一种墨吉对虾饲料添加剂及其制备方法

一种墨吉对虾饲料添加剂及其制备方法
【专利摘要】本发明提供一种墨吉对虾饲料添加剂及其制备方法，所述添加剂包括以下原料组分：大鲵油、马齿苋、木瓜、蒲公英、丝瓜、陈皮、百合、香菇、薄荷、桑叶、猕猴桃、心胆草、狗蚁草、甘草、白带草、枣花蜜、油菜花粉和醋蛋液。本发明的有益效果是：其成分为兼有药用和食用双重作用，可抗菌、消炎，提高墨吉对虾的免疫力，同时可有效治疗斑节对虾杆状病毒病。食用本发明添加剂后的墨吉对虾抗病力强，生长速度快、肉质营养丰富，极大增加了养殖户的经济效益，具有配方简单、科学、合理，纯天然绿色无残留，实用性强，无毒副作用，效果显著的优点。
【专利说明】
一种墨吉对虾饲料添加剂及其制备方法
技术领域
[0001] 本发明涉及饲料添加剂技术领域，特别涉及一种墨吉对奸饲料添加剂及制备方 法。
【背景技术】
[0002] 墨吉对虾俗称大虾、明虾、黄虾、大白虾、大明虾，可食用虾，是甲壳纲动物，与蟹和 龙虾相关。在中间有扁而有弹性的半透明的身体，具有良好的营养价值。墨吉对虾营养丰 富，且其肉质松软，易消化，对身体虚弱以及病后需要调养的人是极好的食物;墨吉对虾中 含有丰富的镁，镁对心脏活动具有重要的调节作用，能很好的保护心血管系统，它可减少血 液中胆固醇含量，防止动脉硬化，同时还能扩张冠状动脉，有利于预防高血压及心肌梗死； 墨吉对虾的通乳作用较强，并且富含磷、钙、对小儿、孕妇尤有补益功效；
[0003] 墨吉对虾味美肉嫩，营养价值高，已成为人们最好的水产品之一。斑节对虾杆状病 毒病，是引起多种对虾生病的流行性传染病。斑节对虾杆状病毒病主要侵害对虾的肝胰腺 和前中肠上皮组织，并在细胞核内产生多个嗜酸性的圆形或椭圆形的病毒包涵体。症状:幼 体易挂脏、养殖虾体色暗，自净行为减少，不活泼;食欲减退，生长速度减慢，虾体瘦弱，肝脏 萎缩变白。幼体期受害严重，死亡率80%以上。目前市面上销售的饲料都是一般的虾饲料， 没有治疗墨吉对虾的斑节对虾杆状病毒病的饲料，更没有增强其免疫力的饲料。

【发明内容】

[0004] 本发明所要解决的技术问题在于，提供一种墨吉对虾饲料添加剂及制备方法，能 抗菌、消炎，提高墨吉对虾的免疫力，同时有效治疗斑节对虾杆状病毒病。食用本发明添加 剂后的墨吉对虾抗病力强，生长速度快、肉质营养丰富，极大增加了养殖户的经济效益，具 有配方简单、科学、合理，纯天然绿色无残留，实用性强，无毒副作用，效果显著的优点。
[0005] 为解决上述技术问题，本发明提供一种墨吉对虾饲料添加剂，所述添加剂包括以 下组分:大鲵油、马齿苋、木瓜、蒲公英、丝瓜、陈皮、百合、香菇、薄荷、桑叶、猕猴桃、心胆草、 狗蚁草、甘草、白带草、枣花蜜、油菜花粉和醋蛋液。
[0006] 所述添加剂中各原料的重量份数为:大鲵油0.5-1.0份、马齿苋4-15份、木瓜10-19 份、蒲公英12-22份、丝瓜4-11份、陈皮15-28份、百合8-14份、香菇5-16份、薄荷9-19份、猕猴 桃3-14份、心胆草0.4-1.0份、狗蚁草0.2-0.9份、甘草4-12份、白带草0.4-1.2份、枣花蜜17-31份、油菜花粉10-23份和醋蛋液7-14份。
[0007] 大鲵油0.6-0.8份、马齿苋8-11份、木瓜13-17份、蒲公英15-20份、丝瓜5-9份、陈皮 18-22份、百合10-12份、香菇8-13份、薄荷11-16份、猕猴桃6-11份、心胆草0.4-0.9份、狗蚁 草0.2-0.7份、甘草4-11份、白带草0.4-1.0份、枣花蜜20-27份、油菜花粉14-19份和醋蛋液 9-11份。
[0008] 大鲵油0.8份、马齿苋8份、木瓜15份、蒲公英20份、丝瓜5份、陈皮22份、百合10份、 香菇8份、薄荷16份、猕猴桃8份、心胆草0.4份、狗蚁草0.7份、甘草9份、白带草0.8份、率花蜜 27份、油菜花粉14份和醋蛋液11份。
[0009] 大鲵油0.7份、马齿苋11份、木瓜13份、蒲公英18份、丝瓜7份、陈皮18份、百合12份、 香菇1 〇份、薄荷14份、猕猴桃11份、心胆草0.9份、狗蚁草0.4份、甘草4份、白带草1.0份、率花 蜜20份、油菜花粉16份和醋蛋液10份。
[0010] 大鲵油0.6份、马齿苋9份、木瓜17份、蒲公英15份、丝瓜9份、陈皮20份、百合11份、 香菇13份、薄荷11份、猕猴桃6份、心胆草0.6份、狗蚁草0.2份、甘草11份、白带草0.4份、枣花 蜜23份、油菜花粉19份和醋蛋液9份。
[0011] 为解决上述技术问题，本发明还提供一种墨吉对虾饲料添加剂的制备方法，其制 备方法包括以下步骤：
[0012] (1)取大鲵体内的脂肪组织，切碎，清洗干净，加入脂肪组织质量5-7倍的去离子 水，武火煮沸后，后改文火煮5_6h，把所得到的油液过滤、去渣、离心、，取上清油液，得到大鲵 油；
[0013] ⑵取鸡蛋若干个，加入鸡蛋质量3倍的6°米醋，密封浸泡1周后，启封将鸡蛋清与 鸡蛋黄与醋搅匀，继续密封2天后，过滤取滤液得到醋蛋液；
[0014] (3)将木瓜和丝瓜投入粉碎机粉碎，按所述质量份数取大鲵油、醋蛋液、粉碎后的 木瓜和丝瓜，混合均匀后放置15-18h得混合物一；
[0015] (4)按所述质量份数比例取马齿苋、蒲公英、陈皮、百合、香菇、薄荷、桑叶、猕猴桃、 心胆草、狗蚁草、甘草、白带草混合，加入相对于混合物10~12倍的醇体积浓度为90%~ 95 %的乙醇，加热至沸腾回流3~5小时，过滤，收集滤液，随后在真空度0.05~0.08Mpa下减 压浓缩至40~50 °C时相对密度为1.00~1.04的膏体，喷雾干燥，喷雾干燥机的进风温度160 ~175°C、出风温度80~85°C，随后粉碎成粉末，制成干膏粉；
[0016] (5)取所述质量份枣花蜜、油菜花粉与步骤(2)得到的醋蛋液，步骤(3)得到的干膏 粉混合均匀得到墨吉对虾饲料添加剂。
[0017] 本发明实施例提供的技术方案带来的有益效果是:其成分为兼有药用和食用双重 作用，可抗菌、消炎，提高墨吉对虾的免疫力，同时有效治疗斑节对虾杆状病毒病。食用本发 明添加剂后的墨吉对虾抗病力强，生长速度快、肉质营养丰富，极大增加了养殖户的经济效 益，具有配方简单、科学、合理，纯天然绿色无残留，实用性强，无毒副作用，效果显著的优 点
【具体实施方式】
[0018] 本发明提供了一种墨吉对虾饲料添加剂及制备方法，包括原料有：大鲵油、马齿 苋、木瓜、蒲公英、丝瓜、陈皮、百合、香菇、薄荷、桑叶、猕猴桃、心胆草、狗蚁草、甘草、白带 草、枣花蜜、油菜花粉和醋蛋液。
[0019] 马齿苋：别名马齿菜、马苋菜、猪母菜、瓜仁菜、瓜子菜、长寿菜、马蛇子菜。本品为 马齿苋科植物马齿苋，以全草入药。酸，寒。清热利湿，凉血解毒。
[0020] 木瓜:别名贴梗海棠、铁脚梨、皱皮木瓜、宣木瓜。本品为蔷薇科植物贴梗海棠的干 燥近成熟果实。夏、秋二季果实绿黄时采收，置沸水中烫至外皮灰白色，对半纵剖，晒干。酸， 温。归肝、脾经。平肝舒筋，和胃化湿。
[0021] 蒲公英：别名黄花地丁、婆婆丁。本品为菊科植物蒲公英、碱地蒲公英或同属数种 植物的干燥全草。春至秋季花初开时采挖，除去杂质，洗净，晒干。苦、甘，寒。归肝、胃经。清 热解毒，消肿散结，利尿通淋。
[0022] 丝瓜：别名：天丝瓜、天罗、蜜瓜、布瓜、天吊瓜、纯阳瓜、倒阳菜、水瓜、絮瓜、缣瓜、 蛮瓜、绵瓜。丝瓜苦味质、黏液质、木胶、瓜氨酸、木聚糖和干扰素等特殊物质具有一定的特 殊作用。有清凉、利尿、活血、通经、解毒之效。
[0023]陈皮：别名橘皮。本品为芸香科植物橘及其栽培变种的干燥成熟果皮。药材分为 "陈皮"和"广陈皮"。采摘成熟果实，剥取果皮，晒干或低温干燥。苦、辛，温。归肺、脾经。理气 健脾，燥湿化痰。
[0024] 百合:百合或细叶百合的干燥肉质鳞叶。甘，寒。归心、肺经。养阴润肺，清心安神。 用于阴虚久咳，痰中带血，虚烦惊悸，失眠多梦，精神恍惚。
[0025] 香燕:别名别名:冬燕、香菌、爪菰、花燕、香蕈、香菰、香信。性味甘、平、凉;人肝、胃 经。有补肝肾、健脾胃、益气血、益智安神、美容颜之功效。
[0026]薄荷:本品为唇形科薄荷属植物薄荷的干燥地上部分。夏、秋二季茎叶茂盛或花开 至三轮时，选晴天，分次采割，晒干或阴干。辛，凉。归肺、肝经。宣散风热。清头目，透疹。
[0027] 桑叶:本品为桑科植物桑的干燥叶。初霜后采收，除去杂质，晒干。甘、苦，寒。归肺、 肝经。疏散风热，清肺润燥，清肝明目。
[0028] 猕猴桃：别名藤梨、阳桃、白毛桃、毛梨子。猕猴桃科猕猴桃属植物猕猴桃，以根和 果实入药。秋季摘果挖根，鲜用或晒干。果:调中理气，生津润燥，解热除烦。根、根皮:清热解 毒，活血消肿，祛风利湿。
[0029] 心胆草:别名日本柳叶菜、水朝阳花、小对经草、对叶草、水苏、蒿子杆针。为柳叶菜 科植物长籽柳叶菜的全株。味苦;辛;性凉。清热利湿;止血安胎;解毒消肿。主痢疾;吐血;咳 血;便积血；月经过多;胎动不安;痈疮疖肿;烫伤;跌打伤肿;外伤出血。
[0030] 狗蚁草：别名链夹豆、练夹豆、小号野花生、山花生。豆科狗蚁草，以全草、根、叶入 药。味甘、苦，性平。活血通络，清热化湿，驳骨消肿，去腐生肌。
[0031] 甘草:甘，平。归心、肺、脾、胃经。补脾益气，清热解毒，祛痰止咳，缓急止痛，调和诸 药。用于脾胃虚弱，倦怠乏力，心悸气短，咳嗽痰多，脘腹、四肢挛急疼痛，痈肿疮毒，缓解药 物毒性、烈性。
[0032] 白带草:别名雀儿菜、野养菜、米花香荠菜。为十字花科植物碎米荠及弯曲碎米荠 的全草。味甘;淡;性凉。清热利湿;安神;止血。主湿热泻痢;热淋；白带；心悸;失眠;虚火牙 痛;小儿疳积;吐血;便血;疔疮。
[0033] 枣花蜜：内含丰富的葡萄糖、果糖和多种维生素及矿物质。性平偏温.功能补中益 气、养血安神、护脾养胃.
[0034] 以下采用实施例来详细说明本发明的实施方式，借此对本发明如何应用技术手段 来解决技术问题，并达成技术效果的实现过程能充分理解并据以实施。
[0035] 实施例1添加剂1
[0036] 一种墨吉对虾饲料添加剂，其中添加剂包括:大鲵油0.8g、马齿苋8g、木瓜15g、蒲 公英20g、丝瓜5g、陈皮22g、百合1(^、香燕8&、薄荷16g、猕猴桃8g、心胆草0.4g、狗蚁草0.7g、 甘草9g、白带草0.8g、枣花蜜27g、油菜花粉14g和醋蛋液1 lg。
[0037]添加剂的制备方法包括以下步骤：
[0038] (1)取大鲵体内的脂肪组织，切碎，清洗干净，加入脂肪组织质量6倍的去离子水， 武火煮沸后，后改文火煮5h，把所得到的油液过滤、去渣、离心，取上清油液，得到大鲵油；
[0039] (2)取鸡蛋若干个，加入鸡蛋质量3倍的6°米醋，密封浸泡1周后，启封将鸡蛋清与 鸡蛋黄与醋搅匀，继续密封2天后，过滤取滤液得到醋蛋液；
[0040] (3)将木瓜和丝瓜投入粉碎机粉碎，按所述质量份数取大鲵油、醋蛋液、粉碎后的 木瓜和丝瓜，混合均匀后放置17h得混合物一；
[0041] (4)按所述质量份数比例取马齿苋、蒲公英、陈皮、百合、香菇、薄荷、桑叶、猕猴桃、 心胆草、狗蚁草、甘草、白带草混合，加入相对于混合物10~12倍的醇体积浓度为90%~ 95 %的乙醇，加热至沸腾回流3~5小时，过滤，收集滤液，随后在真空度0.05~0.08Mpa下减 压浓缩至40~50 °C时相对密度为1.00~1.04的膏体，喷雾干燥，喷雾干燥机的进风温度160 ~175°C、出风温度80~85°C，随后粉碎成粉末，制成干膏粉；
[0042] (5)取所述质量份枣花蜜、油菜花粉与步骤(3)得到的混合物一，步骤(4)得到的干 膏粉混合均勾得到墨吉对奸饲料添加剂。
[0043] 实施例2添加剂2
[0044] -种墨吉对虾饲料添加剂，其中添加剂包括:大鲵油0.7g、马齿苋llg、木瓜13g、蒲 公英18g、丝瓜7g、陈皮18g、百合128、香燕1(^、薄荷148、猕猴桃11^、心胆草0.98、狗蚁草 〇. 4g、甘草4g、白带草1.0g、枣花蜜20g、油菜花粉16g和醋蛋液10g。
[0045] 添加剂的制备方法包括以下步骤：
[0046] (1)取大鲵体内的脂肪组织，切碎，清洗干净，加入脂肪组织质量7倍的去离子水， 武火煮沸后，后改文火煮6h，把所得到的油液过滤、去渣、离心，取上清油液，得到大鲵油；
[0047] (2)取鸡蛋若干个，加入鸡蛋质量3倍的6°米醋，密封浸泡1周后，启封将鸡蛋清与 鸡蛋黄与醋搅匀，继续密封2天后，过滤取滤液得到醋蛋液；
[0048] (3)将木瓜和丝瓜投入粉碎机粉碎，按所述质量份数取大鲵油、醋蛋液、粉碎后的 木瓜和丝瓜，混合均匀后放置15h得混合物一；
[0049] (4)按所述质量份数比例取马齿苋、蒲公英、陈皮、百合、香菇、薄荷、桑叶、猕猴桃、 心胆草、狗蚁草、甘草、白带草混合，加入相对于混合物10~12倍的醇体积浓度为90%~ 95 %的乙醇，加热至沸腾回流3~5小时，过滤，收集滤液，随后在真空度0.05~0.08Mpa下减 压浓缩至40~50 °C时相对密度为1.00~1.04的膏体，喷雾干燥，喷雾干燥机的进风温度160 ~175°C、出风温度80~85°C，随后粉碎成粉末，制成干膏粉；
[0050] (5)取所述质量份枣花蜜、油菜花粉与步骤(3)得到的混合物一，步骤(4)得到的干 膏粉混合均勾得到墨吉对奸饲料添加剂。
[0051 ]实施例3添加剂3
[0052] 一种墨吉对虾饲料添加剂，其中添加剂包括:大鲵油0.6g、马齿苋9g、木瓜17g、蒲 公英158、丝瓜98、陈皮2(^、百合11^、香燕138、薄荷1]^、猕猴桃68、心胆草0.68、狗蚁草 0.2g、甘草1 lg、白带草0.4g、枣花蜜23g、油菜花粉19g和醋蛋液9g。
[0053] 添加剂的制备方法包括以下步骤：
[0054] (1)取大鲵体内的脂肪组织，切碎，清洗干净，加入脂肪组织质量5倍的去离子水， 武火煮沸后，后改文火煮5h，把所得到的油液过滤、去渣、离心，取上清油液，得到大鲵油；
[0055] (2)取鸡蛋若干个，加入鸡蛋质量3倍的6°米醋，密封浸泡1周后，启封将鸡蛋清与 鸡蛋黄与醋搅匀，继续密封2天后，过滤取滤液得到醋蛋液；
[0056] (3)将木瓜和丝瓜投入粉碎机粉碎，按所述质量份数取大鲵油、醋蛋液、粉碎后的 木瓜和丝瓜，混合均匀后放置18h得混合物一；
[0057] (4)按所述质量份数比例取马齿苋、蒲公英、陈皮、百合、香菇、薄荷、桑叶、猕猴桃、 心胆草、狗蚁草、甘草、白带草混合，加入相对于混合物10~12倍的醇体积浓度为90%~ 95 %的乙醇，加热至沸腾回流3~5小时，过滤，收集滤液，随后在真空度0.05~0.08Mpa下减 压浓缩至40~50 °C时相对密度为1.00~1.04的膏体，喷雾干燥，喷雾干燥机的进风温度160 ~175°C、出风温度80~85°C，随后粉碎成粉末，制成干膏粉；
[0058] (5)取所述质量份枣花蜜、油菜花粉与步骤(3)得到的混合物一，步骤(4)得到的干 膏粉混合均勾得到墨吉对奸饲料添加剂。
[0059]实施例4添加剂4
[0060] 一种墨吉对虾饲料添加剂，其中添加剂包括：马齿苋8g、木瓜15g、蒲公英20g、丝瓜 5g、陈皮22g、百合1(^、香燕8&、薄荷16g、猕猴桃8g、心胆草0.4g、狗蚁草0.7g、甘草9g、白带 草0.8g、枣花蜜27g、油菜花粉14g和醋蛋液llg。
[0061 ]添加剂的制备方法包括以下步骤：
[0062] (1)取鸡蛋若干个，加入鸡蛋质量3倍的6°米醋，密封浸泡1周后，启封将鸡蛋清与 鸡蛋黄与醋搅匀，继续密封2天后，过滤取滤液得到醋蛋液；
[0063] (2)将木瓜和丝瓜投入粉碎机粉碎，按所述质量份数取醋蛋液、粉碎后的木瓜和丝 瓜，混合均匀后放置17h得混合物一；
[0064] (3)按所述质量份数比例取马齿苋、蒲公英、陈皮、百合、香菇、薄荷、桑叶、猕猴桃、 心胆草、狗蚁草、甘草、白带草混合，加入相对于混合物10~12倍的醇体积浓度为90%~ 95 %的乙醇，加热至沸腾回流3~5小时，过滤，收集滤液，随后在真空度0.05~0.08Mpa下减 压浓缩至40~50 °C时相对密度为1.00~1.04的膏体，喷雾干燥，喷雾干燥机的进风温度160 ~175°C、出风温度80~85°C，随后粉碎成粉末，制成干膏粉；
[0065] (4)取所述质量份枣花蜜、油菜花粉与步骤(2)得到的混合物一，步骤(3)得到的干 膏粉混合均勾得到墨吉对奸饲料添加剂。
[0066] 实施例5添加剂5
[0067] 一种墨吉对虾饲料添加剂，其中添加剂包括:大鲵油0.8g、马齿苋8g、木瓜15g、蒲 公英20g、丝瓜5g、陈皮22g、百合1(^、香燕8&、薄荷16g、猕猴桃8g、心胆草0.4g、狗蚁草0.7g、 甘草9g、白带草0.8g、枣花蜜27g和油菜花粉14g。
[0068] 添加剂的制备方法包括以下步骤：
[0069] (1)取大鲵体内的脂肪组织，切碎，清洗干净，加入脂肪组织质量5-7倍的去离子 水，武火煮沸后，后改文火煮6h，把所得到的油液过滤、去渣、离心，取上清油液，得到大鲵 油；
[0070] (2)将木瓜和丝瓜投入粉碎机粉碎，按所述质量份数取大鲵油、粉碎后的木瓜和丝 瓜，混合均匀后放置17h得混合物一；
[0071] (3)按所述质量份数比例取马齿苋、蒲公英、陈皮、百合、香菇、薄荷、桑叶、猕猴桃、 心胆草、狗蚁草、甘草、白带草混合，加入相对于混合物10~12倍的醇体积浓度为90%~ 95 %的乙醇，加热至沸腾回流3~5小时，过滤，收集滤液，随后在真空度0.05~0.08Mpa下减 压浓缩至40~50 °C时相对密度为1.00~1.04的膏体，喷雾干燥，喷雾干燥机的进风温度160 ~175°C、出风温度80~85°C，随后粉碎成粉末，制成干膏粉；
[0072] (4)取所述质量份枣花蜜、油菜花粉与步骤(2)得到的混合物一，步骤(3)得到的干 膏粉混合均勾得到墨吉对奸饲料添加剂。
[0073]实施例6添加剂6
[0074] 一种墨吉对虾饲料添加剂，其中添加剂包括:大鲵油0.8g、马齿苋8g、木瓜15g、蒲 公英20g、丝瓜5g、陈皮22g、百合10g、香菇8g、薄荷16g、猕猴桃8g和醋蛋液llg。
[0075] 添加剂的制备方法包括以下步骤：
[0076] (1)取大鲵体内的脂肪组织，切碎，清洗干净，加入脂肪组织质量7倍的去离子水， 武火煮沸后，后改文火煮6h，把所得到的油液过滤、去渣、离心，取上清油液，得到大鲵油；
[0077] (2)取鸡蛋若干个，加入鸡蛋质量3倍的6°米醋，密封浸泡1周后，启封将鸡蛋清与 鸡蛋黄与醋搅匀，继续密封2天后，过滤取滤液得到醋蛋液；
[0078] (3)将木瓜和丝瓜投入粉碎机粉碎，按所述质量份数取大鲵油、醋蛋液、粉碎后的 木瓜和丝瓜，混合均匀后放置17h得混合物一；
[0079] (4)按所述质量份数比例取马齿苋、蒲公英、陈皮、百合、香菇、薄荷、猕猴桃混合， 加入相对于混合物1 〇~12倍的醇体积浓度为90 %~95 %的乙醇，加热至沸腾回流3~5小 时，过滤，收集滤液，随后在真空度0.05~0.08Mpa下减压浓缩至40~50 °C时相对密度为 1.00~1.04的膏体，喷雾干燥，喷雾干燥机的进风温度160~175°C、出风温度80~85 °C，随 后粉碎成粉末，制成干膏粉；
[0080] (5)将步骤(3)得到的混合物一与步骤(4)得到的干膏粉混合均匀得到墨吉对虾饲 料添加剂。
[0081 ] 安全性试验 [0082] 1、急性毒性试验
[0083] (1)试验动物、饲料及饲养
[0084]清洁级昆明种小白鼠，体重18_22g，20只，雌雄各半。由上海斯莱克实验动物有限 公司提供。全价营养生长饲料由广州大台农饲料有限公司提供。Π级动物房，人工昼夜节 律，温度：24±2°C，湿度：45±5%。
[0085] (2)试验试剂
[0086]羧甲基纤维素(分析纯），用蒸馏水配制成0.5%悬浮液待用。
[0087] (3)试验方法
[0088]试验方法选用最大耐受量法。取20只体重为18_22g健康的清洁级昆明种小白鼠， 雌雄各10只。试验前禁食16h(隔夜），不禁水。取5g本发明实施例1中的添加剂1，用0.4 %羧 甲基纤维素稀释至18mL。分上、下午间隔4h二次经口灌胃，第二次灌胃后2h进食，总灌胃剂 量为l〇g · (kg · bwr1。连续观察14d，记录中毒表现及死亡情况。
[0089] 2、致突变性试验
[0090] 2.1试验菌株
[0091] TA97、TA98、TA100、TA102四株鼠伤寒沙门氏菌。由黑龙江省疾病控制中心提供。 [0092] 2.2试验动物及试剂
[0093] (l)Ames 试验：
[0094]营养肉汤培养基的配制：牛肉膏2.4g，蛋白胨5.0g，氯化钠2.4g，磷酸氢二钾 (1(2耶04.3!120)1.28，蒸馏水50011^。加热溶解将上述试剂，调？!1至7.4，分装、灭菌 (0.103MPa，20min)，普通冰箱保存备用(不超过半年）。
[0095] 磷酸盐贮备液配制：磷酸氢钠氨(NaNH4HP04 · 4H20)17.4g，柠檬酸（C6H807 · H20) l〇.〇g，磷酸氢二钾(K2HP04)50.0g，硫酸镁(MgS04 · 7H20)1.0g。
[0096]硫酸镁待其他试剂完全溶解后再缓缓放入，使其继续溶解(否则会析出沉淀）。 [0097] 1.5%琼脂培养基配制：琼脂48&押.(^，滴入蒸馏水至40〇11^，上述试剂融化后 0 · 102MPa 灭菌 25min。
[0098] 底层培养基配制:灭菌琼脂培养基(80°〇4001^，磷酸盐贮备液711^，40%葡萄糖溶 液20mL，在容器中依次加入上述试剂，充分混匀，待温度降至80 °C左右时倒平皿，每皿25mL， 37 °C培养过夜的同时除去水分，然后检查有无污染。
[0099]顶层琼脂配制:琼脂3 · 0g，氯化钠2 · 5g，滴入蒸馏水至500M1。
[0100] 0.5mmol/L组氨酸-生物素溶液配制:D-生物素D-Biotin(分子量244)30.4mg，L-组 氨酸1^-]^81:丨(1;[116(分子量155)19.311^，滴入蒸馏水至2501111^
[0101] 10 % S-9混合液的配制：磷酸盐缓冲液（0.2mο 1 /L，pΗ7.4 ) 6mL，氯化钾溶液 (1 · 65mol/L)0 · 2mL，氯化镁溶液（0 · 4mol/L)0 · 2mL，葡萄糖-6-磷酸钠盐溶液(0 · 05mol/L) 1. OmL，辅酶-Π溶液(0.0025mo 1/L) 1.5mL，肝S-9液1. OmL混匀，临用时配制，置水浴中待用。
[0102] 肝s-9液由黑龙江省疾病控制中心提供。标准诱变剂分别为敌克松、叠氮钠、2-乙 酰氨基芴、1、8-二羟蒽醌，由黑龙江省疾病控制中心提供。
[0103] (2)微核试验
[0104] 50只清洁级昆明种小白鼠，体重25_30g，雌雄各半。由上海斯莱克实验动物有限公 司提供。全价营养生长饲料由广州大台农饲料有限公司提供。Π级动物房，人工昼夜节律， 温度：24±2Γ，湿度：45±5%。
[0105] 小牛血清：小牛血清虑菌后放入恒温水浴中，56°C灭活lh。灭活后将其储存于4°C 冰箱中保存备用。
[0106]吉姆萨(Giemsa)染液:称取Giemsa3.8g，加入375ml甲醇（分析纯)研磨，待完全溶 解后，再加入125ml甘油。置于37 °C恒温箱48h震摇数次。过滤，静置两周后用。
[0107] 吉姆萨(Giemsa)应用液:取一份Giemsa染液与6份磷酸盐缓冲液混合而成。临用时 配制。
[0108] l/15moL/L磷酸盐缓冲液（PH6.8)配制：磷酸二氢钾(KH2P04)4.50g，磷酸二氢钠 (Na2HP04 · 12H20) 11.78g，滴入蒸馏水至1000mL，全部试剂除注明外，均为分析纯，试验用 水为蒸馏水。
[0109] (3)精子畸形试验
[0110] 50只清洁级昆明种雄性小白鼠，体重25-35g。由上海斯莱克实验动物有限公司提 供。全价营养生长饲料由广州大台农饲料有限公司提供。人工昼夜节律，温度：24±2°C，湿 度：45±5%。
[0111] 甲醇。1 %~2 %伊红染色液:称取伊红1~2g，溶于100mL蒸馏水备用。全部试剂除 标明外，均为分析纯，试验用水为蒸馏水。
[0112] 2.3试验方法
[0113] 2.3.1Ames 试验
[0114] (1)原理：鼠伤寒沙门氏菌的突变型（即组氨酸缺陷型）菌株在有组氨酸条件下的 培养基上可以正常生长，在无组氨酸存在的培养基上不能生长。但若有致突变物存在于无 组氨酸的培养基中时，则沙门氏菌突变型可回复突变为野生型（表现型），因而可以生长于 无组氨酸的培养基上，所以可根据菌落形成数量为标准来判断受试物致突性的强弱。一些 特殊的受试物需要经过代谢活化系统处理后才能使沙门氏菌突变型回复突变为野生型，代 谢活化系统采用S-9混合液(制备方法:利用多氯联苯(Polychlorinated biphenyl，PCB)诱 导大鼠肝匀浆(S-9))。
[0115] (2)试验菌株:采用1497、1498、14100、1六102四株鼠伤寒沙门氏菌突变型菌株， TA97和TA98可以检测各种移码型诱变剂;TA100可检测引起碱基对置换的诱变剂;TA102能 检测出其他测试菌株不能检出或极少检出的某些诱变剂。
[0116] (3)5个本发明实施例1中的添加剂1剂量分别为5000、1000、200、40和8以8/皿.
[0117] (4)增菌培训取营养肉汤培养基5ml，加入无菌小三角瓶或无菌试管中，将冷冻保 存的菌株接种于营养肉汤培养基内，37 °C振荡（100次/min)培养10h至对数增长期，每毫升 活菌数多于1 X 1〇9~2 X 109个，用黑纸包裹培养瓶，以防细菌被光线照射。
[0118] (5)准备数个底层培养基平皿。
[0119] (6)将顶层培养基融化并分装于无菌小试管，每管2ml，保温于45°C水浴锅中。
[0120] (7)将0.1ml的测试菌株新鲜增菌液依次加入保温的顶层培养基中，混匀；然后滴 入0. lml受试物(活化时另加入0.5ml 10% S-9混合液），再混匀，快速倒在底层培养基上，并 使其在底层上均匀分布，平放固化，无菌箱中（37 °C)培养48h观察结果。
[0121] (8)另做溶剂对照（即阴性对照，蒸馏水0.1ml/皿）和阳性对照（分别采用叠氮钠 1.5yg/皿、敌克松50yg/皿、2-乙酰氨基芴10yg/皿、1，8-二羟蒽醌50yg/皿）。溶剂对照加灭 菌蒸馏水;阳性对照不加受试物，只加标准诱变剂;其他方法同上。重复两次。
[0122] 2.3.2微核试验
[0123]表1微核试验设计(n = 10)
[0124]
[0125] 按30h给受试物法给药，阳性对照组用环磷酸胺一次腹腔注射0.04g · (kg · bwr1， 其余各组灌胃，2次给药间隔24h，第2次给药后6h处死动物。
[0126] 制片:在第2次给药6h后将小鼠脱颈椎处死，取小鼠脊椎，剔去肌肉，剪开一端的骨 椎，用尖嘴钳挤出骨髓滴到小牛血清(0.05mL，置于载玻片上）中。
[0127] 推片:混匀后，推片若干张，静置干燥。
[0128] 固定：用甲醇溶液将干燥的涂片固定5~lOmin，取出瞭干。当日不染色的涂片亦应 固定后保存。
[0129] 染色:用1:10的吉姆萨-磷酸缓冲液(pH为6.4)染色固定好的涂片15~30min。用蒸 馏水冲洗，干燥后待检。每只小白鼠计数1 〇〇〇个PCE(Poiychromatic erythrocytes，PCE)， 微核率以％。表示；另外，在计数PCE时，同时计数RBC(Red blood cell count，RBC)数，计算 PCE/RBC 值。
[0130] 2.3.3精子畸形试验
[0131] 表2精子畸形试验设计(n = 10)
[0132]
[0133] ~每日染毒一次，连续5d，每天记录体重、进食量和摄入添加剂量。阳性对照组采用 0.04g · (kg · bw · (1Γ1环磷酰胺进行腹腔注射，本发明实施例1添加剂1的给药方式为灌胃。 试验结束时要求每组至少有5只存活动物。
[0134] 精子采样与镜检:于首次给受试物后第5周（35d)将小鼠用颈椎脱臼法处死，打开 腹腔，摘取两侧附睾，放入小平皿中（盛有约2ml生理盐水）。将附睾以眼科剪剪碎（不能太 碎）。将组织碎片用四层擦纸滤去。滤液离心5min(1000~1500r/min)。留存约0.5ml液体，其 余上清液弃除，将其与沉淀物摇匀后，在洁净的载玻片上滴1滴进行涂片(一般每只小鼠做4 ~5张涂片）。涂片在空气中干燥后，采用甲醇溶液固定5min。用2 %伊红溶液在其自然干燥 后染色lh，用水轻冲，干燥待检。
[0135] 在低倍镜下找到精子重叠较少、背景清晰的部分，用高倍镜顺序检查精子，并计 数。凡不完整，轮廓不清，或重叠，或明显属人为剪碎者均不计算。一个精子只计其中较为明 显的一种畸形。
[0136] 精子的畸形主要表现在头部，其次在尾部，畸形类型有香蕉形、无定形、无钩、胖 头、双头、双尾、尾折叠等。记录异常的精子数和异常类型，并计算畸形类型的精子构成比。 每鼠计1000个完整精子，崎形率以％。表不。
[0137] 精子畸形率(％。）=精子畸形总数/检查精子总数XI 000
[0138] 3、慢性和亚慢性试验
[0139] 3.1试验动物、饲料及饲养
[0140] 3.1.1大鼠30d喂养试验
[0141] 清洁级Wistar大白鼠，体重150_180g，80只，雌雄各半。由上海斯莱克实验动物有 限公司提供。全价营养生长饲料由北京澳协力饲料有限公司提供。Π级动物房，人工昼夜节 律，温度：24±2°C，湿度：45±5%。
[0142] 3.1.2蛋鸡56d喂养试验
[0143] 29周龄海赛蛋鸡240只，由哈尔滨益农禽业提供。基础饲粮由哈尔滨华达饲料厂提 供。蛋鸡饲养在东北农业大学实验实习基地蛋鸡舍。
[0144] 3.2试验试剂
[0145] 普通化学试剂：甲醛、石蜡、乙醇、二甲苯、苏木精、伊红、丙酮、磷酸盐缓冲液等。
[0146] 生化指标测定试剂盒：谷草转氨酶(6111丨&111；[0-(?&1&061:;[(3 1:抑118&111；[116&86,601')、 谷丙转氨酶（Glutamic-pyruvic transaminase，GPT)、尿素氮（Urea nitrogen，BUN)、肌酐 (Creatinine，CRE)、胆固醇（Cholesterol，CH0)、血糖（Glucose，GLU)、TG、白蛋白（Albumin， ALB)、总蛋白（Total protein，TP)测试试剂盒均购自中生北控(生产批号：100731)
[0147] 血细胞分析仪测试试剂：染色剂（STR0MAT0LYSER-4DS FFS-800A)、血蛋白检测试 剂（SULF0LYSERSLS-210A1015)、嗜碱性粒细胞和白细胞检测试剂（STR0MAT0LYSER-FBR1039)、稀释液(PK-30L G2109)。全部试剂均为分析纯，试验用水为蒸馏水。
[0148] 3.3试验方法
[0149] 3.3.1大鼠30d喂养试验
[0150] 表3大鼠30d喂养试验设计(η = 20)
[0151] __
[0152] ~动物购入隔离喂养1周后供试验用，每组雌雄各半。试验动物自由采食、自由饮水。_
[0153] (1)血液指标：
[0154] 一般性指标:观察大鼠的采食、饮水、发病及死亡等情况，每日早晚两次，体重和饲 料每周各称一次，并计算平均增重、采食量、始重、末重及饲料利用率。
[0155] 血液学指标:30d喂养结束后，采血液样品，测定红细胞(Red blood cell count， RBC)、白细胞(White blood cell count，W3C)、血红蛋白（Hemoglobin，HGB)、淋巴细胞数 (Lymphocyte，LYM)及白细胞分类。
[0156] 生化指标：30d喂养结束后，采集大鼠血液样品离心取血清，测定G0T、GPT、BUN、 CRE、CH0、GLU、TG、ALB、TP 〇
[0157] (2)病理学检查：
[0158] 尸检:观察并记录各系统器官、组织的肉眼变化，典型病变拍照。
[0159] 脏器系数:心脏、肝脏、肾脏、脾脏、睾丸或卵巢等组织及体重称重，并计算脏器系 数。
[0160] 组织学检查:在上述解剖试验动物以肉眼观察变化的同时，取心脏、肾脏、脾脏、肝 脏、胃、睾丸或卵巢等脏器组织1~2块，以甲醛溶液固定，石蜡包埋，切片，HE(H Ematine， HE)染色，显微镜下观察并记录组织学变化。
[0161] 3.3.2蛋鸡56d喂养试验
[0162] 表4蛋鸡56d喂养试验设计(n = 60)
[0163]

[0164] 动物购入后在本试验条件下适应7天后再开始试验。试验动物自由采食、自由饮 水。
[0165] (1)血液指标：
[0166] -般性指标:观察蛋鸡的采食、饮水、发病及死亡等情况，每日早晚两次，对蛋重和 饲料每天各称一次，并计算料蛋比、产蛋率。
[0167] 血液学指标:在56天喂养结束后，对蛋鸡进行采血测定RBC、WBC、HGB、LYM。
[0168] 生化指标：在56天喂养结束后，对蛋鸡进行采集血液离心取血清测定GOT、GPT、 BUN、CRE、CHO、GLU、TG、ALB、TP 〇
[0169] (2)病理学检查：
[0170] 尸检：肉眼观察并记录各系统器官、组织的变化，典型病变拍照。
[0171] 脏器系数:称心脏、肝脏、肺脏、肾脏、脾脏、胰腺、腺胃、肌胃等组织重及体重。
[0172] 组织学检查:在上述解剖试验动物以肉眼观察变化的同时，取肝脏、脾脏、肾脏、腺 胃等脏器组织1~2块以甲醛溶液固定，石蜡包埋，切片，HE染色，显微镜下观察并记录组织 学变化。
[0173] 3.4数据处理
[0174] 结果用平均值土标准差表示，采用SPSS 17.0进行统计分析。急性毒性试验、大白 鼠30d喂养试验和蛋鸡56d喂养试验结果进行单因素方差(one-wayANOVA)分析;Ames试验结 果和小鼠骨髓细胞微核试验结果均进行卡方检验;小鼠精子畸形试验结果进行单因素方差 分析和Duncar/s法多重比较。P〈0.05为差异显著性判断标准，P〈0.01为差异极显著判断标 准。
[0175] 4、结果与分析
[0176] 4.1急性毒性
[0177] 表5急性毒性
[0178]
[0179] 由表5可见，试验结束后，所有小鼠在试验期间全部无异常，饮水、采食及粪便均正 常，全部存活;两种性别小鼠的体重增重未见显著差异(P>〇.05)。在试验结束后将全部小鼠 脱颈处死，解剖，肉眼观察心、肝、脾、肺、胃、肾、胸腺等脏器均未出现异常病理变化。结果表 明，本发明实施例1添加剂1的LD50>10mg · (kg · bw)-l，属于实际无毒类物质。
[0180] 4.2致突变性
[0181] 4.2.1Ames 试验
[0182] 由表6、7、8、9可见，与阴性对照组相比，在加与不加S-9情况下两次Ames试验阳性 对照组回复突变菌落数极显著增高(P〈〇.01)，本发明实施例1添加剂1各剂量组回复突变菌 落数无显著差异(P>〇.05)，无剂量反应关系，即此剂量下本发明实施例1添加剂1对鼠伤寒 沙门氏菌为致突变阴性。
[0183 ]表6本发明实施例1添加剂1对回复突变菌落数的影响(第一次试验，-S9)
[0184]
[0185] 注：同列中*表示差异极显著(Ρ〈0·01)。表7、8、9同
[0186] 表7本发明实施例1添加剂1对回复突变菌落数的影响(第一次试验，+S9)
[0187]
[0188]
[0189 ]表8本发明实施例1添加剂1对回复突变菌落数的影响(第二次试验，-S9) [0190]
[0191]
[0192 ]表9本发明实施例1添加剂1对回复突变菌落数的影响(第二次试验，+S9)
[0193]
[0194] 4.2.2小鼠骨髓细胞微核试验
[0195] 表10小鼠骨髓细胞微核试验(η = 10)
[0196]
[0197]
[0198] 注：同列中肩标*者表示差异极显著(P〈0.01)
[0199]由表10可见，与阴性对照组相比，阳性对照组微核率极显著提高(P〈0.01)，雌、雄 小鼠本发明实施例1添加剂1各组微核率均无显著差异(P>〇.05)，说明在此剂量下本发明实 施例1添加剂1对小鼠骨髓细胞微核率无显著影响，即本试验结果为阴性。此外，除阳性对照 组外，本发明实施例1添加剂1各组与阴性对照组相比PCE/RBC无显著差异(P>0.05)，说明此 剂量下本发明实施例1添加剂1对试验动物未见细胞毒性作用。
[0200] 4.2.3小鼠精子畸形试验
[0201]由表11可见，各组小鼠均有一定数量的畸形精子出现，与阴性对照组相比，阳性对 照组精子畸形率极显著提高（P〈〇. 01)，本发明实施例1添加剂1各组差异均不显著（P> 0.05)，无剂量反应关系，说明在此剂量下本发明实施例1添加剂1对小鼠精子畸形发生率没 有影响。
[0202] 表11小鼠精子畸形试验(η = 10)
[0203]
[0204] ~注：同列中肩标*者表示差异极显著(Ρ〈0.01)^' '
[0205] 4.3慢性和亚慢性
[0206] 4.3.1大鼠30d喂养试验
[0207] 4.3.1.1-般性指标
[0208]表12大鼠30d喂养试验体重增重、进食量、食物利用率(η = 10)
[0209]
[0210]
[0211] 由表12可见，本发明实施例1添加剂1喂饲大鼠30d后体重增重、总进食量以及食物 利用率与对照组相比均无显著差异(p>0.05)。
[0212] 4.3.1.2血液学指标
[0213] 表13大鼠30d喂养试验血液学指标（1) (η = 10)
[0214]
[0215] 表14大鼠30d喂养试验血液学指标(2) (η = 10)
[0216]
[0217]
[0218] 由表13和14可见，与对照组相比，本发明实施例1添加剂1饲喂大鼠30d后雌雄大鼠 的白细胞、红细胞、血红蛋白以及白细胞分类计数差异均不显著(P>〇.05)。
[0219] 4.3.1.3血液生化指标
[0220] 表15大鼠30d喂养试验血液生化指标（1) (n = 10)
[0221]
[0222] 表16大鼠30d喂养试验血液生化指标(2) (n = 10)
[0223]
[0224]
[0225] 由表15和16可见，与对照组相比，本发明实施例1添加剂1饲喂大鼠30d后雌雄大鼠 的9项血液生化指标差异均不显著(P>0.05)。
[0226] 4.3.1.4病理学检查
[0227] (1)大体观察
[0228] 试验结束后解剖各组大鼠进行肉眼尸检。各组大鼠气管、心脏、胸主动脉、肝、肾、 肾上腺、脾、胃、盲肠、结肠、直肠、胰腺、部分肠系膜淋巴结、乳腺、十二指肠、空肠、前列腺、 睾丸、附睾精囊或卵巢、子宫、阴道、坐骨神经、膀胱、皮肤等组织均未见明显异常。
[0229] 表17大鼠30d喂养试验脏器体重比（1) (η = 10)
[0230]
[0231] 表18大鼠30d喂养试验脏器体重比（2) (η = 10)
[0232]
[0233] 由表17、18可见，本发明实施例1添加剂1饲喂大鼠30d后与对照组雌雄大鼠的脏器 体重比相比差异均不显著(P>〇.05)。
[0234] (2)脏器组织病理检查
[0235] 试验结束后对所有大鼠心脏、肝脏、脾、肾、胃、睾丸或卵巢进行HE染色。显微镜下 观察，各剂量组与对照组相比未见任何明显异常
[0236] 4.3.2蛋鸡56d喂养试验
[0237] 4.3.2.1-般性指标
[0238] 由表19可见，与对照组相比，蛋鸡经56d本发明实施例1添加剂1饲喂后日采食量、 平均蛋重差异均不显著(P>〇.05);平均产蛋率显著提高，料蛋比显著降低(P〈0.05)，表明适 当剂量本发明实施例1添加剂1能够提高蛋鸡的生产性能。
[0239] 表19蛋鸡喂养试验一般性指标(η = 60)
[0240]
[0241] 注：同行中肩上字母不同者表示差异显著(Ρ〈0.05)
[0242] 4.3.2.2血液学指标
[0243] 由表20可见，与对照组相比，蛋鸡经56d本发明实施例1添加剂1饲喂后白细胞、红 细胞、血红蛋白、红细胞比容、红细胞平均体积、平均红细胞血色素、红细胞平均蛋白浓度、 血小板差异均不显著(P>〇. 05)。
[0244] 表20蛋鸡喂养试验血液学指标(η = 60)
[0245]
[0246] 4.3.2.3血液生化指标
[0247] 表21蛋鸡喂养试验血液生化指标(η = 60)
[0248]
[0249] 注：同行中肩上标注*者表示差异显著(P〈0.05)
[0250] 由表21可见，与对照组相比，高剂量组蛋鸡血液BUN水平显著降低(P〈0.05)，其他 指标均无显著差异(P>〇. 05)。
[0251] 4.3.2.4病理学检查
[0252] (1)大体观察
[0253] 试验结束后，对各组蛋鸡解剖，进行肉眼尸检。各组蛋鸡的主要脏器气管、心脏、 肝、肾、肾上腺、脾、胃、盲肠、结肠、直肠、胰腺、部分肠系膜淋巴结、十二指肠、卵巢、子宫、皮 肤等经肉眼观察，未见明显异常。
[0254] 表22蛋鸡喂养试验脏器体重比(n = 60)
[0255]
[0256]
[0257] 由表22可见，与对照组相比，本发明实施例1添加剂1各组蛋鸡脏器体重差异均不 显著(P>0.05)。
[0258] (2)脏器组织病理检查
[0259] 蛋鸡肝脏、脾、肾、腺胃经HE染色，在显微镜下观察，各剂量组与对照组相比较均未 见任何明显异常
[0260]综上实验结果：
[0261] 1.本发明实施例1添加剂1的半数致死量大于10g · (kg · bw)_l，属于实际无毒类 物质。
[0262] 2.本试验条件下，本发明实施例1添加剂1没有致突变性。
[0263] 3.本试验条件下，本发明实施例1添加剂1对大鼠和蛋鸡没有慢性和亚慢性毒性， 并可提尚蛋鸡的生广性能。
[0264] 综上所述，本试验结果提示，本试验条件下，本发明实施例1添加剂1既没有急性毒 性、致突变性，也没有慢性或亚慢性毒性，本发明实施例1添加剂1在适当的剂量下完全可以 作为一种绿色、天然、安全的功能性饲料添加剂，并应用于畜牧生产中。
[0265] 本发明的实施例2、实施例3、实施例4、实施例5和实施例6的添加剂同样进行了上 述试验，同样证明本发明实施例2、实施例3、实施例4、实施例5和实施例6的添加剂既没有急 性毒性、致突变性，也没有慢性或亚慢性毒性，在适当的剂量下完全可以作为一种绿色、天 然、安全的功能性饲料添加剂，并应用于畜牧生产中。
[0266] 对比试验：
[0267] 选取某墨吉对虾养殖场。挑选外观正常、体质健壮、大小均匀的墨吉对虾，将4200 尾墨吉对随机分为7组，每组600只，7组分别为饲喂本发明实施例1添加剂1组、饲喂本发明 实施例2添加剂2组、饲喂本发明实施例3添加剂3组、饲喂本发明实施例4添加剂4组、饲喂本 发明实施例5添加剂5组、饲喂本发明实施例6添加剂6组和饲喂普通饲料的对比组。添加剂 质量占饲料总重量的〇. 08%。将7组墨吉对虾分别放养在3.0m*3.0m*l. 0m的网箱中，试验用 水为天然海水经过沙滤所得，盐度为31-33，水温为23°C-26°C，水深为0.6m，试验过程溶解 氧保持在6. Omg/L以上。试验期为45天。日常管理每天换水排污一次。试验期间投喂量按墨 吉对虾体重的7-9%进行投喂，投饲频率3次/d(上午7:00-8:00、下午15:00-16:00、晚上22: 00-23:00)，早、中、晚的投喂量分别为35 %、30 %和35 %。
[0268] 1、增重率测定
[0269] 在试验的第1天、第45天（饲养结束）随机取60尾对虾，分别称取每组对虾体长体 重，计算体长增长率、相对增重率。
[0270] 体长增长率（％ )=[(试验末体长-试验初体长)/试验初体长]*100%
[0271 ] 相对增重率（％ ) = [(试验末体重-试验初体重)/试验初体重]*100%
[0272] 存活率（％ )=(末尾数-初始尾数)*100%
[0273] 2、血细胞吞噬活力的检测
[0274] 用无菌生理盐水冲洗过活化的白色念珠菌斜面，经过来活制成1.4*107/ml的菌悬 液。将饲喂上述7组45天的墨吉对虾进行接种试验，每组随机取20尾对虾，于对虾第二腹节 处进行肌肉注射接种0.1ml的菌悬液。lh后用lml注射器采血并按常规方法制作血液涂片玻 片，染色，检测100个血细胞，计算吞噬率和吞噬指数。计算公式如下：
[0275] 吞噬百分比(PP) = 100个血细胞中参吞噬的细胞数/100*100%
[0276] 吞噬指数(PI) = 100个参与吞噬的细胞内的真菌总数/100
[0277] 实验结果如下：
[0278] 表23七组墨吉对虾的增长、增重和成活率情况
[0279]
[0280]
[0281] 注：同列字母相同表示无显著差异(P>0.05);字母不同，则有显著差异(P〈0.05)。
[0282] 从以上数据可以看出本发明实施例所得添加剂与普通饲料相比，增重效果明显， 生长迅速，成活率高.
[0283] 表24试验前后血细胞吞噬活力的检测
[0284]
[0285] ~注：同行字母相同表示无显著差异(P>0.05);字母不同，则有显著差异(P〈0.05)。
[0286] 从以上数据可以看出本发明实施例所得添加剂与普通饲料相比，免疫力得到了极 大的提尚。
[0287] 3、选取该墨吉对虾养殖场中患有斑节对虾杆状病毒病的病虾140尾，随机分为7 组，每组20尾。7组分别为饲喂本发明实施例1添加剂1组、饲喂本发明实施例2添加剂2组、饲 喂本发明实施例3添加剂3组、饲喂本发明实施例4添加剂4组、饲喂本发明实施例5添加剂5 组、饲喂本发明实施例6添加剂6组和饲喂普通添加剂组的对比组。添加剂质量占饲料总重 量的0.1 %。将7组墨吉对虾分别放养在1.0m*l. 0m*0.5m的网箱中，试验期为7天。日常管理 每天换水排污一次。试验期间投喂量按墨吉对虾体重的7-9%进行投喂，投饲频率3次/d(上 午7:00-8:00、下午15:00-16:00、晚上22:00-23:00)，早、中、晚的投喂量分别为35%、30% 和 35 %。
[0288] 症状：
[0289] 致病虾食欲减少，活动呆滞，鳃、附肢和体表常带有大量的附生生物。受感染后幼 体除部分体色加深外，并无特别的症状，多数携带病毒的虾活动仍正常。
[0290]疗效判定：
[0291 ]痊愈:食欲及活动正常，鳃、附肢和体表附生生物消失；
[0292] 有效:食欲及活动好转，鳃、附肢和体表附生生物症状减轻；
[0293] 无效:死亡。
[0294] 实验结果：
[0295] 表25将140尾病虾饲喂4天后，实验结果：
[0296]
[0297] 以上实验结果可以看出，本发明实施例所得添加剂与普通添加剂相比，可以显著 提高墨吉对虾的免疫力及抗病能力，对治疗墨吉对虾的斑节对虾杆状病毒病效果相当显 著，具有独特的见效快、疗程短、无毒副作用的优势。
[0298] 综上实验结果，本发明所得墨吉对虾添加剂相对于普通添加剂，能明显的提高墨 吉对虾的免疫力，极大提高了墨吉对虾生长速度，同时可有效治疗斑节对虾杆状病毒病，提 高了墨吉对虾的经济价值。
[0299] 以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和 原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
【主权项】
1. 一种墨吉对虾饲料添加剂，其特征在于，所述添加剂包括以下组分:大鲵油、马齿苋、 木瓜、蒲公英、丝瓜、陈皮、百合、香菇、薄荷、桑叶、猕猴桃、心胆草、狗蚁草、甘草、白带草、 枣花蜜、油菜花粉和醋蛋液。2. 如权利要求1所述的墨吉对虾饲料添加剂，其特征在于，所述添加剂中各原料的重量 份数为:大銳油〇. 5_1.0份、马齿苋4_15份、木瓜10-19份、蒲公英12-22份、丝瓜4_11份、陈皮 15-28份、百合8-14份、香菇5-16份、薄荷9-19份、猕猴桃3-14份、心胆草0.4-1.0份、狗蚁草 0.2-0.9份、甘草4-12份、白带草0.4-1.2份、枣花蜜17-31份、油菜花粉10-23份和醋蛋液7-14份。3. 如权利要求1或2所述的墨吉对虾饲料添加剂，其特征在于，所述添加剂中各原料的 重量份数为:大鲵油0.6-0.8份、马齿苋8-11份、木瓜13-17份、蒲公英15-20份、丝瓜5-9份、 陈皮18-22份、百合10-12份、香燕8-13份、薄荷11-16份、猕猴桃6-11份、心胆草0 · 4-0 · 9份、 狗蚁草0.2-0.7份、甘草4-11份、白带草0.4-1.0份、枣花蜜20-27份、油菜花粉14-19份和醋 蛋液9-11份。4. 如权利要求1至3任一所述的墨吉对虾饲料添加剂，其特征在于，所述添加剂中各原 料的重量份数为:大鲵油0.8份、马齿苋8份、木瓜15份、蒲公英20份、丝瓜5份、陈皮22份、百 合10份、香菇8份、薄荷16份、猕猴桃8份、心胆草0.4份、狗蚁草0.7份、甘草9份、白带草0.8 份、枣花蜜27份、油菜花粉14份和醋蛋液11份。5. 如权利要求1至4任一所述的墨吉对虾饲料添加剂，其特征在于，所述添加剂中各原 料的重量份数为:大鲵油0.7份、马齿苋11份、木瓜13份、蒲公英18份、丝瓜7份、陈皮18份、百 合12份、香菇10份、薄荷14份、猕猴桃11份、心胆草0.9份、狗蚁草0.4份、甘草4份、白带草1.0 份、枣花蜜20份、油菜花粉16份和醋蛋液10份。6. 如权利要求1至5任一所述的墨吉对虾饲料添加剂，其特征在于，所述添加剂中各原 料的重量份数为:大鲵油0.6份、马齿苋9份、木瓜17份、蒲公英15份、丝瓜9份、陈皮20份、百 合11份、香菇13份、薄荷11份、猕猴桃6份、心胆草0.6份、狗蚁草0.2份、甘草11份、白带草0.4 份、枣花蜜23份、油菜花粉19份和醋蛋液9份。7. -种如权利要求1至6任一所述的墨吉对虾饲料添加剂的制备方法，其特征在于，所 述制备方法包括以下步骤： (1) 取大鲵体内的脂肪组织，切碎，清洗干净，加入脂肪组织质量5-7倍的去离子水，武 火煮沸后，后改文火煮5_6h，把所得到的油液过滤、去渣、离心，取上清油液，得到大鲵油； (2) 取鸡蛋若干个，加入鸡蛋质量3倍的6°米醋，密封浸泡1周后，启封将鸡蛋清与鸡蛋 黄与醋搅匀，继续密封2天后，过滤取滤液得到醋蛋液； (3) 将木瓜和丝瓜投入粉碎机粉碎，按所述质量份数取大鲵油、醋蛋液、粉碎后的木瓜 和丝瓜，混合均匀后放置15-18h得混合物一； (4) 按所述质量份数比例取马齿苋、蒲公英、陈皮、百合、香菇、薄荷、桑叶、猕猴桃、心 胆草、狗蚁草、甘草、白带草混合，加入相对于混合物10~12倍的醇体积浓度为90%~95%的 乙醇，加热至沸腾回流3~5小时，过滤，收集滤液，随后在真空度0.05~0.08Mpa下减压浓缩 至40~50°C时相对密度为1.00~1.04的膏体，喷雾干燥，喷雾干燥机的进风温度160~175 °C、出风温度80~85°C，随后粉碎成粉末，制成干膏粉； (5) 取所述质量份枣花蜜、油菜花粉与步骤(2)得到的混合物一，步骤(4)得到的干膏粉
【文档编号】A23K10/30GK105995249SQ201610626332
【公开日】2016年10月12日
【申请日】2016年8月2日
【发明人】燕磊, 吕明斌, 黄河
【申请人】山东新希望六和集团有限公司