一种凡纳滨对虾卵巢促熟的配合饲料及其制备方法

本发明属于海产品养殖领域，涉及一种凡纳滨对虾养殖技术，具体涉及凡纳滨对虾卵巢促熟的配合饲料及其制备方法。

背景技术：

凡纳滨对虾(litopenaeusvannamei)原产于墨西哥索诺拉到秘鲁北部的东太平洋，近年来在世界范围内被广泛养殖。根据世界粮农组织的统计，凡纳滨对虾在世界范围内的养殖产量从1999年的18.6万吨上升到2018年的4966.2万吨。凡纳滨对虾于1987年被引入中国，由于其较高的经济价值和良好的养殖特性，目前已经成为我国最主要的对虾养殖品种。

种虾环节处于整个凡纳滨对虾产业链的开端，我国大部分凡纳滨对虾种虾从国外公司进口，对国外种虾的依赖严重制约了我国凡纳滨对虾产业的发展。国内自2004年开始，通过引进、消化吸收和自主创新，建立了基于规模化家系的“水产动物多性状复合育种技术”，全人工亲体培育已成为凡纳滨对虾产业的技术关键。

营养无疑是亲体培育的关键因素之一，决定着亲体的性腺发育和生殖性能。目前国内外对雌性凡纳滨对虾促熟主要基于眼柄切除手术并通过饲喂沙蚕、鱿鱼强化其营养达到性腺熟化目的。虽然该项技术在全球多地已广泛应用，且生产中的应用也较为成熟。但是其中存在的弊端在于：其一，切除眼柄虽能快速促进卵巢发育成熟和批量产卵，但切除眼柄后亲虾由于失去性腺抑制激素的调控，使其时时处于旺盛的发育状态，直至卵巢衰竭，破坏性的操作有时会加剧死亡率的上升；其二，沙蚕中含有大量不饱和脂肪酸，尤其是二十碳五烯酸(epa)和二十二碳六烯酸(dha)的含量非常丰富，是水产生物亲体如对虾亲体等的优质饵料；鱿鱼含有的一些性激素或甾醇类物质能有效地诱导卵黄物质的产生和积累，二者营养价值高，对亲虾的繁殖有较理想的效果。但是，它们在应用过程中存在价格昂贵、破坏水质、传染病原、质量不稳定等一系列问题。相比之下，人工配合饲料具有营养全面、质量稳定、投喂方便、易贮存运输等优点。

脂质是生殖发育中重要的营养元素，饵料的脂肪水平及脂肪酸组成对亲虾性腺成熟和生殖性能具极为重要作用。磷虾油中含有多种磷脂酰胆碱、磷脂酰肌醇、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸和磷脂酸。磷虾油具有高浓度的长链多不饱和脂肪酸(pufa)：二十碳五烯酸(epa，13.8～20.3％)和二十二碳六烯酸(dha，5.6～17.4％)是一种有价值的日粮补充剂。虽然鱼油含有相似含量的epa和dha，但与之相比，磷虾油的独特之处在于ω-3多不饱和脂肪酸，特别是二十碳五烯酸(epa)和二十二碳六烯酸(dha)，其富含磷脂衍生的ω-3脂肪酸，比鱼油中的甘油三脂(tag)更具生物利用度。此外，磷虾油还含有虾青素，是一种类胡萝卜素色素和强大的天然抗氧化剂。磷脂是虾类的一种必须营养素，是虾类卵巢中脂肪的主要组分，主要以磷脂酰胆碱和磷脂酰乙醇胺形式存在。因此，磷虾油可作为亲虾卵巢促熟的日粮脂肪源。

技术实现要素：

本发明的目的是提供了一种以磷虾油为主要脂肪源替代生物饵料的配合饲料，本发明配合饲料具有营养全面、质量稳定、投喂方便、易贮存运输等优点，在技术上可取代饲喂生物饵料，不仅可以使亲虾健康生长，还能有效地促进亲虾性腺发育，促进亲虾分泌生殖激素，增强生殖性能。

为了实现上述目的，本发明的技术方案为：提供一种凡纳滨对虾卵巢促熟的配合饲料，其中，包括以下重量份数的组分：鱼粉100～300份、酪蛋白200～400份、明胶50～100份、玉米淀粉100～200份、鱼油1～20份、磷虾油10～50份、胆固醇1～10份、棕榈油10～50份、无水碳酸钙0.5～5份、五水合乳酸钙1～10份、氯化胆碱1～10份、肌型肌醇1～10份、甜菜碱0.1～1份、维生素预混料10～30份、矿物质预混料1～20份、2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚10～30份、羧甲基纤维素钠10～30份、微晶纤维素40～100份。

进一步地，所述维生素预混料包括以下组分：维生素a醋酸酯、l-抗坏血酸-2-聚磷酸盐35％活性c、叶酸、生物素、核黄素、dlca-泛酸、吡哆醇、酛胺盐酸盐、维生素b12、维生素k3、维生素d3、dl-α-生育酚乙酸、烟酸、脱脂米糠。

进一步地，所述维生素预混料包括以下重量百分比的组分：维生素a醋酸酯0.1～1％、l-抗坏血酸-2-聚磷酸盐35％活性c10～40％、叶酸0.1～1％、生物素1～5％、核黄素1～5％、dlca-泛酸1～10％、吡哆醇1～5％、酛胺盐酸盐0.1～1％、维生素b120.1～1％、维生素k31～5％、维生素d30.1～1％、dl-α-生育酚乙酸5～10％、烟酸1～10％、脱脂米糠30～50％。

进一步地，所述矿物质预混料包括以下组分：一水硫酸锌、碘酸钙、五水硫酸铜、一水硫酸锰、一水硫酸镁、氯化钴、一水硫酸亚铁、亚硒酸钠、二水磷酸氢钙、麸皮面粉。

进一步地，所述矿物质预混料包括以下百分比的组分：一水硫酸锌1～3％、碘酸钙0.1～1％、五水硫酸铜0.5～1％、一水硫酸锰0.5～1％、一水硫酸镁2～5％、氯化钴0.1～1％、一水硫酸亚铁0.5～1％、亚硒酸钠0.1～1％、二水磷酸氢钙10～20％、麸皮面粉70～80％。

本发明的另一目的在于提供一种凡纳滨对虾卵巢促熟的配合饲料的制备方法，包括以下步骤：

s1、将鱼粉、明胶、2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚分别在高速粉碎机中进行粉碎，并使用60～80目筛网过筛，备用；

s2、将氯化胆碱、肌型肌醇、甜菜碱一起融入20～100ml去离子水中，得到离子水混合液；

s3、按添加量由小至大依次在容器中加入无水碳酸钙、五水合乳酸钙、胆固醇、矿物质预混料、维生素预混料、羧甲基纤维素钠、微晶纤维素、明胶、玉米淀粉、鱼粉、酪蛋白，充分混匀，得到预混料；

s4、在预混料中依次加入2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚、鱼油、磷虾油、棕榈油、离子水混合液，充分混匀；

s5、混匀搅拌，使用60～80目筛网过筛，筛下物转至于强力搅拌机中充分搅拌，并补充2～5ml去离子水再次搅拌，得到柔软面沙状的混合料；

s6、将混合料转至双螺旋研磨机中挤压成颗粒物，在室温下风干，得到凡纳滨对虾卵巢促熟的配合饲料。

进一步地，所述颗粒物直径为1.5～3mm、长度0.2～1cm。

进一步地，所述颗粒物在室温下风干至水分含量低于10％，储存于-20℃下。

与现有技术相比，本发明凡纳滨对虾卵巢促熟的配合饲料具有以下的有益效果：

(1)本发明配合饲料能显著提高亲虾血清中雌二醇(e2)和甲基法尼酯(mf)的含量，促进亲虾卵巢中卵黄颗粒的沉积，可替代生物饵料使亲虾卵巢成熟，降低亲虾因摄食生物饵料感染病原菌的风险；

(2)本发明配合饲料可提高肝胰腺中谷胱甘肽过氧化物酶(gsh-px)和超氧化物歧化酶(sod)的活性，提升亲虾肝胰腺抗氧化能力，并降低过氧化脂质降解产物中的丙二醛(mda)水平，减小机体细胞受自由基攻击程度，是一种既能使亲虾健康生长，又能促进卵巢成熟的人工配合饲料。

附图说明

图1为本发明饲料中添加磷脂可促进亲虾雌性个体肝胰腺和卵巢中脂质的积累图；

图2为本发明和对照组1-3中的亲虾卵巢组织切片对比图；

图3为本发明和对照组1-3中的亲虾性腺指数(a)及激素水平(b/c)对比图；

图4为本发明和对照组1-3中的亲虾抗氧化酶活对比图；

图5a为对照组4饲喂的沙蚕，图5b为对照组4摄食沙蚕的亲虾粪便，图5c为本发明和对照组1-3摄食饲料的亲虾粪便；

图6为本发明和对照组1-4中水环境和亲虾粪便中的弧菌量图。

具体实施方式

实施例1

(一)预处理：挑选健康、均匀、活力强的雌性凡纳滨对虾(体重30～35g，体长13～15cm，日龄160d)，入池前使用1500～2000ppm的聚维酮碘溶液浸泡消毒3～5s，以防治丝状细菌、真菌和原生动物感染。

(二)养殖池1#：亲虾养殖池(圆桶)：d(4.0)m×h(1.1)m，控制实际存水量为6.0～6.3m³，配置控光、控温、增氧系统。

(三)本发明凡纳滨对虾卵巢促熟的配合饲料的制备方法，包括以下步骤：

s1、将鱼粉200g、明胶80g、2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚20g分别在高速多功能粉碎机(型号：4500y)中进行粉碎，并使用80目筛网过筛，备用；

s2、将氯化胆碱4g、肌型肌醇5g、甜菜碱0.25g一起融入50ml去离子水中，得到离子水混合液；

s3、按添加量由小至大依次在容器中加入无水碳酸钙1g、五水合乳酸钙4g、胆固醇5g、矿物质预混料10g、维生素预混料20g、羧甲基纤维素钠20g、微晶纤维素70.75g、明胶80g、玉米淀粉150g、鱼粉200g、酪蛋白320g，充分混匀，得到预混料；

s4、在预混料中依次加入2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚20g、鱼油10g、磷虾油40g、棕榈油40g、离子水混合液，充分混匀；

s5、混匀搅拌，使用60目筛网过筛，筛下物转至于强力搅拌机(型号：b20)中充分搅拌，并补充2.5ml去离子水再次搅拌，得到柔软面沙状的混合料；

s6、将混合料转至双螺旋研磨机(型号：cd4-1ts)中挤压成直径为2.5mm、长度0.5cm的颗粒物，在室温下风干至水分含量低于10％，储存于-20℃下，得到凡纳滨对虾卵巢促熟的配合饲料。

所述维生素预混料包括以下重量百分比的组分：维生素a醋酸酯(50万iu/g)：0.48％、l-抗坏血酸-2-聚磷酸盐35％活性c：35.71％、叶酸：0.18％、生物素：2.5％、核黄素：3％、dlca-泛酸：5％、吡哆醇：1％、酛胺盐酸盐：0.5％、维生素b12：0.2％、维生素k3：2％、维生素d3(50万iu/g)：0.8％、dl-α-生育酚乙酸(250iu/g)：8％、烟酸：5％、脱脂米糠：35.63％。

所述矿物质预混料包括以下重量百分比的组分：一水硫酸锌：2％、碘酸钙：0.1％、五水硫酸铜：0.6％、一水硫酸锰：1％、一水硫酸镁：4％、氯化钴：1％、一水硫酸亚铁：0.8％、亚硒酸钠：0.8％、二水磷酸氢钙：15％、麸皮面粉：74.7％。

(四)亲虾养殖：暂养密度为50尾/池，日换水量1/3～1/2，换水前以虹吸的方式清除残饵、蜕壳和粪便，维持良好的水质环境(水温28～29℃，ph7.8～8.4，盐度30～32ppt，溶解氧5.0～6.0mg/l，氨氮0.10～0.30mg/l，亚硝氮0.03～0.10mg/l)每日控制光照周期为l:d＝12-14:10～12。

(五)亲虾饲喂：为期28d的养殖实验，饲喂上述饲料。养殖期间为避免饲料在养殖水体中长时间浸泡导致营养成分流失，每天分别在7:30、10:00、13:00、15:00、18:00、21:00、23:30进行7次投喂，日投喂量为总体重的5～8％，每日根据天气情况和摄食情况进行料量调整。

实施例2

(一)预处理：挑选健康、均匀、活力强的雌性凡纳滨对虾(体重30～35g，体长13～15cm，日龄160d)，入池前使用1500～2000ppm的聚维酮碘溶液浸泡消毒3～5s，以防治丝状细菌、真菌和原生动物感染。

(二)养殖池1#：亲虾养殖池(圆桶)：d(4.0)m×h(1.1)m，控制实际存水量为6.0～6.3m³，配置控光、控温、增氧系统。

(三)本发明凡纳滨对虾卵巢促熟的配合饲料的制备方法，包括以下步骤：

s1、将鱼粉100g、明胶50g、2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚10g分别在高速多功能粉碎机中进行粉碎，并使用80目筛网过筛，备用；

s2、将氯化胆碱1g、肌型肌醇1g、甜菜碱0.1g一起融入100ml去离子水中，得到离子水混合液；

s3、按添加量由小至大依次在容器中加入无水碳酸钙0.5g、五水合乳酸钙1g、胆固醇1g、矿物质预混料1g、维生素预混料10g、羧甲基纤维素钠10g、微晶纤维素49.34g、明胶50g、玉米淀粉100g、鱼粉100g、酪蛋白200g，充分混匀，得到预混料；

s4、在预混料中依次加入2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚10g、鱼油1g、磷虾油10g、棕榈油10g、离子水混合液，充分混匀；

s5、混匀搅拌，使用80目筛网过筛，筛下物转至于强力搅拌机中充分搅拌，并补充2ml去离子水再次搅拌，得到柔软面沙状的混合料；

s6、将混合料转至双螺旋研磨机中挤压成直径为1.5mm、长度0.2cm的颗粒物，在室温下风干至水分含量低于10％，储存于-20℃下，得到凡纳滨对虾卵巢促熟的配合饲料。

所述维生素预混料包括以下重量百分比的组分：维生素a醋酸酯(50万iu/g)：1％、l-抗坏血酸-2-聚磷酸盐35％活性c：40％、叶酸：0.1％、生物素：1％、核黄素：1％、dlca-泛酸：1％、吡哆醇：1％、酛胺盐酸盐：0.1％、维生素b12：0.1％、维生素k3：1％、维生素d3(50万iu/g)：1％、dl-α-生育酚乙酸(250iu/g)：10％、烟酸：10％、脱脂米糠：32.7％。

所述矿物质预混料包括以下重量百分比的组分：一水硫酸锌：1％、碘酸钙：0.1％、五水硫酸铜：1％、一水硫酸锰：1％、一水硫酸镁：2％、氯化钴：1％、一水硫酸亚铁：1％、亚硒酸钠：0.1％、二水磷酸氢钙：12.8％、麸皮面粉：80％。

(四)亲虾养殖：暂养密度为50尾/池，日换水量1/3～1/2，换水前以虹吸的方式清除残饵、蜕壳和粪便，维持良好的水质环境(水温28～29℃，ph7.8～8.4，盐度30～32ppt，溶解氧5.0～6.0mg/l，氨氮0.10～0.30mg/l，亚硝氮0.03～0.10mg/l)每日控制光照周期为l:d＝12-14:10～12。

(五)亲虾饲喂：为期28d的养殖实验，饲喂上述饲料。养殖期间为避免饲料在养殖水体中长时间浸泡导致营养成分流失，每天分别在7:30、10:00、13:00、15:00、18:00、21:00、23:30进行7次投喂，日投喂量为总体重的5～8％，每日根据天气情况和摄食情况进行料量调整。

实施例3

(一)预处理：挑选健康、均匀、活力强的雌性凡纳滨对虾(体重30～35g，体长13～15cm，日龄160d)，入池前使用1500～2000ppm的聚维酮碘溶液浸泡消毒3～5s，以防治丝状细菌、真菌和原生动物感染。

(二)养殖池1#：亲虾养殖池(圆桶)：d(4.0)m×h(1.1)m，控制实际存水量为6.0～6.3m³，配置控光、控温、增氧系统。

(三)本发明凡纳滨对虾卵巢促熟的配合饲料的制备方法，包括以下步骤：

s1、将鱼粉300g、明胶50g、2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚30g分别在高速粉碎机中进行粉碎，并使用80目筛网过筛，备用；

s2、将氯化胆碱10g、肌型肌醇10g、甜菜碱1g一起融入20～100ml去离子水中，得到离子水混合液；

s3、按添加量由小至大依次在容器中加入无水碳酸钙5g、五水合乳酸钙10g、胆固醇10g、矿物质预混料20g、维生素预混料30g、羧甲基纤维素钠30g、微晶纤维素40g、明胶50g、玉米淀粉100g、酪蛋白234g、鱼粉300g、充分混匀，得到预混料；

s4、在预混料中依次加入2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚30g、鱼油20g、磷虾油50g、棕榈油50g、离子水混合液，充分混匀；

s5、混匀搅拌，使用80目筛网过筛，筛下物转至于强力搅拌机中充分搅拌，并补充5ml去离子水再次搅拌，得到柔软面沙状的混合料；

s6、将混合料转至双螺旋研磨机中挤压成直径为3mm、长度1cm颗粒物，在室温下风干至水分含量低于10％，储存于-20℃下，得到凡纳滨对虾卵巢促熟的配合饲料。

所述维生素预混料包括以下重量百分比的组分：维生素a醋酸酯(50万iu/g)：1％、l-抗坏血酸-2-聚磷酸盐35％活性c：20％、叶酸：1％、生物素：5％、核黄素：5％、dlca-泛酸：10％、吡哆醇：5％、酛胺盐酸盐：1％、维生素b12：1％、维生素k3：5％、维生素d3(50万iu/g)：1％、dl-α-生育酚乙酸(250iu/g)：5％、烟酸：10％、脱脂米糠：30％。

所述矿物质预混料包括以下重量百分比的组分：一水硫酸锌：3％、碘酸钙：1％、五水硫酸铜：1％、一水硫酸锰：1％、一水硫酸镁：5％、氯化钴：1％、一水硫酸亚铁：1％、亚硒酸钠：1％、二水磷酸氢钙：16％、麸皮面粉：70％。

(四)亲虾养殖：暂养密度为50尾/池，日换水量1/3～1/2，换水前以虹吸的方式清除残饵、蜕壳和粪便，维持良好的水质环境(水温28～29℃，ph7.8～8.4，盐度30～32ppt，溶解氧5.0～6.0mg/l，氨氮0.10～0.30mg/l，亚硝氮0.03～0.10mg/l)每日控制光照周期为l:d＝12-14:10～12。

(五)亲虾饲喂：为期28d的养殖实验，饲喂上述饲料。养殖期间为避免饲料在养殖水体中长时间浸泡导致营养成分流失，每天分别在7:30、10:00、13:00、15:00、18:00、21:00、23:30进行7次投喂，日投喂量为总体重的5～8％，每日根据天气情况和摄食情况进行料量调整。

对照组1(饲喂pl0组饲料)

对照组1除了饲料不含有磷虾油、胆固醇、鱼油和棕榈油，其余组分、制备方法及养殖、饲喂过程均与本发明实施例1均相同。

对照组2(饲喂sl组饲料)

对照组2除了饲料中将磷虾油替换为大豆卵磷脂及不含维生素预混料和矿物质预混料；其余组分、制备方法及养殖、饲喂过程均与本发明实施例1均相同。

对照组3(饲喂el组饲料)

对照组3除了饲料中将磷虾油替换为蛋黄卵磷脂；其余组分、制备方法及养殖、饲喂过程均与本发明实施例1均相同。

对照组4(饲喂bb组生物饵料，沙蚕:鱿鱼＝3:2)

对照组4除了饲喂沙蚕、鱿鱼活饵，其余养殖步骤和本发明实施例1相同。

监测及检测：养殖实验期间检测水环境及粪便弧菌含量；养殖实验结束后检测摄食不同饲料组血清中雌二醇(e2)含量、甲基法尼酯(mf)含量；肝胰腺抗氧化酶活性(超氧化物歧化酶sod、丙二醛mda、谷胱甘肽过氧化物酶gsh-px)；观察卵巢组织切片。最终以上述指标评判凡纳滨对虾雌性生殖性能。

本发明实施例与对照组1-4养殖亲虾结果情况分析(图中不同字母表示差异性显著(p<0.05))：

本发明实施例和对照组1-4分别饲喂雌性凡纳滨对虾28d。如图1所示，本发明饲料中添加磷脂可促进雌性个体肝胰腺和卵巢中脂质的积累。如图2亲虾卵巢组织切片所示，本发明(ko组)比对照组1(pl0组)、对照组2(sl组)和对照组3(el组)更有效地促进亲虾卵巢中卵黄颗粒的沉积。

如图3所示，各处理组的性腺指数gsi由初始0.51％上升至2.23％～4.69％，其中添加磷脂源饲料的雌虾比未添加的(对照组1)具有更高的gsi值(p<0.05)。同时本发明(ko组)的gsi值高于对照组2(sl组)(p<0.05)，而对照组3(el组)介于两者之间(图3a)。与对照组1(pl0组)相比，添加磷脂组血清中的雌激素雌二醇e2(图3b)和甲基法尼酯mf(图3c)含量显著增加(p<0.05)，本发明(ko组)的值均高于el和sl组(p<0.05)。

如图4所示，与pl0组相比，本发明和对照组2-3饲喂添加磷脂源饲料的雌虾肝胰腺中丙二醛含量较低(p<0.05)(图4b)，且超氧化物歧化酶sod(图4a)和谷胱甘肽过氧化物酶gsh-px(图4c)的活性较高(p<0.05)，本发明在三种不同磷脂源中抗氧化效果是最好的。

如图5、6所示，与饲喂生物饵料bb组相比，本发明和对照组1-3水环境中的弧菌量显著低于bb组(p<0.05)(图6a)，且本发明和对照组1-3粪便中的弧菌量也显著低于bb组(p<0.05)(图6b)。结果表明，本发明饲料能够有效降低亲虾因摄食生物饵料感染病原菌的风险。

因此，磷虾油是一种较好的脂质来源，添加于饲料中可促进凡纳滨对虾卵巢成熟。同时本发明饲料中的组分及配比，并不是随机挑选或添加，而是需要经过反复筛选配比实验，有选择的挑选及按一定的比例进行组合而成。本发明人工配合饲料可取代饲喂生物饵料，具有营养全面、质量稳定、投喂方便、易贮存运输等优点，不仅可以使亲虾健康生长，还能有效地促进亲虾性腺发育，促进亲虾分泌生殖激素，增强生殖性能，具有广阔的应用前景。

以上所揭露的仅为本发明的较佳实施例而已，当然不能以此来限定本发明之权利范围，因此依本发明权利要求所作的等同变化，仍属于本发明所涵盖的范围。