专利名称：新颖结晶的制作方法
技术领域：
本发明涉及作为钙释放依赖性钙通道抑制剂有用的4，6-二甲基-4’-[3，5-双(三氟甲基)-1H-吡唑-1-基]烟酰苯胺(nicotinanilide)的新颖结晶。
背景技术：
已知钙释放依赖性钙通道(Ca2+release activated Ca2+channel；以下简称为CRACC，也被称为钙储存依赖性钙通道(store-dependent Ca2+channel))存在于肥大细胞、淋巴细胞、星形胶质细胞(J.Biol.Chem.，270，p29-32(1995))等几乎所有的炎症性细胞，有报道它与细胞素的产生及脂质介质游离等有很大的关系(J.Immunol.，155，p285-96(1995)及Br.J.Pharmacol.，144，p598-601(1995))。
此外，已知CRACC也存在于内皮细胞(Am.J.Physiol.，269，C733-8(1995))及上皮细胞(J.Biol.Chem.，270，p169-75(1995))。有报道内皮细胞在受到自由基损伤时与持续的钙流入有关(Am.J.Physiol.，261，C889-896(1991))，这就意味着CRACC抑制剂对与内皮细胞有关的组织损伤具有保护作用。此外，有报道抑制钙流入具有抑制细胞增殖的作用及抑制白细胞介素2(IL-2)产生的作用(Br.J.Pharmmacol.，133，p861-8(1994))，CRACC抑制剂作为恶性肿瘤等增殖性或进行性疾病、自身免疫疾病的预防·治疗剂有用，此外作为移植时的排斥反应的抑制剂也有用。
因此，可期待CRACC抑制剂成为对于各种炎症性疾病、变应性疾病、自身免疫疾病、组织损伤、增殖性疾病等的预防或治疗有用的药物制剂。
对与平滑肌细胞和神经细胞等兴奋性细胞的细胞内钙调节有关的膜电位依赖性Ca2+通道(以下简称为VOCC)和CRACC的抑制选择性较高、具有抑制IL-2产生活性的吡唑衍生物有所报道(例如，专利文献1)。
式中，D表示可被卤代低级烷基等取代的吡唑基，n表示0或1，B表示亚苯基等，X表示-NR1-CR2R3-等，A表示可带有1个以上的取代基的单环或2～3环式稠合杂芳基等。
此外，对具有抑制IL-2产生活性的作为自身免疫疾病治疗剂有用的其它吡唑衍生物也有所报道(例如，专利文献2及3)。专利文献2揭示了以下的化合物。
式中，R1及R3表示碳原子数1～15的全氟烷基等，Z表示氮或碳，Q表示芳基等，E表示-L3-B等，详细情况参考该公报。
专利文献3揭示了以下的化合物。
式中，R1及R3表示CF3等，L表示-NHC(O)-等，详细情况参考该公报。
4，6-二甲基-4’-[3，5-双(三氟甲基)-1H-吡唑-1-基]烟酰苯胺虽然包含在专利文献1～3的权利要求中，但它是未被具体揭示的新颖的化合物。
专利文献1国际公开第99/19303号小册子专利文献2国际公开第99/51580号小册子专利文献3国际公开第99/62885号小册子化合物作为医药品使用时，从其稳定性考虑，最好为结晶。此外，为了实现处理性和品质的稳定，有时必须将其控制为多晶形。
发明的揭示本发明者以提供选择性地抑制CRACC、对各种炎症性疾病、变应性疾病的预防·治疗有用的新颖的医药品为目的进行研究后发现，4，6-二甲基-4’-[3，5-双(三氟甲基)-1H-吡唑-1-基]烟酰苯胺可作为结晶获得，并意外地发现该化合物的结晶中存在2种多晶形，而且进一步发现任一多晶体都适合作为医药组合物的制造原料使用。
即，本发明涉及作为医药组合物的制造原料有用的4，6-二甲基-4’-[3，5-双(三氟甲基)-1H-吡唑-1-基]烟酰苯胺的多晶体。
以下，对本发明进行详细说明。
本发明涉及4，6-二甲基-4’-[3，5-双(三氟甲基)-1H-吡唑-1-基]烟酰苯胺的结晶。本发明的结晶只要是达到可作为医药品的制造原料使用的程度的稳定的结晶即可，较好的是具有下述物性值的α型或β型结晶。各结晶在以下的粉末X射线衍射光谱[2θ(°)]具有各自的特征。此外，粉末X射线衍射在数据的性质上、结晶的同一性检定中，晶格的间隔和整体的图形非常重要，由于相对强度因结晶成长方向、粒子的大小、测定条件而多少可有些变化，所以不能严密地解释。
α型5.94，9.94，15.64，15.88，18.48，20.04及20.76β型10.60，12.90及17.24。
此外，在DSC分析中，α型结晶在约196℃(起始(onset)峰的形成温度)具有热吸收峰。β型结晶在172～174℃附近伴随相位移具有微小的峰，并在约196℃(起始)具有热吸收峰。即，不论是α型还是β型结晶在195～198℃(起始)都具有热吸收峰。
α型及β型中的任一结晶在5～60℃都可稳定存在至少3个月，利用重结晶可实现高纯度化，因此可作为医药的制造原料使用，特别适合用作固形制剂的原料。
例如，40℃、遮光下的稳定性试验结果如表1所示。
表1 40℃中的稳定性试验
(值表示由HPLC获得的峰面积根据内标法求得的定量值)α型结晶能够通过在甲苯中进行重结晶而获得。此外，在2-丙醇和水的混合溶剂中，使β型结晶悬浮，于室温～加热下，较好为30～60℃，更好为40～50℃加温下，对其搅拌数小时～数日，也可获得α型结晶。即，α型结晶因其悬浮下的稳定性，是适合于大规模制造的晶形。
在2-丙醇溶液中，搅拌下加水(最好与2-丙醇等量)使结晶析出可获得β型结晶。即，从可仅用毒性低于甲苯等的溶剂直接制备这点看，β型结晶较为理想。
不论是α型结晶还是β型结晶，在进行重结晶时，最好采用另外获得的所希望的结晶作为晶种。
此外，通过采用2-丙醇和水的混合溶剂(例如，4∶3的混合比)，加热溶解后放冷使结晶析出，能够获得在DSC分析中具有与α型结晶相同的热吸收峰、在粉末X射线衍射中除2θ＝19.24°的峰以外显示与α型结晶相同的衍射图形的结晶。该结晶在室温下是稳定的，从其DSC分析和粉末X射线衍射的结果看，该结晶也包括在本发明的α型结晶中。
此外，本发明还涉及含有4，6-二甲基-4’-[3，5-双(三氟甲基)-1H-吡唑-1-基]烟酰苯胺的结晶和制药学中允许的载体的固形医药组合物。
产业上利用的可能性4，6-二甲基-4’-[3，5-双(三氟甲基)-1H-吡唑-1-基]烟酰苯胺具有良好的CRACC抑制作用、与VOCC的抑制选择性及抑制IL-2产生的作用。此外，在对TNCB诱发接触性过敏症(TNCB-induced Contact Hypersensitivity)的抑制效果、对小鼠胶原关节炎模型的关节炎抑制作用、嗜酸性细胞浸润抑制作用(Antigen-induced airway eosinophilia(rat))等专利文献1记载的试验中显现出良好的活性。因此，含有该化合物的医药品作为与CRACC和IL-2有关的变应性、炎症性或自身免疫疾病的预防或治疗剂有用。这里，变应性、炎症性或自身免疫疾病包括支气管哮喘、牛皮癣、包含特应性皮肤炎的特应性疾病、包含结肠病的炎症性大肠疾病、消化性溃疡、肾炎、肝炎、胰腺炎、胶原性疾病、风湿性关节炎、变形性关节炎、移植时的排斥反应等。对于上述疾病的有用性可通过专利文献1记载的CRACC抑制作用及IL-2产生抑制作用等的体外试验，使用了作为支气管哮喘的代表疾病模型的抗原诱发气道内嗜酸性细胞浸润模型或小鼠胶原关节炎模型等的各种试验得到确认。4，6-二甲基-4’-[3，5-双(三氟甲基)-1H-吡唑-1-基]烟酰苯胺可通过专利文献1记载的方法制得。
以本发明的4，6-二甲基-4’-[3，5-双(三氟甲基)-1H-吡唑-1-基]烟酰苯胺的结晶为有效成分的固形医药组合物可采用在本领域常用的药物制剂用载体、赋形剂等通过常规方法调制。给药可采用片剂、丸剂、胶囊剂、颗粒剂、散剂、溶液剂等经口给药的方式，或关节内、静脉内、肌肉内给药等的注射剂、栓剂、经皮用溶液剂、软膏剂、经皮用贴附剂、经粘膜溶液剂、经粘膜贴附剂、吸入剂等非经口给药的方式中的任一种方式给药。以4，6-二甲基-4’-[3，5-双(三氟甲基)-1H-吡唑-1-基]烟酰苯胺的结晶为制造原料的口服用片剂、丸剂、胶囊剂、颗粒剂、散剂等及非口服用吸入剂、经鼻剂等作为稳定的固形制剂是比较理想的。
口服的固形制剂由本发明化合物和至少一种惰性赋形剂，例如，乳糖、甘露糖醇、葡萄糖、羟丙基纤维素、微晶纤维素、淀粉、聚乙烯吡咯烷酮、硅铝酸镁等混合而成。根据常规方法，组合物中还可包含惰性添加剂，例如，硬脂酸镁等润滑剂、羧甲基淀粉钠等崩解剂和助溶剂。片剂或丸剂还可根据需要用糖衣或胃溶性或肠溶性涂敷剂包膜。
口服的液体制剂包含药物制剂所允许的乳剂、溶液剂、悬浮剂、糖浆剂、酏剂等，一般所用的惰性溶剂例如包括精制水、乙醇。该组合物除了惰性溶剂之外，还可包含溶解剂、湿润剂、悬浮剂等助剂，甜味剂，矫味剂，芳香剂和防腐剂。
非口服给药的注射剂包含无菌的水性或非水性的溶液剂、悬浮剂和乳剂。水性溶剂例如包含注射用蒸馏水及生理食盐水。非水性溶剂例如有丙二醇、聚乙二醇、橄榄油等植物油、乙醇等醇类、吐温80(商品名)等。该组合物还可包含等渗剂、防腐剂、湿润剂、乳化剂、分散剂、稳定剂、助溶剂。它们例如通过滤菌膜过滤、掺入杀菌剂或进行照射而实现无菌化。此外，也可将它们制成无菌的固体组合物，使用前溶于无菌水或无菌的注射用溶剂使其悬浮再使用。
吸入剂和经鼻剂等经粘膜剂可采用固体、液体、半固体的剂型，可采用以往公知的方法制得。例如，可适当添加乳糖和淀粉等赋形剂，还可适当添加pH调整剂、防腐剂、表面活性剂、润滑剂、稳定剂和增粘剂等。给药时可采用适当的吸入或喷送装置。例如，使用计量给药吸入装置等公知的装置或喷雾器，可单独使用该化合物的粉末或将其配成混合物粉末，或者与医药中允许的载体组合形成溶液或悬浮液再给药。干燥粉末吸入器等可以是单次或多次给药用吸入器，可采用干燥粉末或含粉末的胶囊。或者，以适当的喷雾剂，例如采用了氯氟烷、氢氟烷或二氧化碳等适当的气体的加压气溶胶喷雾等方式使用。
给药量可考虑给药对象的年龄和性别等根据不同情况适当决定。通常口服给药时，成人1天为0.001mg/kg～10mg/kg左右，可1次或分2～4次给药。吸入给药时，通常成人1次0.0001mg/kg～1mg/kg，1天内1次或数次给药。
对附图的简单说明
图1为4，6-二甲基-4’-[3，5-双(三氟甲基)-1H-吡唑-1-基]烟酰苯胺的α型结晶的粉末X射线衍射图。
图2为4，6-二甲基-4’-[3，5-双(三氟甲基)-1H-吡唑-1-基]烟酰苯胺的α型结晶的热分析图。
图3为4，6-二甲基-4’-[3，5-双(三氟甲基)-1H-吡唑-1-基]烟酰苯胺的β型结晶的粉末X射线衍射图。
图2为4，6-二甲基-4’-[3，5-双(三氟甲基)-1H-吡唑-1-基]烟酰苯胺的β型结晶的热分析图。
实施发明的最佳方式以下，通过实施例对本发明进行具体说明，但本发明的范围并不限定于此。
粉末X射线衍射的测定采用按照通用方法粉碎的试样和MAC Science公司制MXP18TAHF22，在对阴极铜、管电流350mA、管电压45kV、采样间隔0.020度、扫描速度3.0°/min、波长1.54056、扫描范围(2θ)5～40°的条件下进行。
差示扫描热量(DSC)及热质量(TG)的测定采用TA Instruments公司制DSC2910及Hi-Res TGA 2950，在试样量约5mg、试样容器铝盘(开放，DSC用)及铂盘(开放，TG用)、加热速度10℃/min、测定温度范围室温～250℃、气氛气体干燥氮气、气氛气体流量50ml/min的条件下进行。
实施例1冰冷下，在4，6-二甲基烟酸(15.1g)及二氯甲烷(150ml)的混合物中加入草酰氯(8.7ml)，于15～20℃搅拌1小时。在反应液中加入4-[3，5-双(三氟甲基)-1H-吡唑-1-基]苯胺(23.59g)及二氯甲烷(300ml)的混合物，室温下搅拌18小时。在反应液中加入20％碳酸钾水溶液(约200ml)，分离有机层后，水层用二氯甲烷(约50ml)萃取。合并有机层和萃取液后，减压下浓缩。所得残渣用乙醇和水(2∶1)的混合溶剂(270ml)重结晶，获得呈蓝白色固体的4，6-二甲基-4’-[3，5-双(三氟甲基)-1H-吡唑-1-基]烟酰苯胺(26.70g)。
FAB-MS(Pos.)m/z 429[(M+H)+]；NMR(DMSO-d6)δ2.41(3H，s)，2.49(3H，s)，7.24(1H，s)，7.60(2H，d，J＝8.8Hz)，7.79(1H，s)，7.95(2H，d，J＝8.8Hz)，8.58(1H，s)，10.72(1H，s)。
实施例2(α型结晶的制备)
对4，6-二甲基-4’-[3，5-双(三氟甲基)-1H-吡唑-1-基]烟酰苯胺(8.0g)和甲苯(160ml)的混合物进行加热直至溶液沸腾后，自然冷却至室温的同时用搅拌子彻夜搅拌。滤取析出的结晶，用甲苯(10ml)洗涤后，于60℃彻夜减压干燥，获得呈白色固体的4，6-二甲基-4’-[3，5-双(三氟甲基)-1H-吡唑-1-基]烟酰苯胺的α型结晶(6.52g)。
实施例3(β型结晶的制备)在4，6-二甲基-4’-[3，5-双(三氟甲基)-1H-吡唑-1-基]烟酰苯胺(8.0g)中加入2-丙醇(120ml)，加热直至溶液沸腾使其溶解后，自然冷却至室温。此时，未观测到结晶的析出。用搅拌翼进行搅拌的同时在溶液中加水(120ml)，直接在室温下搅拌1小时30分钟。滤取析出的结晶，用2-丙醇和水(1∶1)的混合溶剂(约50ml)进行洗涤后，于60℃减压干燥1天，获得呈白色固体的4，6-二甲基-4’-[3，5-双(三氟甲基)-1H-吡唑-1-基]烟酰苯胺的β型结晶(7.32g)。
本发明的4，6-二甲基-4’-[3，5-双(三氟甲基)-1H-吡唑-1-基]烟酰苯胺的结晶，特别是α型及β型结晶的稳定性良好，作为医药品的制造原料有用。
权利要求
1.4，6-二甲基-4’-[3，5-双(三氟甲基)-1H-吡唑-1-基]烟酰苯胺的结晶。
2.如权利要求1所述的结晶，其特征还在于，在粉末X射线衍射中具有2θ(°)5.94，9.94，15.64，15.88，18.48，20.04及20.76的峰。
3.如权利要求1所述的结晶，其特征还在于，在粉末X射线衍射中具有2θ(°)10.60，12.90及17.24的峰。
4.如权利要求1所述的结晶，其特征还在于，DSC分析中在195～198℃(起始)具有热吸收峰。
5.如权利要求2所述的结晶，其特征还在于，DSC分析中在195～198℃(起始)具有热吸收峰。
6.如权利要求3所述的结晶，其特征还在于，DSC分析中在195～198℃(起始)具有热吸收峰。
7.固形医药组合物，其特征在于，含有权利要求1所述的结晶和制药学中允许的载体。
全文摘要
获得了钙释放依赖性钙通道抑制作用及抑制IL－2产生作用活性优良的4，6－二甲基－4’－[3，5－双(三氟甲基)－1H－吡唑－1－基]烟酰苯胺的结晶，该化合物存在2种多晶形，任一结晶都适合作为医药组合物的制造原料。
文档编号A61P11/06GK1678606SQ0382015
公开日2005年10月5日 申请日期2003年8月26日 优先权日2002年8月27日
发明者洼田浩一, 岩冈清, 山口聪, 横田正树 申请人:山之内制药株式会社