] 试验 提供以下实施例用于示范和进一步说明本发明的某些优选实施方案和方面，且不应解 释为限制其范围。
[0106] 实施例1 体外消化 用于磷酸盐和糖释放的猪体外模型 参考文献：Boisen S·，A multienzyme assay for pigs (猪多酶测定），Chapter 10, A Model for Feed Evaluation Based on Invitro Digestible Dry Matter and Protein(基于体外可消化干燥物质和蛋白质的饲料评价模型），Invitro Digestion for Pig and Poultry (猪和家禽的体外消化），1990, M.F. Fuller 试剂： A. 0. 2M HCl B. 4M HCl C. 2M HCl D. 0. 6M NaOH :使24g氢氧化钠 （Fisher S318)溶于900ml去离子水，然后使达到IL 的最终体积。
[0107] E.胃蛋白酶（购自 Sigma) (P7012):在-20°C储存 F. 胰酶（购自 Sigma) (P3292):在-20°C储存 G. 15%三氯乙酸（TCA):用去离子水将15g三氯乙酸（Sigma T6399)稀释到100mL的 体积 H. 0.1 M乙酸盐缓冲液，pH 6. 0 a. 使8. 203g乙酸钠 （Fisher S210)溶于900ml去离子水 b. 用IM HCL调节至pH 6. 0,并用去离子水使达到IL体积 I. 0. 2M乙酸盐缓冲液，pH 6. 8 a. 使16. 406g乙酸钠 （Fisher S210)溶于900ml去离子水 b. 调节至pH 6. 8,并用去离子水使达到IL的体积 J. 色素试剂（新制） a. 3体积IM硫酸 i.在容量瓶中，向90ml去离子水加入5. 52ml浓（18. 1M)硫酸，然后使达到IOOrnl最 终体积 1.向60mL去离子水加入40mL的5N硫酸 b. 1体积2. 5% (w/v)钼酸铵 i.使2. 65g四水合钼酸铵（Sigma A7302)溶于80ml去离子水，然后使达到100mL的 最终体积 c. 1体积10%(w/v)抗坏血酸 i.使IOg抗坏血酸（Fisher BP351)溶于80ml去离子水，然后使达到100mL最终体积 K. DNS溶液：在暗色瓶（dark bottle-good)中储存6个月 a. 使IOg二硝基水杨酸（Sigma D0550)溶于400ml b. 使 16g NaOH(Fisher S318)溶于 150ml 去离子水 c. 在搅拌同时，向二硝基水杨酸溶液缓慢加入NaOH溶液 d. 放入50 °C水浴中，直至所有固体溶解 e. 在搅拌同时，加入300g四水合酒石酸钠钾（Sigma 217255) f. 用去离子水使达到IL体积 L. 葡萄糖标准物：用去离子水稀释Ig葡萄糖（Fisher D16)，以达到100mL体积。从 此储备溶液产生以下葡萄糖稀释度：
M. 9mM磷酸钾（KH2PO4)溶液-用于标准曲线 a.使I. 22g KH2PO4 (Fisher Sp361)溶于800ml去离子水，然后使达到IL最终体积 N. 磷酸盐标准物：用9mM磷酸盐储备溶液产生以下磷酸盐稀释度
步骤 SSF提取物 1. 在125 ml有盖的瓶中，向IOOmL去离子水加入Ig SSF-麸皮 2. 在250°C振摇1小时 3. 稀释 a. 1:500 (ImL SSF/ 4mL (λ IM 乙酸钠缓冲剂），然后 1:5000 (ImL 1:500 混合物 / 9mL 缓冲剂） 步骤1 -胃 1.磨碎饲料，并使磨碎的饲料通过Ixlmm筛 2. 在250ml烧瓶中加入2g样品 a. 进入提取SSF 50分钟，加入50ml 0.1 M乙酸钠溶液，在搅拌同时缓慢加入20ml 0. 2M HCl b. 在饲料中没有酶时，加入1ml酶+49ml乙酸钠 3. 用4M HCl (~10滴）调节至pH 3,然后用2M HCl (~10滴）调节至pH 2 4. 加入2ml胃蛋白酶溶液（IOmg胃蛋白酶/ml去离子水，新制）和1.0 ml氯霉素溶液 (5mg 氯霉素 （Sigma C0378)/lml 乙醇，新制） a. 实例：胃蛋白酶=130mg/13mL去离子水（6烧瓶+ImL额外物（extra)) b. 实例：氯霉素=32. 5mg/6. 5mL乙醇（6烧瓶+0· 5mL额外物） 5. 盖上烧瓶，搅拌溶液，并放入39°C搅动水浴（55RPM)经历6小时（用重物（weights) 保持烧瓶不飘浮） a. 每小时充分搅拌烧瓶，以保证良好混合 步骤2 -小肠 1. 加入20ml 0. 2M乙酸钠缓冲液和IOmL 0. 6M NaOH (缓慢加入，同时搅拌） 2. 用 0· 6M NaOH (20-25 滴）调节至 pH 6. 8 3. 加入2mL胰酶溶液（50mg/ml去离子水+2mL额外物；在烧杯中用搅拌棒混合，新 制）。
[0108] 4.搅拌溶液，并放入39°C搅动（55RPM)水浴经历18小时 5.搅拌溶液，倒入Falcon离心管，并在HOOOg离心20分钟 磷酸盐释放 参考文献：Kim T.W·，Lei X.G. (2005)，An Improved Method for a Rapid Determ ination of Phytase in Animal Feed(用于快速确定在动物饲料中的植酸酶的改进方法）， J. Animal science, 83:1062-1067 1. 在孵育后，恰好在离心完成之前吸取Iml 15% TCA终止液至Iml上清液（使用双 份），然后涡旋管 2. 在2, OOOxg离心管10分钟。
[0109] a.在此期间可制备色素试剂 3. 在洁净的试管中，混合0. 2ml上清液与I. 8ml纳米纯的水（18M Ω ^cm)。也将〇. 2ml 各磷酸盐标准物加到1.8ml纳米纯的水，并涡旋。在加上清液的同时，烧灼各一个样品，随 后加到管中。
[0110] 4.向所有管加入2. Oml新色素试剂，并充分涡旋。
[0111] 5.在水浴中在50°C下孵育所有样品15分钟。
[0112] 6.使所有样品达到室温。将温度计放入室温水浴（20-25Γ)中。
[0113] 7.在820nm读取吸收度。
[0114] a.将吸收度平均值与标准值比较，并计算mg磷酸盐/kg饲料 b. 在计算结果时，要记住考虑稀释度 还原糖释放 参考文南犬：MiIler (1959), Use of Dintrosalicylic Acid Reagent for Determina tion of Reducing Sugar (用二硝基水杨酸试剂确定还原糖），Anal. Chem. 31 , 426-428 1. 如有必要，用去离子水稀释Iml上清液 2. 在玻璃试管中，在Iml水中放入Iml经稀释的上清液（使用双份）. 3. 在玻璃试管中，将Iml各葡萄糖标准溶液吸取至Iml水 4. 向各试管加入3ml DNS溶液，立即涡旋，并放入沸水浴经历5分钟 5. 将经沸煮的试管放入冰水浴经历约2-3分钟，然后使管达到室温。将温度计放入室 温水浴（20-25°C )中。
[0115] 6.在540nm读取吸收度。
[0116] a.将吸收度平均值与标准值比较，并计算g还原糖/kg饲料 b.在计算结果时，要记住考虑稀释度 酶的稀释 1. 确定稀释因子 2. 在 DI 水中 1:100 稀释（lg/100ml) 3. 在蛋白胨瓶（Peptone bottle)中混合 60min(RT, 250RPM) 4. 在15ml管中连续稀释 5. 参考步骤1. 3 体外步骤留下由经消化饲料和已加入液体组分组成的最终浆状体（mass)。该混合物用 P8级滤纸和布氏漏斗过滤，以得到固体组分。在冷冻干燥固体部分的同时，用ICP系统关于 磷含量分析液体部分。这种冻干的块生成最终干燥物质部分。为校准，用NIR扫描干燥的 物质。也用氮燃烧分析仪关于蛋白质含量检验干燥物质的一部分。在弹式量热计上关于总 能量检验另一部分。表1显示经历体外消化和分析的饲料的示例性数据集。
[0117] 用NIR和从其它分析工具得到的数据作为参考数据产生模型。NIR光谱由与物质 结构内某些键相关的峰组成（例如，蛋白质具有其自身的峰）。然后，使这些峰关联回获取 的参考数据，以便在已得到多个光谱和数据点后，产生关于饲料的具体组分（例如，酶）的 预测模型。图2显示示例性NIR光谱。图3显示残余蛋白质浓度的NIR预测的精确度。
[0118] 以上说明书中提到的所有公布和专利均通过引用结合到本文中。在不脱离本发明 的精神和范围下本发明所述组合物和方法的各种修改和变化对本领域的技术人员会是显 而易见的。虽然已与具体的优选实施方案关联描述了本发明，但应了解，所要求保护的本发 明不应过分地局限于这些具体实施方案。实际上，对相关领域技术人员显而易见的用于实 施本发明的所述方式的各种修改意图落入本发明的范围内。
【主权项】
1. 一种分析动物饲料的方法，所述方法包括以下步骤： a) 用至少一种消化酶体外消化动物饲料样品，以产生包含至少一种残余组分的经消化 的动物饲料； b) 用NIR光谱法扫描所述经消化的动物饲料，以产生光谱数据；并且 c) 将所述光谱数据与计算机模型比较，以产生经消化的动物饲料的至少一种残余组分 的预测浓度。2. 权利要求1的方法，其中至少一种消化酶为胃蛋白酶或胰酶或二者。3. 权利要求1或2的方法，其中所述消化动物饲料样品另外包括使经消化的样品分开 为干燥物质部分和液体部分，和其中扫描所述经消化动物饲料包括扫描干燥物质部分。4. 权利要求3的方法，其中在扫描所述干燥物质部分前使所述干燥物质部分干燥。5. 权利要求1至4中任一项的方法，其中所述至少一种残余组分选自蛋白质、磷、总能 量和碳水化合物。6. 权利要求1至5中任一项的方法，其中所述动物饲料样品包含添加剂。7. 权利要求6的方法，其中所述添加剂包括酶。8. 权利要求1至7中任一项的方法，其中所述方法进一步包括通过比较包含添加剂的 经消化的动物饲料的样品中所述至少一种残余组分的预测浓度与没有所述添加剂的经消 化动物饲料的样品中所述至少一种残余组分的预测浓度，确定所述添加剂对所述动物饲料 消化率的影响。9. 权利要求1至8中任一项的方法，其中用计算机执行方法比较所述光谱数据，所述方 法包括，从经消化的样品接收光谱数据，并将该光谱数据与所述计算机模型比较，以得到所 述至少一种残余组分的预测浓度。
【专利摘要】本发明涉及用于分析动物饲料的系统和方法。具体地讲，本公开涉及关于营养物和能源的代谢分析动物饲料的体外系统和方法。大多数动物饲料以提供至少最少营养需求以供养它所喂养的动物作为主要目的。在过去20-50年内，已关于具体特征对家畜(例如，牛、猪、家禽、鱼等)作了精选，所述具体特征例如生长、瘦和代谢效率。
【IPC分类】A23K10/14
【公开号】CN105338821
【申请号】CN201480028341
【发明人】K.麦金尼, A.洛弗尔, B.亨利, P.贝克尔, R.A.蒂蒙斯
【申请人】全技术公司
【公开日】2016年2月17日
【申请日】2014年2月11日
【公告号】CA2903247A1, EP2983493A1, US20140273048, WO2014149239A1