一种改善睡眠的保健食品及其制备方法与流程

1.本发明涉及保健食品技术领域，具体涉及一种改善睡眠的保健食品及其制备方法。


背景技术：

2.随着社会竞争的加剧，生活节奏的加快，人们的生活压力变大，睡眠障碍的发生率呈上升趋势。睡眠障碍表现为睡眠量不正常以及睡眠中出现异常行为，也表现为睡眠和觉醒正常节律性交替紊乱。失眠是常见的睡眠障碍。失眠等睡眠障碍会给人带来焦虑、抑郁、注意力不集中、记忆障碍等后果，引起身心疲惫、全身免疫功能下降等问题，给患者身体和心理带来严重的危害。
3.因此，改善睡眠质量对预防疾病和保护人们身心健康意义重大。目前，改善睡眠、治疗失眠等睡眠障碍的方法主要有调整生活节奏、适当运动、进行心理疏导、食物调理、药物治疗等方法。其中，药物治疗效果较好，但是药物治疗通常需要长期服药，容易对药物产生依赖，停药后容易发生反弹；且治疗睡眠障碍的药物主要是阿普唑仑、艾司唑仑、氯氮平、劳拉西泮、唑吡坦、佐匹克隆等，长期服用会，会存在毒副作用，增加肝肾功能负担，刺激胃肠道，影响正常消化功能。对于大多数轻症患者，食物调理即可达到理想的效果，对此，保健食品为轻症患者提供了较为理想的选择。
4.但是，目前市面上的保健食品，虽种类繁多，但是具体症状针对性不强，具体用于改善睡眠质量的保健食品种类较少，且效果参差不齐。为此，本发明研发了一种针对存在睡眠障碍的患者食用的改善睡眠质量的保健食品。


技术实现要素：

5.针对上述现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种针对性强，效果良好、适宜长期服用的改善睡眠的保健食品及其制备方法。
6.本发明是通过如下技术方案实现的：一种改善睡眠的保健食品，原料组成及质量分数为：酸枣仁提取物15%~30%、五味子粉10~20%、茯苓提取物10%~18%和百合提取物10%~18%。
7.在本技术的一种实施例中，原料组成及质量分数为：酸枣仁提取物22%~25%、五味子粉15~20%、茯苓提取物13%~15%和百合提取物13%~15%。
8.在本技术的一种实施例中，所述酸枣仁提取物由以下方式制得：取净酸枣仁捣碎、加水浸泡后，煎煮，过滤，浓缩成膏，干膏粉碎制得酸枣仁提取物粉末；和/或者所述五味子粉由以下方式制得：取净五味子，加入固液质量比为1：2~5的黄酒，浸泡，加热蒸煮至表面呈黑紫色或褐色，取出干燥，粉碎制得五味子粉；和/或者所述茯苓提取物和百合提取物由以下方式制得：分别取净茯苓和净百合，粉碎，粉末加热水浸提，浓缩制得浓缩液，向所述浓缩液中加95%乙醇沉淀，静置，离心，获得沉淀物，所述沉淀物经无水乙醇、丙酮或乙醚洗涤，洗涤后的所述沉淀物经真空干燥，制得所述茯苓
提取物和百合提取物。
9.在本技术的一种实施例中，所述保健食品的原料组成及质量分数还包括：破壁灵芝孢子粉3%~5%，和/或天麻提取物5%~10%。
10.在本技术的一种实施例中，所述天麻提取物由以下方式制得：取净天麻块茎，粉碎，加乙醇浸泡45min~60min后，于索氏提取器内加热连续回流30min~45min，冷却后离心，取上清液浓缩，干燥制得所述天麻提取物。
11.在本技术的一种实施例中，所述原料组成及质量分数为：酸枣仁提取物25%、五味子粉20%、茯苓提取物15%、百合提取物15%和破壁灵芝孢子粉5%，玉米淀粉补足余量。
12.在本技术的一种实施例中，所述原料组成及质量分数为：酸枣仁提取物30%、五味子粉10%、茯苓提取物10%和百合提取物10%、破壁灵芝孢子粉3%和天麻提取物7%，玉米淀粉补足余量。
13.在本技术的一种实施例中，所述保健食品的总皂苷含量≥0.38%。
14.一种改善睡眠的保健食品的制备方法，包括如下步骤：步骤s1、将所述酸枣仁提取物、五味子粉、茯苓提取物和百合提取物分别粉碎，过80目筛，制成细粉，备用；步骤s2、分别称取步骤s1中制备的所述酸枣仁提取物、五味子粉、茯苓提取物和百合提取物细粉，与过80目筛后的玉米淀粉进行混合，制得混合粉；步骤s3、将所述混合粉灌装胶囊，制得灌装量为400mg/粒的胶囊。
15.一种改善睡眠的保健食品的制备方法，包括如下步骤：步骤s1、将所述酸枣仁提取物、五味子粉、茯苓提取物、百合提取物、破壁灵芝孢子粉和天麻提取物分别粉碎，过80目筛，制成细粉，备用；步骤s2、分别称取步骤s1中制备的所述酸枣仁提取物、五味子粉、茯苓提取物、百合提取物、破壁灵芝孢子粉和天麻提取物细粉，与过80目筛后的玉米淀粉进行混合，制得混合粉；步骤s3、将所述混合粉灌装胶囊，制得灌装量为400mg/粒的胶囊。
16.与现有技术相比，本发的有益效果是：本发明提供的保健食品遵循中药理论和现代医学理论研制而成，以酸枣仁提取物为主，以五味子粉为辅，配以茯苓提取物、百合提取物等，具有宁心、敛汗、生津、益气、补肾的作用，以及改善失眠、虚烦惊悸、神疲乏力等功效，可供睡眠不佳的成年人食用；该保健食品药性平和，调理脏腑、调节阴阳平衡，进而改善睡眠，原料间无配伍禁忌，食用安全，改善睡眠功能确切，适宜长期服用。
具体实施方式
17.实施例1一种改善睡眠的保健食品，其原料组成及质量分数为：酸枣仁提取物25%、五味子粉20%、茯苓提取物15%和、百合提取物15%和玉米淀粉25%。
18.其中，酸枣仁提取物的制备方法为：取干燥洁净的酸枣仁，捣碎，按固液质量比1:10加入蒸馏水，浸泡8小时，进行煎煮，沸腾1小时，过滤，保留滤液；滤渣加水进行第二次煎煮，沸腾1~2小时，过滤；合并滤液，加热浓缩成膏；待浓缩膏干燥后进行粉碎，制得酸枣仁提
取物粉末。
19.五味子粉的制备方法为：取干燥洁净的五味子，捣碎，加入固液比为1：3的黄酒，密封浸泡，完全浸润后，于蒸锅中加热用黄酒蒸汽熏或直接蒸煮，至五味子表面呈黑紫色或褐色，取出干燥，进行粉碎，制得五味子粉。
20.茯苓提取物的制备方法为：称取洁净干燥的茯苓丁或块进行粉碎，粉末加入热水中进行浸提，固液比为1：30，热水温度为85℃，浸提3小时；浸提液进行抽滤获得滤液，滤液真空减压浓缩为浓缩液，滤液与浓缩液的体积比为10：1；向浓缩液加入10倍体积的95%乙醇进行沉淀，确保沉淀液的醇含量在85%以上，于4℃低温静置8h后，进行离心，获得沉淀物；沉淀物经无水乙醇、或丙酮、或乙醚洗涤，洗涤后的沉淀物进行真空干燥，制得茯苓提取物。
21.该方法获得的茯苓提取物主要成分为茯苓多糖。
22.百合提取物的制备方法：称取洁净干燥的百合，粉碎，加入热水进行浸提，固液比为1：40，热水温度为70℃，浸提8h；浸提液进行抽滤获得滤液，滤液真空减压浓缩为浓缩液，滤液与浓缩液的体积比为10：1；向浓缩液加入95%乙醇进行沉淀，95%乙醇与浓缩液的体积比为10：3，确保沉淀液的醇含量在70%以上，于4℃低温静置8h后，进行离心，获得沉淀物；沉淀物经无水乙醇洗涤，洗涤后的沉淀物进行真空干燥，制得百合提取物。
23.该方法获得的百合提取物主要成分为百合多糖。
24.该改善睡眠的保健食品的制备方法：步骤s1、将上述的酸枣仁提取物、五味子粉、茯苓提取物和百合提取物分别进行粉碎，过80目筛，制成细粉，备用；玉米淀粉也过80目筛，制成细粉。
25.步骤s2、按配方比例，分别称取酸枣仁提取物2.5kg、五味子粉2.0kg、茯苓提取物1.5kg、百合提取物1.5kg和玉米淀粉2.5kg，使用三维混合机（规格型号：syh
‑
200）混合30min，制得混合粉。
26.步骤s3、将上述制得的混合粉，使用全自动胶囊填充机（规格型号：njp
‑
2000c）灌装胶囊，制得灌装量为400mg/粒的胶囊颗粒。
27.步骤s4、抛光除去胶囊表面的粉末，并挑选剔除不合格的胶囊颗粒。
28.步骤s5、装入符合标准的口服固体药用聚酯瓶，规格为60粒/瓶。
29.步骤s6、进行外包装，然后成品检验，检验合格后，入库。
30.上述步骤s1至步骤s5是在洁净度为三十万级的生产车间内完成。
31.本实施例中采用的玉米淀粉可由其他食用固体辅料进行替换。
32.本实施例中制得的保健食品，其总皂苷含量约为0.40%。
33.实施例2一种改善睡眠的保健食品，其原料组成及质量分数为：酸枣仁提取物25%、五味子粉20%、茯苓提取物15%和、百合提取物15%、破壁灵芝袍子粉5%和玉米淀粉20%。
34.其中，酸枣仁提取物、五味子粉、茯苓提取物和百合提取物，采用实施例1中相应的制备方法进行制备。
35.破壁灵芝孢子粉的制备方法为：称取成熟饱满的灵芝孢子粉200g，加入800g玉米淀粉、0.1g纤维素酶（酶活为20万u/g）、0.1g几丁质酶（酶活为10万u/g）和0.05g葡萄糖苷酶（酶活20万u/g），加入温水中进行充分混合，在密闭容器中，40℃浸泡发酵4~6小时，使灵芝孢子壁软化降解；然后将发酵物快速升温至70℃，维持15分钟，使玉米淀粉糊化、灵芝孢子
粉破壁，同时使纤维素酶、几丁质酶和葡萄糖苷酶灭活；最后将发酵物进行干燥、粉碎，制得破壁灵芝孢子粉。
36.该改善睡眠的保健食品的制备方法：步骤s1、将上述的酸枣仁提取物、五味子粉、茯苓提取物、百合提取物和破壁灵芝孢子粉分别进行粉碎，过80目筛，制成细粉，备用；玉米淀粉也过80目筛，制成细粉。
37.步骤s2、按配方比例，分别称取酸枣仁提取物2.5kg、五味子粉2.0kg、茯苓提取物1.5kg、百合提取物1.5kg、破壁灵芝孢子粉0.5kg和玉米淀粉2.0kg，使用三维混合机（规格型号：syh
‑
200）混合30min，制得混合粉。
38.步骤s3、将上述制得的混合粉，使用全自动胶囊填充机（规格型号：njp
‑
2000c）灌装胶囊，制得灌装量为400mg/粒的胶囊颗粒。
39.步骤s4、抛光除去胶囊表面的粉末，并挑选剔除不合格的胶囊颗粒。
40.步骤s5、装入符合标准的口服固体药用聚酯瓶，规格为60粒/瓶。
41.步骤s6、进行外包装，然后成品检验，检验合格后，入库。
42.上述步骤s1至步骤s5是在洁净度为三十万级的生产车间内完成。
43.本实施例中采用的玉米淀粉可由其他食用固体辅料进行替换。
44.本实施例中制得的保健食品，其总皂苷含量约为0.41%。
45.实施例3一种改善睡眠的保健食品，其原料组成及质量分数为：酸枣仁提取物30%、五味子粉10%、茯苓提取物10%和、百合提取物10%、破壁灵芝袍子粉3%、天麻提取物7%和玉米淀粉30%。
46.其中，酸枣仁提取物、五味子粉、茯苓提取物和百合提取物采用实施例1中相应的制备方法进行制备。破壁灵芝孢子粉采用实施例2中描述的制备方法进行制备。
47.天麻提取物的制备方法为：称取干燥洁净的天麻块茎，粉碎，加入体积比为1：10的75%乙醇浸泡45min，置于索氏提取器内加热连续回流提取45min，冷却后离心，取上清液，减压浓缩，回收乙醇，浓缩至相当于生药1~2g/ml时，加入玉米淀粉进行混合，然后真空干燥，制得天麻提取物。
48.该方法获得的天麻提取物主要成分为天麻素。
49.该改善睡眠的保健食品的制备方法：步骤s1、将上述的酸枣仁提取物、五味子粉、茯苓提取物、百合提取物、破壁灵芝孢子粉和天麻提取物分别进行粉碎，过80目筛，制成细粉，备用；玉米淀粉也过80目筛，制成细粉。
50.步骤s2、按配方比例，分别称取酸枣仁提取物6.0kg、五味子粉2.0kg、茯苓提取物2.0kg、百合提取物2.0kg、破壁灵芝孢子粉0.6kg、天麻提取物1.4kg和玉米淀粉6.0kg，使用三维混合机（规格型号：syh
‑
200）混合30min，制得混合粉。
51.步骤s3、将上述制得的混合粉，使用全自动胶囊填充机（规格型号：njp
‑
2000c）灌装胶囊，制得灌装量为400mg/粒的胶囊颗粒。
52.步骤s4、抛光除去胶囊表面的粉末，并挑选剔除不合格的胶囊颗粒。
53.步骤s5、装入符合标准的口服固体药用聚酯瓶，规格为60粒/瓶。
54.步骤s6、进行外包装，然后成品检验，检验合格后，入库。
55.上述步骤s1至步骤s5是在洁净度为三十万级的生产车间内完成。
56.本实施例中采用的玉米淀粉可由其他食用固体辅料进行替换。
57.本实施例中制得的保健食品，其总皂苷含量约为0.39%。
58.实施例4一种改善睡眠的保健食品，其原料组成及质量分数为：酸枣仁提取物22%、五味子粉15%、茯苓提取物13%和、百合提取物15%、天麻提取物10%和玉米淀粉25%。
59.其中，酸枣仁提取物、五味子粉、茯苓提取物和百合提取物，采用实施例1中相应的制备方法进行制备；破壁灵芝孢子粉采用实施例2中相应的制备方法进行制备；天麻提取物采用实施例3中相应的制备方法进行制备。
60.该改善睡眠的保健食品的制备方法：步骤s1、将上述的酸枣仁提取物、五味子粉、茯苓提取物、百合提取物和天麻提取物分别进行粉碎，过80目筛，制成细粉，备用；玉米淀粉也过80目筛，制成细粉。
61.步骤s2、按配方比例，分别称取酸枣仁提取物4.4kg、五味子粉3.0kg、茯苓提取物2.6kg、百合提取物3.0kg、天麻提取物2.0kg和玉米淀粉5.0kg，使用三维混合机（规格型号：syh
‑
200）混合40min，制得混合粉。
62.步骤s3、将上述制得的混合粉，使用全自动胶囊填充机（规格型号：njp
‑
2000c）灌装胶囊，制得灌装量为400mg/粒的胶囊颗粒。
63.步骤s4、抛光除去胶囊表面的粉末，并挑选剔除不合格的胶囊颗粒。
64.步骤s5、装入符合标准的口服固体药用聚酯瓶，规格为60粒/瓶。
65.步骤s6、进行外包装，然后成品检验，检验合格后，入库。
66.上述步骤s1至步骤s5是在洁净度为三十万级的生产车间内完成。
67.本实施例中采用的玉米淀粉可由其他食用固体辅料进行替换。
68.本实施例中制得的保健食品，其总皂苷含量约为0.39%。
69.实施例4一种改善睡眠的保健食品，其原料组成及质量分数为：酸枣仁提取物22%、五味子粉15%、茯苓提取物13%和、百合提取物15%、天麻提取物10%和玉米淀粉25%。
70.其中，酸枣仁提取物、五味子粉、茯苓提取物和百合提取物，采用实施例1中相应的制备方法进行制备；破壁灵芝孢子粉采用实施例2中相应的制备方法进行制备；天麻提取物采用实施例3中相应的制备方法进行制备。
71.该改善睡眠的保健食品的制备方法：步骤s1、将上述的酸枣仁提取物、五味子粉、茯苓提取物、百合提取物和天麻提取物分别进行粉碎，过80目筛，制成细粉，备用；玉米淀粉也过80目筛，制成细粉。
72.步骤s2、按配方比例，分别称取酸枣仁提取物4.4kg、五味子粉3.0kg、茯苓提取物2.6kg、百合提取物3.0kg、天麻提取物2.0kg和玉米淀粉5.0kg，使用三维混合机（规格型号：syh
‑
200）混合40min，制得混合粉。
73.步骤s3、将上述制得的混合粉，使用全自动胶囊填充机（规格型号：njp
‑
2000c）灌装胶囊，制得灌装量为400mg/粒的胶囊颗粒。
74.步骤s4、抛光除去胶囊表面的粉末，并挑选剔除不合格的胶囊颗粒。
75.步骤s5、装入符合标准的口服固体药用聚酯瓶，规格为60粒/瓶。
76.步骤s6、进行外包装，然后成品检验，检验合格后，入库。
77.上述步骤s1至步骤s5是在洁净度为三十万级的生产车间内完成。
78.本实施例中采用的玉米淀粉可由其他食用固体辅料进行替换。
79.本实施例中制得的保健食品，其总皂苷含量约为0.39%。
80.实施例5一种改善睡眠的保健食品，其原料组成及质量分数为：酸枣仁提取物15%、五味子粉20%、茯苓提取物18%和、百合提取物18%、破壁灵芝孢子粉4%、天麻提取物5%和玉米淀粉20%。
81.其中，酸枣仁提取物、五味子粉、茯苓提取物和百合提取物，采用实施例1中相应的制备方法进行制备；破壁灵芝孢子粉采用实施例2中相应的制备方法进行制备；天麻提取物采用实施例3中相应的制备方法进行制备。
82.该改善睡眠的保健食品的制备方法：步骤s1、将上述的酸枣仁提取物、五味子粉、茯苓提取物、百合提取物、破壁灵芝孢子粉和天麻提取物分别进行粉碎，过80目筛，制成细粉，备用；玉米淀粉也过80目筛，制成细粉。
83.步骤s2、按配方比例，分别称取酸枣仁提取物1.5kg、五味子粉2.0kg、茯苓提取物1.8kg、百合提取物1.8kg、破壁灵芝孢子粉0.4kg、天麻提取物0.5kg和玉米淀粉2.0kg，使用三维混合机（规格型号：syh
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200）混合35min，制得混合粉。
84.步骤s3、将上述制得的混合粉，使用全自动胶囊填充机（规格型号：njp
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2000c）灌装胶囊，制得灌装量为400mg/粒的胶囊颗粒。
85.步骤s4、抛光除去胶囊表面的粉末，并挑选剔除不合格的胶囊颗粒。
86.步骤s5、装入符合标准的口服固体药用聚酯瓶，规格为60粒/瓶。
87.步骤s6、进行外包装，然后成品检验，检验合格后，入库。
88.上述步骤s1至步骤s5是在洁净度为三十万级的生产车间内完成。
89.本实施例中采用的玉米淀粉可由其他食用固体辅料进行替换。
90.本实施例中制得的保健食品，其总皂苷含量约为0.42%。
91.实施例6安全性毒理学评价试验一、急性经口毒性试验（最大耐受剂量法，即mtd法）受试物为实施例5制得的胶囊制剂，内容物为棕色粉末，推荐成人服用量为800mg/日，实验时采用蒸馏水溶解配置成所需浓度。
92.sd大鼠（由成都达硕生物科技有限公司提供，合格证号：scxk（川）2008
‑
24号），20只，体重180 g~220 g，雌雄各半。设10 g/kg.bw一个剂量组，称取受试物50g，蒸馏水配制至100 ml，按2 ml/100g.bw一次经口灌胃，灌胃后观察死亡动物数及一般健康情况，根据最大耐受量判断受试物的急性毒性。
93.该急性经口毒性试验的试验结果如表1所示，受试物10 g/kg.bw剂量经口染毒后，两周内未见动物死亡，亦无明显的中毒症状或不良反应。两周试验结束后剖杀全部动物，内脏器官未见明显异常改变。
94.结论：该受试物对雌、雄性sd大鼠的急性经口mtd大于10 g/kg.bw，属实际无毒类。
95.二、遗传毒性试验1、污染物致突变性检测试验（ames试验）受试物为实施例5制得的胶囊制剂，内容物为棕色粉末，推荐成人服用量为800mg/日，实验时采用蒸馏水溶解配置成所需浓度。
96.采用经鉴定符合要求的ta97、ta98、ta100和ta102菌株，进行加与不加大鼠肝s9（由多氯联苯诱导）的标准平皿参入试验（s9混合物用量为0.5 ml/皿）。
97.设五个受试物剂量：8、40、200、1000和5000 μg/皿。准确称取受试物1.0g，加蒸馏水至20ml得到最高工作浓度50 mg/ml。取100 μl加入平皿为最高终浓度5000 μg/皿。其余工作浓度用蒸馏水5倍往下稀释获得。所有配置好的工作液均采用8磅15min高压灭菌。试验时分别取100μl加入平皿中获得所设计的浓度。
98.设自发对照组、溶剂对照组（灭菌蒸馏水100μl/皿）和阳性对照。不加s9试验的阳性对照为2,4,7
‑
三硝基茐酮（2,4,7
‑
tnfone）（0.2μg/皿，适用菌株ta97、ta98）；叠氮钠（nan3）（1.5μg/皿，适用菌株ta100）、丝裂霉素c（mmc）（0.5μg/皿，适用菌株ta102）；加s9试验的阳性对照为2
‑
氨基茐（2
‑
af）（10.0μg/皿，适用菌株ta97、ta98、ta100）、1,8
‑
二羟基蒽醌（dan）（50.0μg/皿，适用菌株ta102）。每个试验剂量作三个平行皿，重复试验一次。
99.该ames试验的试验结果如表2和表3所示，无论加与不加s9的试验，自发对照组的每皿平均回变菌落数均在正常值范围内，而阳性对照组诱发的每皿平均回变菌落数均为自发对照组二倍以上，呈明显阳性反应。该受试物各剂量组的平均回变菌落数均未超过溶剂对照组的一倍，呈阴性反应。
100.结论：该受试物无诱导试验菌株回复突变的作用。
101.2、小数骨髓嗜多染红细胞微核试验受试物为实施例5制得的胶囊制剂，内容物为棕色粉末，推荐成人服用量为800mg/日，实验时采用蒸馏水溶解配置成所需浓度。
102.spk级km种小鼠（由四川省中医药科学院提供），体重25g~30g，随机分为5组，每组10只，雌雄各半。
103.试验设阴性对照（蒸馏水）、阳性对照（环磷酰胺40 mg/kg.bw）和2.5、5.0和10.0 g/kg.bw受试物试验组（分别称取5.0g、10.0g和20.0g受试物，个加蒸馏水至40ml）。
104.动物分别于0小时和第24小时按2ml/100g.bw经口灌胃，末次染毒后6小时处死动物，按程序制片。
105.每只动物计数1000个嗜多染红细胞（pcf），观察含有微核的嗜多染红细胞数，计算
微核率（
‰
），同时观察200个红细胞中pce和rbc所占数目，并计算pce/rbc比值。
106.该小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验的结果如表4所示，阳性对照组雌、雄动物的微核率均显著高于阴性对照组（p＜0.01），受试物各组的微核率与阴性对照组比较均无显著性差异（p＞0.05），提示该受试物在小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验中为阴性结果。
107.3、小鼠精子畸形试验受试物为实施例5制得的胶囊制剂，内容物为棕色粉末，推荐成人服用量为800mg/日，实验时采用蒸馏水溶解配置成所需浓度。
108.spk级km种雄性小鼠（由四川省中医药科学院提供，合格证号：scxk（川）2008
‑
19号），体重25g~35g，随机分为5组，每组5只。
109.试验设阴性对照组，阳性对照组（环磷酰胺cp 40 mg/kg.bw）和2.5 g/kg.bw、5.0 g/kg.bw和10.0 g/kg.bw三个受试物剂量组（灌胃液配制同微核试验），按2 ml/100g.bw经口灌胃动物，连续5天。于首次灌胃后35天处死动物，取双侧附睾，按标准程序制片，每只动物观察1000个完整精子，记录各类畸形精子数。
110.该小鼠精子畸形试验结果如表5所示，阳性对照组的精子畸形率显著高于阴性对照组（p＜0.01），该受试物各剂量组的精子畸形率与阴性对照组比较均无显著性差异（p＞0.05），提示本受试物在小鼠精子畸形试验中为阴性结果。
111.综上，ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验和小鼠精子畸形试验三项遗传毒性试验结果均为阴性，表明该受试物无致突变作用。
112.三、大鼠30天喂养试验受试物为实施例5制得的胶囊制剂，内容物为棕色粉末，推荐成人服用量为800mg/日。
113.断乳sd大鼠（由四川省中医药科学院提供），适应性喂养一周后，按体重随机分为四组，每组20只，雌雄各半。
114.试验设一个阴性对照组（基础饲料）和三个受试物剂量组：400 mg/kg.bw、1000 mg/kg.bw和1600 mg/kg.bw（相当于人体推荐摄入量的30、75和120倍）。按动物体重的10%受试物掺入饲料拌饲。饲料配制方法：每1kg饲料中分别加入4.0g、10g和16g受试物，均加工为颗粒饲料，喂养30天。
115.每周称一次动物体重、两次给食量和剩食量，并计算摄食量。分别按周增重及周摄食量计算周食物利用率（%），同时计算总食物利用率（%）。30天后处死动物，进行血液学、血清生化学及组织病理学检查和脏器系数测定。
116.阴性对照组和3个剂量组动物在30天喂养期间，摄食、饮水、大小便正常，生长发育情况和一般表现良好，未观察到明显行为改变和中毒表现。
117.（1）对体重和食物利用率的影响各实验组在整个试验期间的体重和食物利用率结果参见表6和表7。受试物各剂量组动物各周体重、总增重和总食物利用率经方差分析与阴性对照组比较无显著性差异（p＞0.05），表明该受试物对机体生长发育无不良影响。
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（2）脏器系数测定结果如表8所示，为受试物各剂量组的重要脏器的重量和脏器系数(脏器湿重/体重
×
100)，由表8可见雌、雄鼠各剂量组重要脏器的重量和脏器系数与阴性对照组比较均无显著性差异(p>0.05)。
119.（3）末期血液学检验结果如表9所示，为试验末期的常规血液学指标(红细胞、血红蛋白、白细胞及分类)测定结果。受试物各剂量组雌、雄鼠的血液学测定指标与阴性对照组比较均无显著性差异（p>0.05）。
120.（4）末期生化指标检验结果如表10所示，为各实验组肝功、肾功、血脂和血糖等生化指标检测结果，各剂量组指标与阴性对照组比较均无显著性差异(p>0.05)。
121.（5）组织学检查结果试验结束时对肝、肾、胃、空肠、脾脏和卵巢/睾丸等进行大体检查和组织病理学检查。大体检查未发现明显病变，因此仅选高剂量组和阴性对照组作组织学检查。
122.参见表11~表17所示，镜下见：对照组和高剂量组各发现一例轻度慢性肾盂肾炎，综合分析所出现病变，应属动物的自发病变。因此，各剂量组动物脏器均未见由受试物引起的损害性改变。
123.综上，从表6至表17各项生物学指标检查结果表明，在最高剂量为人体推荐摄入量120倍（1600mg/kg.bw）的大鼠30天喂养试验中，本受试物未引起大鼠的整体健康状况、生理生化功能和器官形态学等各重要指标的异常变化。
124.总结：由实施例5获得的改善睡眠的保健食品对sd大鼠的急性经口mtd大于10 g/kg.bw，为实际无毒类。ames试验、小鼠骨髓细胞微核试验和小鼠精子畸形试验三项遗传毒性试验均为阴性结果，表明该受试物无致突变作用。在最高剂量为人体推荐摄入量120倍（1600 mg/kg.bw）的大鼠30天喂养试验中，未引起大鼠整体健康状况、生理生化功能和器官组织形态学各重要指标的异常变化，初步估计该受试物最大无作用剂量大于1600 mg/kg.bw。
125.因此，可有效证明该改善睡眠的保健食品可长期食用，安全无毒副作用。
126.实施例7改善睡眠功能检验受试物为实施例1制得的胶囊制剂，内容物为棕色粉末，推荐成人服用量为800mg/
日，用蒸馏水配制灌胃液。
127.spf级雌性icr种小鼠（由四川大硕生物科技有限公司提供），随机分为4组，即阴性对照组和受试物0.13 g/kg.bw、0.27 gkg.bw、0.40 g/kg.bw三个剂量组（分别相当于人体推荐摄入量的10、20、30倍）。分别称受试物胶囊的内容物0.26g、0.54g、0.80g溶解于40ml蒸馏水中(每日现配)，作为高、中、低三个剂量组灌胃液。按2%体积每天灌胃一次，连续30天。阴性对照组使用等体积蒸馏水灌胃。
128.1、直接睡眠试验观察各组动物在给予受试样品后，是否出现睡眠现象（睡眠以翻正反射消失为指标）。
129.结果：各组动物在给予受试样品后均未出现睡眠现象，即表明受试物无直接睡眠作用。
130.2、延长戊巴比妥钠睡眠时间试验末次灌胃受试样品或燕馏水30分钟后，给各组动物腹腔注射戊巴比妥钠45 mg/kg.bw，观察并记录注射后动物的睡眠（即失去翻正反射）持续时间。分别计算各组动物的平均睡眠时间。
131.如表18所示，受试物的三个剂量组小鼠平均睡眠时间均长于对照组，但无统计学意义（p>0.05），表明本受试物对戊巴比妥钠诱导的小鼠睡眠时间无显著延长作用。
132.3、戊巴比妥钠阈下剂量催眠试验末次灌胃受试样品或蒸馏水30分钟后，给各组动物腹腔注射戊巴比妥钠27 mg/kg.bw，观察注射后30分钟内的入睡动物数(以翻正反射消失超过1分钟为判断入睡的标准)。分别计算各组动物的睡眠发生率。
133.如表19所示，受试物各剂量组小鼠的睡眠发生率均高于对照组，高剂量组小鼠的睡眠发生率与对照组比较显著增加（p＜0.05），表明本受试物可增加低剂量戊巴比妥钠诱导的小鼠睡眠发生率。
134.4、巴比妥钠睡眠潜伏期试验末次灌胃受试样品或蒸馏水30分钟后，给各组动物腹腔注射巴比妥钠240 mg/kg.bw，观察并记录注射后动物的入睡时间。分别计算各组动物的平均睡眠潜伏期(即入睡时间一注射巴比安钠时间)。
135.如表20所示，该受试物各剂量组小鼠的平均睡眠潜伏时间与对照组比较均有所降低，高剂量组小鼠的平均睡眠潜伏时间与对照组比较显著缩短（p＜0.05），表明本受试物可缩短巴比妥钠诱导的小鼠睡眠潜伏时间。
136.综上，由该受试物改善睡眠功能的检验结果表明，本受试物对小鼠无直接睡眠作用；0.40g/kg.bw剂量组小鼠的入睡率显著高于对照组，平均睡眠潜伏时间显著短于对照组。按评价标准判定，本受试物具有改善睡眠的功能。