一种用于治疗革兰氏阴性菌感染的抗菌药物组合物的制作方法
【专利摘要】本发明揭示了一种用于治疗革兰氏阴性菌感染的抗菌药物组合物，所述组合物包括：TNP?2092和细胞膜渗透剂。其中，所述细胞膜渗透剂为多粘菌素B或多粘菌素E。本发明的一种用于治疗革兰氏阴性菌感染的抗菌药物组合物，通过TNP?2092和细胞膜渗透剂联合使用，治疗革兰氏阴性菌感染，其抗菌活性较单独使用TNP?2092或细胞膜渗透剂时增强，具有抗菌的协同作用，可用于治疗革兰氏阴性菌感染，包括耐药菌感染。
【专利说明】
-种用于治疗革兰氏阴性菌感染的抗菌药物组合物
技术领域
[0001] 本发明属于医药化学药物组合物技术领域，尤其设及一种用于治疗革兰氏阴性菌 感染的抗菌药物组合物。
【背景技术】
[0002] 由于抗菌素耐药性的产生，革兰阴性菌感染的治疗正面临巨大的挑战。临床上主 要的致病革兰氏阴性菌包括：大肠埃希氏菌化.col 1)、肺炎克雷伯菌（Klebsiella pneumonia)、鲍曼不动杆菌（Acinetobacter baumannii )、铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa)、嗜麦芽窄食单胞菌（S.maltophilia)、伤寒沙口菌（Salmonella Typhi)、非伤 寒沙口菌(non-typhoidal Salmonella)和志贺菌属(Shigella)等。在常见医院获得性感染 中，肺炎克雷伯菌是一个主要致病菌，碳氨霉締类抗菌药物曾是治疗该菌感染的最后防线， 然而在部分地区，超过一半的肺炎克雷伯感染对碳氨霉締类药物产生耐药，运种耐药性已 经播散到世界范围。在中国，碳青霉締耐药的的肠杆菌(CRE)逐渐增多。在肠杆菌科细菌中， W肺炎克雷伯CRE最为多见，2009/2012年中国CHI肥T对碳青霉締类抗生素耐药的肺炎克雷 伯菌的分离率分别为2.1 %、6.2%、9.3%和10.8%。
[0003] 通过对含有利福霉素和/或哇诺酬耐药基因突变并同时包含有IpxC和TolC基因突 变(包括单独和组合）的大肠杆菌D21的等基因菌株的研究显示，影响TNP-2092抗菌活性的 因素包括：（l)WTolC为外膜通道的药物外排机制；（2)由IpxC变异引起的细胞内药物富集。 基于运些结果可W假设，如果与一个能提高TNP-2092细胞内富集，或者能抑制TNP-2092外 排的增效剂联合使用，TNP-2092对常见革兰氏阴性细菌的抗菌活性可W得到提高。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的是提供一种用于治疗革兰氏阴性菌感染的抗菌药物组合物。
[0005] 本发明通过如下技术方案实现上述目的：
[0006] -种用于治疗革兰氏阴性菌感染的抗菌药物组合物，所述组合物包括:TNP-2092 和细胞膜渗透剂；
[0007] 其中，所述TNP-2092的化学名为：
[000引（R)-3-[[[4-[l-[l-(3-簇基-1-环丙基-7-氣-9-甲基-4-氧-4-氨-8-哇嗦基)-3- 化咯烷基]环丙基](甲基）氨基]-1-赃晚基]亚氨基]甲基]-利福霉素 SV(英文名：（1〇-3- (((4-((l-(l-(3-c曰rboxy-1-cyclopropyl-7-fluor〇-9-methyl-4-〇x〇-4H-quinolizin-8- yl)pyrrolidin-3-yl)cyclopropyl)(methyl)amino)piperidin-1-yl)imino)methyl)- rifamyc in SV)，其结构式如下：
[0009]
[0010] 进一步的，所述组合物包括重量比为3:400-125:4的TNP-2092和细胞膜渗透剂。
[0011] 进一步的，所述细胞膜渗透剂为多粘菌素 B或多粘菌素 E，包括运两个药物的各种 可能的晶型、盐型和制剂。
[0012] 进一步的，所述组合物包括重量比为3:400-125:4的TNP-2092和多粘菌素 B。
[0013] 进一步的，所述组合物包括重量比为3:400-25:3的TNP-2092和多粘菌素 E。
[0014] 上述的抗菌药物组合物在对抗革兰氏阴性菌中的应用。
[0015] 进一步的，所述组合物为TNP-2092和细胞膜渗透剂的联合使用，或者为TNP-2092 和细胞膜渗透剂的混合制剂。
[0016] 进一步的，所述革兰氏阴性菌包括大肠埃希氏菌、肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌、 铜绿假单胞菌、嗜麦芽窄食单胞菌、伤寒沙口菌、非伤寒沙口菌和志贺菌属。
[0017] 与现有技术相比，本发明的有益效果是:本发明的一种用于治疗革兰氏阴性菌感 染的抗菌药物组合物，通过TNP-2092和细胞膜渗透剂联合使用，治疗革兰氏阴性菌感染，其 抗菌活性较单独使用TNP-2092或细胞膜渗透剂时增强，具有抗菌的协同作用，可用于治疗 革兰氏阴性菌感染，包括耐药菌感染。
【附图说明】
[001引图1是本发明实施例的TNP-2092和多粘菌素 B药物组合物针对大肠杆菌ATCC 25922菌株的棋盘法最低杀菌浓度(MBC)试验结果图；
[0019]图2是本发明实施例的TNP-2092和多粘菌素 E药物组合物针对大肠杆菌ATCC 25922菌株的棋盘法最低杀菌浓度(MBC)试验结果图。
【具体实施方式】
[0020] 本发明的药物组合体外抗菌活性的测试使用的是测定最低抑菌浓度(MIC)和最低 杀菌浓度(MBC)为终点的标准96孔板棋盘法检验平台。最初的研究主要使用大肠杆菌ATCC 25922作为革兰氏阴性代表菌株。所观察到的结果与医院内的主要革兰氏阴性菌一一铜绿 假单胞菌、肺炎克雷伯菌、鲍氏不动杆菌和嗜麦芽窄食单胞菌一一的相关性用类似的方法 进行评估。
[0021] 大肠杆菌ATCC 25922是由临床实验室标准协会(CLSI)推荐的用于MIC测试的质量 控制菌株，最初是从美国品种组织培养(ATTC)存储库获得，作为革兰氏阴性致病菌的模型 使用。其它的革兰氏阴性菌株，包括两株铜绿假单胞菌，两株肺炎克雷伯菌、一株鲍氏不动 杆菌和一株嗜麦芽窄食单胞菌，也来自ATCC。
[0022] TNP-2092和多粘菌素 B或E药物组合的最低抑菌浓度(MIC)由双试剂棋盘稀释法遵 照化SI微量肉汤稀释法药敏试验标准进行测定。为了获得每个药物组合的96孔板，需根据 W下描述准备两个过度稀释板。在含0.002% (体积：体积）吐溫80的经阳离子校正的 Mueller Hintonation肉汤中，使用直接菌落悬液法制备足够量的含有约5X 105CFU/ml细 菌的培养液。加入0.2ml的上述悬液到第一块96孔板（ID-1)的第一列孔中，加0.1ml到所有 剩下的孔中。加入0.2ml同样的细胞培养悬液至第二块96孔板(ID-2)的第1行孔中，加0.1ml 到所有剩下的孔中。加入适当浓度的药品"化合物-Γ (代表组合测试的两个药物之一)至板 ID-1的第1列的每个孔。然后做整板的二倍连续稀释，每次转移换加样头，直到达到第11列 孔。从第11列孔中吸出0.1ml并丢弃，第12列孔中只含细胞培养液而没有药物。接下来，适当 浓度的药品"化合物-2"(代表组合测试的两个药物之二)被稀释加入至板ID-2的第1行的每 个孔。然后沿板下行做二倍连续稀释，每次转移换加样头，直到第7行孔。从第7行孔中吸出 0.1ml并丢弃，第8行只包含细胞培养液而没有药物。最后，从ID-1和ID-2中均转移0.05ml至 第Ξ块96孔板作为"最终MIC测试板"。运将导致2个化合物的进一步的二倍稀释，并产生两 种药物的77个不同的测试组合。而由第12列孔可得到单独化合物-2的MIC，第8行孔可得到 单独化合物-1的MIC。第8行和第12列的交叉处不包含药物，可作为细菌的正常生长参比。 "最终MIC测试板"在35Γ下静态培养18-24小时，可直观读出每个单独药物或药物组合物的 MIC值。
[0023] 为了测定最低杀菌浓度(MBC)，当MIC测定后，通过自动加样器将每孔的0.008ml从 MIC测试板转移到加有木炭的琼脂板。转移液体小滴在生物柜中风干，然后琼脂板在35°C培 养18-24小时。MBC数值定义为在18-24h内杀死99.9% W上的试验菌株，或在每0.008ml液滴 中含有少于5个菌落形成单位(CFU)的最低药物浓度。
[0024] 体外药物相互作用的分级抑制浓度(FIC)使用W下公式计算：
[0025] FIC =化合物X的最低MIC(混合)/化合物X的最低MIC(单用）+化合物Y的最低MIC (混合)/化合物Y的最低MIC(单用）
[0026] 分级抑菌浓度(FIC)或分级杀菌浓度(FBC)的结果可被定义为协同，叠加，无区别， 或括抗几种情况。如果没有观察到终点而不能确定MIC/MBC，为了运算目的，终点假设为大 于测试范围的下一稀释度的浓度。
[0027]
[002引实施例；
[0029]用两种药物组合棋盘法试验对MIC和MBC终点进行平行测定。TNP-2092、多粘菌素 B 和多粘菌素 E在单独进行测试时对大肠杆菌ATCC 25922具有一定抗菌活性(见表1)。通过棋 盘法对不同比例的TNP-2092与多粘菌素 B或多粘菌素 E进行药物组合测试时，若WMIC为测 试终点，TNP-2092与多粘菌素 B或多粘菌素 E具有叠加和协同作用，若WMBC为测试终点， TNP-2092与多粘菌素 B或多粘菌素 E均具有明显协同作用（见表2和图1、图2)。由图1可知， TNP-2092的测试浓度区间为0.03-2yg/mL，多粘菌素 B的测试区间为0.008-祉g/mL，在TNP- 2092与多粘菌素 B的重量比0.25:0.008至0.03:4间均观察到二者的叠加或协同作用。由图2 可知，TNP-2092的测试浓度区间为0.03-2yg/mL，多粘菌素 E的测试区间为0.03-3化g/mL，在 TNP-2092与多粘菌素 E的重量比0.25:0.03至0.03:4间均观察到二者的叠加或协同作用。因 而多粘菌素 B或多粘菌素 E可W增强TNP-2092对大肠杆菌的活性，从而达到更好的治疗效 果。
[0030] 表1 TNP-2092、多粘菌素 B和多粘菌素 E单独使用对抗大肠杆菌ATCC 25922的MIC 和MBC (yg/mL) W 及MBC99.9/MIC 比值
[0031] _
[0032] 表2 TNP-2092与多粘菌素 B或多粘菌素 E药物组合物对抗大肠杆菌ATCC 25922的 FIC和FBC值
[0033]
[0034] ~针对其它革兰氏阴性菌中，多粘菌素 B和多粘菌素 E对TNP-2092的杀菌活性也有增I 效作用，结果见表3和表4。根据WMIC或MBC为终点得到的FIC或FBC数据表明，多粘菌素 B和 多粘菌素 E与TNP-2092存在叠加或协同的杀菌作用。特别是在WMBC为终点时，TNP-2092与 多粘菌素 E存在明显的药物协同作用(见表4)。
[0035] 表3 TNP-2092与多粘菌素 B或多粘菌素 E对抗多种菌株的FIC值
[0038] 表4 TNP-2092与多粘菌素 B或多粘菌素 E对抗多种菌株的FBC值
[0036]
[0037]
[0039]
[0040] 由此可见，细胞渗透剂多粘菌素 B或多粘菌素 E与TNP-2092对多种革兰氏阴性菌具 有协同抗菌活性，通过与多粘菌素 B或多粘菌素 E联合使用，TNP-2092对革兰氏阴性菌的抑 菌和杀菌活性明显提高，从而达到治疗革兰氏阴性菌感染的目的。
[0041] W上所述的仅是本发明的一些实施方式。对于本领域的普通技术人员来说，在不 脱离本发明创造构思的前提下，还可W做出若干变形和改进，运些都属于本发明的保护范 围。
【主权项】
1. 一种用于治疗革兰氏阴性菌感染的抗菌药物组合物，所述组合物包括:TNP-2092和 细胞膜渗透剂； 其中，所述TNP-2092的化学名为： (R)-3_[[[4-[l-[l-(3-羧基-1-环丙基-7-氟-9-甲基-4-氧-4-氢-8-喹嗪基)-3-吡咯 烷基]环丙基](甲基)氨基]-1-哌啶基]亚氨基]甲基]-利福霉素 SV，其结构式如下：2. 根据权利要求1所述的一种用于治疗革兰氏阴性菌感染的抗菌药物组合物，其特征 在于:所述组合物包括重量比为3:400-125:4的TNP-2092和细胞膜渗透剂。3. 根据权利要求1所述的一种用于治疗革兰氏阴性菌感染的抗菌药物组合物，其特征 在于:所述细胞膜渗透剂为多粘菌素 B或多粘菌素 E。4. 根据权利要求3所述的一种用于治疗革兰氏阴性菌感染的抗菌药物组合物，其特征 在于:所述组合物包括重量比为3:400-125:4的TNP-2092和多粘菌素 B。5. 根据权利要求3所述的一种用于治疗革兰氏阴性菌感染的抗菌药物组合物，其特征 在于:所述组合物包括重量比为3:400-25:3的TNP-2092和多粘菌素 E。6. 权利要求1-5任一项所述的抗菌药物组合物在对抗革兰氏阴性菌中的应用。7. 根据权利要求6所述的抗菌药物组合物在对抗革兰氏阴性菌中的应用，其特征在于： 所述组合物为TNP-2092和细胞膜渗透剂的联合使用，或者为TNP-2092和细胞膜渗透剂的混 合制剂。8. 根据权利要求6所述的抗菌药物组合物在对抗革兰氏阴性菌中的应用，其特征在于： 所述革兰氏阴性菌包括大肠埃希氏菌、肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌、嗜麦 芽窄食单胞菌、伤寒沙门菌、非伤寒沙门菌和志贺菌属。
【文档编号】A61K38/12GK105879009SQ201610238915
【公开日】2016年8月24日
【申请日】2016年4月18日
【发明人】马振坤, 格雷戈瑞·罗伯森, 王晓梅
【申请人】丹诺医药(苏州）有限公司