一种美白、抗光、淡斑组合物及其制备方法与流程

40份、茯苓10-20份、菊花5-15份。
13.本发明组合物中所述的中药粉优选由如下重量份的药材组成：白芷10份、薏苡仁30份、茯苓15份、菊花10份。所述的菊花优选为胎菊。
14.本发明组合物中中药粉的制备方法为：按照配方量称取白芷、薏苡仁、茯苓、菊花进行提取，加10倍量的水，提取2次，每次提取2小时，合并提取液过滤，所得滤液进行浓缩，浓缩至密度为1.10-1.20，过滤，干燥，粉碎，得中药粉。
15.本发明组合物作为产品时，可以制成固体饮料、软体饮料、混合粉、米稀、奶昔、压片糖果、丸剂、胶囊或片剂。
16.本发明组合物片剂的制备工艺为：a中药粉的制备：白芷、薏苡仁、茯苓、菊花进行提取，加10倍量的水，提取2次，每次提取2小时，合并提取液过滤，所得滤液进行浓缩，浓缩至密度为1.10-1.20，过滤，干燥，粉碎，得中药粉；b成品的制备：按照配方量称取朝鲜蓟粉、酵母抽提物、橄榄果粉、葡萄籽提取物、针叶樱桃果粉、中药粉进行混合，加物料重量15%-25%的95%乙醇进行湿法制粒，制粒，60℃干燥、整粒，得干颗粒；按常规方法进行压片、包衣即得。
17.本发明组合物服用方便、口感好，满足了目标人群改善皮肤，抑制黑色素形成，抵抗光老化，美白祛斑的效果；且便于运输，贮存期长，安全有效，方便爱美人士长期服用，适于在人群中推广。
18.附图说明：图1. 组合物美白功效头部黑色素典型图图2. 组合物处理后斑马鱼头部黑色素信号强度与正常对照组比较，**p 《 0.01，***p 《 0.001图3. 组合物对斑马鱼美白功效图4. 组合物祛斑功效头部黑色素典型图图5. 组合物处理后斑马鱼头部黑色素信号强度与正常对照组比较，*p 《 0.05，***p 《 0.001图6. 组合物对斑马鱼祛斑功效图7. 组合物处理后斑马鱼酪氨酸酶活性（吸光度值）与正常对照组比较，***p 《 0.001图8. 组合物对斑马鱼酪氨酸酶活性抑制功效图9. 组合物尾鳍损伤典型图图10. 组合物处理后斑马鱼尾鳍面积与模型对照组比较，***p 《 0.001图11. 组合物皮肤损伤修复功效试验例1： 为了考察本发明组合物的功效，特采用野生型ab品系斑马鱼该组合物对美白祛斑作用进行了功效性评价。
19.一、检测器材1. 样品信息组合物，棕粉色片剂，临用时用超纯水配制成20mg/ml母液，试验后，需要将样品-20℃冷冻封存，以供备查。
20.阳性对照：“symwhite377”，馨肤白是德之馨的一款高效的新型美白剂，白色粉末，德之馨（上海）有限公司，批号为20200608，4℃保存。临用前用100%dmso配制成75 mg/ml母液，现配现用；临用时按需稀释，最终工作液中dmso含量为1%。
21.2. 实验动物斑马鱼均饲养于28℃的养鱼用水中（水质：每1l反渗透水中加入200mg速溶海盐，电导率为450~550
µ
s/cm；ph为6.5~8.5；硬度为50~100 mg/l caco3），由杭州环特生物科技股份有限公司养鱼中心繁殖提供，实验动物使用许可证号为：syxk（浙）2012-0171，饲养管理符合国际aaalac认证（认证编号：001458）的要求。
22.野生型ab品系斑马鱼，以自然成对交配繁殖方式进行，共210尾，每实验组为30尾，年龄为受精后6小时（6hpf）。用于美白祛斑功效评价最大检测浓度（mtc）测定。
23.野生型ab品系斑马鱼，以自然成对交配繁殖方式进行，共600尾，每实验组为30尾，年龄为6hpf。用于美白祛斑功效评价。
24.3. 仪器和试剂解剖显微镜（szx7，olympus，japan）；ccd相机（verta1，上海土森视觉科技有限公司）；精密电子天平（cp214，ohaus，usa）；多功能酶标仪（spark，tecan，switzerland）；高速冷冻离心机（pic017/21，thermo，usa）。
25.甲基纤维素（批号079k0054v，sigma，usa）；6孔板（nest biotech，china）；ripa裂解液（批号p0013b，beyotime，china）；pmsf（批号st506-2，beyotime，china），l-左旋多巴（批号i1705022，上海阿拉丁生化科技股份有限公司）；二甲基亚砜（dmso，批号bcbz1685，sigma，usa）。
26.检测方法mtc：最大检测浓度随机选取210尾6hpf野生型ab品系斑马鱼于六孔板中，每孔（实验组）均处理30尾斑马鱼。分别水溶给予组合物15.6、31.3、62.5、125、250和500
µ
g/ml浓度，同时设置正常对照组（标准稀释水处理斑马鱼），每孔容量为3ml。各实验组处理48小时后，移除药液；继续处理24小时后实验结束，观察记录斑马鱼的毒性表型和死亡情况，确定组合物对正常斑马鱼的mtc。
27.美白祛斑功效随机选取150尾6hpf野生型ab品系斑马鱼于六孔板中，每孔均处理30尾斑马鱼。分别水溶给予组合物6.94、20.8和62.5
µ
g/ml浓度，阳性对照组“symwhite377”750
µ
g/ml浓度，同时设置正常对照组，每孔容量为3ml。1）各实验组处理48小时后，每组随机选取10尾斑马鱼置于解剖显微镜下拍照并保存图片，使用image-j pro高级图像处理软件进行分析并采集数据，分析斑马鱼头部黑色素信号强度（s1），以头部黑色素信号强度的统计学分析结果评价组合物对斑马鱼的美白功效；2）剩余斑马鱼及时洗脱，各实验组均用标准稀释水继续处理24小时后，每组随机选取10尾斑马鱼置于解剖显微镜下拍照并保存图片，使用image-j pro高级图像处理软件进行分析并采集数据，分析斑马鱼头部黑色素信号强度（s2），以头部黑色素信号强度的统计学分析结果评价组合物对斑马鱼的祛斑功效。统计学处理结果采用mean
±
se表示。美白和祛斑功效计算公式如下：
用方差分析和dunnett’s t-检验进行统计学分析，p 《 0.05表明具有显著性差异。
28.酪氨酸酶活性抑制功效随机选取450尾6 hpf野生型ab品系斑马鱼于六孔板中，每孔均处理30尾斑马鱼。水溶给予组合物6.94、20.8和62.5
ꢀµ
g/ml浓度，阳性对照组“symwhite377”750
µ
g/ml浓度，同时设置正常对照组，每孔容量为3ml。平行设置三次实验。各实验组处理48小时后实验结束，立即收集斑马鱼样本，采用多巴胺氧化法，利用多功能酶标仪在475nm波长处测定各实验组斑马鱼吸光度值（od值），以吸光度值的统计学分析结果评价组合物对斑马鱼酪氨酸酶活性的抑制功效。统计学处理结果采用mean
±
se表示。酪氨酸酶活性抑制功效计算公式如下：用方差分析和dunnett’s t-检验进行统计学分析，p 《 0.05表明具有显著性差异。
29.三、检测结果1. mtc在本实验条件下，组合物美白祛斑功效评价mtc为62.5
µ
g/ml。
30.2. 美白功效在本实验条件下，组合物有明显的美白功效。
31.3. 祛斑功效
在本实验条件下，组合物有祛斑功效。
32.4. 酪氨酸酶活性抑制功效在本实验条件下，组合物有明显的酪氨酸酶活性抑制功效。
33.试验例2：检测项目：皮肤损伤修复功效评价一、检测器材1. 样品信息组合物，棕粉色片剂，临用时用超纯水配制成20mg/ml母液，母液使用后会-20℃储存，等项目完全结束后，客户收到检测报告无疑问后处理。
34.阳性对照：茶多酚，褐色粉末，批号为y23m10b83928，上海源叶生物科技有限公司，阴凉干燥保存。临用时用超纯水配制成10 mg/ml母液，现配现用。
35.2. 实验动物斑马鱼均饲养于28℃的养鱼用水中（水质：每1l反渗透水中加入200mg速溶海盐，电导率为450~550
µ
s/cm；ph为6.5~8.5；硬度为50~100 mg/l caco3），由杭州环特生物科技股份有限公司养鱼中心繁殖提供，实验动物使用许可证号为：syxk（浙）2012-0171，饲养管理符合国际aaalac认证（认证编号：001458）的要求。
36.野生型ab品系斑马鱼，以自然成对交配繁殖方式进行，共240尾，每实验组为30尾，年龄为受精后3天（3dpf）。用于皮肤损伤修复功效评价mtc测定。
37.野生型ab品系斑马鱼，以自然成对交配繁殖方式进行，共180尾，每实验组为30尾，年龄为3dpf。用于皮肤损伤修复功效评价。
38.3. 仪器和试剂解剖显微镜（szx7，olympus，japan）；ccd相机（verta1，上海土森视觉科技有限公司）；精密电子天平（cp214，ohaus，usa）；紫外线光疗仪（kn-4006，徐州市科诺医学仪器设备有限公司）。
39.甲基纤维素（批号079k0054v，sigma，usa）；6孔板（nest biotech，china）。
40.二、检测方法
1. mtc随机选取240尾3dpf野生型ab品系斑马鱼于六孔板中，每孔（每实验组）均处理30尾斑马鱼。分别水溶给予组合物15.6、31.3、62.5、125、250和500
µ
g/ml浓度，同时设置正常对照组（标准稀释水处理斑马鱼）和模型对照组，每孔容量为3ml。除正常对照组外，各实验组处理2小时后，用紫外照射诱导斑马鱼建立光老化模型；各实验组继续处理24小时后实验结束，观察统计斑马鱼的毒性表型和死亡情况，确定组合物对光损伤模型斑马鱼的mtc。
41.2. 皮肤损伤修复功效随机选取180尾3dpf野生型ab品系斑马鱼于六孔板中，每孔均处理30尾斑马鱼。分别水溶给予组合物3.47、10.4和31.3
µ
g/ml，阳性对照组茶多酚10.0
µ
g/ml浓度，同时设置正常对照组和模型对照组，每孔容量为3ml。除正常对照组外，各实验组处理2小时后，用紫外照射诱导斑马鱼建立光损伤模型；各实验组继续处理24小时后，每组随机选取10条斑马鱼在解剖显微镜下拍照并保存图片，使用nis-elements d 3.10高级图像处理软件进行分析并采集数据，分析斑马鱼尾鳍面积（s3），以尾鳍面积的统计学分析结果评价组合物对紫外照射诱发的斑马鱼皮肤损伤修复功效。统计学处理结果用mean
±
se表示，皮肤损伤修复功效计算公式如下：统计学分析采用方差分析和dunnett’s t检验，p 《 0.05表明具有显著性差异。
42.三、检测结果1. mtc2. 皮肤损伤修复功效在本实验条件下，组合物有明显的皮肤损伤修复功效。
具体实施方式
43.下面通过具体实施例对本发明作进一步详细描述，以助于理解本发明的内容。
[0044] 实施例1：称取中药材：白芷100g、薏苡仁300g、茯苓150g、胎菊100g中药粉的制备按照配方量称取白芷、薏苡仁、茯苓、胎菊进行提取，加入10倍量水提取2次、每次提取2小时，提取过滤，所得滤液进行浓缩，浓缩至密度为1.10~1.20，200目纱布过滤，得浓缩液进行干燥，得中药粉。
[0045]
称取朝鲜蓟粉50g、酵母抽提物100g、橄榄果粉100g、葡萄籽提取物100g、针叶樱桃果粉100g、中药粉100g将称取的朝鲜蓟粉、酵母抽提物、橄榄果粉、葡萄籽提取物、针叶樱桃果粉、中药粉进行混合，加物料重量15%-25%的95%乙醇进行湿法制粒，过20目摇摆制粒，60℃干燥（水分控制在3%~4%），烘干过程中需翻动物料，防止板结。20目摇摆制粒机整粒，得干颗粒。按常规方法制成片剂即可。
[0046]
实施例2：称取中药材：白芷50g、薏苡仁400g、茯苓100g、胎菊150g中药粉的制备按照配方量称取白芷、薏苡仁、茯苓、胎菊进行提取，加入10倍量水提取2次、每次提取2小时，提取过滤，所得滤液进行浓缩，浓缩至密度为1.10~1.20，200目纱布过滤，得浓缩液进行干燥，得中药粉。
[0047]
称取朝鲜蓟粉20g、酵母抽提物150g、橄榄果粉50g、葡萄籽提取物150g、针叶樱桃果粉50g、中药粉150g将称取的朝鲜蓟粉、酵母抽提物、橄榄果粉、葡萄籽提取物、针叶樱桃果粉、中药粉进行混合，加物料重量15%-25%的95%乙醇进行湿法制粒，60℃干燥，水分控制在4%，烘干过程中需翻动物料，防止板结。20目摇摆制粒机整粒，得干颗粒。按常规方法制成固体饮料即可。
[0048]
实施例3：称取中药材：白芷150g、薏苡仁200g、茯苓200g、胎菊50g中药粉的制备按照配方量称取白芷、薏苡仁、茯苓、胎菊进行提取，加入10倍量水提取2次、每次提取2小时，提取过滤，所得滤液进行浓缩，浓缩至密度为1.10~1.20，200目纱布过滤，得浓缩液进行干燥，得中药粉。
[0049]
称取朝鲜蓟粉80g、酵母抽提物50g、橄榄果粉150g、葡萄籽提取物50g、针叶樱桃果粉150g、中药粉50g将称取的朝鲜蓟粉、酵母抽提物、橄榄果粉、葡萄籽提取物、针叶樱桃果粉、中药粉进行混合，加物料重量15%-25%的95%乙醇进行湿法制粒， 60℃干燥，水分控制在3%。整粒，得干颗粒。按常规方法制成胶囊即可。