专利名称：一种抗肿瘤及抗衰老的药物组合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种抗肿瘤及抗衰老的药物组合物，该药物组合物有效组份为从大豆中提取的鲍曼-伯克蛋白酶抑制剂和葡萄皮籽提取物。
背景技术：
蛋白酶抑制剂(Bowman-birk soybean protease inhibitor，简称BBI)是鲍曼1946年在粗制大豆粉中分离出来的一种具有较高胱氨酸含量的蛋白物质。由于该物质具有不溶于丙酮的物理性质，当时将其称为丙酮不溶因子(Pro.soc.exp.biol.med.63547-550)；1961年，伯克完成了对该物质的纯化(DEAE-cellulose column层析法)，并赋予更为完整的理化及生理学性质“其分子是由7个二硫键締合71个氨基酸而成，分子量8000，拥有两个独立的抑制位点，可与胰蛋白酶或者糜蛋白酶结合形成一个1∶1的复合物，使酶原有活性改变”(Biochim.biophys.acta.54378-381)。此后，该抑制剂以上述二人名字命名，即BBI。
最先发现BBI医学用途的是Troll.。1983年，Troll报告流行病学研究显示，经常食用富含BBI的食物可以降低人们前列腺、乳腺、结肠及皮肤部位癌症的发病率，这一结果已在其建立的动物试验模型系统得到证实。Troll认为，在上述过程中BBI是以植物抗氧剂发挥抗癌作用(Prostate.4345-349)。继之，有关BBI各种医学应用的研究相继报道1984年，Kennedy报告无论使用BBI纯品或者含有BBI的大豆粗提物(称BBIconcentrate，简称BBIC)，都可以使患有Bloom′s综合症小鼠细胞染色体畸形的水平降低。该病是一种具有较高染色体畸形水平、癌发病率很高的遗传性疾病(Mechanisms of tumor promotion，Vol.III，pp13-55；CRC press，Inc.BocaRaton)；1985年，Yavelow报道了一种新的BBI提取方法用于提取的材料是经丙酮，而非以前所用乙醚去脂的大豆粉；通过醇提、丙酮沉淀、滤膜渗析及冷冻干燥得到的BBIC，在体外试验系统中可显示出更好的抑制细胞恶变效果(Proc.natl.acad.sci.USA.825395-5399)；同年，Weed模拟人结肠直肠癌发病机理，利用dimethylhydrazine(DMH)作诱变剂建立了一个小鼠致结肠癌模型系统。在这个实验系统的研究中，Weed将BBIC加入到模型组及空白组，结果显示BBIC可以显著抑制鼠结肠粘膜腺癌的发病水平；空白组中的大多数小鼠则维持到其正常的寿命期限(1.5年)而未发现任何健康问题；(Carcinogenesis.61239-1241)；1986年，Messadi证实利用Yavelow方法制取的BBIC，在其建立的与人口腔癌病变过程、组织病理、生长方式及癌前损伤都极为相似的动物模型系统中，能够有效地抑制7，12-dimethyl-benz[a]anthracene(DMBA)诱发的hamster鼠颊囊袋肿瘤发生水平(JNCI，76，447-452)；1986年及1993年，Kennedy分别申请了两项BBIC的制取方法专利(US4793996；US5217717)。Kennedy指出如果需要BBI纯品，可以在获得的BBIC基础上通过传统法得到。但他认为BBI纯品与BBIC在许多试验中没有表现出较多的效力上的差异，而且BBIC可以直接食用，从成本考虑，建议使用BBIC；1989年，Witschi报告BBIC还可以抑制3-methylcholanthrane(MCA)诱发的小鼠肺癌发生的比率(Carcinogenesis.122275-2277)；1990年，ST.Clair对不同剂量下的BBI纯品及BBIC抑癌效力进行了试验，发现在经DMH处理的小鼠食物中加入0.5％、0.1％的BBIC或者0.1％、0.01％的BBI纯品这样的较低剂量，其结果都能导致具有统计学意义的抑制肝血管肉瘤及结肠癌的效果，而且没有任何毒副作用反应(Cancer Res.50580-586)。
除了上面所述之外，还有许多体外试验研究揭示了BBIC对鳞状细胞癌、腺癌等多种细胞类型癌具有抑制作用。综合以上研究，可以对BBI的性能状况以及现存问题作如下描述BBI是一个抗肿瘤谱广、无毒、可食的化学物质；在较低剂量下，可对癌变的三个主要过程启动(initiation)、促进(promotion)和演进(progression)有效抑制；医学上仅被定位在化学防护剂应用范畴。现存的问题是，自1983年起发现BBIC的抗肿瘤作用以来，至今尚未见到可以应用的产品上市，是否因为其以单一成分在实际的应用中产生了效力方面的问题；除作为化学防护剂应用之外，BBIC是否还可以作为一种有效的化学治疗剂使用？这一点十分重要，因为它关系到BBIC应用价值的扩大与延深。但是，在Pubmed数据库中的数百条文献中未能找到一篇涉及移植性肿瘤的药理学研究予以明确。为了弄清这些问题，本发明人作了相应的试验研究。发现BBIC确实存在着对实体瘤抑制率较低的问题(见抗肿瘤试验部分)。
发明内容
本发明的目的在于提供一种抗肿瘤及抗衰老的药物组合物。这里所说的抗肿瘤不再仅仅局限于肿瘤的防护，而且可以适用于肿瘤发生后的化学治疗；所说的抗衰老是药物组合物在动物长期毒性试验中的意外发现，服用本组合物的小鼠对照空白组出现了较大的寿命时间差异。
鉴于背景技术中所述的内容，寻求一种可与BBIC产生协力作用的活性物质并能与之组成一个药物组合物，使BBIC的单一肿瘤防护作用延伸至可以有效地进行化学治疗是构成本发明的一个基本驱动思想。通过对大量药理上的可用材料进行试验筛选，发现葡萄皮籽提取物(GSSE)是达到本发明原定目标的理想物质。
流行病学揭示葡萄及其饮食制品降低癌和心脏病发生率，通过物理和化学技术分析得知葡萄的全果实，特别是其皮部和籽部，含有一群在物源、结构和性质上密切关联的活性化合物，即多元酚(pps，主要存在于葡萄籽中)和黄酮类似物(flavonoids，主要存在于葡萄皮中)。他们是葡萄皮籽提取物中的主要有效成分，均具有广谱的生理、药理学活性。通过抗氧化，中和自由基-超氧阴离子，羟自由基，稳定的PHH自由基，抑制脂质过氧化，LDL氧化，抑制环氧合酶，脂氧化酶，胶原酶、弹性蛋白酶、透明质酸酶，降低血脂、扩张血管、防止脉管狭窄、栓塞硬化、提高免疫力、抗突变以及抗肿瘤等多种作用。尽管GSSE具有以上所述多种功能，但是单独以其用作抗肿瘤药物还难以达到理想程度。近年来，国内外已有一些利用GSSE与其他物源成分协同作用，提高了疗效及扩大了适应症范围的文献报道。本发明人通过试验也证明了这一现象BBIC经与GSSE组合，抑瘤效果显著提高，从而形成了本项发明。
在本发明的药物组合物中，BBIC的制取依照Yavelow在Proc.Natl.Acad.sci.USA，82，5395-5399文献中采用的方法进行。按照此法获得的BBIC每克含80-115mg CI(chymotrypsin inhibitor)，含量测定效仿中华人民共和国药典抑肽酶效价测定方法；GSSE制取的工艺流程如下葡萄皮籽选分、干燥、合并、混匀；含水20％乙酸乙酯浸提(交替法)；过滤得滤液；减压浓缩，泥桨加入石油醚搅洗沉析得粗品固形物；溶于纯水，上大孔吸附树脂柱，水与乙醇梯度洗涤与解吸；洗脱液减压浓缩得固形物；真空干燥或喷雾干燥得成品；用儿茶素(98％)和表没食子儿茶素没食子酸酯(98％)作标品进行HPLC分析，GSSE的主要有效成分(pps和flavonoid)含量为65％-75％。
本发明的药物组合物，BBIC与GSSE两组分的比例为1∶1～1∶9；其优选配比为1∶3～1∶5。
本发明的药物组合物，可以根据不同的给药途径配以药学上可以接受的各种附加剂，例如，填充剂、粘合剂、崩解剂、稀释剂等，采用本领域常规制剂技术制成药学上常用的各种剂型。例如，片剂、胶囊剂、颗粒剂、口服液、透皮吸收剂等。
具体实施方法实施例1选用下列用量的药物组合物与附加剂BBIC100gGSSE300g羟基纤维素 150g微粉硅胶30g胶化淀粉30g硬脂酸镁10g制成1000片实施例2选用下列用量的药物组合物与附加剂BBIC100gGSSE400g琼脂30g硬脂酸镁20g羟基纤维素100g制成1000粒胶囊实施例3选用下列用量的药物组合物与附加剂BBIC50gGSSE250g乳糖250g糊精50g山梨醇 30g蒸馏水 适量防腐剂适量制成1000ml口服液本发明药物组合物的抗肿瘤试验材料和方法昆明种小白鼠，19～22g，随机分组#1生理盐水组用作阴性对照(0.2ml/只/天)；#2天仙胶囊组(250mg/kg/d)与#35-FU组(25mg/kg/d)用做阳性对照；#4BBIC(100mg CI/g)组(100mg/kg/d)；#5GSSE(每克含主要有效成分70％)组(100mg/kg/d)；#6，#7为本发明药物组合物BBIC与GSSE按1∶4及1∶3剂量配比组(100mg/kg/d)。瘤株∶肝癌、S-80、艾氏腹水瘤来源于吉林省肿瘤研究所，细胞培养、计数及接种方法按照《药理实验方法学》(徐叔云等，人民卫生出版社)所述方法进行。实验结果见以下各表表1 本发明药物组合物对载肝癌细胞小鼠的影响
表2本发明药物组合物对载S-180肉瘤小鼠的影响
表3本发明药物组合物对小鼠艾氏腹水瘤体内生长的影响
表4本发明药物组合物量效关系(#7 肝癌)
本发明药物组合物长期慢性毒性试验昆明种雌性12月龄小鼠45只，随机平分3组，对照组提供日常普通饲料；给药(#7)组分中、高二个剂量；饲料另制，依照小鼠平均食量中应包含该组规定的每日给药剂量为准。试验状况见表5
表5本发明药物组合物长期慢性毒性试验
试验中所有死亡鼠均冷冻保存，经尸检，未发现药物组合物组任何小鼠主要藏器有异常表现。尽管试验意外中断，但从药物组合物组与对照组小鼠死亡的比率可以看出，本药物组合物的中、高剂量组均有明显的延长小鼠寿命的趋势。
本发明药物组合物抗衰老试验本实验通过对用药后的自然衰老模型鼠血中丙二醛(MDA)含量以及SOD活力的影响，探讨本发明药物组合物的抗衰老作用。方法如下昆明种雌性14月龄小鼠45只，随机平分老龄对照组(NS 0.2ml/只)，本发明药物组合物#7中剂量组和高剂量组；灌胃给药100天杀鼠取血，分离血清，对血中SOD和MDA进行测定。SOD采用黄嘌呤氧化酶法，MDA采用荧光法。
试验结果见表6
表6本发明药物组合物抗衰老试验(#7) 以上数据表明，药物组随剂量不同对两个老化指标都产生显著和极显著的影响，证实本发明药物组合物具有抗衰老功能。
综合以上试验结果，可以得出以下结论本发明药物组合物与组合前的单一组分相比较，抑瘤效果明显提高，充分表现该两组份组合确实具有较好协同作用；本发明药物组合物具有抗衰老功能。
权利要求
1.一种抗肿瘤及抗衰老的药物组合物，其特征在于它包含的有效组分为从大豆中提取的鲍曼-伯克蛋白酶抑制剂和葡萄皮籽提取物，鲍曼-伯克蛋白酶抑制剂与葡萄皮籽提取物的比例为1∶1～1∶9。
2.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于葡萄皮籽提取物包含的主要有效成分为多元酚和黄酮类似物。
3.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于鲍曼-伯克蛋白酶抑制剂与葡萄皮籽提取物的优选比例为1∶3～1∶5。
全文摘要
本发明涉及一种抗肿瘤及抗衰老的药物组合物，它包含的有效组分为从大豆中提取出的鲍曼－伯克蛋白酶抑制剂和葡萄皮籽提取物，该组合物可根据不同的给药途径，配以药学上可以接受的各种辅剂，制成不同剂型的药物。
文档编号A61P43/00GK1651078SQ20041003950
公开日2005年8月10日 申请日期2004年2月5日 优先权日2004年2月5日
发明者李占兵, 江漫涛 申请人:李占兵, 江漫涛