饲喂量为基础)。生长性能：计算每个围栏的牛的平均日增重。记录每围栏的总干物质摄入，并以adg除以每只动物的饲料干物质每日摄入量来计算增重效率。在研究期间，大约以28天间隔计算每围栏的干物质摄入、增重速率和饲料效率。胴体特征：在收获之日，将动物从围栏中以组移出，使用群秤(groupscale)进行称重，然后装载到卡车上运送到商业屠宰场。胴体根据屠宰场的收获顺序进行识别。记录收获当天的热胴体重以及肝脓肿患病率和严重程度。冷藏24至48小时后，记录每只胴体的大理石纹得分，肌长肌面积、皮下脂肪厚度(第12肋骨)、黑切牛肉的发病率、usda产量等级和usda质量等级。实例5含有来源于feed玉米杂种的玉米谷物或玉米的饮食的消化部位和消化程度目标：1)比较由玉米和玉米青贮饲料组成的育肥饮食中干物质、有机质、淀粉、中性洗涤纤维(ndf)、酸性洗涤纤维(adf)、氮和脂质的消化部位和消化程度；和2)在饲喂由玉米谷物和玉米青贮饲料的组合组成的饮食的牛中，测量液体稀释率和微生物蛋白质合成。研究方法：研究动物。该研究使用了12头多插管阉牛(瘤胃、十二指肠、回肠)，平均体重大约为500磅。阉牛装有瘤胃、十二指肠(双l；幽门括约肌后6cm)和回肠(双l；回盲肠交界处前10cm)插管。阉牛圈养在配备有单独的饲料槽和水的分格栏(boxstall)里。研究设计。实验由重复的4x4拉丁方设计和2×2因子排列处理组成。因子由以下组成：1)谷物来源(未分等级的(millrun)或feed玉米(efc)，和2)草料来源(通常用于玉米青贮饲料生产的商业混合饲料或efc青贮饲料杂种)。实验由四个为期15天的时间段(每个包括10天的适应期和5天的采样期)组成。实验饮食。每天将饮食混合，并大约在上午8:00随意供应给阉牛。饮食含有(基于干物质)约10％的玉米青贮饲料、84％的玉米和6％的补充剂。饮食、残屑、消化物和粪便的收集、加工和分析。在第4天至第13天，每天将氧化铬(10g)混合到各个饮食中，作为确定饮食消化率的标记。在第15天，在上午8:00时将200-ml含有3gco-edta的溶液脉冲式注入瘤胃插管中，以估计液体流通速率。在第11天至第14天，按时间段对固定百分比的每日残屑进行二次采样和复合。在第10天至第13天收集混合后的饮食样品，并在相同重量基础上按时间段复合。每个时间段的第15天用于收集瘤胃液，以测量ph、挥发性脂肪酸(vfa)和流通速率。在第11天至第14天，每天收集三次十二指肠(约300ml)和回肠(约200ml)食糜和粪便的随机采集样品(约300g湿基)。以8小时为间隔收集样品，其中每天将收集时间提前2小时，以获得代表饲喂后24小时周期的曲线。将十二指肠、回肠和粪便样品立即在4℃下冷冻。在每个收集期结束时，将每头阉牛的消化物和粪便样品进行复合。将饮食、残屑和粪便样品在55℃下干燥4天，空气平衡，并且然后使用1-mm筛(第二维利氏磨粉机(no.2wileymill)，宾夕法尼亚州费城的亚瑟·h·托马斯公司(arthurh.thomasco.))研磨。将消化物样品冷冻干燥(virtisgenesis型号35el)，然后在维利氏磨粉机中通过1-mm筛进行研磨。分析饮食、残屑、消化物和粪便中的干物质(105℃下24小时)、有机质(600℃下2小时)、氮(氮气分析仪，lecofp-2000；密歇根州圣约瑟夫(st.joseph，mi))、淀粉、游离葡萄糖(使用technicon自动分析仪iii型)和铬。在第11天至第14天，每天收集一次大约500ml的瘤胃液，以估计瘤胃微生物蛋白质合成。将样品共混以清除与颗粒相关的细菌，并通过8层粗棉布过滤，然后在4℃冷冻。每天将收集时间提前6个小时，以在24h周期中每6小时间隔获得一次样品。通过差速离心从瘤胃内容物中分离瘤胃微生物细胞，将其冷冻干燥，并分析其中的干物质、有机质和氮。测量微生物细胞和十二指肠样品的胞嘧啶浓度。微生物来源的十二指肠消化物的比例通过将十二指肠胞嘧啶流量除以微生物胞嘧啶:氮的比率来确定。通过从微生物氮流量中减去总氮流量来计算进料氮流量，从而包括内源氮的贡献。将瘤胃中发酵的真实有机质计算为摄入的有机质减去到达十二指肠的总有机质，以校正到达十二指肠的微生物有机质。饲喂后第15天的08:00，以及随后的2、4、6、8、12、18和24h收集瘤胃液样品。将瘤胃液通过四层粗棉布过滤，并在采样时使用便携式ph计分析ph。将瘤胃液(8ml)添加到2ml的25％(wt/vol)偏磷酸中，并冷冻用于vfa和氨的后续分析。将大约20ml经过滤的瘤胃液放入闪烁小瓶中，并冷冻用于后续的钴分析。将瘤胃液解冻并在30,000×g下离心20分钟后，使用原子吸收分光光度法测量其中的钴。将酸化的瘤胃液样品解冻，在30,000×g下离心20min，然后通过气相色谱法(配备15mnukol柱的agilent7890a气相色谱仪)分析vfa，并使用technicon自动分析仪iii型(布兰和鲁贝公司(branandluebbe)，纽约州埃尔姆斯福德)分析nh3。统计分析。使用单个动物作为实验单位并使用sas的procmixed分析摄入、流量和消化数据。该模型包括压片的谷物来源、青贮饲料来源、以及谷物来源和青贮饲料来源之间的相互作用的影响。随机效应包括阉牛和时间段。使用sas的procmixed的复合对称协方差结构对挥发性脂肪酸、nh3和ph数据作为重复测量进行分析。模型说明包括压片的谷物来源、青贮饲料来源、小时和所有相互作用的影响。随机说明包括阉牛和时间段、以及阉牛×时间段×谷物来源×青贮饲料来源的影响。重复测量定义为时段内的小时×阉牛×谷物来源×青贮饲料来源。为了确定液体流通速率，使用sas的reg程序，将0、2、4、6、8、12、18和24h时钴的浓度转换为自然对数，并按时间对单个阉牛进行回归。如前所述，使用sas的mixed程序分析斜率(流通速率的估算)实例6用feed玉米进行肉用育前牛研究育前牛(有时也称为架子牛)是处于断奶(典型地发生在400至550磅之间)和饲养场育肥之间的中间阶段的动物。尽管有时也使用补充剂，但传统上饲喂这些动物高草料(例如牧草)含量的饮食。目标：确定生长中的小牛对含有α淀粉酶性状的feed玉米(当以完整去壳玉米(wc)或干轧玉米(drc)饲喂时)的反应。实验程序：将426头杂交阉牛(平均体重538磅)从德克萨斯州的拉兹布迪(lazbuddie)运送到堪萨斯州立大学(ksu)的牛仓储部门(beefstockerunit)。采用2x2因子设计(两种类型的玉米(对比黄玉米2号)和两种水平的玉米加工(wc对比drc))。每天一次向阉牛饲喂全混合日粮(tmr)，持续76天，然后进行14天的肠道填充(共90天)。将四种处理饮食配制为提供51mcalneg(增重净能)/100磅。以下表12中是tmr的详细信息。表12：实验饮食。1玉米类型：对比阴性黄玉米2号，并且以完整去壳玉米(wc)或干轧玉米(drc)饲喂2具有可溶物的湿酒糟3维持净能4增重净能结果：对阉牛的初始体重(bw)、最终bw、平均日增重(adg)、干物质摄入(dmi)和饲料:增重(f:g)进行了评估。结果示于下表13中。表13：肥育场性能。总结：1.饲喂feed玉米的小牛的最终体重和adg倾向于更高(p<0.10)。2.饲喂feed玉米的小牛的dmi倾向于更低(p<0.09)。3.接受feed玉米的小牛的饲料效率(f:g)提高了5.5％(p<0.01)。实例7肉用育前牛中feed玉米谷物和feed青贮饲料饮食结合这项研究的目的是比较饲喂含有α-淀粉酶性状的feed玉米(efc)与饲喂不含α-淀粉酶性状(阴性等值线)的等值线亲本玉米(以玉米青贮饲料和玉米谷物的形式)的生长中的肉用育前牛的健康和性能。efc作为针对新到的和生长中的肉用牛的青贮饲料和/或谷物形式的能量来源的相对价值尚不清楚。生长中的肉用牛饮食通常由大量的粗饲料和谷物加工业副产品组成，其中约三分之一的dm摄入由作为能量来源的玉米或其他谷类组成。实验设计–性能研究：试验开始于堪萨斯州立大学(ksu)牛仓储部门(ksbsu)，并且包括32个围栏(每个处理8个围栏)，每个围栏由12-14只动物组成，除14天的肠道填充整理期(共90天)外，还持续大约76天。将四种处理饮食配制为提供50mcalneg/100磅。类似地按照2x2因子排列的处理设计饮食，其中因子为+α淀粉酶/-α淀粉酶玉米青贮饲料和+α淀粉酶/-α淀粉酶玉米谷物；表14)。将个体按其所在区组(每个负载)内的重量分层，并随机分配给围栏。然后将处理随机分配给围栏。表14.饲料1玉米青贮饲料和玉米谷物(enogen)对比阴性等值线玉米青贮饲料和玉米谷物1)动物说明：获得大约400头重大约500磅的杂交雌性肉用小牛(beefcalve)，并通过商用卡车运送到ksu牛仓储部门。到达后，目视检查所有动物，以评估其健康状况，包括呼吸、运动和消化系统。立即将任何具有健康问题的动物从研究中移除。测试所有动物的bvdv-pi状态。如果为阳性，则将动物从研究中移除。2)预防医学要求：抵达后大约24小时，将按照标准的卫生规程对牛进行处理，这些标准的卫生规程包括修饰的活病毒(传染性鼻气管炎、牛病毒性腹泻、副流感病毒3型、牛呼吸道合胞病毒)疫苗、7路梭菌疫苗(7-wayclostridiavaccine)和抗寄生虫药。3)动物鉴定：到达后，所有研究动物都将获得带有rfid按钮标签的独有的悬挂耳标。4)水牛可以随时自由饮水。5)日粮：根据美国国家研究委员会(nationalresearchcouncil)的肉用牛营养需求(nutrientrequirementsofbeefcattle)(nrc，第7版，1996年)的建议，将饮食配制为达到或超过对此类动物的建议。在76天的研究期内，可以根据需要调整饮食，以满足不断变化的营养需求。记录饮食组成和所有饮食变化。6)饲料和料槽采样在每周基础上收集饲料和料槽样品并复合进行分析。7)饮食适应和饲喂：每天给小牛饲喂一次相应的处理饮食，并记录每次饲喂时输送到每个围栏的饲料量。8)健康处理：在ksbsu受过训练的员工负责识别临床上患病的动物，将它们转移到治疗区域并进行适当的治疗。至少每天观察两次每个围栏，以鉴定临床上患病的动物。被识别为患病的每只动物都被转移到治疗区。对临床疾病得分大于1且直肠温度大于或等于104°f且到达后超过72小时的动物进行治疗。治疗基于以下所示的ksbsu正常治疗方案(表15)。治疗后将动物放回它们的原始围栏，并且将任何经过治疗3次brdc的动物指定为“慢性”，并从研究中移除。表15.9)性能和健康数据收集在到达时(第-1天)、初始处理(第0天)、再接种(第14天)，第48天(粪便淀粉随机采集样品)和试验的最后一天(第90天)分别对牛进行称重。在没有计划的个体重量的情况下，在每周基础上记录围栏的重量。计算以下五个时间段内每个围栏的平均日增重和饲料转化率：到达第14天、第21天、第34天、第48天、第62天和第76天。ksbsu员工每天读取饲料槽，并且分配的饲料量基于反映自上次饲喂以来的饲料消耗那天的料槽得分。记录每次饲喂时卸货到每个围栏的饲料总量。如果需要，可以计算发病率、死亡率、病死率、首次用药(pull)日期以及首次抗微生物治疗的成功率。发病率计算为每个处理接受首次brdc治疗的动物数除以该处理纳入的动物数。死亡率计算为每个处理死于brdc的动物数除以该处理纳入的动物总数。每个处理的病死率计算为brdc导致的死亡数除以至少治疗一次brdc的动物数。使用相对于试验第0天给动物用药的日期计算首次用药的日期。通过将仅接受过一次疾病治疗的动物数除以最初接受疾病治疗的动物总数，确定首次抗微生物治疗的成功率。10)物理环境测量气象监测站(风暴三号水浸五参数气象站(storm3waterloggerfiveparameterweatherstation)，斯蒂文斯水监测系统公司(stevenswatermonitoringsystems,inc.))在为期56天的研究期内收集了包括降水、风速和风向、相对湿度和温度在内的天气数据。11)数据分析分析数据以评估四种饮食处理在性能和健康结果上的差异。使用逻辑回归模型分析治疗水平发病率、死亡率和病死率的比例。实验设计-摄入和消化率研究：该试验是在堪萨斯州立大学牛仓储部门(ksbsu)进行的，同时进行了上述性能研究。四头肉牛杂交阉牛重450-500磅，用于进行摄入和消化率研究(wang等人,2016.j.anim.sci.[动物科学杂志].94-1159-1169)。阉牛单独圈养在室外设施中。使用上面列出的相同处理饮食，将一头阉牛随机分配每种处理，总共4头阉牛。1)拉丁方设计使用四头肉牛杂交阉牛来确定测试饮食的体内消化率。该研究为期60天，分为四个15天时间段，以完成一个拉丁方设计。每个阶段由以下组成：10天的适应期、4天的粪便采样和1天的瘤胃消化物样品收集。2)瘤胃消化物样品在每个时间段结束时采集瘤胃消化物样品，以确定处理饮食的消化率。还分析样品中标记的比例，以确定液体稀释率。分析和计算乙酸盐、丙酸盐、丁酸盐和乳酸盐的浓度。3)粪便样品定时分析粪便随机采集样品以确定存在的标记的浓度。4)体外分析体外发酵法用于确定四种处理饮食相关的体外干物质消化率(ivdmd)、体外有机质消化率(ivomd)和产气量。实例8feed玉米青贮饲料或谷物对生长中的肉用牛性能和消化的影响目标：评估在含有40％玉米谷物的预饲饮食中的feed玉米(efc)谷物以及评估efc玉米青贮饲料(假设以干物质[dm]为基础青贮饲料中含50％谷物，则具有等量谷物)。实验程序青贮饲料：在东部内布拉斯加州研究和推广中心种植的灌溉玉米用于收获青贮饲料和干谷物。青贮饲料的收获目标是37％-38％dm或大约3/4乳线。在运输时称量每份负载的青贮饲料，并采样以获取初始dm含量。在放料期间，每周在表面上采样青贮饲料，以进行dm分析。每周保留样品，以获取后续关于每月综合值的养分、ph和有机酸含量。对移出用于饲喂的材料按原样称重，并且用每周dm百分比获取饲喂的dm量。根据身份保持协议(identity-preservedprotocol)生产谷物，并作为全谷物存储在单独的箱中。根据需要，谷物在身份保持下作为干轧玉米输送和加工。生长研究：牛背景：在内布拉斯加州米德附近的内布拉斯加州大学东部内布拉斯加州研究与推广中心，所有接收的阉牛都是断奶的小牛。在实验前的3到4周接收小牛，以确保所有小牛都健康。小牛可能会在实验前的冬季生长，以确保健康和准备就绪。该实验的动物处理和空间依照guideforthecareanduseofagriculturalanimalsinagriculturalresearchandteaching[农业研究与教学中农业动物的养护和使用指南](fass[动物科学学会联合会]，第一修订版，1999年1月)。作为本研究一部分概述的所有程序均依照内布拉斯加州大学动物护理委员会。设计与分配在称重之前，以预估2％的体重(bw)，用50％苜蓿、50％湿玉米蛋白饲料(wcgf)饮食来限制饲喂阉牛，持续5天。连续两天收集个体重量，以最小化肠道填充(gutfill)效应并获得准确的初始体重。此研究利用576头阉牛(12阉牛/围栏)。根据第一天的重量，将阉牛随机分配到围栏。可以根据体重范围使用区组化标准。围栏随机分配到以下6种处理之一。本研究设计为完全随机设计(或在需要区组化标准的情况下，设计为随机区组设计)，其中6个处理安排为2×2+2因子排列处理。围栏是实验单位，并且每个简单效应处理重复8次，或总共48个围栏使用6个处理。饮食与饲喂表16描述了处理饮食组成。处理结构组织为2×2因子处理以及2个另外的比较处理。在因子排列中，因子包括含有或不含α淀粉酶表达性状(efc)的青贮饲料，以及是否经过籽粒加工(2mm)的青贮饲料。另外2个处理可以评估含草料的预饲饮食中使用的玉米谷物。假设在玉米青贮饲料中含有50％玉米谷物和50％草料，则饲喂80％玉米青贮饲料时，40％包括谷物与40％谷物内含物相同。所有的饮食都含有15％的酒糟，以提供足够的饮食瘤胃不可降解蛋白质(rup)来满足蛋白质需求和5％干膳食补充剂。膳食补充剂的主要组分是钙、用于瘤胃可降解蛋白的尿素、痕量矿物质预混料、维生素ade预混料和(目标水平)。膳食补充剂的载体是细磨玉米。将饮食配制为提供相似的ca和适当的ca:p比。最终饮食每天提供莫能菌素200mg/阉牛。每天饲喂一次阉牛，并用roto-mix饲料卡车混合饮食。表16.饲喂给生长中的阉小牛大约84天以评估efc青贮饲料或玉米谷物使用的饮食。2con，没有α淀粉酶性状的常规玉米。1提供rumensin(每天200mg/阉牛)以及矿物质和尿素以确保满足蛋白质、矿物质和维生素要求的补充剂。测量在试验开始时的连续两天以及在大约第84天的连续两天对牛进行称重以获取最终活bw。对阉牛以体重的2％限制饲喂饮食，这些饮食与用于收集初始体重和最终体重而饲喂的饮食相同，以均衡牛和处理中的肠道填充。性能特征包括干物质摄入、平均日增重(使用限制饲喂的初始重量和最终体重)和饲料效率。实例9feed青贮饲料质量研究进行研究以评估feed青贮饲料与不含有α-淀粉酶性状的常规玉米青贮饲料相比的多个青贮饲料质量参数。与由goldenharvest(gh)/nk杂种(相似的遗传背景)或竞争对手玉米杂种制备的对照青贮饲料相比，由含有α淀粉酶性状的先正达玉米制备的青贮饲料具有多种改善的特性。判别分析指出，feed青贮饲料的营养特征可以根据存在α淀粉酶性状而不是遗传背景与对照进行区分(数据未显示)。青贮饲料是由以下制备：在地面上约6英寸处切割整个玉米植物；然后将材料切碎，并且将小规模样品收集在袋中并真空密封。在分析之前，允许样品发酵60至75天。排除了一些在收集时过于干燥或未能有效发酵的样品。分析所包括的最终样品数为：165种feed青贮饲料样品、160种gh/nk非样品和105种无α淀粉酶性状的竞争对手杂种样品。近红外反射(nir)光谱法用于评估多种青贮饲料的营养特性。还使用化学分析评估了淀粉和糖特征，并通过测量在瘤胃中的多孔袋中孵育7小时的青贮饲料样品中淀粉的消失来确定瘤胃中淀粉的原位消化率。如通过nir确定的，feed玉米生产的青贮饲料与来自缺乏α淀粉酶性状的gh/nk或竞争对手玉米杂种的非青贮饲料相比，蛋白质、脂肪、木质素、灰分、乳酸或乙酸的浓度、或ph没有任何有意义的差异(数据未显示)。feed青贮饲料与不含有α-淀粉酶性状的玉米青贮饲料相比，鉴定出淀粉和糖特征存在显著差异。影响动物的淀粉利用率的两个重要因素是粒度和消化率。如图1所示，使用化学分析，feed青贮饲料和非青贮饲料中总淀粉水平相似。然而，feed青贮饲料中的小颗粒淀粉(通过50μm孔的扩散确定)水平更高(增加了199.5％)，使得在瘤胃中可以更快获得，因此可以提供更多立即可用的能量。此外，7小时后原位观察到瘤胃淀粉消化率(issd7)提高了14％，这表明feed青贮饲料使可用淀粉的消化率提高。糖是动物快速可用能量的另一种来源。青贮饲料中天然糖浓度往往相对较低，但如图2所示，如通过分析化学方法确定的，feed青贮饲料与不含α-淀粉酶性状的传统玉米青贮饲料相比，具有显著更高的总糖水平(201％)，因此有可能为动物和瘤胃微生物提供更多可用能量。如通过nir确定的，feed青贮饲料与缺乏α淀粉酶性状的gh/nk青贮饲料或竞争对手杂种青贮饲料相比，具有显著更高的乙醇可溶性碳水化合物(esc)和水溶性碳水化合物(wsc)。此外，如通过化学分析测量的总糖(葡萄糖、果糖、蔗糖、乳糖和甘露醇)显示出相同的模式。青贮饲料的纤维特征也通过nir确定。纤维消化率与干物质摄入呈正相关，因为通过瘤胃的经过时间越快，可消化的纤维向动物的填充就越少。因此动物就能消耗更多的草料，这可能会对性能(例如adg或产乳)产生积极影响。中性洗涤纤维消化率(ndfd)是在不同时间间隔的纤维消化率的量度，并且通常用于比较草料的饲用价值。高ndfd青贮饲料具有更大的干物质摄入潜力，并且因此有可能为动物提供更多的青贮饲料。在这项青贮饲料质量研究中，通过nir预测feed青贮饲料比常规玉米青贮饲料具有更高的ndfd(纤维消化率的重要指标)。如图3所示，如在多个时间点确定的，feed青贮饲料与不含有α淀粉酶性状的非玉米青贮饲料相比，具有更高的ndfd值：增加8.2％(30小时)、增加12.6％(120小时)、以及增加6.2％(240小时)。值在所有时间点都显著不同。相反，通过nir预测feed青贮饲料与常规玉米青贮饲料相比，不可消化的中性纤维(undf)减少了18.5％(120小时)和17.4％(240小时)(数据未显示)。此外，如通过nir的预测，feed青贮饲料与传统的玉米青贮饲料相比，总消化道中性洗涤纤维消化率(ttndfd)增加了6.4％(数据未显示)。通过评估纤维消化率、纤维流通速率和难消化的纤维含量，ttdnfd提供了纤维消化率的整体视图。ttndfd值越高，表明纤维消化率和干物质摄入越好，这可能有助于增强动物性能。综上所述，该研究指出feed青贮饲料由于其中小颗粒淀粉的浓度增加，从而提高了淀粉消化率。这种淀粉特征伴随更高水平的糖为动物和反刍动物微生物提供了更容易获得的能量来源，这可能会改善动物性能。此外，feed青贮饲料中纤维消化率的改善可以导致更多的干物质摄入，从而再次增强动物性能，而在本研究的情况下，基于专业动物营养师常用的商业软件包(ndsprofessional，可从rumen.it/en/ndspro上的万维网上下载)进行的分析，预测产乳将增加约2至5磅/头/天。实例10评估在不同温度下储存或用不同接种剂/化学稳定剂处理的feed玉米青贮饲料的发酵、营养价值和有氧稳定性目标：在1)不同储存温度方案或2)用接种剂或化学稳定剂进行不同的预储存处理下，评估feed玉米(efc)青贮饲料对比对照青贮饲料的发酵、瘤胃淀粉消化率和有氧稳定性受储存长度的影响。材料与方法：玉米杂种由先正达公司(syngenta)提供，并按照特拉华大学(universityofdelaware)农场的常规农艺措施进行种植和管理。地块大约为8至12行，长度为400-600英尺。使用配备机械处理器(辊隙设置为1.40mm)的拖挂式收割机(pull-typeharvester)(johndeere3975，伊利诺伊州莫林)收获全株干物质(dm)。以34％-36％dm的目标且理论切割长度为19mm来切碎玉米植物，并包装在7.5l实验室筒仓中，密度为约230kgdm/m3(湿重约44磅或15磅dm/英尺3)。实验1温度影响：将以下处理的五个单独制备的重复进行包装，并以不同的时间长度和在不同温度下进行储存(6个处理×5个重复×3个时间点＝90个筒仓)：1)在22℃(72°f)下储存对照杂种2)在22℃下储存feed玉米3)在22℃下储存用lb500*处理的feed玉米4)在40℃(104°f)下储存对照杂种5)在40℃下储存feed玉米6)在40℃下储存用lb500*处理的feed玉米*lb500＝最终施用量400,000cfu的布赫内氏乳杆菌40788+100,000cfu的戊糖片球菌12455(拉曼动物营养公司)。来自处理1-3的筒仓在约21℃-22℃的实验室室温下储存30、120和240天。来自处理4-6的筒仓在约40℃的升高温度下储存0至120天，然后在约32℃的更低(但仍升高)温度下储存，直到240天打开。实验2接种剂/稳定剂的影响：将以下处理的五个单独制备的重复进行包装，并在用接种剂或化学稳定剂处理后均在22℃/72°f下储存不同的时间长度(6个处理×5个重复×3个时间点＝90个筒仓)：1)不处理对照杂种2)用化学稳定剂*处理对照杂种3)对照杂种+lb500**4)不处理杂种5)用化学稳定剂处理杂种6)杂种+lb500****lb500＝最终施用量400,000cfu的布赫内氏乳杆菌40788+100,000cfu的戊糖片球菌12455(拉曼动物营养公司)。采样与分析：在每个实验的每次打开时(30、120和240天)，确定筒仓重量，并将其与青贮饲料中的dm含量一起用于确定dm回收率。根据以前的经验，青贮饲料样品在实验室筒仓中长期储存通常会导致缺乏活酵母，因为筒仓具有极高的气密性(商业筒仓中的情况更是如此)。因此，在储存期间，储存了120天和240天打开的筒仓在最后6周储存内要承受4h/wk的受控气压。确定所有打开筒仓的玉米青贮饲料的有氧稳定性。将每个筒仓中约3±0.01kg的代表性玉米青贮饲料返回到相同的清洁筒仓中。将热电偶丝放置在每个样品质量的几何中心，并使用数据记录仪(datatakerdt85，赛默飞世尔科技澳大利亚有限公司(thermofisherscientificaustralia，pty)每30分钟记录一次温度。从空桶中的热电偶丝记录环境温度。桶用两层粗棉布覆盖，并暴露于实验室的空气中(22℃±1℃)。有氧稳定性计算为青贮饲料块的温度升高到比基线温度高3℃之前的h数。通过在60℃的强制通风炉中干燥48h来确定所有样品的dm含量。使用udy旋风式样品磨粉机(cyclonesamplemill)(udy公司(udycorp.)，科罗拉多州科林斯堡(fortcollins，co))将每个干燥样品的一部分磨碎，使其通过1-mm的筛，并分析中性洗涤纤维(ndf)。根据已知程序(修改之处在于，来自adf的纤维残留物是在加利福尼亚布氏漏斗(californiabuchnerfunnel)(934-ah，沃特曼公司(whatmaninc.)，新泽西州克利夫顿(clifton,nj))中的1.5μm颗粒保留7cmwhatman过滤器中回收，而不是在古氏坩埚(goochcrucible)中回收，以实现更好的过滤)在干燥的磨碎样品上定量酸性洗涤纤维(adf)。通过样品燃烧确定总n(lecocns2000分析仪，leco公司(lecocorporation)，密歇根州圣约瑟夫(st.joseph，mi))，并且通过将所得的总n乘以6.25计算粗蛋白(cp)。确定可溶性蛋白(cp的％)。将干燥样品的单独部分磨碎，使其通过3-mm筛，并分析淀粉和淀粉在体外7h的瘤胃消化率。灰分、adf、ndf、cp、可溶性n、淀粉和淀粉-d的浓度由马里兰州黑格斯敦的坎伯兰谷分析服务公司(cumberlandvalleyanalyticalservices，hagerstown，md)分析。将湿草料和青贮饲料的代表性样品与无菌四分之一强度林格氏液(oxoidbr0052g，oxoid公司，尤尼帕斯有限公司(unipath,ltd.)，英国贝辛斯托克(basingstoke,uk))混合，并在proctor-silex57171共混器(汉密尔顿海滩/普罗特希利斯有限公司(hamiltonbeach/proctor-silexinc.),美国北卡罗来纳州华盛顿(washington，nc，usa))中均化1min。ph取决于淡水提取物。通过在deman、rogosa和sharpe琼脂(cm3651，oxoid公司，尤尼帕斯公司(unipath)，英国贝辛斯托克)上倾注铺板10倍连续稀释液来确定乳酸菌总数。将板在32℃下厌氧孵育48h至72h。通过麦芽提取物琼脂(cm0059，oxoid公司，尤尼帕斯公司(unipath)，英国贝辛斯托克)上倾注铺板10倍连续稀释液来确定酵母和霉菌总数。在计数之前，将这些板在32℃下有氧孵育48h至72h。在分析之前将水提取物的一部分进行冷冻。经由hplc确定水提取物中的乳酸和乙酸、1-2丙二醇(1，2pd)和乙醇。通过苯酚-次氯酸盐法确定水提取物中的氨-n。通过比色程序定量水溶性碳水化合物(wsc)。按植物材料和时间分析(表17)：表17.1等值线玉米和feed玉米各5个重复＝10个样品26个处理x5个重复x3个打开＝90个样品3由合格的实验室完成的分析统计：将来自每个筒仓打开的数据作为完全随机设计分别进行分析。模型包括固定处理效果。使用sas9.3(sas研究所有限公司(sasinstituteinc.)，北卡罗来纳州凯瑞(cary,nc))软件的procglm对数据进行分析，并且当p≤0.05时差异报告为显著。当总体p-值显著时，平均值由图基检验分离(p≤0.05)。实例11用feed青贮饲料的乳牛研究进行研究以评估向乳牛饲喂feed青贮饲料对产乳、乳质量和体况得分(bcs)的影响。实验：根据泌乳阶段/性能将乳牛圈养在围栏内，并根据该围栏内乳牛的营养需求专门栏内饲喂全混合日粮(tmr)。不给动物施用牛促生长素。青贮饲料是从feed玉米或不含有α淀粉酶性状的常规玉米生产的。使用前将青贮饲料发酵3个月。数据收集自饲喂30天含有不含α淀粉酶性状的传统玉米青贮饲料的tmr的动物(间歇(off)feed青贮饲料期)。然后，以50:50的比例饲喂这两种青贮饲料12天，动物饲料从常规青贮饲料转变为feed青贮饲料。然后换成向动物饲喂100％feed青贮饲料(作为tmr的青贮饲料组分)持续85天(饲喂(on)feed青贮饲料期)。每天通过电子挤奶厅系统测量每头乳牛的乳产量。每天通过tmr库存系统测量围栏干物质摄入(dmi)。在研究过程中，每月对10％的乳牛进行体况得分评估，这些乳牛是从所有围栏中随机选择的。计分以1到5的等级进行，1分为太瘦，5分为太重，并且3分是理想的。如下将乳牛分至围栏：泌乳早期(1个围栏)、泌乳后期(2个围栏)和高产(2个围栏)。每个围栏的日粮由专业的动物营养师配制。对于高产乳牛日粮，tmr的草料组成如下：表18.高产乳牛日粮的草料组成：与高产乳牛的日粮相比，泌乳早期和泌乳后期乳牛的日粮通常具有更低的能量含量，这反映在与表18中所示的日粮相比，其中更高百分比的日粮处于草料(青贮饲料)形式。对于泌乳早期和泌乳后期的乳牛，在间歇期和饲喂期的草料含量和组成经计算为相似。以间歇期和饲喂期的所有围栏的平均值评估泌乳性能(泌乳早期、泌乳后期和高产)。从下表19中可以看出，饲喂feed青贮饲料的乳牛每天的产乳要多于间歇期饲喂日粮中的常规玉米青贮饲料的乳牛。同时，dmi(干物质摄入)降低，从而提高了饲料效率(fe)。牛群中泌乳的乳牛总数和泌乳天数在间歇期和饲喂期没有显著差异，并且因此，预期导致这两个时期中的性能、摄入或饲料效率没有显著差异。表19.泌乳性能。1干物质摄入2饲料效率除了产生的乳量之外，乳质量和动物体况也是重要的考虑因素。高产乳牛的一个担忧是体况会受到影响，这可能会导致长期的生产力丧失。同样地，如果乳质量明显下降，则产乳的增加将具有有限的价值。在这项研究中，乳质量和体况得分即使在更高产乳下也得以保持。在间歇期和饲喂期产生的乳的脂肪、蛋白质和乳尿素氮(mun)组成没有显著差异(数据未显示)。此外，在间歇期和饲喂期，随机选择的动物中，bcs没有变化，平均得分都大约为3(1分为太瘦，5分为太重，并且3分是理想的)。总而言之，在这项研究中，饲喂作为tmr一部分的feed青贮饲料的乳牛的产乳提高，同时保持了乳质量和体况。实例12feed玉米补充对高产乳牛的产乳和饲料摄入的影响目标：为了确定饲喂从表达α淀粉酶性状的杂种(feed玉米”或“efc”)产生的玉米青贮饲料对比饲喂标准玉米青贮饲料对过渡型高产乳牛的饲料摄入和产乳的影响。种植、收获和储存：先正达为研究提供了efc杂种玉米的种子(efc种子)和近等值线杂种玉米的种子(对照种子)，提供的量足以播种大约22英亩/杂种，其中目标播种率为33,000个种子/英亩。在相同的45英亩土地上使用24行播机播种种子。在全株水分为62％-65％时收获efc青贮饲料和对照青贮饲料，并储存在隔离的农用袋中，用商业乳制品接种剂(dairyinoculant)lb500接种。动物与处理：基于预期的产犊日期、泌乳、体况得分(bcs)和先前的产乳(me305)，将进入其第二次或更多次泌乳期的二十四(24)头荷斯坦(holstein)不产乳的乳牛区组化，用于处理。随机分配以下两种饮食处理：1)对照玉米青贮饲料和2)efc青贮饲料。在预期产犊前约3-4周开始，将不产乳的乳牛圈养在生物防治个体饲料站(biocontrolindividual饲料stations)中，在此产前期间的日粮包括指定的青贮饲料处理(对照对比efc)。产犊后，给动物分配高乳牛日粮中的两种玉米青贮饲料处理之一。使动物留在生物防治(biocontrol)围栏中长达90个泌乳天数(dim)。处理分配参见表20。随着第一组通过90dim，生物防治门(biocontrolgate)开始再次可用后，尽快对第二组的二十四(24)头乳牛重复整个实验。表20.实验设计1全混合日粮日粮和饲料输送：每天两次给在商业畜棚或公共围栏中圈养的乳牛饲喂全混合日粮(tmr)，而每天一次给在生物防治门圈养的动物饲喂tmr。使用roto-mix旋转混合机，制备一次装载中所有围栏的基础日粮(没有玉米青贮饲料)。混合基础日粮后，卸载日粮，并将其一半与对照青贮饲料一起添加到混合机中。将日粮进一步混合并输送到对照围栏或生物防治门。清洁混合机，并将卸载的基础日粮的剩余一半与efc玉米青贮饲料一起重新装载入混合机中。混合后，将efc处理玉米青贮饲料日粮输送至其各自的围栏或生物防治门。在每日饲喂之前读取饲料槽，并根据料槽中剩余的残留饲料对饲喂量进行相应调整。将乳牛饲喂至略微拒食，0到4量表的评分为1；其中0表示没有剩余的饲料，而1表示是1％-5％的饲料剩余。使用tmr跟踪器(digi-star公司，威斯康星州阿特金森堡(fortatkinson，wi))以电子方式记录混合配方、输送的饲料和剩余在料槽中的残留饲料。为了保持一致的养分密度，应定期调整日粮的成分组成，以解决玉米青贮饲料和苜蓿青贮饲料中干物质含量随时间的变化。测量参数：在个体层面每天记录一次生物防治门中不产乳的乳牛的干物质摄入(dmi)。乳牛产后每天挤奶3次，并记录和储存个体乳产量。每周从每头乳牛收集一次乳样品，直到在连续3次挤奶时到90dim，并且由agsource实验室(agsourcelaboratories)(威斯康星州梅诺莫尼(menomonie，wi))分析脂肪的、蛋白质的和乳糖的百分比，体细胞计数(scc)以及乳尿素氮(mun)。每天的个体dmi记录为从0-90dim。在试验期间，每周采集个体乳牛体重。dairycomp305(dc305；瓦利农业软件公司(valleyagriculturalsoftware)，加利福尼亚州图莱尔(tulare，ca))中记录了乳牛事件，例如健康、繁殖等。干物质摄入/围栏是根据每日饲料输送量减去饲料拒食量计算的。在试验前、产犊时、45dim和试验的最后一天进行bcs测量。当将每头乳牛放到生物防治门内(产犊前约30天)以及在0、45和90dim时记录运动评分。每周收集一次tmr和拒食量，并冻结直到分析。在第0、14、28和42天，收集粪便样品并分析粪便淀粉。在过去45天中，每月一次收集粪便样品，直到产乳高峰。每周记录3次每个青贮饲料袋中表面(12”)和36”处的温度，对每个深度在青贮饲料袋的整个表面探测5个位置。连续四周进行实验室青贮饲料稳定性研究。结果。结果显示产乳和乳饲料效率(每食用饲料磅数产生的乳磅数)增加如下(表21)：1磅/头/天2磅dmi/头/天3乳量/饲料摄入·对照产前/对照产后(处理1)大约为103.5磅乳/头/天，对比efc产前/efc产后(处理4)为111.4磅/头/天·在产前和产后饲喂efc时，经90天泌乳，平均7.9磅/头/天的差异·其他2个处理(产前期或产后期的efc；处理2和3)产生了中间结果·处理1(对照产前/对照产后)的饲料效率为1.656，对比处理4(efc产前/efc产后)的饲料效率为1.792。实例13乳牛性能研究：饲喂feed谷物和青贮饲料的组合威斯康星大学麦迪逊分校(universityofwisconsin-madison)的阿灵顿农业研究中心(arlingtonagricultureresearchcenter)进行了一项乳牛性能研究。该围栏研究使用了在泌乳中期的多胎荷斯坦乳牛。有16个围栏，每个围栏8头乳牛，总共128头乳牛。实验开始于2周的协变量期，向所有乳牛饲喂相同的饮食。在随后的10周中，给围栏随机分配四种饮食之一，这些饮食含有不同水平的feed玉米青贮饲料或feed玉米谷物。四种实验饮食处理是：1)40％常规玉米青贮饲料和15％常规玉米谷物(阴性对照)2)40％feed玉米青贮饲料和15％常规玉米谷物(玉米青贮饲料影响)3)40％常规玉米青贮饲料和15％feed玉米谷物(玉米谷物影响)4)40％feed玉米青贮饲料和15％feed玉米谷物(阳性对照)要测量的样品/响应变量：干物质摄入：每天随意给乳牛饲喂全混合日粮(tmr)，将供应的量调整为每个围栏拒食的5％-10％。每周将草料在60℃下干燥48h，以调整tmr成分混合的干物质(dm)变化。饲料成分：每周对单个饲料成分、tmr、精饲料混合物和残屑进行一次采样，并保持冷冻，以备后续分析。每两周将每种饲料成分样品复合、干燥、并在维利氏磨粉机中研磨以通过1.0mm筛。分析样品中的粗蛋白(cp)、中性洗涤纤维(ndf)、酸性洗涤纤维(adf)、淀粉、木质素、醚提取物(脂肪)和灰分。此外，确定草料、精饲料混合物(包括常规的和feed玉米青贮饲料和谷物)的30h时的瘤胃体外ndf消化率(ndfd30h)、7h时的瘤胃体外淀粉消化率。产乳和乳组成：在实验过程中每天测量每头乳牛的乳产量。乳牛每天上午和下午共挤奶两次。每两周连续两天(4次挤奶)收集乳样品用于获取乳组成。分析乳样品中的脂肪、蛋白质、乳糖、体细胞和乳尿素氮(mun)浓度。点尿样品：每隔6h间隔在4个时间点(以覆盖24h时间)收集每头乳牛的尿液样品。分析尿液样品中的嘌呤衍生物和肌酐浓度，以估计微生物蛋白的合成和尿液量。血液样品：在试验结束时，收集每头乳牛的血液样品并分析一次氨基酸谱。体重(bw)和体况得分(bcs)：在试验开始时，在实验饮食的第5周和实验最后一周期间，连续2天测量乳牛的bw和bcs。实例14乳废物产生研究：饲喂feed谷物和青贮饲料的组合威斯康星大学(universityofwisconsin)使用饲喂常规的或feed玉米青贮饲料和feed玉米谷物的泌乳乳牛，进行了乳牛性能、肠甲烷排放、瘤胃代谢、氮利用和养分消化率的研究。材料与方法实验设计是重复的4x4拉丁方(每方4头乳牛，4个时间段)，四个28天的时间段(适应期14天，数据收集14天)，试验为期16周。将二十头处于泌乳中期的多胎泌乳乳牛被圈养在一个拴养式畜棚(tie-stallbarn)中。除了四个方的非插管乳牛外，还有四只瘤胃插管(rc)乳牛采用双交叉设计。乳牛每天饲喂一次，并每天挤奶两次。下面列出了非插管乳牛的四种饮食处理，其中含有不同水平的feed玉米青贮饲料或feed玉米谷物。给乳牛随机分配方内4种饮食处理顺序。非插管乳牛的四种实验饮食处理是：1)40％常规玉米青贮饲料和15％常规玉米谷物(阴性对照)2)40％feed玉米青贮饲料和15％常规玉米谷物(玉米青贮饲料影响)3)40％常规玉米青贮饲料和15％feed玉米谷物(玉米谷物影响)4)40％feed玉米青贮饲料和15％feed玉米谷物(阳性对照)rc乳牛的饮食为1)(阴性对照)和4)(阳性对照)(例如，饮食顺序为1)→4)→1)→4)双交叉)。要测量的样品/响应变量：干物质摄入：向乳牛每天随意饲喂一次全混合日粮(tmr)，除了在采样期间的rc乳牛(每天上午8点和下午8点供应两次饮食，其中调整供应量为每头乳牛的拒食量的5％-10％)。每周将草料在60℃下干燥48h，以调整tmr成分混合的干物质(dm)变化。饲料成分：每周对单个饲料成分、tmr、精饲料混合物和残屑进行一次采样，并保持冷冻，以备后续分析。在每个时间段的最后两周将每种饲料成分样品复合、干燥、并在维利氏磨粉机中研磨以通过1.0mm筛。分析样品的总能量、粗蛋白(cp)、中性洗涤纤维(ndf)、不可消化的中性洗涤纤维(undf)、酸性洗涤纤维(adf)、淀粉、水溶性碳水化合物、木质素、醚提取物和灰分。分析残屑样品中的淀粉、灰分、cp和ndf以及undf。此外，确定草料、精饲料混合物(包括常规的和feed玉米青贮饲料和谷物)的30h时的瘤胃体外ndf消化率(ndfd30h)、7h时的瘤胃体外淀粉消化率。产乳和乳组成：在实验过程中每天测量每头乳牛的乳产量。乳牛每天上午和下午共挤奶两次。在每个时间段的最后两周中连续两天(4次挤奶)收集乳样品用于获取乳组成。分析乳样品中的脂肪、蛋白质、乳糖、体细胞和mun浓度。体重(bw)和体况得分(bcs)：在试验开始时以及每个时间段的第四周期间，连续2天测量乳牛的bw和bcs。肠甲烷(ch4)排放：在每个时间段的第三周期间测量每头乳牛的ch4。每天多次(最大频率为每四个小时一次)用greenfeed系统(c-lock有限公司(c-lockinc.)，南达科他州拉皮德市(rapidcity，southdakota))进行甲烷测量。在给乳牛分配不同的饮食处理之前，对20头饲喂相同牛群饮食的非插管乳牛进行两周的适应和greenfeed系统选择。在这两周期间，将greenfeed系统多次放在乳牛前面，以训练它们适应ch4测量设备。在选择周结束时，将不适应greenfeed的乳牛和协议中的任何其他乳牛放回乳牛群，仅16头乳牛(除了4头rc乳牛)用于评估饮食处理的影响。瘤胃液采样：在每个时间段饲喂后2h和4h，从4头rc乳牛采样一次瘤胃液，以分析vfa、氨和ph曲线。瘤胃池大小和瘤胃消化物养分：在每个时间段的第21天(3周时间段)在晚上12点(喂食后4h)和早上7点(喂食前1h)，通过瘤胃插管将4头rc乳牛中的每一个的瘤胃内容物手动排空。确定总的瘤胃内容物质量和体积，并收集1kg瘤胃消化物子样品，以分析有机质(om)、中性洗涤纤维(ndf)、不可消化的中性洗涤纤维(undf)和淀粉、并将排出的消化物放回瘤胃。om、ndf、undf和淀粉的瘤胃池大小是通过将每种组分的浓度乘以瘤胃消化物dm来确定的。重瓣胃消化物采样：在每个时间段的最后一周期间，使用huhtanen等人(1997.janimsci[动物科学杂志].75:1380–1392)开发的并且由ahvenjarvi等人(2000,br.j.nutr[英国营养杂志]83:67-77)和lopes等人(2015j.dairysci[乳品科学杂志]98:574-585)改进的重瓣胃采样技术来定量从rc乳牛的瘤胃流到重瓣胃的消化物。难消化的ndf、coedta(“co”)和lantanum(“la”)分别用作大颗粒相、液相和小颗粒相的消化物流标记。从每个时间段的第20天开始，在0600、1200、1800和0000h，通过瘤胃插管给药含有1gla和0.75gco的明胶胶囊(每天总共4gla和3gco)，持续7天，并在第20天给药3次。从第23天到第25天，每天以2h间隔获取重瓣胃样品4次，以代表24h。将复合的重瓣胃样品分为3个重瓣胃相，并分析标记浓度。结果，从瘤胃流出的重瓣胃表观消化物复原。确定了重瓣胃消化物中om、ndf、淀粉、非氨-n和微生物n的浓度。还确定了瘤胃养分的消化率和流速。体外ndf消化率：将常规的和feed玉米青贮饲料和玉米谷物进行干燥和研磨。将一式三份的样品放入ankom袋中，并在39℃水浴中的缓冲瘤胃液中孵育0、24、30、48h(4个样品来源x4个时间点x一式三份＝48个ankom样品袋)。然后用ankom200纤维分析仪(安康科技公司(ankomtechnology)，纽约州费尔波特(fairport，ny))，根据α-淀粉酶和硫化钠对袋中的ndf进行分析，以确定ndf残留。然后可以计算出玉米产品的纤维消化动力学。点尿样品：在每个时间段的第四周期间的四个时间点(以覆盖24h)收集点尿样品。用0.072m的硫酸酸化尿液样品，酸与尿液的体积比为4:1。将尿液样品冷冻至-20℃直至分析。将每个时间段每头乳牛的尿液样品复合成一个样品，并分析其总n、尿肌酐和尿液尿素。以尿中的肌酐作为内部标记估算每头乳牛的每日尿量。此外，还分析了饮食复合的尿液样品在每个时间段的总能量。粪便随机采集样品：在点尿采样的同一时间，从每头乳牛的直肠采集粪便样品(4次，间隔每6h，以覆盖24h)。将每头乳牛的粪便样品按重量复合，并且干燥、研磨、并分析undf、ndf、有机质、总氮和淀粉的总消化道养分消化率。以undf作为内部标记估算每天的粪便dm输出。此外，还分析了饮食复合的粪便样品在每个时间段的总能量。利用来自摄入、和粪便以及尿液的总能量，可以确定能量平衡，包括饮食中的可消化能量和可代谢能量。血液样品：从尾静脉采集血液，每个时间段最多采集三次，以获取血液中的尿素氮。实例15以feed玉米作为谷物的乳牛研究多项农场研究表明，将feed玉米谷物纳入日粮来饲喂泌乳乳牛是有益的。在最初的农场研究中，使用6.5磅/头/天的feed玉米谷物直接替代相同量的常规2号黄玉米谷物作为均衡日粮的一部分，显示可以使产乳免受通常预期的夏季热量相关的输出下降的影响。将每种常规玉米和feed玉米都研磨成450μm的粒度，并且不对日粮组成进行其他改变。在春季末和夏季天气转暖期间，在过去几年中乳牛的产乳通常下降3-5磅/头/天，而从春季末(饲喂feed玉米期)开始对比之前三十天(间歇feed玉米期)，未观察到将feed玉米谷物纳入日粮后产乳量或质量下降(表22)。饲喂期的粪便样品分析显示，与间歇期相比，粪便淀粉减少了43％，而表观总消化道淀粉消化率(attsd)从95.42％dm提高到98.07％dm。表22.泌乳性能、粪便淀粉和总消化道淀粉消化率*表观总消化道淀粉消化率在第二个乳牛地点，主治营养师认为，在泌乳乳牛日粮中用相同量的feed玉米谷物替代常规玉米谷物(6.5磅/头/天，粒度为450μm)对控制a型产气荚膜梭菌(clostridiumperfringens)的难控流行病是有益的。这种生物体虽然是乳牛肠道菌群的正常组成部分，但在某些情况下(包括压力、营养失衡或瘤胃酸中毒)会导致严重或致命的疾病。这种流行病已经持续了6个月，且标准抗生素和抗毒素治疗的成功有限。一旦为牛群换成含有feed玉米谷物的日粮，治疗成功就会得到改善，并且流行病很快就结束了。尽管尚未完全了解它发生的机理，但通过增加淀粉的消化率来降低瘤胃酸中毒和减少肠道中过多的淀粉可能是重要的因素。在第三项研究中，十头乳牛(代表大约一万二千头泌乳乳牛，它们全部使用同一位咨询营养师，并且全部接受包括在其牛群日粮(来自一家饲料加工厂)中的玉米谷物)参与了直接替代研究，其中将它们的混合日粮中的常规玉米用feed玉米(6.5磅/头/天，粒度为450μm)替代，研究持续60到90天。在此期间，不对日粮进行其他改变。在此内含物水平下，避免了先前描述的夏季产乳下降。在逐渐将日粮中包括的feed玉米谷物增加至13.5磅/头/天(增加2至2.5磅/头天)的这些乳牛的子集中，观察到产乳增加而乳质量参数没有下降。以上所述情形是用作说明本发明的，并且不应当解释为本发明的限制。本发明是由以下权利要求限定的，这些权利要求的等效物被包括在其中。本文引用的所有的公开、专利申请、专利以及其他参考文件对于引用中提及的有关句子和/或段落的传授内容通过引用以其全文并入本文。序列表<110>syngentaparticipationsagwatson,eileendorotheairagavarapu,tammirajkumarwitherspoon,david<120>改善的动物饲料组合物及使用方法<130>81471-us-l-org-nat-1<160>5<170>patentinversion3.5<210>1<211>436<212>prt<213>人工<220><223>合成<400>1metalalystyrleugluleuglugluglyglyvalilemetglnala151015phetyrtrpaspvalproserglyglyiletrptrpaspthrilearg202530glnlysileproglutrptyraspalaglyileseralailetrpile354045proproalaserlysglymetserglyglytyrsermetglytyrasp505560protyrasptyrpheaspleuglyglutyrtyrglnlysglythrval65707580gluthrargpheglyserlysglngluleuileasnmetileasnthr859095alahisalatyrglyilelysvalilealaaspilevalileasnhis100105110argalaglyglyaspleuglutrpasnprophevalglyasptyrthr115120125trpthrasppheserlysvalalaserglylystyrthralaasntyr130135140leuaspphehisproasngluleuhisalaglyaspserglythrphe145150155160glyglytyrproaspilecyshisasplyssertrpaspglntyrtrp165170175leutrpalaserglnglusertyralaalatyrleuargserilegly180185190ileaspalatrpargpheasptyrvallysglytyrglyalatrpval195200205vallysasptrpleuasntrptrpglyglytrpalavalglyglutyr210215220trpaspthrasnvalaspalaleuleuasntrpalatyrsersergly225230235240alalysvalpheasppheproleutyrtyrlysmetaspalaalaphe245250255aspasnlysasnileproalaleuvalglualaleulysasnglygly260265270thrvalvalserargaspprophelysalavalthrphevalalaasn275280285hisaspthraspileiletrpasnlystyrproalatyralapheile290295300leuthrtyrgluglyglnprothrilephetyrargasptyrgluglu305310315320trpleuasnlysasplysleulysasnleuiletrpilehisaspasn325330335leualaglyglyserthrserilevaltyrtyraspseraspglumet340345350ilephevalargasnglytyrglyserlysproglyleuilethrtyr355360365ileasnleuglyserserlysvalglyargtrpvaltyrvalprolys370375380phealaglyalacysilehisglutyrthrglyasnleuglyglytrp385390395400valasplystyrvaltyrserserglytrpvaltyrleuglualapro405410415alatyraspproalaasnglyglntyrglytyrservaltrpsertyr420425430cysglyvalgly435<210>2<211>1308<212>dna<213>人工<220><223>合成<400>2atggccaagtacctggagctggaggagggcggcgtgatcatgcaggcgttctactgggac60gtcccgagcggaggcatctggtgggacaccatccgccagaagatccccgagtggtacgac120gccggcatctccgcgatctggataccgccagcttccaagggcatgtccgggggctactcg180atgggctacgacccgtacgactacttcgacctcggcgagtactaccagaagggcacggtg240gagacgcgcttcgggtccaagcaggagctcatcaacatgatcaacacggcgcacgcctac300ggcatcaaggtcatcgcggacatcgtgatcaaccacagggccggcggcgacctggagtgg360aacccgttcgtcggcgactacacctggacggacttctccaaggtcgcctccggcaagtac420accgccaactacctcgacttccaccccaacgagctgcacgcgggcgactccggcacgttc480ggcggctacccggacatctgccacgacaagtcctgggaccagtactggctctgggcctcg540caggagtcctacgcggcctacctgcgctccatcggcatcgacgcgtggcgcttcgactac600gtcaagggctacggggcctgggtggtcaaggactggctcaactggtggggcggctgggcg660gtgggcgagtactgggacaccaacgtcgacgcgctgctcaactgggcctactcctccggc720gccaaggtgttcgacttccccctgtactacaagatggacgcggccttcgacaacaagaac780atcccggcgctcgtcgaggccctgaagaacggcggcacggtggtctcccgcgacccgttc840aaggccgtgaccttcgtcgccaaccacgacacggacatcatctggaacaagtacccggcg900tacgccttcatcctcacctacgagggccagcccacgatcttctaccgcgactacgaggag960tggctgaacaaggacaagctcaagaacctgatctggattcacgacaacctcgcgggcggc1020tccactagtatcgtgtactacgactccgacgagatgatcttcgtccgcaacggctacggc1080tccaagcccggcctgatcacgtacatcaacctgggctcctccaaggtgggccgctgggtg1140tacgtcccgaagttcgccggcgcgtgcatccacgagtacaccggcaacctcggcggctgg1200gtggacaagtacgtgtactcctccggctgggtctacctggaggccccggcctacgacccc1260gccaacggccagtacggctactccgtgtggtcctactgcggcgtcggc1308<210>3<211>2223<212>dna<213>人工<220><223>合成<400>3atggccaagtacctggagctggaggagggcggcgtgatcatgcaggcgttctactgggac60gtcccgagcggaggcatctggtgggacaccatccgccagaagatccccgagtggtacgac120gccggcatctccgcgatctggataccgccagcttccaagggcatgtccgggggctactcg180atgggctacgacccgtacgactacttcgacctcggcgagtactaccagaagggcacggtg240gagacgcgcttcgggtccaagcaggagctcatcaacatgatcaacacggcgcacgcctac300ggcatcaaggtcatcgcggacatcgtgatcaaccacagggccggcggcgacctggagtgg360aacccgttcgtcggcgactacacctggacggacttctccaaggtcgcctccggcaagtac420accgccaactacctcgacttccaccccaacgagctgcacgcgggcgactccggcacgttc480ggcggctacccggacatctgccacgacaagtcctgggaccagtactggctctgggcctcg540caggagtcctacgcggcctacctgcgctccatcggcatcgacgcgtggcgcttcgactac600gtcaagggctacggggcctgggtggtcaaggactggctcaactggtggggcggctgggcg660gtgggcgagtactgggacaccaacgtcgacgcgctgctcaactgggcctactcctccggc720gccaaggtgttcgacttccccctgtactacaagatggacgcggccttcgacaacaagaac780atcccggcgctcgtcgaggccctgaagaacggcggcacggtggtctcccgcgacccgttc840aaggccgtgaccttcgtcgccaaccacgacacggacatcatctggaacaagtacccggcg900tacgccttcatcctcacctacgagggccagcccacgatcttctaccgcgactacgaggag960tggctgaacaaggacaagctcaagaacctgatctggattcacgacaacctcgcgggcggc1020tccactagtatcgtgtactacgactccgacgagatgatcttcgtccgcaacggctacggc1080tccaagcccggcctgatcacgtacatcaacctgggctcctccaaggtgggccgctgggtg1140tacgtcccgaagttcgccggcgcgtgcatccacgagtacaccggcaacctcggcggctgg1200gtggacaagtacgtgtactcctccggctgggtctacctggaggccccggcctacgacccc1260gccaacggccagtacggctactccgtgtggtcctactgcggcgtcggcacatcgattgct1320ggcatcctcgaggccgacagggtcctcaccgtcagcccctactacgccgaggagctcatc1380tccggcatcgccaggggctgcgagctcgacaacatcatgcgcctcaccggcatcaccggc1440atcgtcaacggcatggacgtcagcgagtgggaccccagcagggacaagtacatcgccgtg1500aagtacgacgtgtcgacggccgtggaggccaaggcgctgaacaaggaggcgctgcaggcg1560gaggtcgggctcccggtggaccggaacatcccgctggtggcgttcatcggcaggctggaa1620gagcagaagggccccgacgtcatggcggccgccatcccgcagctcatggagatggtggag1680gacgtgcagatcgttctgctgggcacgggcaagaagaagttcgagcgcatgctcatgagc1740gccgaggagaagttcccaggcaaggtgcgcgccgtggtcaagttcaacgcggcgctggcg1800caccacatcatggccggcgccgacgtgctcgccgtcaccagccgcttcgagccctgcggc1860ctcatccagctgcaggggatgcgatacggaacgccctgcgcctgcgcgtccaccggtgga1920ctcgtcgacaccatcatcgaaggcaagaccgggttccacatgggccgcctcagcgtcgac1980tgcaacgtcgtggagccggcggacgtcaagaaggtggccaccaccttgcagcgcgccatc2040aaggtggtcggcacgccggcgtacgaggagatggtgaggaactgcatgatccaggatctc2100tcctggaagggccctgccaagaactgggagaacgtgctgctcagcctcggggtcgccggc2160ggcgagccaggggttgaaggcgaggagatcgcgccgctcgccaaggagaacgtggccgcg2220ccc2223<210>4<211>3285<212>dna<213>白宇佐美曲霉（aspergillusshirousami）<400>4gccaccccggccgactggcgctcccagtccatctacttcctcctcaccgaccgcttcgcc60cgcaccgacggctccaccaccgccacctgcaacaccgccgaccagaagtactgcggcggc120acctggcagggcatcatcgacaagctcgactacatccagggcatgggcttcaccgccatc180tggatcaccccggtgaccgcccagctcccgcagaccaccgcctacggcgacgcctaccac240ggctactggcagcaggacatctactccctcaacgagaactacggcaccgccgacgacctc300aaggccctctcctccgccctccacgagcgcggcatgtacctcatggtggacgtggtggcc360aaccacatgggctacgacggcgccggctcctccgtggactactccgtgttcaagccgttc420tcctcccaggactacttccacccgttctgcttcatccagaactacgaggaccagacccag480gtggaggactgctggctcggcgacaacaccgtgtccctcccggacctcgacaccaccaag540gacgtggtgaagaacgagtggtacgactgggtgggctccctcgtgtccaactactccatc600gacggcctccgcatcgacaccgtgaagcacgtgcagaaggacttctggccgggctacaac660aaggccgccggcgtgtactgcatcggcgaggtgctcgacgtggacccggcctacacctgc720ccgtaccagaacgtgatggacggcgtgctcaactacccgatctactacccgctcctcaac780gccttcaagtccacctccggctcgatggacgacctctacaacatgatcaacaccgtgaag840tccgactgcccggactccaccctcctcggcaccttcgtggagaaccacgacaacccgcgc900ttcgcctcctacaccaacgacatcgccctcgccaagaacgtggccgccttcatcatcctc960aacgacggcatcccgatcatctacgccggccaggagcagcactacgccggcggcaacgac1020ccggccaaccgcgaggccacctggctctccggctacccgaccgactccgagctgtacaag1080ctcatcgcctccgccaacgccatccgcaactacgccatctccaaggacaccggcttcgtg1140acctacaagaactggccgatctacaaggacgacaccaccatcgccatgcgcaagggcacc1200gacggctcccagatcgtgaccatcctctccaacaagggcgcctccggcgactcctacacc1260ctctccctctccggcgccggctacaccgccggccagcagctcaccgaggtgatcggctgc1320accaccgtgaccgtgggctccgacggcaacgtgccggtgccgatggccggcggcctcccg1380cgcgtgctctacccgaccgagaagctcgccggctccaagatatgctcctcctccaagccg1440gccaccctcgactcctggctctccaacgaggccaccgtggcccgcaccgccatcctcaac1500aacatcggcgccgacggcgcctgggtgtccggcgccgactccggcatcgtggtggcctcc1560ccgtccaccgacaacccggactacttctacacctggacccgcgactccggcatcgtgctc1620aagaccctcgtggacctcttccgcaacggcgacaccgacctcctctccaccatcgagcac1680tacatctcctcccaggccatcatccagggcgtgtccaacccgtccggcgacctctcctcc1740ggcggcctcggcgagccgaagttcaacgtggacgagaccgcctacgccggctcctggggc1800cgcccgcagcgcgacggcccggccctccgcgccaccgccatgatcggcttcggccagtgg1860ctcctcgacaacggctacacctccgccgccaccgagatcgtgtggccgctcgtgcgcaac1920gacctctcctacgtggcccagtactggaaccagaccggctacgacctctgggaggaggtg1980aacggctcctccttcttcaccatcgccgtgcagcaccgcgccctcgtggagggctccgcc2040ttcgccaccgccgtgggctcctcctgctcctggtgcgactcccaggccccgcagatcctc2100tgctacctccagtccttctggaccggctcctacatcctcgccaacttcgactcctcccgc2160tccggcaaggacaccaacaccctcctcggctccatccacaccttcgacccggaggccggc2220tgcgacgactccaccttccagccgtgctccccgcgcgccctcgccaaccacaaggaggtg2280gtggactccttccgctccatctacaccctcaacgacggcctctccgactccgaggccgtg2340gccgtgggccgctacccggaggactcctactacaacggcaacccgtggttcctctgcacc2400ctcgccgccgccgagcagctctacgacgccctctaccagtgggacaagcagggctccctg2460gagatcaccgacgtgtccctcgacttcttcaaggccctctactccggcgccgccaccggc2520acctactcctcctcct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