专利名称：葡萄柚种子提取物在制备抗sars病毒药物中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及药物领域，具体地是葡萄柚种子提取物(GSE)在制备抗SARS病毒药物中的应用。
背景技术：
自正式确定非典型肺炎的病原体为SARS冠状病毒以来，对于非典型肺炎及其病原体的防治和研究取得了极大进展，抗SARS冠状病毒药物和疫苗研制工作也在全力进行。SARS病毒是一种新型的冠状病毒，具有较强的传染性和变异性。目前SARS还缺乏特效的治疗，目前的治疗包括抗病毒治疗如利巴韦林，血清疗法等，用激素降低免疫系统对肺的损伤，用抗生素治疗潜在的细菌感染，辨证的中西医结合治疗；呼吸机的应用以及应激和ARDS的对症支持治疗等。抗SARS药物研制目前尚处于初期阶段。
葡萄柚种子提取物(Grapefruit Seed Extract，简称GSE)是一种高效无毒的广谱抗菌剂。二十世纪50年代，Jacob Harich发现了GSE。通过半个世纪的研究，人们发现GSE具有神奇的功效，(如1991年下半年，Allan Sachs博士听说葡萄柚种子提取物(GSE)是一种新开发的抗微生物制剂，后来他长期坚持研究GSE的临床应用，创建了至少25种含有GSE的药物处方，至今仍然在被全世界的临床医生们使用。1997年，他编写出版了一本GSE专著《葡萄柚种子提取物权威指南》。在这本书中，他用自己创立的标准对GSE进行分析论证，明确支持GSE是一种十分理想的极具优良的抗微生物制剂，全面符合十项专门指标。
1.广谱抗菌对40余种革兰氏阴性菌，30余种革兰氏阳性菌，以及真菌与酵母菌，病毒(包括甲型单纯性疱疹病毒、A2型流感病毒、艾滋病病毒等)，寄生虫(包括溶组织阿米巴和肠贾第虫等)。Allan Sachs博士称GSE是力克各种病原体的“瑞士军刀”。
2.强力高效 对上述各种病原体的最低抑菌浓度仅在2ppm～200ppm，与同类其他抗菌化合物比较，GSE的抗菌效力约高10至100倍。
3.安全无毒 1995年7月，美国加州贝克利Northview Pacific实验室发表了一份关于GSE急性毒性毒理学的研究报告，认为每公斤体重摄入量超过5000mg是安全的。也就是说，一个体重60公斤的人每日服下300,000mgGSE，在理论上说是安全的，而这是一个异常巨大的剂量。这项急性毒性试验后来被许多实验室重复做过，而每次重复的结果都是相同的，即GSE的半致死剂量(LD50)均大于5000mg/Kg(体重)。
而慢性经口毒性试验(对实验动物持续喂食，然后对其后代进行24个月的观察研究)结果表明，GSE的LD50为2500mg/Kg(田鼠和豚鼠)。根据化学物质毒性分级标准，GSE属实际无毒类)。
4.对有益微生物无副作用。
5.已被深入研究过。
6.来源于自然资源。
7.无刺激或过敏反应。
8.具有可生物降解性能。
9.与其他天然药物可兼容。
发明内容
本发明的目的在于提供一种葡萄柚种子提取物在制备抗SARS病毒药物中的应用。
本发明制备的抗SARS病毒药物含有中药活性成分葡萄柚种子提取物，其药物毒性小，稳定性好，耐药性强。
本发明用葡萄柚种子提取物制备的抗SARS病毒药物可采用常规的制备工艺，制备成不同的药物剂型供患者使用，如制成口服液、胶囊、粉剂、针剂等。
本发明用葡萄柚种子提取物制备的抗SARS病毒药物的抗病毒作用分述如下1、药物对细胞的保护作用以不同浓度药物加到长满单层Vero-E6细胞的96孔板中，培养2h后弃药液，接种100TCID50的SARS-CoV病毒液，37℃吸附5％CO2培养48h，观察药物处理后的细胞对SARS-CoV感染的影响。同时做单用病毒感染时的病毒对照、正常细胞对照。用MTS/PMS法测定RD-09对Vero-E6的细胞毒性，结果如表1结果显示在100ug/ml的浓度范围内RD-09对Vero-E6细胞没有毒性。
表1MTS/PMS法测定RD-09对Vero-E6的细胞毒性
2、药物对SARS-CoV增殖的影响接种100TCID50的SARS-CoV于长满单层Vero-E6细胞的96孔板上，37℃吸附2h，换上含相应浓度药物的维持液，继续培养48h，观察药物对SARS-CoV增殖的影响。结果显示RD-09对SARS-CoV的半抑制剂量为2～4ug/ml。
3、药物对SARS-CoV的直接杀伤作用含不同浓度药物的维持液与等量病毒液后，置37℃作用2h后，将孵育液加入长满单层Vero-E6细胞的96孔板中，0.1ml/孔，37℃吸附1h，换上含相应浓度药物的维持液，继续培养48h，观察药物对SARS-CoV的直接杀伤作用。结果显示不同浓度药物与病毒等量混合2h后，在4μg/ml时对细胞感染SARS-CoV皆有全抑制作用。
4、药物对SARS-CoV感染细胞的综合作用药物和病毒等量混合后直接加到长满单层Vero-E6细胞的96孔板上37℃吸附2h，弃混合液加维持液，继续培养48h，观察药物对SARS-CoV感染细胞的综合作用。结果显示RD-09对SARS-CoV感染细胞的综合作用效果为4ug/ml时，对SARS-CoV病毒有100％的抑制效果。
5、药物对病毒感染细胞的预防作用不同浓度药物预先与细胞作用2h后，接种病毒，RD-09在4μg/mL时可以100％抑制SARS病毒感染的Vero-E6细胞病变。
6、药物对病毒感染细胞的治疗作用药物对细胞感染SARS-CoV有全部抑制作用，表2是药物9不同方式作用SARS-CoV感染的Vero-E6细胞情况。表2
SARS-CoV对照组++++ 细胞对照组----注“+”为CPE等级，0～25％为+、25％～50％为++、50％～75％为+++、75％～100％为++++本发明与现有技术相比具有如下优点1、在安全剂量范围内，对SARS病毒的抑制率高。
2、有较强的预防SARS病毒感染的作用。
3、愈后快，可以减轻感染病人的综合症状。
图1是Vero-E6正常细胞2是Vero-E6细胞被SARS-CoV感染后病变3是RD-09药物对被SARS-CoV感染的Vero-E6细胞的保护效果图具体实施方式
如图1所示，正常Vero-E6细胞贴壁生长，具有贴壁细胞的一般特性，细胞之间空隙小。
如图2所示，Vero-E6细胞被SARS-CoV感染后，细胞从壁上脱落，细胞碎裂。
如图3所示，被SARS-CoV感染Vero-E6细胞加入药物处理后，仅有部分细胞从壁上脱落，大部分细胞的形态与正常细胞相同，可见药物作用后SARS-CoV感染Vero-E6细胞病变减轻。
实施例1对人进行的临床试验，试验组用本发明制备的药物注射液，药物注射液的用法与用量一次50mg，一日一次，缓缓静脉滴注。对照组注射生理盐水，其病情状况如表3所示，治愈时间如表4所示
表3病情状况
该表结果显示试验组(即使用RD-09治疗组)的病人比对照组的病人在病情上有较大的减轻。
表4治愈时间
注()号内的数字为死亡人数。该表结果显示试验组(即使用RD-09治疗组)的病人在治疗时间比对照组有较大的缩短。
权利要求
1.一种葡萄柚种子提取物在制备抗SARS病毒药物中的应用，是以葡萄柚种子提取物为有效成分制备抗SARS病毒药物。
2.根据权利要求1所述的葡萄柚种子提取物在制备抗SARS病毒药物中的应用，制备的药物剂型是口服液、胶囊、粉剂、或针剂。
全文摘要
一种葡萄柚种子提取物在制备抗SARS病毒药物中的应用，是以葡萄柚种子提取物为有效成分制备抗SARS病毒药物，在安全剂量范围内，对SARS病毒的抑制率高；强的预防SARS病毒感染的作用；愈后快，可以减轻感染病人的综合症状；药物毒性小，稳定性好，耐药性强。
文档编号A61P31/00GK1452978SQ03126919
公开日2003年11月5日 申请日期2003年6月19日 优先权日2003年6月19日
发明者王一飞, 陶光复, 张美英 申请人:广州暨南生物医药研究开发基地有限公司