专利名称：用于保持妇女健康的植物雌激素和益生菌的制作方法
技术领域：
本发明涉及新的组合物，该组合物可以片剂、胶囊或临时配制成混悬液的粉末形式口服给药，其用于增进骨胳的生理机能以及更年期和绝经妇女的健康。
背景技术：
由于卵巢激素分泌不足而导致的绝经后骨质疏松是妇女骨质流失最常见的原因。这种紊乱通过施用外源雌激素，即，通过适当的激素替代疗法(HRT)而得到预防。用于这种目的的合成雌激素类激素药效强并且，如果不正确使用的话，可能导致副作用，特别是长期给药时。
亚洲国家的由骨质疏松所致的骨折发生率要低于西方国家。这种差异是由于在亚洲国家大豆食品被广泛食用[1]以及特别是由于大豆中存在的某些异黄酮的作用。事实上，大豆异黄酮(SIs)对绝经后妇女的骨胳具有营养作用的功效在若干临床研究中已被证明[2，3，4，5]而且在对卵巢切除的大鼠的研究中得到证实[6]。
大豆主要含有两种异黄酮，即染料木苷和黄豆苷。染料木苷(MW 432.22)是染料木苷原(MW 270.24)的β-葡糖苷。黄豆苷(MW 416.23)是黄豆苷原(daidzin)(MW 254.24)的β-葡糖苷。染料木苷和黄豆苷是相对较大的分子；它们水溶性好，极性大。这些性质妨碍了它们的胃肠道吸收以及雌激素部分的生物利用度。
为了可被吸收和变得可生物利用，SIs必须被水解成糖苷配基，也就是与葡糖苷组分分离[7]。这可通过特殊酶即糖苷酶的作用完成。然而，人类以及许多哺乳动物的胃肠道并不分泌糖苷酶，因此异黄酮并不能被水解进而变得生物可利用。相反，肠道菌群的某些微生物，特别是某些乳酸菌，可产生上述水解反应所必需的糖苷酶，该糖苷酶对SIs的吸收是必需的[8，9]。因此胃肠道中产生糖苷酶的细菌的存在是SIs吸收以及发挥功效的先决条件。
肠道菌群在个体之间的变化很大，甚至在相同的受试者体内，肠道菌群的功能也随着食物、气候、药物治疗、疾病，等等的不同而改变。因而，在很多受试者中，通过肠道菌群产生的糖苷酶可能很少或者甚至没有，从而危及SIs的吸收。
本发明的目的是提供可口服给药的，特别是作为食品添加剂的组合物，用于减轻、消除、和/或预防困扰绝经前、绝经期以及绝经后妇女的更年期以及绝经后机能紊乱，包括骨的新陈代谢紊乱，其可导致增加骨折风险的骨质流失以及骨组织改变。
本发明概述本发明提供用于缓解和预防更年期以及绝经后机能紊乱的组合物，其包含有效量的大豆异黄酮和活性乳酸菌，该组合物以适用于口服的剂量形式提供。
本发明的组合物包括具有雌激素活性的大豆异黄酮和可在肠道内产生糖苷酶的乳酸菌，其目的是将摄取的异黄酮葡糖苷裂解成可被吸收的糖苷配基并确保所服用的SIs在所有个体内的生物利用度。
本发明还提供该组合物用于制备药物或食品添加剂的用途，通过在需要的个体中口服有效量的上述组合物，用于消除和预防更年期以及绝经期机能紊乱。
原则上，任意类型的乳酸菌都适合于本发明的组合物。事实上，乳酸菌是具有诸多益处的益生菌，原因在于●乳酸菌可产生乳酸，其可酸化肠道内容物，为诸多致病微生物(大肠杆菌，念珠菌等)的生长创造了不利的条件，而且，相反地，为钙、铁、磷以及其他营养素的吸收创造了有利的条件。
●通过这些机理，以及通过由于乳酸的产生而导致的pH降低，乳酸菌改善并均衡了肠道菌群。这是非常有用的，特别是在由于不正确的饮食、药物(特别是抗生素)、气候应激反应、消化紊乱或营养缺乏而导致的肠道菌群不足或失衡时。事实上，由于腐败菌群比发酵菌群占优势而产生毒素，这些情况可导致腹泻、便秘、气胀、消化不良、衰弱及不适。
●乳酸菌产生蛋白酶和脂肪酶，其完成蛋白质和脂肪的消化并且还削减肠道菌群微生物的这些营养物质，它们会产生有毒物质，例如在厌氧的腐败过程所产生的物质。
●乳酸菌可产生维生素K，其是血液凝固所必需的因子；而且可产生B族的几种维生素，其对维持活跃的新陈代谢是必需的。
●还因为乳酸菌可产生特殊的抗菌物质细菌素，其可阻止“有害”菌群的生长。因此它们可消除肠道的不良微生物作用。
●另外，乳酸菌在肠壁上生长和繁殖，从而形成抵御致病微生物的一层屏障，这些致病微生物是例如白色念珠菌、沙门氏菌族、埃希氏杆菌族、葡萄球菌、梭状芽孢杆菌，等等，其可产生毒素而且可致肠道感染。
●最后，乳酸菌可激活胃肠道的免疫防御，其有助于使我们的机体抵御感染以及毒物过敏。
为了实现本发明的目的，特别优选乳酸杆菌孢子(凝固芽孢杆菌)，下文缩写为Ls，任选地与其他乳酸菌结合，因为Ls的孢子在一般环境条件下是稳定的，并不需要在冰箱中保存而且可在能杀灭大部分其他乳酸菌的胃和胆的分泌物中保持活性。
特别要指出的是，Ls通过同型发酵反应产生L-乳酸。L-乳酸，也就是进入我们的代谢途径中的乳酸的异构体，因其不引起全身酸中毒而为世界卫生组织所推荐。
为了生产乳酸，Ls利用未消化的糖的碎片，削减肠菌群中有害种类的这些底物，因而抑制了它们的生长而且还有助于保持身体健康。
因为上述的这些原因，乳酸菌，特别是Ls，是非常有益的益生素，它们除了可提高SIs的生物利用度之外，还对保持身体健康提供诸多益处。
骨骼的进一步强化可通过加入其他对骨骼和关节有益的物质来实现。其中之一就是木贼(问荆)，其可提供单硅酸的有机盐，其为硅的可溶性本体，在胃肠道容易吸收而且因此易被生物利用。硅，与磷、氟化物、镁、以及硼一起，与羟基磷灰石晶体在胶原原纤维上的沉积过程(也就是骨矿物质成分累积在器官结构上)有关系，木贼还含有木贼宁，其为具有温和的利尿作用的物质，可用于调整水潴留，这种情况在绝经期经常发生并导致下肢肿胀以及体重增加。另外还应当补充钙(与维生素D一起使用以促进钙的吸收和在骨骼上沉积)，因为绝经时对钙的需求总是增长。
实验实验部分的目的是调查不同成份在预防切除卵巢的大鼠的骨质流失中的作用，切除卵巢的大鼠是广泛应用的绝经后骨质疏松模型[6]。
简要地说，就是在以3ml/kg体重的量进行equitesin(equitesin是戊巴比妥、乙醇、水合氯醛、丙二醇、硫酸镁水溶液的混合物)腹膜麻醉的情况下，切除95天龄的Sprague-Dawley大鼠的卵巢。每8只大鼠一组，共分为4组。第5组的8只大鼠进行假手术并且作为未切除卵巢的对照组。大鼠可自由饮水并且随意喂食针对啮齿类动物的添加碳酸钙(0.1g/kg食物)和维生素D3(1μg/kg食物)的Harlan食品。SIs和Ls混悬于0.5％的羟丙基甲基纤维素水溶液(下文称为载体)中，然后每天以10ml/kg体重的剂量用胃管给药。
各组进行如下处理。
组1.假手术，未切除卵巢的对照组载体组2.切除卵巢的对照组载体组3.切除卵巢的SIs处理组染料木苷0.5mg/kg体重+黄豆苷0.5mg/kg体重组4.切除卵巢的SIs+Ls处理组染料木苷0.5mg/kg体重+黄豆苷0.5mg/kg体重+8百万/每千克体重的Ls孢子组5.切除卵巢的SIs+Ls+木贼处理组染料木苷0.5mg/kg体重+黄豆苷0.5mg/kg体重+8百万/每千克体重的Ls孢子+1.5mg/kg体重的木贼茎干干燥提取物(以含有7％硅为标准)剂量以对人类使用的通常建议用量为基础，根据研究中所用的大鼠体重进行调整。
大豆异黄酮通常的日剂量为20-80mg，优选40-60mg。
乳酸杆菌孢子通常的日剂量为0.75亿-15亿个孢子，优选2.5-10亿个。
木贼通常的日剂量为相当于3-10mg二氧化硅。
钙成年妇女推荐的每日膳食供给量(RDDA)为800mg。对于本发明来说，优选100mg至300mg的日剂量，将其作为在日常饮食中所包含的钙的补充。
维生素D3成年妇女的RDDA为5μg。对于本发明的组合物来说，优选3-5μg的日剂量。
卵巢切除后六周，大鼠乙醚麻醉后用颈脱位法处死。取出子宫迅速称量，将股骨从软组织取出，并用卡尺测量其长度，应用阿基米德原理测量体积和密度，然后在640℃下灰化24h。每一个灰分样品称重然后溶于6N的HCl中。在最终的溶液中通过原子吸收光谱法测量钙，通过比色分析测量磷。
计算不同结果的平均和标准误差，进而通过t-检验估计各个数值间的显著性差异。
本研究最后得到的结果见表1而且可以总结如下。
1.相对于假手术动物组(组1)，任何卵巢切除动物组在切除卵巢后六周的体重没有任何显著性变化。
2.相反地，在卵巢切除对照组(组2)，子宫重量有非常显著的下降而且股骨在长度、密度、灰分重量、钙和磷的含量方面下降很明显，从而显示雌激素缺乏对骨的营养有负面影响。
3.给予SIs(组3)对体重和子宫的影响(相对于组2)不显著(对α雌激素受体无刺激作用)，但是可显著增加股骨长度以及骨骼中的磷，从而显示对骨的营养有适当的积极作用。
4.添加Ls至SIs中(组4)显著地和令人惊讶地改善了骨的营养状况，如通过所有骨营养状况的标志(股骨长度、密度、灰分重量、钙和磷的含量)的显著增加所示，从而支持了SIs-Ls的组合的理论，即通过SIs-Ls的组合提高了SIs的生物利用度进而增进SIs对骨胳的正面作用。
5.额外添加的木贼提取物(组5)使得所有骨营养状况标志(股骨长度、密度、灰分重量、钙和磷的含量)有了出乎意料的进一步提高，从而证实了这种天然草本植物产品对骨合成代谢的作用。
总之，由于Ls的益生性能所致的SIs的生物利用度以及肠内钙和磷吸收的提高，Ls显著强化了SIs对骨合成代谢的作用。木贼提取物的添加则对骨合成代谢有进一步的促进作用。值得注意的是，无论是SIs还是SIs+Ls均对子宫的重量没有明显影响，从而表明其对d雌激素受体没有刺激作用。这与雌激素类激素所产生的作用形成了鲜明的对比，由于雌激素类激素对d雌激素受体的刺激，因而其在促进骨营养的同时可能在一些患者中产生有害作用，特别是长期使用的情况下更是如此。
因此，本研究支持了这一理论，即SIs+Ls的组合是防止大鼠骨质流失的天然的和耐受良好的治疗剂，其中大鼠的骨质流失是由于卵巢切除所致的雌激素类激素缺乏所引起的，这一情况也存在于绝经后的妇女当中。添加木贼提取物可增强SIs+Ls组合防止骨质流失的作用。
表1.6周治疗后不同组的结果。平均值以及标准误差体重和子宫数据的数量＝8；股骨数据数量＝16还记录了相对于组2的卵巢切除对照组的变化百分数数据。显著性差异(Pt＜0.05)以斜体表示。
aPtNS vs.组1bPtNS vs.组2cPt＜0.001 vs.组1dPt＜0.05 vs.组1ePt＜0.001 vs.组2fPt＝0.05 vs.组2gPt＜0.05 vs.组2本发明详述下列实施例描述了本发明可能的实际应用但并未将本发明的范围限定于这些实施例实施例1用于口服的片剂下列处方考虑了本发明条件下可用来配制口服片制的活性成份以及赋形剂(和它们的技术功能)。
一片中包含一个日剂量。根据本领域通常的技术常识制备片剂，不需要任何特别或特殊的步骤。总之下列制备步骤是必需的●称出单个组分；●通过在合适的干燥粉末混合器中混合处方组份制备压片混合物；●在合适的自动压片机中压制所得的混合物，得到具有所需形状和大小的片。
所需的组份列于下表。
(*)含有36％m/m钙(**)还被用作赋形剂
实施例2用于口服的胶囊下列处方考虑了本发明条件下可用来制备口服胶囊的活性成份以及赋形剂(和它们的技术功能)。
两只胶囊含有一个日剂量。根据本领域通常的技术常识制备胶囊，不需要任何特别或特殊的步骤。总之下列制备步骤是必需的●称出单个组分；●在适合于进行干燥混合操作的混合器中制备用于填充胶囊的混合物；●选用合适尺寸和预期颜色的硬明胶胶囊，在自动封囊机中进行胶囊填充。
所需的组份列于下表。
(*)含有36％m/m钙
实施例3包含粉末的药囊(该粉末可临时配制成口服混悬液)下列处方考虑了本发明条件下可用来配制适合制成口服混悬液的粉末的活性成份以及赋形剂(和它们的技术功能)。
一份粉末包含一个日剂量。这份粉末包含在药囊中，该药囊是由外部纸层、铝中间层、以及内部聚乙烯层组成。根据本领域通常的技术常识来制备药囊，不需要任何特别或特殊的步骤。总之，下列制备步骤是必需的●称出单个组分；●在适合于进行干燥混合操作的混合器中匀化混合组份；●在合适的自动生产线上热压成形制备药囊，该自动生产线其中还包括填充和封闭装置；●在上述的自动生产线上填充并封闭药囊，得到所期望的大小和形状的药囊，该药囊含有可供临时应用的单剂量粉末。
所需的组份列于下表。
(*)含有36％m/m钙
(*)增甜剂以及调味剂可随意添加，根据喜好而变。
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权利要求
1.用于缓解和/或预防困扰绝经前、绝经期以及绝经后妇女的更年期以及绝经期机能紊乱的组合物，其特征在于该组合物含有大豆异黄酮和可促进大豆异黄酮吸收的活性乳酸菌，该组合物以口服给药的剂量形式提供。
2.根据权利要求1的组合物，其中所述的乳酸菌包含乳酸杆菌孢子(凝固芽孢杆菌)。
3.根据权利要求1或2的组合物，其中还含有问荆干燥提取物。
4.根据权利要求1至3任一的组合物，其中所说的剂量形式适合于大豆异黄酮以20-80mg，优选40-60mg的日剂量给药。
5.根据权利要求1至4任一的组合物，其中所说的剂量形式适合于所说的乳酸菌以0.75亿-15亿个孢子，优选2.5-10亿个孢子的日剂量给药。
6.根据权利要求3的组合物，其中所说的剂量形式适合于问荆干燥提取物以3.0-10.0mg并且优选5-7mg的日剂量给药，该剂量以所述干燥提取物中含有的二氧化硅来表达。
7.根据权利要求1至6任一的组合物，其中还包含药学上可接受的钙盐和/或维生素D3。
8.根据权利要求1至7任一的组合物，其中所述的剂量形式选自片、胶囊或包含可临时配制成混悬液的粉末的药囊。
9.权利要求1至8任一项的组合物用于制备药物或食品添加剂的用途，该药物或食品添加剂可口服用于治疗困扰绝经前、绝经期以及绝经后妇女的更年期以及绝经期机能紊乱。
10.根据权利要求9的用途，其用于预防与绝经或其他形式的卵巢机能不全有关的骨流失。
全文摘要
用于缓解和/或预防困扰绝经前、绝经期以及绝经后妇女的更年期以及绝经期机能紊乱的组合物，其含有大豆异黄酮和可促进大豆异黄酮吸收的活性乳酸菌并优选含有乳酸杆菌孢子。组合物以适合于口服的剂量形式提供。优选该组合物还包含问荆干燥提取物和药学上可接受的钙盐和/或维生素D
文档编号A61P19/00GK1781497SQ20041001043
公开日2006年6月7日 申请日期2004年11月29日 优先权日2004年11月29日
发明者P·塞宁, I·塞特尼卡, L·A·罗瓦蒂 申请人:罗塔药品股份有限公司