专利名称：革兰氏阴性杆菌新编码鉴定方法及专用培养基的制作方法
技术领域：
本发明涉及的是一种微生物的鉴定方法，本发明也涉及一种培养基。
在医学临床、卫生防疫、科研细菌实验等活动中，检出革兰氏阴性杆菌的频度最大，要进行菌种鉴定，往往需要检查许多生物学特征，这种工作的程序比较繁杂，要求工作人员必须有较丰富的细菌学分类鉴定理论知识和实践经验，而且很难得到准确的结果。随着电子计算机技术的飞速发展，出现了借助生物信息编码鉴定细菌的新方法。1994年以徐迪诚为主编的《革兰氏阴性杆菌新编码鉴定手册》出版，并提出了相应的革兰氏阴性杆菌七位编码鉴定方法及其培养基，使细菌实验变的简便易行，并且准确性大为提高。但是七位编码鉴定方法的应用还是比较麻烦。
本发明的目的在于提供一种使用简便，准确率高的革兰氏阴性杆菌新编码鉴定方法及专用培养基。
本发明的目的是这样实现的将未知的被测菌接种于培养基上，检测尿素、IPA、硫化氢、气体、乳糖、赖氨酸、鸟氨酸、动力、靛基质、柠檬酸盐、V-P、DNA十二项指标，这十二项指标按自左至右顺序每三项分为一组，每一组中第一项赋予数值4、第二项赋予数值2、第三项赋予数值1，该未知被测菌在培养基上的那项指标为阴(-)性，则该项指标的数值为0，为阳(+)性，则该项指标为所赋予的数值，将每组的三项指标相加得一个数值，四个数字按顺序排列组成一个四位编码，从编码工具书中找出相同的编码得出未知被测菌的菌种。
本发明的鉴定方法的专用培养基包括I、II两个系列，I系列由分装的尿素、SIM(IPA)、克氏双糖、赖氨酸、鸟氨酸、柠檬盐酸、V-P、DNA八种培养基组成，II系列由O-F、氧化酶、柠檬盐酸、麦芽糖、精氨酸、甘露醇、木糖、硝酸盐、DNA、乙酰胺十种培养基组成。每种培养基的组成分别为尿素培养基的组成为蛋白胨1克、氯化钠5克、磷酸二氢钾2克、葡萄糖1克、琼脂20克、尿素2克、0.6％酚红溶液2毫升、蒸馏水1000毫升；SIM培养基的组成为肉膏3克、蛋白胨30克、次亚硫酸钠0.05克、盐酸胱氨酸0.2克、柠檬酸铁铵0.5克、琼脂3克、蒸馏水1000毫升；克氏双糖培养基的组成为肉膏4克、蛋白胨15克、乳糖10克、葡萄糖1克、氯化钠5克、次亚硫酸钠0.08克、亚硫酸钠0.4克、硫酸亚铁0.2克、酚红0.02克、琼脂10克、蒸馏水1000毫升；赖氨酸或鸟氨酸培养基的组成为蛋白胨5克、肉膏5克、葡萄糖0.5克、吡哆醛0.005克、蒸馏水1000毫升2％溴甲酚紫5毫升、2％酚红2.5毫升及每100毫升标基培养基内加入L-赖氨酸或L-鸟氨酸；柠檬酸盐培养基的组成为磷酸氢二钾1克、磷酸二氢钾1克、柠檬酸钠2克、硫酸镁0.2克、氯化钠5克、蒸馏水1000毫升、澳麝香草酚兰0.024克；V-P培养基的组成为酵母膏1克、胰胨7克、大豆蛋白胨5克、葡萄糖10克、氯化钠5克、琼脂3克、蒸馏水1000毫升DNA培养基的组成为酪胨15克、大豆胨5克、氯化钠5克、DNA2克、甲苯胺兰0.1克、琼脂15克、蒸馏水1000毫升；O-F培养基的组成为蛋白胨2.7克、葡萄糖10克、氯化钠5克、磷酸氢二钾0.3克、1％澳麝香草酚兰3毫升、琼脂3克、蒸馏水1000毫升；每100张氧化酶纸条的组成为二氯四甲基对苯撑二胺或盐酸二甲基对苯撑二胺20毫克、抗坏血酸2毫克；糖培养基因加入的糖的种类不同，包括麦芽糖、甘露醇、木糖培养基，其基础成份为蛋白胨2克、氯化钠5克、磷酸氢二钾0.3克、琼脂3克、1％澳麝香草酚兰3毫升、蒸馏水1000毫升按1％的糖类加入基础培养内，精氨酸培养基的组成为蛋白胨1克、氯化钠5克、磷酸氢二钾0.3克、琼脂6克、酚红0.01克、L精氨酸10克、蒸馏水1000毫升；硝酸盐培养基的组成为蛋白胨水培养基1000毫升、硝酸钾1克；乙酰胺培养基的组成为酵母膏0.5克、葡萄糖0.2克、氯化钠5克、磷酸氢二钾1克、乙酰胺3克、酚红0.03克、琼脂15克、蒸馏水1000毫升。将各种培养基分别封装于安瓶中。
以上所列即构成了本发明的最佳实施方案。
本发明通过专用培养基测定未知菌的特性，组成一个四位编码，与相配套的四位编码鉴定手册相配合使用，使得革兰氏阴性杆菌的鉴定更简便，更快捷，更准确，普通实验人员即可进行操作。而且其适用范围广泛。本发明的培养基的品种少，成本低，准确率高。
将I、II系列培养基编成阿拉佰数字，根据未知菌在培养基上的反应，判定为阴性或阳性(+、-)，阴性为“0”、阳性为有效数字，使其每组数字相加和，就为未知菌的数字编码。这数字再与工具书查找就得出未知菌的名称。
数字编码工具书、包括革兰氏阴性杆菌、(有发酵葡萄糖和不发酵葡萄糖菌)及其类似菌，近89株利用电子计算机求出每种菌的不同性状，不同组合可能性、符于数字编码代号。
例如根据O-F试验结果被确定为肠杆菌科及其类似菌，如果O-F为阳性，使用I系列培养基。
I组 II组 III组 IV组尿I硫 气乳赖 鸟动靛 柠VDP化 氨 氨 基 檬IN素A氢 体糖酸 酸力质 盐PA(4)(2)(1)(4)(2)(1) (4)(2)(1) (4)(2)(1)- - - + + -+ + -+ + -06 6 6“0666”这四位数字，即代表分离菌株12个生化性状结果。此时，查对编码工具书，编码工具书“0666”一栏得到以下答复阴沟肠杆菌产气肠杆菌再做补充试验，用精氨酸鉴定，如果是阳性定为阳沟肠杆菌，反之为产气肠杆菌。
权利要求
1.一种革兰氏阴性杆菌新编码鉴定方法，其特征是将未知的被测菌接种于培养基上，检测尿素、IPA、硫化氢、气体、乳糖、赖氨酸、鸟氨酸、动力、靛基质、柠檬酸盐、V-P、DNA十二项指标，这十二项指标按自左至右顺序每三项分为一组，每一组中第一项赋予数值4、第二项赋予数值2、第三项赋予数值1，该未知被测菌在培养基上的每项指标为阴(-)性，则该项指标的数值为0，为阳(+)性，则该项指标为所赋予的数值，将每组的三项指标相加得一个数值，四个数字按顺序排列组成一个四位编码，从编码工具书中找出相同的编码得出未知被测菌的菌种。
2.一种革兰氏阴性杆菌新编码鉴定方法及其专用培养基，其特征是它包括I、II两个系列，I系列由分装的尿素、SIM(IPA)、克氏双糖、赖氨酸、尿氨酸、柠檬盐酸、V-P、DNA八种培养基组成，II系列由O-F、氧化酶、柠檬盐酸、麦芽糖、精氨酸、甘露醇、木糖、硝酸盐、DNA、乙酰胺十种培养基组成。
3.根据权利要求2所述的革兰氏阴性杆菌新编码鉴定方法及其专用培养基，其特征是尿素培养基的组成为蛋白胨1克、氯化钠5克、磷酸二氢钾2克、葡萄糖1克、琼脂20克、尿素2克、0.6％酚红溶液2毫升、蒸馏水1000毫升。SIM培养基的组成为肉膏3克、蛋白胨30克、次亚硫酸钠0.05克、盐酸胱氨酸0.2克、柠檬酸铁铵0.5克、琼脂3克、蒸馏水1000毫升。双糖铁培养基的组成为肉膏4克、蛋白胨15克、乳糖1克、氯化钠5克、次亚硫酸钠0.08克、亚硫酸钠0.4克、硫酸亚铁0.2克酚红0.02克、琼脂10克、蒸馏水1000毫升。赖氨酸或鸟氨酸培养基的组成为蛋白胨5克、肉膏5克、葡萄糖0.5克、吡哆醛0.005克、蒸馏水1000毫升。2％溴甲酚紫5毫升、2％酚红2.5毫升及L-赖氨酸或L-鸟氨酸，柠檬酸盐培养基的组成为磷酸氢二钾1克、磷酸二氢钾1克、柠檬酸钠2克、硫酸镁0.2克、氯化钠5克、蒸馏水1000毫升、澳麝香草酚兰0.024克，V-P培养基的组成为酵母膏1克、胰胨7克、大豆蛋白胨5克、葡萄糖10克、氯化钠5克、琼脂3克、蒸馏水1000毫升。DNA培养年的组成为酪胨15克、大豆胨5克、氯化钠5克、DNA2克、甲苯胺兰0.1克、琼脂15克、蒸馏水1000毫升，O-F培养基的组成为蛋白胨2.7克、葡萄糖10克、氯化钠5克、磷酸氢二钾0.3克、1％澳麝香草酚兰3毫升、琼脂3克、蒸馏水1000毫升。每100张氧化酶纸条的组成为二氯四甲基对苯撑二胺或盐酸二甲基对苯撑二胺20毫克、抗坏血酸2毫克。糖培养基因加入的糖的种类不同，包括麦芽糖、甘露醇、木糖培养基，其基础成份为蛋白胨2克、氯化钠5克、磷酸氢二钾0.3克、琼脂3克、1％澳麝香草酚兰3毫升、蒸馏水1000毫升按1％的糖类加入基础培养内。精氨酸培养基的组成为蛋白胨1克、氯化钠5克、磷酸氢二钾0.3克、琼脂6克、酚红0.01克、L精氨酸10克、蒸馏水1000毫升。硝酸盐培养基的组成为蛋白胨水培养基1000毫升、硝酸钾1克。乙酰胺培养基的组成为酵母膏0.5克、葡萄糖0.2克、氯化钠5克、磷酸氢二钾1克、乙酰胺3克、酚红0.03克、琼脂15克、蒸馏水1000毫升。
全文摘要
本发明涉及的是一种革兰氏阴性杆菌新编码鉴定方法及专用培养基。它采用专用培养基、检测尿素、IPA、硫化氢、气体、乳糖、赖氨酸、鸟氨酸、动力、靛基质、柠檬酸盐、V-P、DNA十二项指标，编成四位数码，在专用编码手册中找出相应的菌种。其操作简便，准确率较高。
文档编号C12N1/20GK1162646SQ9710131
公开日1997年10月22日 申请日期1997年1月10日 优先权日1997年1月10日
发明者徐钧, 韩桂荣 申请人:徐钧, 韩桂荣