血流改善食品的制作方法

专利名称：血流改善食品的制作方法
技术领域：
本发明涉及以原花色素(proanthocyanidin)为有效成分的血液流动性改善组合物。该组合物是用于改善血液流动性的食品组合物或医药品组合物。此外，本发明还涉及含原花色素和抗坏血酸或其衍生物的饮料组合物。该饮料是一种有效的具有改善血液流动性作用的饮料。
背景技术：
近年，由于饮食生活的欧美化、运动不足、压力过大等生活环境的变化，动脉硬化、脑血栓等与血液和循环系统疾病以及高血脂、糖尿病等对血液循环有不良影响的疾病逐渐增加。由于这些疾病会导致微血管及毛细血管血流质量下降，因此被指存在给生物体带来各种不良影响的危险性。而且，血流状况亦被指与皮肤瘙痒、疲劳、高血压等相关。
通常，血液循环，即血流状况会因受到(1)高血脂、高血糖导致血液流动性恶化，(2)血细胞流动性，即红细胞或白细胞柔软性降低，或粘性增大，(3)血小板凝集能增高等的影响而降低。尤其是红细胞、白细胞等血细胞，占血液体积的约40％，会给微细血管中的血液流动带来特别影响。如果长期持续这种低质血流状态，就会引发例如血管失去柔软性，红细胞柔软性恶化，微血管中的红细胞或白细胞易凝集，易形成血栓等现象，成为上述循环系统疾病的发病的原因之一。严重时甚至会导致血流停止，发生周围组织坏死。因此，人们越发重视“生物体内的血液易流动性”在保持健康上的重要性。
迄今为止，人们已发现很多能改善血流的食品及食品成分。例如，在生活中的食物材料中，可举出黑醋、梅干等。而在日本特开平7-138168号公报中，也揭示了鱼类胆汁的极性溶剂提取物有改善血液流动性的效果。另外，在日本特开2002-97143号公报中，揭示了葡糖胺盐或葡糖胺衍生物有预防血栓以及改善血液流动性的效果。但是，血流改善却几乎主要是通过与血液流动性相关的作用实现，却未揭示添加具有在改善血流的同时，还具有改善血管强度、弹性，也即血管保护效果的成分的食品或医药组合物。另外，在日本特开2000-135071号公报中，揭示了在血管强化作用方面，葡萄榨汁粕提取物具有优于含多酚的提取物的效果。但对血液流动性却未做任何研究。
因此，人们需要真正意义上的具有改善生物体内血流，即改善血液流动性，且具有优良的血管保护效果的血液流动性改善组合物。

发明内容
为此，发明人等在对改善体内血液流动性的组合物进行深入研究后，发现以原花色素为有效成分的组合物具有良好的血液流动性改善作用和血管保护作用。发明人认为，这种血液流动性的改善是由于红细胞、白细胞等血细胞的流动性得到改善导致的。
即，本发明涉及以原花色素为有效成分的血液流动性改善组合物。
在优选实施方式中，上述组合物为改善血细胞流动性的组合物。
在优选实施方式中，上述组合物还含有抗坏血酸或其衍生物。
在优选实施方式中，上述原花色素的20重量％以上为寡聚原花色素(OPColigomeric proanthocyanidin)。
本发明还涉及含原花色素、抗坏血酸或其衍生物的饮料。
在优选实施方式中，以重量比计，上述原花色素和抗坏血酸或其衍生物的含量比为1∶0.1～500。
在优选实施方式中，饮料中的上述原花色素浓度为1mg/L以上。
在优选实施方式中，所述饮料为茶饮料。
此外，在优选实施方式中，所述饮料具有血液流动性改善作用。


图1表示分别摄取含松树皮提取物的饮料和不含松树皮提取物的饮料时，冷水负荷后即刻和冷水负荷3分钟后的指尖温度(受验人1)。
图2表示分别摄取含松树皮提取物的饮料和不含松树皮提取物的饮料时，冷水负荷后即刻和冷水负荷3分钟后的指尖温度(受验人2)。
具体实施例方式
下面，首先对用于本发明的血液流动性改善组合物成分进行说明，再对含本发明的血液流动性改善组合物及原花色素和抗坏血酸或其衍生物的饮料进行说明。另外，对本领域技术人员而言，他们明白下述说明的组成并不对本发明构成限定，可在本发明主旨的范围内作出变形。
原花色素及其材料在本发明中，原花色素是指以黄烷-3-醇及/或黄烷-3，4-二醇为结构单元的聚合度2以上的缩聚物构成的化合物族。
已知原花色素有各种活性，代表性的是抗氧化作用。
在本说明书中，原花色素中，以黄烷-3-醇和/或黄烷-3，4-二醇为结构单元的聚合度2～4的缩聚物，被称为OPC(寡聚原花色素，oligomeric proanthocyanidin)。OPC是一种多酚，是由植物生产的强抗氧化物，人体内不能生成。
OPC集中存在于植物的叶、树皮、果皮或种子的部分。具体而言，含于松树、橡树、山桃等的树皮，葡萄、越桔、覆盆子、酸果蔓、草莓、鳄梨、伪刺槐、苔桃的果实或种子，大麦、小麦、大豆、黑大豆、可可、小豆、橡子的壳、花生的薄皮、银杏叶等中。且已知西非可拉果、秘鲁拉塔尼亚芭蕉的根、日本的绿茶中也含有OPC。
因此，原花色素可使用含大量上述OPC的树皮、果实或种子的粉碎物或其提取物等食品原料。特别优选使用松树皮提取物。由于松树皮的原花色素中含丰富的OPC，因此本发明中可用作原花色素的优选原料。
原花色素的调制下面，以含丰富OPC的松树皮提取物为例，说明原花色素调制方法。
松树皮提取物优选使用法国海岸松(Pinus Martima)、落叶松、黑松、红松、五须松、姬小松、高丽松、偃松、琉球松、美松、大王松、白松、加拿大魁北克地区的Anedda等属于松目的植物的树皮提取物。其中优选为法国海岸松(Pinus Martima)的树皮提取物。
法国海岸松是指生长在法国南部大西洋沿岸部分地区的海洋性松树。法国海岸松的树皮中含有原花色素、有机酸、及其它生理活性成分等，其中的主要成分原花色素中具有除去活性氧的强抗氧化作用。
松树皮提取物是用水或有机溶剂提取上述松树皮而得。用水提取时，可使用温水或热水。用于提取的有机溶剂可使用食品或药剂制造中可接受的有机溶剂，例如甲醇、乙醇、1-丙醇、2-丙醇、1-丁醇、2-丁醇、丙酮、己烷、环己烷、丙二醇、含水乙醇、含水丙二醇、甲乙酮、甘油、乙酸甲酯、乙酸乙酯、二乙醚、二氯甲烷、食用油脂、1，1，1，2-四氟乙烷和1，1，2-三氟乙烯。这些水和有机溶剂可单独使用，也可组合使用。特别优选使用热水、含水乙醇及含水丙二醇。
对从松树皮提取原花色素的方法无特别限定，例如，可使用加热提取法、超临界流体提取法等。
超临界流体提取法是指使用超过物质气液临界点(临界温度、临界压力)状态的流体，即超临界流体进行提取的方法。超临界流体可使用二氧化碳、乙烯、丙烷、一氧化氮(笑气)等，优选使用二氧化碳。
超临界流体提取法，包括用超临界流体提取目的成分的提取工序和分离目的成分和超临界流体的分离工序。分离工序可采用根据压力变化提取分离、根据温度变化提取分离、或使用吸附剂-吸收剂的提取分离中的任一种。
此外，还可利用夹带剂添加法进行超临界流体提取。该方法是向超临界流体中添加2～20W/V％左右的例如乙醇、丙醇、正己烷、丙酮、甲苯、其它脂肪族低级醇类、脂肪烃类、芳香烃类、或酮类，用所得提取流体进行超临界流体提取，这是极大提高OPC、儿茶酸类(后述)等提取目的物在提取流体中的溶解度或增强分离选择性的得到松树皮提取物的高效方法。
由于超临界流体提取法能在较低温度下操作，所以具有能适用于高温下会变质、分解的物质；提取流体无残留；溶剂可反复利用，可省略脱溶剂工序等，工艺简单等优点。
而从松树皮中进行提取的方法，除上述方法之外，还可利用液体二氧化碳间歇法、液体二氧化碳回流法、超临界二氧化碳回流法等进行。
从松树皮提取可组合多种提取方法。通过组合多种提取方法，可得到各种组成的松树皮提取物。
在本发明的血液流动性改善组合物中，用作原花色素的松树皮提取物具体是通过下述方法调制的，但该方法仅是举例，而不受限于该方法。
将1kg法国海岸松树皮放入3L氯化钠饱和溶液中，在100℃下提取30分钟，得到提取液(提取工序)。然后，过滤提取液，将所得不溶物用500mL氯化钠饱和溶液清洗，得到清洗液(清洗工序)。将该提取液和清洗液合并，得到松树皮粗提取液。
然后向该粗提取液中添加250mL乙酸乙酯并分液，进行5次回收乙酸乙酯的工序。合并回收的乙酸乙酯溶液，直接添加到无水硫酸钠200g中脱水。然后过滤该乙酸乙酯溶液，减压浓缩滤液至原来的1/5。将浓缩乙酸乙酯溶液注入2L氯仿，过滤搅拌，回收所得沉淀。然后将该沉淀溶于100mL乙酸乙酯，反复进行再添加到1L氯仿中沉淀的操作两次的清洗工序。通过该方法，能得到例如含20重量％以上的2～4聚体OPC，且含5重量％以上的儿茶酸类的约5g松树皮提取物。
而考虑到用于食品、医药品时的安全性，本发明优选使用乙醇或水等，更优选在加热下使用乙醇或水等从松树皮中提取原花色素，用DIAION HP-20、Sephadex-LH20、壳质等吸附性树脂等或超过滤膜，使用原花色素含量高的松树皮提取物。
本发明所用的原花色素在本发明的血液流动性改善的组合物中，所用代表性原花色素使用的是来自上述原料植物中的提取物。特别是在松树皮提取物中含有很多的原花色素，即以黄烷-3-醇及/或黄烷-3，4-二醇为结构单元的聚合度2以上的缩聚物。其中，优选使用含有较多低聚合度的缩聚物的松树皮提取物。低聚合度缩聚物中，优选为聚合度2～30的缩聚物(2～30聚体)，更优选为聚合度2～10的缩聚物(2～10聚体)，进一步优选为聚合度2～4的缩聚体(2～4聚体；即OPC)。
本发明优选使用OPC含量20重量％以上、更优选为30重量％以上的原花色素。这类原花色素可使用松树皮提取物。
使用OPC含量高的原花色素与使用聚合度高的原花色素(OPC含量少)的情况相比，能达到更好的血流改善效果。
植物(树皮)提取物中的原花色素含量无特别限定，如果植物(树皮)提取物中的原花色素浓度含量高，则原花色素自身的生理活性降低，因此，提取物中的原花色素含量优选小于80重量％、更优选小于75重量％、进一步优选小于55重量％。
如上所述，由于OPC为抗氧化物质，因此还具有降低癌症、心脏病等成人疾病危险率，改善关节炎、特应性皮炎、花粉症等过敏体质，阻碍胶原氧化及分解等效果。
此外，OPC还有极大提高体内维生素C的吸收及其在体内的持久性，并同时提高体内抗氧化能力的作用。
且已知，OPC除抗氧化作用外，还具有恢复血管强度和弹性；降低血中的胆甾醇及LDL；降低高血压病的血压；防止胆甾醇附着；再生由活性氧分解而得的维生素E；作为维生素E的增强剂的效果等。
特别是不仅具有可通过抗氧化作用及降低血中的胆甾醇、降低高血压病的血压、恢复血管的弹性和防止胆甾醇附着等效果保护血管，还能同时改善血液流动性，并能改善生物体内的血流。
已知，特别是当红细胞或白细胞的流动性降低时，则尤其是微细血管中的血流动性降低，该流动性是因氧化应激、发炎等导致的血细胞粘着性增加、血压变化、血管狭窄等化学或物理刺激而降低。已知，当红细胞受到化学或物理刺激，即当这些外部信号传到红细胞内部，会发生生化变化，从而导致红细胞流动性降低。由于OPC如上所述，具有抗氧化性和增强血管强度和柔软性等的作用，所以能减弱对红细胞、白细胞等的化学或物理刺激，因此可维持血细胞的流动性，改善血流。另外，如果摄取本发明的血液流动性改善组合物，对血小板凝集能及血小板数，胆甾醇、中性脂肪等血浆成分，红细胞、白细胞等血细胞数等无影响，而改善血细胞的流动性，从而改善血液流动性。
抗坏血酸或其衍生物此外，尤其是为更有效地使OPC发挥更好的效果，本发明的原花色素还可添加抗坏血酸或其衍生物。本发明组合物用作饮料时，因原花色素与抗坏血酸或其衍生物共存，能进一步提高原花色素的效果。
本发明的血液流动性改善组合物中所含抗坏血酸或其衍生物可使用用作食品添加剂的抗坏血酸或其衍生物，例如，可使用抗坏血酸配糖物、抗坏血酸钠、抗坏血酸镁等。富含抗坏血酸的柠檬、柑橘、金虎尾等果实类天然材料，或椰菜、姬甘蓝、青椒、冬菜、菜花等蔬菜类天然材料等天然材料也能用作本发明中的抗坏血酸。
在抗坏血酸或其衍生物与原花色素(其中包括OPC)同时摄取时，将提高抗坏血酸的吸收率和生理活性的持续性。在本发明中，为达到保护血管、特别是增强血管柔软性和强度、降低血液中的胆甾醇的目的，也可添加抗坏血酸或其衍生物。尤其是抗坏血酸及其衍生物还具有不仅对血管，而且对所有组织结构蛋白的胶原合成的促进、减弱应激(特别是氧化应激)、抗血栓、提高免疫力等作用，所以不仅有保护血管、改善血液流动性的效果，而且对活体内所有组织的改善均有效果。
而在水溶液中配有原花色素时，例如，饮料中含原花色素时，配合抗坏血酸或其衍生物可有效维持原花色素的生理活性。且在饮料中配合抗坏血酸及其衍生物有望达到赋予饮料味道、香味、饮料着色、稳定保持饮料成分等效果。
抗坏血酸或其衍生物的配合量无特别限制，以原花色素为基准，原花色素和抗坏血酸或其衍生物在本发明的血液流动性改善组合物中的配比以重量比计，优选为1∶0.1～500，更优选为1∶0.2～200，进一步优选为1∶0.2～150。
儿茶酸类根据需要，本发明的血液流动性改善组合物还可含有儿茶酸类。儿茶酸类是聚羟基黄烷-3-醇的总称。儿茶酸类已知有(+)-儿茶素、(-)-表儿茶素、(+)-没食子儿茶精、(-)-表没食子儿茶精、表没食子儿茶酸棓酸酯、表儿茶酸棓酸酯等。除称为狭义儿茶素的(+)-儿茶素之外，由天然物中还离析出没食子儿茶酚、阿夫儿茶精及(+)-儿茶素或没食子儿茶精等3-没食子酰基衍生物。已知，儿茶酸类具有抑制癌症发生、预防动脉硬化、抑制脂肪代谢异常、抑制血压上升、抑制血小板凝集等作用，并具有抗过敏、抗病毒、抗菌、预防龋齿、预防口臭、使肠内菌群正常的效果、以及消除活性氧、自由基等的作用、抗氧化作用等。且已知儿茶酸类还具有抑制血糖升高的抗糖尿病效果。且单就儿茶酸类而言，水溶性差、生理活性低，但在OPC共存下，不仅能增加水溶性，还具有活性，通过同时摄取OPC，而有效发生作用。
本发明的组合物因含这类儿茶酸类而能发挥更好的血流改善效果。
在来自原料植物的原花色素中，特别是植物提取物中，不仅含OPC，大多数情况下还同时含有儿茶酸类。在上述原料植物提取物中，儿茶酸类含量油选为5重量％以上，更优选为10重量％以上。更优选调制为在含20重量％以上OPC的原料植物提取物中，儿茶酸类含量为5重量％以上。例如，当松树皮提取物的儿茶酸类含量小于5重量％时，可添加儿茶酸类，使其含量达到5重量％以上。优选使用儿茶酸类含量5重量％以上，OPC含量20重量％以上的松树皮提取物。
其它成分本发明的血液流动性改善组合物，还可根据需要添加已知的改善血流的其它成分。这类成分可举出例如，黑醋、梅肉或其提取物，洋葱、大蒜等中所含的含硫有机化合物或其提取物，荞麦，壳质-壳聚糖或其衍生物，葡糖胺盐及其衍生物，橙皮素、槲皮素、黄体素或其衍生物，维生素B族、维生素E、维生素K等维生素类，水溶性食物纤维等，但也不限于此。
特别是为增强抑制血糖、血脂、及高血压，抗血栓，降低血中的胆甾醇等作用的目的，适于使用上述含硫有机化合物、维生素K、维生素E、以及壳质-壳聚糖及其衍生物。为增强血管保护作用及抗氧化作用，适于使用橙皮素、槲皮素、黄体素或其衍生物。
此外，本发明的血液流动性改善组合物还可根据目的添加各种添加剂，例如，赋形剂、增量剂、结合剂、增稠剂、乳化剂、润滑剂、湿润剂、悬浊剂、着色剂、香料、食品添加剂等。
还能添加例如，蜂王浆、维生素、蛋白质、蛋壳钙等钙，卵磷脂、小球藻末、当归末、长果种黄麻末等营养成分。也可加入千斤藤末、末茶粉、柠檬粉、蜂蜜、还原麦芽糖、乳糖、糖液、调味料等调整味道。
血液流动性改善组合物本发明的血液流动性改善组合物含有原花色素为有效成分，根据需要，还可含有抗坏血酸或其衍生物、儿茶酸类、及其它成分。原花色素含量无特别限制，在组合物中，优选为0.0001重量％～50重量％、更优选为0.005重量％～20重量％。且与原花色素同时摄取的抗坏血酸或其衍生物量优选为0.03g～1g。这类组合物可用于食品或医药品。
本发明的血液流动性改善组合物可对各成分实施本领域技术人员易于实现的加工，调制成各种形态。例如，向含原花色素的松树皮提取物中加入赋形剂等，成型为片剂或丸剂等形状，或不经成型而形成散剂形态，或其它形态。其它形态可举出硬胶囊、软胶囊等胶囊剂，粉末状，颗粒状，茶袋状，饴状，液体，糊状等形态。其中优选为液体(如饮料)。
本发明的血液流动性改善组合物的摄取方法无特别限定。根据本发明的血液流动性改善组合物的形状或习惯，既可直接食用，也可在溶于水、热饮、牛奶等中饮用，还可饮用成分浸出物。
含原花色素和抗坏血酸或其衍生物的饮料本发明，特别是作为进一步提高原花色素的血流改善作用的组合物，还优选在血液流动性改善组合物中加入对血流改善很重要的补充水分的要素的原花色素配合饮料为好。更优选为含抗坏血酸或其衍生物的原花色素配合饮料。此时的水分补给量优选为100mL以上。
上述饮料中的原花色素含量无特别限制，在饮料中通常为1mg/L以上、优选为1mg/L～20g/L、更优选为2mg/L～10g/L。在还含有抗坏血酸或其衍生物时，所含原花色素和抗坏血酸或其衍生物的重量比为1∶0.1～500、优选为1∶0.2～200、更优选为1∶0.2～150。
上述饮料中，原花色素优选使用松树皮提取物。松树皮提取物对水及乙醇等极性溶剂的溶解性高，即使原花色素含量高，涩味也很淡，故可广泛适用于饮料。
饮料中的原花色素在高于10mg/L的浓度时，显出特有的香味，但浓度在该值以下时，可控制清凉饮料也有可能采用的味道，无需遮味。优选配合浓度为10mg/L以下，更优选为5mg/L以下。
而当原花色素以高浓度配在饮料中时，有效的且用天然材料遮掩其独特香味的方法中，可确认的有效方法为添加以绿茶为代表的松叶茶、乌龙茶、红茶、麦茶、其它混合茶等茶类。在将原花色素以2～200mg/L、优选为5～200mg/L、更优选为30～200mg/L的比例与茶类配合时，配合后，不会减弱茶类的香味。尤其是由于日本茶中含较多儿茶酸类，故能进一步增强血液流动性改善效果。且对于100mL以上的饮用型饮料，在配合香料或柠檬果汁等天然果汁等遮掩效果强的物质时，能同上所述地以高浓度配合原花色素。
这类饮料优选为例如，果汁饮料、碳酸饮料、运动饮料等酸性饮料，茶饮料、咖啡饮料、可可饮料、汤饮料等低酸性饮料，可用作健康饮料。其中更优选为茶饮料。茶饮料如上所述含有儿茶酸类，通过加入原花色素或含原花色素的植物(树皮)提取物，能达到当今的茶饮料中尚无的血液流动性改善效果。该茶饮料的上述效果比上述其它饮料的效果好，这类茶饮料是一种有益的健康饮料。
本发明对含血液流动性改善组合物及原花色素和抗坏血酸或其衍生物的饮料(饮料组合物)无特别限定，为得到血液流动性改善效果，每次的原花色素摄取量为0.001～0.2g，优选为0.002g～0.15g，更优选为0.002g～0.08g。该摄取量能以与现有血液流动性改善组合物的摄取量相比更少的量达到伴随优良的血细胞，即红细胞及白细胞的流动性改善而改善血液流动性的效果。而本发明组合物中的原花色素为松树皮提取物时，每日摄取量以松树皮提取物中的原花色素计，为0.001g～0.05g时，能达到上述效果，优选为0.001g～0.04g，更优选为0.001g～0.025g，进一步优选为0.008g～0.025g。这相当于约0.002g～0.2g、优选为0.01g～0.15g、更优选为0.04g～0.15g松树皮。在以饮料形式摄取时，每次摄取量以松树皮计，含量为0.002g～0.2g，优选为0.01～0.15g，更优选为0.04g～0.15g。在含原花色素的植物提取物中，使用水、热水、乙醇等提取的松树皮提取物与其它植物提取物相比，尤其是血细胞流动性改善效果及血液流动性改善效果也是特别高，可优选使用，尽管其机理尚不明。
本发明的血液流动性改善组合物，不仅改善血液流动性及血细胞流动性，还改善血管的柔软性及强度等。因此，可达到改善活体内的血流、特别是末梢血流的效果。并通过改善血流而改善身体整体的健康状态。
实施例下面举出实施例说明本发明，当然，本发明不受限于实施例。
实施例1食品1的制造制造含40重量％原花色素(20重量％OPC)，且含下表1所述量(重量份)的含13重量％儿茶酚的松树皮的乙醇提取物(商品名黄烷二烯醇，株式会社东洋新药)、抗坏血酸(丸善制药株式会社)、结晶纤维素、蔗糖酯、二氧化硅及蛋壳钙的片剂(每片约200mg)(食品1)。
实施例2食品2的制造制造含下表1所述重量比的与实施例1相同的松树皮乙醇提取物(商品名黄烷二烯醇，株式会社东洋新药)、结晶纤维素、蔗糖酯、二氧化硅及蛋壳钙的片剂(每片约200mg)(食品2)。
实施例3食品3的制造使用Sephadex LH20，在下述条件下，使用与实施例1相同的松树皮乙醇提取物(商品名黄烷二烯醇，株式会社东洋新药)精制原花色素，调制含原花色素95.9％重量的松树皮提取物。用该松树皮提取物和结晶纤维素、蔗糖酯、二氧化硅及蛋壳钙制造含下表1所述重量比的片剂(每片约200mg)(食品3)。
原花色素精制首先，将水膨润的MCI凝胶(三菱化学株式会社制)100mL填充在30×300mm柱中，用50mL精制水清洗。用8mL精制水溶解400mg上述松树皮提取物，使该溶液流过上述凝胶柱，在吸附原花色素后，用0～30％(v/v)乙醇-水混合溶剂呈梯度溶出，每次取10mL。在取用的同时，利用硅胶色谱法(TLC)，以二聚体的OPC标准品(二聚体原花色素B-2(Rf值0.6)为指标，检测每次的OPC。TLC的条件如下所述TLC硅胶板(Merck & CO.，Inc.制)展开溶剂苯/甲酸乙酯/甲酸(2/7/1)检测试剂硫酸和茴香醛硫酸样品量各10μL在由TLC检测出OPC时刻立即停止溶离，然后将1200mL乙醇通入凝胶柱，使吸附的原花色素溶离。将该溶离液与检测出OPC的部分一起冻结干燥，得到156g干燥粉末。反复进行该操作，回收定量的干燥粉末。此外，为检知该干燥粉末是否存在儿茶素，以儿茶素为标准品(Rf值0.8)为指标，以同上所述的条件进行TLC，结果未检测出儿茶素。
以原花色素B-2为标准品，根据R.B.Broadhurst等人的方法(J.Sci.Fd.Agric.，1978，29，788～794项)测定该干燥粉的原花色素含量，结果为95.9重量％。
实施例4食品4的制造以4∶6的比例将与实施例1相同的松树皮提取物和实施例3的食品3中所用的松树皮提取物混合(原花色素含量73.1重量％，儿茶素含量5.2重量％)，制造含下表1所述重量比的结晶纤维素、蔗糖酯、二氧化硅及蛋壳钙的片剂(每片约200mg)(食品4)。
实施例5食品5的制造制造含下表1所述重量比的葡萄籽提取物(含38重量％原花色素，2重量％儿茶素，KIKKOMAN株式会社)、结晶纤维素、蔗糖酯、二氧化硅及蛋壳钙的片剂(每片约200mg)(食品5)。
比较例1食品6的制造制造含下表1所述重量比的抗坏血酸(丸善制药株式会社)、结晶纤维素、蔗糖酯、二氧化硅及蛋壳钙的片剂(每片约200mg)(食品6)。
表1

单位重量实施例6～10、比较例2人血的血流通过时间测定和对血小板凝集能及血液成份的影响如下所述研究进食上述食品1～6前后人血的血流通过时间和对血小板凝集能及血液成份的影响。
人血的血流通过时间测定以22～63岁的健康男女36名(男性18名，女性18名)为受验人，除性别均等之外，随机分成6组。让各受验人分别以1日1片的剂量每天进食食品1～6(食品1～4相当于松树皮乙醇提取物40mg)两周。采集开始进食食品1～6之前、开始进食1周后及2周的血液。采血时为安座状态，用真空采血管(Terumo(株)制用肝素钠处理)从肘正中皮静脉采血。且各受验人采血当日空腹。所得血液(试验血液)立即用于测定血流通过时间。
使用MC-FAN(日立原町电子工业制)测定血流通过时间。血液通过的血管模型的微细加工流路使用配有形成流路深度4.5μm、深度中央的流路宽度7μm、流路长度30μm的微细沟的8736根并列的微通道阵列的单晶硅基板(Bloody6-7；日立原町电子工业制)。在20cm水柱差下，注入100μL血液，测定所有血液的通过时间，作为血流通过时间，同时，用显微镜-摄录机系统进行摄影记录血液流动状态。测定值均采用3次测量平均值。以100μL生理盐水通过所需时间12秒补正所得血流通过时间。血流通过时间测定结果示于表2。表中值表示各组流速平均值±标准偏差。
血小板凝集能和血液成份的影响)如下进行血小板凝集能的评价。首先，使用两根Venoject管(Terumo株式会社制)从上述受验人体内各采取4.5mL进食1～6前的血液。其中一根中的血液以1000rpm离心分离，用作不引起血小板凝集的上清，将其回收，向两根试管中各注入100μL，另一根中的血液以3000rpm离心分离，使血小板凝集，回收该上清，每根试管注入100μL，将其用作空白试样。将两根含不引起血小板凝集的上清的试管和空白试样安装至MCM Hematraser-313(MC Medical株式会社)，向不引起血小板凝集的上清中分别添加30μM的ADP和10μM的ADP各22μL，测定血小板凝集率。将各组数值中的最高值作为最大血小板凝集率，算出其平均值，在添加10μM的ADP时，为0.38％，而添加30μM的ADP时，为0.74％。在各进食两周后，进行同上的操作，测定血液的血小板凝集率。
以进食前的最大血小板凝集率的平均值为1，由所得进食各食品两周后的血小板凝集率与该平均值的相对值，求出各ADP浓度，并求各平均值。结果示于表3。
为研究血液成份的影响，分别使用Incenpack-S(极东制药株式会社)及Incenpack-E(极东制药株式会社)从上述受验人身体采集进食前及进食两周后的血液(分别采取9mL和2mL)。将该血液送日本久留米临床检测中心检测血液中的蛋白质、脂质、红细胞数、白细胞数、血小板数、血细胞比容和糖质。算出进食后与进食前的各相对值，求平均值。结果示于表3。
表2

平均值±标准偏差(单位秒)表3

平均值±标准偏差由表2结果可知，通过摄取由本发明的组合物制造的食品1～5能有意缩短血流通过时间，改善血液流动性。且发现，进食前血流通过时间越慢的人，血液的流动性改善的效果越大。用MC-FAN观察进食各食品前和后的血流状态，任一情况下，肉眼均为发现微通道阵列中的堵塞。而比较食品2和5后可知，即使含等量原花色素的植物提取物，松树皮提取物的血液流动性改善效果也比葡萄籽提取物高。而比较食品2～4后可知，在植物提取物中，原花色素在植物提取物中的含量小于75重量％时的活性高。因此，含原花色素和抗坏血酸的食品1对血液流动性改善的效果最好。
根据表3结果可知，在进食食品1～5前后的与血液流动性相关的血小板凝集；血小板数；蛋白质、脂质等血浆成分；红细胞数、白细胞数等血细胞数；以及单位体积血液的血细胞容积比的血细胞比容值与进食前相比无变化。由此可知，食品1～5的血液流动性改善效果不是由于血浆中的成分及血小板的影响或因红细胞及白细胞的数目变化，而是通过改善红细胞及白细胞的流动性改善血液流动性。
综上可知，含原花色素的食品具有伴随血细胞流动性的改善的血液流动性改善效果，在植物提取物中，松树皮提取物用作原花色素具有优良的上述效果，而原花色素含量小于80重量％的松树皮提取物的效果特别好。
实施例11～15，比较例3血流改善效果的评价血流改善效果评价如下所述。首先测定上述各组6名受验人进食前的血流量。然后，让各受验人每日1片每日进食上述食品1～6两周。进食两周后再测定血流量。使用血流计(激光血流影像装置PIM II；Sweden Permied公司)在右前腕部的皮下部位测定血流量。结果示于表4。表中值为平均值±标准偏差，数值越大，表示血流量越多。
表4

平均值±标准偏差由表4结果可知，进食1～5的组因血流量增加而使本发明的改善血液流动性的组合物达到增加组织中的血流量，即血流改善效果。尤其是松树皮提取物与含同等原花色素的葡萄籽提取物相比，血流改善效果更高，且血流通过时间的情况亦同，约含73重量％原花色素的松树皮提取物与约含96重量％原花色素的松树皮提取物相比，血流改善效果更高。且含原花色素和抗坏血酸的食品1具有最佳的血流改善效果。
实施例16～18，比较例4冷水负荷试验)为研究因摄取食品1、2、5和6对末梢血管的效果，通过冷水负荷试验，使末梢毛细血管收缩，引发暂时的血液循环障碍，测定血流恢复效果。
首先，将20到53岁的15名健康男性受验人自由组合分成3组。在进食前进行下述冷水负荷试验。然后让他们每日1片进食上述食品1、2、5和6一周，在进食1周后进行冷水负荷试验。冷水负荷试验如下所述地进行。将受验人左手浸入15℃的冷水中10秒钟，使用温度记录仪(TVS 600，日本Avionics株式会社)测定冷水负荷后和负荷10分钟后的皮肤。然后以中指指尖，中指根骨中间点及第3中手骨的中间点三点的皮肤温度平均温度为手背部的平均皮肤温度。结果示于表5。
表5

*1----平均值±标准偏差如表5所示，进食本发明组合物制得的食品1、2、5的组与进食6的组相比，表皮温度的恢复温度高。由此可知，本发明组合物具有血流改善效果，从毛细血管收缩状态恢复正常状态的速度快，血管也得到强化。尤其是含原花色素和抗坏血酸的食品1具有最佳的血流改善效果。
实施例19原花色素配合茶饮料的制造例1向12g绿茶中加入1L的55℃水提取4分钟后，通过离心分离除去茶叶，得到提取液。在该提取液中溶解松树皮提取物，使原花色素为200mg/L。再向该溶液中添加20mg/L的维生素C，然后用碳酸氢钠将pH值调至6.0，得到饮料。
比较例5除未添加松树皮提取物外，与实施例15同样，调成饮料。
实施例20原花色素配合茶饮料的血流改善效果研究为确认实施例19的原花色素配合饮料的血流改善效果，以两名怕冷女性为对象，进行如下所述的冷水负荷试验。首先，让受验人在进食饮料前3小时内禁食。然后让她们进食比较例5的饮料200mL。进食30分钟后将受验人左手在10℃的水中浸泡30秒，使用温度记录仪(TVS600，日本Avionics株式会社)测定冷水负荷后及冷水负荷3分钟后的指尖温度的上升。指尖温度测定方法与实施例16相同。然后，在次日，与进食上述比较例5的饮料情形同样地进食实施例19的原花色素配合饮料，测定指尖温度，研究末梢血流改善效果。而在进食比较例及实施例各饮料前预先用温度记录仪测定指尖温度，温度无变化。结果示于图1和图2。
由图1和2的结果可知，进食实施例19的原花色素配合饮料200mL的情况与摄取比较例5的不配合原花色素饮料的情况相比，进食后冷水负荷后的指尖温度及负荷3分钟后的指尖温度均上升。由此结果可知，通过进食原花色素配合饮料，饮料中配合有原花色素的情况下显示出血流改善效果，且可知，进食饮料与其它方式相比，达到效果更快。且数据虽未显示，但可知实施例19的原花色素配合茶饮料与等量的其它原花色素配合饮料相比，具有更高的血流改善效果。
实施例21原花色素配合茶饮料的制造例2将24g绿茶叶加入1L的80℃水中提取5分钟后，过滤除去茶叶，得到提取液。用水3倍稀释该提取液，调制茶饮料。按照下表6所述比例向该茶饮料中添加松树皮提取物(原花色素含量40重量％)和抗坏血酸，制成饮料(200mL)。
实施例22原花色素配合茶饮料的制造例3除按照下表6所述比例添加松树皮提取物及抗坏血酸之外，与实施例21同样，制成饮料。
比较例6除按照下表6所述比例添加松树皮提取物及抗坏血酸之外，与实施例21同样，制成饮料。
表6

*每200mL饮料的含量(mg)实施例23原花色素配合茶饮料的血流改善效果及血流恢复效果评价为更详细研究原花色素配合茶饮料的血流改善效果，使用与实施例11～15同样的血流计，评价仅进食一次的血流改善效果。首先，在早晨空腹时集合7名受验人，安静1小时后，测定右手食指的血流量(进食前血流量)。然后让他们进食实施例21的饮料。饮料摄取1小时后，再测定血流量(进食后血流量)。对照组则预先测定进食含原花色素的的松树皮提取物及抗坏血酸均不包含的茶饮料前和后的血流量，然后分别测定进食前和进食后的血流量。由这些测定值，根据下式，补正各试验间的误差，求取相应于对照组的血液增加率。
血流增加率(％)＝(A-B)×100


而为综合评价血流恢复效果，即血管弹性、柔软性的改善效果、血细胞及血液流动性的改善效果，将受验人右手在冰水中浸渍10秒，进行冷水负荷试验，测定冷水负荷后预定时间(冷水负荷试验后1分钟、2分钟、5分钟)的血流量(试验后血流量)，根据同上所述式求血液增加率。即使用冷水负荷后的血流量代替试验组的进食后血流量。对照组也在进食后进行冷水负荷试验，用各预定时间的冷水负荷后的血流量作为对照组进食后血流量计算。结果示于表7。表7中的值越大，表示与摄取对照例饮料时相比血流量增加得越多。
让同上的受验人分别进食实施例22和比较例6的饮料，进行同样的试验，测定血流增加率。而为避免进食各饮料的影响，各试验期间(从血流增加率测定到下次测定的期间)相隔2小时以上。结果示于表7。
表7

单位％由表7结果可知，本发明的含原花色素的松树皮提取物或含松树皮提取物和抗坏血酸的茶饮料(实施例21及22)均比含原花色素的松树皮提取物及抗坏血酸均不含的茶饮料(对照例)的血流量增加。且由于仅含抗坏血酸的茶饮料(比较例6)也未发现这样的血流量增加，因此可知，一次进食就能促进含抗坏血酸饮料的血流改善效果。且实施例的饮料(实施例21及22)与仅含抗坏血酸的饮料(比较例6)和松树皮提取物及抗坏血酸均不含的茶饮料(对照例)相比，由于冷水负荷后预定时间内的血流量增加量高，所以可知冷水负荷后血流量恢复。发明人认为，这是由于收缩血管的恢复和血液流入，即血管柔软性、弹性的提高，增强了血细胞流动性的改善效果和血液流动性的改善效果。尤其是含原花色素的松树皮提取物和抗坏血酸的饮料(实施例21)比仅含松树皮提取物的饮料(实施例22)显示出非常高的血流量增加效果和血流恢复效果，通过并用，能达到协同效果。
此外，不用茶饮料，而是使用精制水并使用含松树皮提取物和抗坏血酸的饮料进行同样试验后，进食1小时后的血流增加率为15.1％，因此可知进食的实施例21的茶饮料的效果高。
实施例24原花色素配合茶饮料的官能评价向绿茶、松叶茶、乌龙茶、红茶、麦茶等各种茶饮料中添加原花色素，通过下述方法评价各含原花色素茶饮料的嗜好性。首先，将10g茶叶(绿茶、松叶、乌龙茶、红茶)加入1L的80℃水中提取5分钟后，过滤除去茶叶，得到各茶饮料。另外，麦茶是将30g麦浸在1L水中沸腾10分钟，得到麦茶饮料。向各种茶饮料中按照每350mL茶饮料40mg的比例添加松树皮提取物(原花色素含量40重量％)混合，调制含原花色素的茶饮料。让6名专家试饮该原花色素配合茶饮料，征集喜好顺序，根据下述评价基准采点。结果示于表8评价基准第1优选5点；第2优选4点；第3优选3点；第4优选2点；第5优选1点。
表8

数值为点数由表8结果可知，使用植物叶调制的茶饮料(绿茶、松叶茶、乌龙茶、红茶)与使用谷物调制的茶饮料(麦茶)相比，具有更好的嗜好性。特别是使用植物叶调制的茶，有“减弱了来自原花色素或松树皮的会聚味”或“味道很香”的评价。其中，特别是绿茶的嗜好性好。
实施例25配合高浓度原花色素的茶饮料的制造调制绿茶(焙茶)中配合有原花色素的饮料。将7g焙茶加入1L的85℃水中提取4分钟。然后离心分离除去茶叶，得到提取液。在该提取液中溶解原花色素含量40重量％(OPC含量20重量％)的松树皮提取物，使其浓度达100mg/L。再向该溶液中添加800mg/L的维生素C，然后用碳酸氢钠将pH值调至6.0，得到饮料。
实施例26配合低浓度原花色素的饮料的制造)以10mg/L的比例配合松树皮提取物调制成清凉饮料。配合成分和配合量如下所示。
组成配合重量(每升)果糖葡萄糖液糖 110g柠檬酸 0.2gL-抗坏血酸 0.2g松树皮提取物10mg氯化钙 840mg氯化镁 80mg氯化钾 280mg香料0.15g纯水余量实施例27配合高浓度原花色素的饮料的制造以200mg/L的比例配合含40重量％原花色素(OPC含量20重量％)的松树皮提取物，调制果汁饮料。配合成分和配合量如下表所示。
组成 配合重量(每升)果糖葡萄糖液糖40g柠檬果汁 30g柠檬酸2gL-抗坏血酸10g松树皮提取物 200mg香料 0.15g维生素B6 1mg维生素B12 2mg纯水 余量实施例28、29，比较例7血管保护效果的研究为研究本发明组合物有效成分的原花色素的血管保护效果，测定了小白鼠的血管弹性效果。首先，给4周的雄性SHR小白鼠(SHR等疾病模型共同研究会)喂养基本饲料(MF粉末Oriental酵母株式会社)和水1周后，使各组体重的平均值基本均匀，每5只分成一组。再让其自由进食基本饲料中含松树皮乙醇提取物(商品名黄烷二烯醇，株式会社东洋新药)0.5重量％(饲料1)或2.5重量％(饲料2)的饲料，或仅为基本饲料(饲料3)28天。并自喂养日开始，整组小白鼠均可自由进食含1％NaCl的饮料水。并在第28天取出胸部大动脉，测定物理性质。测定时，使用拉力试验机(EZ-test，岛津制作所)，将胸部大动脉以2mm/min的夹具速度拉至破断，根据所得应力-应变曲线，求得弹性系数(由应力-应变曲线通过最小二乘法求得的斜率)。
弹力测定结果示于表9。而弹力值越低，表示血管弹性越高。
表9

由表9可知，含原花色素的饲料1和2均比仅含基本饲料的组的弹力高。由上述结果可知，原花色素具有保护血管的效果。
产业实用性如上所述，通过摄取以原花色素为有效成分的组合物，不仅能达到优良的血液流动性改善效果，还能达到血管保护效果。而摄取含抗坏血酸的组合物，就能得到更好的效果。特别是该组合物可有效用作含原花色素和抗坏血酸或其衍生物的饮料(饮料组合物)。
权利要求
1.以原花色素为有效成分的血液流动性改善组合物。
2.如权利要求1所述的血液流动性改善组合物，其中，所述组合物为改善血细胞流动性的组合物。
3.如权利要求1或2所述的血液流动性改善组合物，其特征在于，所述组合物中还含有抗坏血酸或其衍生物。
4.如权利要求1～3所述的血液流动性改善组合物，其特征在于，上述原花色素中的20重量％以上为寡聚原花色素(OPColigomericproanthocyanidin)。
5.含原花色素、抗坏血酸或其衍生物的饮料。
6.如权利要求5所述的饮料，其特征在于，以重量比计，所述原花色素与抗坏血酸或其衍生物的含量比为1∶0.1～500。
7.如权利要求5或6所述的饮料，其特征在于，饮料中的所述原花色素浓度为1mg/L以上。
8.如权利要求5～7任一项所述的饮料，其中，所述饮料为茶饮料。
9.如权利要求5～8任一项所述的饮料，所述饮料具有血液流动性改善作用。
全文摘要
本发明涉及一种组合物，它以原花色素为有效成分，并含有抗坏血酸或其衍生物，从而发挥改善血液流动性和优异的血管保护效果。该组合物可有效用作改善血液流动性的食品组合物或医药品组合物。该组合物用作饮料效果很好。
文档编号A61K36/82GK1671372SQ0381781
公开日2005年9月21日 申请日期2003年7月29日 优先权日2002年7月29日
发明者高垣欣也, 三井雄史, 阿部圭一 申请人:株式会社东洋新药, 三得利株式会社