一种多功能菌发酵复合酶饲料及其制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种多功能菌发酵复合酶饲料及其制备方法。
【背景技术】
[0002] 饲用复合酶是一类水解酶，包括淀粉酶、蛋白酶、纤维素酶等多种酶。家畜添食中 的有机物有相当一部分不能被消化，而添加复合酶能补充动物内源酶的不足，消除饲料中 的抗营养因子，可显著提高饲料的利用率，扩大可以用饲料资源范围，降低养殖成本，改善 养殖生态环境。
[0003] 近几年来人们对酶在饲料工业中的应用取得了快速的发展，在畜禽应用上取得了 很好的效果。据报道，猪、鸡增重均在5-40%之间，节约饲料10-30%，并且可以减少畜、 禽疾病和死亡率。但同时我国复合酶发酵饲料也存在着菌种单一，发酵技术落后等不足，造 成我国复合酶发酵饲料的不稳定，达不到预期效果。
【发明内容】
[0004] 针对上述现有技术中存在的不足，本发明的目的在于提供一种多功能菌发酵复合 酶饲料，由多种菌对饲料进行发酵，不仅产生了酸性蛋白酶、中性蛋白酶和纤维素酶，还大 幅提高了饲料中的蛋白含量，并且能够有效消除牲畜粪便异味。
[0005] 本发明的另一目的是提供该多功能菌发酵复合酶饲料的制备方法。
[0006] 为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
[0007] -种多功能菌发酵复合酶饲料，由白曲霉、拟内孢霉和枯草芽孢杆菌按体积比 (1-2) :(2-3) :(4-6)复合的菌液，与饲料混合、发酵，然后向发酵后的发酵料中加入由酵母 菌、益生菌和光合细菌按体积比（2-3) :(4-6) :(2-3)复合的菌液，进行厌氧发酵而制成；
[0008] 所述饲料是由麸皮、豆饼粉和蘑菇菌渣按质量比（50-70) :(10-20) :(10-20)混合 而成；
[0009] 所述白曲霉、拟内孢霉和枯草芽孢杆菌复合的菌液的加入量为饲料质量的 5-15% ；
[0010] 所述酵母菌、益生菌和光合细菌复合的菌液的加入量为饲料质量的6-15% ;
[0011] 所述益生菌为嗜热链球菌、嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌和干酪乳杆菌中的一种或多 种。
[0012] 本发明中所用的发酵菌株均可以通过常规的商业途径购买得到。
[0013] 优选的，本发明中所用的白曲霉菌具体为中国普通微生物菌种保藏管理中心的编 号为3. 7885的菌株；拟内孢霉菌具体为中国工业微生物菌种保藏管理中心的保藏编号为 CICC31258的菌株；枯草芽孢杆菌具体为中国工业微生物菌种保藏管理中心的保藏编号为 CICC21312 的菌株。
[0014] 该多功能菌发酵复合酶饲料的制备方法，步骤如下：
[0015] (1) -级种子液的制备：分别刮取白曲霉菌、酵母菌和拟内孢霉菌斜面菌种接种 到PDA液体培养基中，培养，分别得到白曲霉、酵母菌和拟内孢霉的一级种子液；将益生菌 菌种接种到MRS培养基中，培养，得到益生菌的一级种子液；将光合细菌液体菌种接种到光 合细菌培养基培养，得到光合菌的一级种子液；将枯草芽孢杆菌接种到LB培养基中培养， 得到芽孢杆菌的一级种子液。
[0016] (2)二级种子液的制备：分别将步骤（1)制备的白曲霉、拟内孢霉和枯草芽孢杆菌 的一级种子液接种到固体发酵培养基中进行培养，分别得到白曲霉菌、拟内孢霉菌和枯草 芽孢杆菌的的二级种子液；将酵母菌的一级种子液接种到PDA液体培养基中，培养，得到酵 母菌的二级种子液；益生菌菌种的一级种子液接种到MRS培养基中，培养，得到益生菌的二 级种子液；将光合细菌米用光合细菌培养基培养，得到光合菌的二级种子液；
[0017] (3)将步骤（2)制备的白曲霉、拟内孢霉和枯草芽孢杆菌的二级种子液按体积 比（1-2) :(2-3) :(4-6)复合，将复合后的菌液接种到由麸皮、豆饼粉和蘑菇菌渣按质量比 (50-70) :(10-20) :(10-20)混合而成的饲料中，发酵培养，得发酵料；
[0018] (4)将步骤（2)制备的酵母菌、益生菌和光合菌的二级种子液按体积比（2-3): (4-6) :(2-3)复合，将复合后的菌液接种到步骤（3)的发酵料中，进行厌氧发酵，将发酵产 物低温干燥，即得。
[0019] 步骤（3)中，白曲霉、拟内孢霉和芽孢杆菌的二级种子液复合后的菌液的接种量 为饲料质量的5-15% ;
[0020] 步骤（4)中，酵母菌、益生菌和光合菌的二级种子液复合后的菌液的接种量为饲 料质量的6-15% ;
[0021] 步骤（3)中，发酵培养条件为：30-34°C，发酵5-7天；
[0022] 步骤（4)中，厌氧发酵的条件为：36-39°C，发酵5-7天。
[0023] 本发明的有益效果：
[0024] (1)本发明发酵所用的菌株，其中，白曲霉具有高的糖化酶、蛋白酶活性；拟内孢 霉能够发酵葡萄糖，同化可溶性淀粉；酵母菌、益生菌和光合菌是适宜饲料发酵的优良菌 种，能够协同和促进各菌株的生长、有效抑制饲料中含有的大量杂菌、有害菌的生长繁殖； 各菌株之间不存在拮抗作用，而且能够协同产生蛋白酶、纤维素酶和淀粉酶等，对饲料进行 进一步的分解，使其更容易被消化和吸收，而且蛋白酶、纤维素酶和淀粉酶属于内源性酶， 还能增强畜禽的自身消化能力；酵母菌和益生菌复合使用，能够产生乳酸，形成酸性环境， 一方面可抑制饲料的腐败，另一方面能够有效的抑制畜禽肠道腐败菌的繁殖，促进有益菌 的生长，减少肠道疾病的发生；益生菌和光合菌的复合使用，通过益生菌对畜禽肠道内菌群 环境的改善，光合菌对粪便的分解作用，内外协同作用，有效降低了畜禽粪便的异味。
[0025] (2)本发明中用于发酵的饲料中含有蘑菇菌渣，通过对蘑菇菌渣肥料的回收利用， 降低了肥料的成本，而且绿色环保。
【具体实施方式】
[0026] 结合实施例对本发明作进一步的说明，应该说明的是，下述说明仅是为了解释本 发明，并不对其内容进行限定。
[0027] 实施例1 :多功能菌发酵复合酶饲料的制备
[0028] L发酵用菌株：
[0029] 白曲霉为中国普通微生物菌种保藏管理中心的编号为3. 7885的菌株；拟内孢霉 为中国工业微生物菌种保藏管理中心的保藏编号为CICC 31258的菌株；枯草芽孢杆菌为 中国工业微生物菌种保藏管理中心的保藏编号为CICC 21312的菌株；益生菌为嗜热链球 菌、嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌和干酪乳杆菌按质量比1:1:1:1混合而成，其中，嗜热链球菌、 嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌和干酪乳杆菌均可通过购买得到；酵母菌和光合菌为市售产品。
[0030] 2.培养基：
[0031] PDA液体培养基：马铃薯200g去皮，沸水煮半个小时，纱布过滤，加入20g蔗糖或 葡萄糖，加水至l〇〇〇ml，pH自然，121 °C 20min灭菌。
[0032] MRS培养基：蛋白陈10. 0g、牛肉膏5. 0g、酵母粉4. 0g、葡萄糖20. 0g、吐温 801. OmU磷酸氢二钾2. 0g、乙酸钠5. 0g、柠檬酸三铵2. 0g、硫酸镁0. 2g、硫酸锰0. 05g、琼脂 粉 15. 0g、蒸馈水加至 lOOOmL，ρΗ6· 5,121°C 20min 灭菌。
[0033] LB培养基：蛋白胨10g、酵母膏5g、氯化钠10g，pH7. 2,121°C 20min灭菌。
[0034] 光合细菌培养基：醋酸钠 I. 145g、蛋白胨0.055g、碳酸氢钠0.6g、硫代硫酸钠 〇· 4g、氯化钠 0· 3g、硫酸镁 0· 5g、磷酸二氢钾 0· 05g，ρΗ7· 0,121°C 20min 灭菌。
[0035] 固体发酵培养基：麸皮55%、红糖6%，均为质量百分比，121°C 20min灭菌。
[0036] 3.制备方法：
[0037] (1) -级种子液制备：将白曲霉、酵母菌、拟内孢霉接种到PDA液体培养基中，30°C 摇瓶培养3天。益生菌接种到MRS培养基，38°C静止培养4天。光合细菌采用光合细菌培 养基，30°C光照静止培养6天。枯草芽孢杆菌米用LB培养基，32°C摇瓶培养1