专利名称：抗毒覃碱药物的用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及基于施用抗毒覃碱(antimuscarinic)药物来预防癫痫发作的预防疗法，其中所述癫痫发作是在癫痫持续状态、头部创伤之后可能随之发生的那些，所述的头部创伤包括由神经外科操作和一般急性损伤事件所引起的那些。
癫痫定义为即使在没有毒代谢或发热背景时运动或非运动性癫痫反复发作的疾病。上述定义清楚地将非癫痫性癫痫发作与真正的癫痫区别开来，其中所述非癫痫性癫痫发作常常是与新陈代谢紊乱或中毒有关的单一的孤立的事件。尽管癫痫性与非癫痫性癫痫发作二者可能具有类似的临床表现、惊厥发作，但癫痫病指的是一种永久性改变的背景疾病。按照这一方式，癫痫病人的神经系统以某一方式在其解剖学、生理学和药理学方面均不同于无癫痫病的人。
癫痫病具有高的普遍性，其中每年的发病率范围为11-131/100000，和占总人口的1.5％(Guerreiro和Guerreiro，1993)。这一疾病的病因学，尽管在大多数情况下是未知的，但有时可清楚地与以前的损伤事件相联系。正因为如此，作为严重头部创伤的结果，癫痫病的发病率范围为15-80％，这取决于受伤的大脑区域的程度、位置和严重性(GumnitRJ.癫痫和脑损伤.《癫痫》修订原因和治疗，P.Robb(编.)，Symposia Specialists，Chicago，pp.177-183，1980)。事实上，在严重头部创伤之后发展成癫痫病的危险比一般人群高13倍。
一些癫痫病患者难以用现有的药物疗法进行治疗，进而可能需要进行神经外科术。然而，即使在最好的医疗中心，外科手术并也不是总能完全地抑制癫痫发作(GermanoIM，Poulin N and Olivier A.复发的精神运动性癫痫的再次手术，《神经外科学杂志》，8131-36，1994)。事实上，可能的情况是，在其中彻底切除癫痫病灶且在外科手术之后仍持久地癫痫发作的那些条件下，外科手术本身可能构成了能引发癫痫病的大脑创伤(Sperling MR，Skolnick J and O`Connor MJ.短暂叶切除术后的先兆预测值，《癫痫》38(增刊.8)80，1997)。如上所述，严重的头部创伤显然与随后癫痫病的发作相关联。
目前可获得的抗癫痫药物能控制在70％的癫痫病人中的癫痫发作(YacubianEMT.Tratamento medicamentoso das epilepsias.Lemos编，Sao Paulo，1999)。尽管在癫痫发作控制中的这种相对成功，但可获得的药物并不真正抗癫痫，而是抗癫痫发作。可获得的治疗癫痫病的药物没有改变或抑制基础的癫痫病况，而仅仅抑制癫痫发作。确实，迄今为止，在或者已经具有癫痫病的患者(能抑制癫痫病)中或者在严重的头部创伤之后的患者(能防止癫痫病)中为评价真正的抗癫痫剂而进行的所有良好控制的临床试验是失败的(Temkin NR，Dikmen SS and Winn HR.用于癫痫发作的预防的临床试验，《抗癫痫药物的发展》，J French，I Leppik and MA Dichter(编.)，Lippincott-Raven Publishers，Philadelphia，pp.179-88，1998)。结果，尽管在与神经系统的损伤相关的数种疾病之后存在形成癫痫病的危险，但目前得不到预防方案(Mello LEAM，Odesenvolvimento medicamentoso de novasestruturas moleculares，InTratamento medicamentoso das epilepsies.EMT Yacubian(编.)，Lemos Editorial，Sao Paulo，pp.107-115，1999；Temkin等，1998 op.Cit.)。
本发明的目的在于，预防在严重的头部创伤之后可能随之出现的癫痫病。本发明基于在老鼠中的试验癫痫病模型的结果。在老鼠内的第一系列的实验中，观察到合成乙酰胆碱的特定神经元群(基本前脑胆碱能神经元)的选择破坏会抑制随后癫痫病的开始。假设该结果可能是基本前脑胆碱能神经元的功能阻断的结果的话，则测试该系统的可逆药物拮抗剂。因此，在老鼠的癫痫病模型中，我们使用东莨菪碱，它是一种胆碱能拮抗剂，以评价它在防止癫痫病开始方面的潜力。使用东莨菪碱盐作为能防止癫痫病的试剂的有用的专利在1999年在巴西被报道，并随后通过PCT路径在30个不同国家申请了专利。
因此，本发明涉及与东莨菪碱相比，具有许多优点的抗毒覃碱药物，即乙酰胆碱受体的拮抗剂，如比哌立登(biperiden)的用途。
该药物是M1受体的部分可逆的选择性拮抗剂(乙酰胆碱受体类)，其显示出更强有力的作用；比哌立登已经用于治疗帕金森病的医学实践中，因此，由于它已知的安全性使它在不同的医学疾病中产生更大的使用可能性。
本发明基于下述癫痫病的实验模型，其中通过施用匹鲁卡品，它是一种胆碱能拮抗剂，实现在老鼠中诱导大脑损伤。根据这一模型的最初描述，在或者老鼠或者小鼠体内注射匹鲁卡品之后约20-30天，开始自发性反复出现癫痫发作(Turski WA，CavalheiroEA，Schwarz M，Czuczwar SJ，Kleinrok Z and Turski L.由毛果芸香碱引起的大鼠肢体癫痫发作，《行为，脑电图和神经病理的研究》，行为性脑研究，9315-335，1983；MelloLEAM，Cavalheiro EA，Babb TL，Kupfer WR，Pretorius JK，Tan AM and Finch DM.在慢性癫痫的毛果芸香碱模型种癫痫发作的复发机理细胞的损失及苔藓样纤维的生长，《癫痫》34985-995，1993)。由于其特殊特征，匹鲁卡品模型是目前在癫痫病研究中3个最广泛使用的实验模型之一。
直到最近，还没有在匹鲁卡品或癫痫病的类似模型中在防止进一步形成癫痫病方面显示出有效性的实验方法。在采用抗毒覃碱化合物，特别是采用比哌立登的目前的工作中，证明在匹鲁卡品损伤之后其预防用途显著延迟或甚至抑制自发性反复癫痫发作，即癫痫病的开始。在最终保持并发生癫痫反复发作的那些动物中，与未用比哌立登治疗的动物相比，这些动物的癫痫发作频率显著较低。
比哌立登与阿托品一起是经典的胆碱能拮抗剂，且已知阻断毒覃碱受体。这些药物因其能阻断胆碱能传递而被公知，否则所述胆碱能将通过毒覃碱受体介导被传递。对于我们的实验来说，我们使用Wistar的雄性成年老鼠，这些老鼠在温度、光/暗循环都受控制的条件下被饲养且最多6只动物一组地保存在具有自由通向自来水和老鼠食物粒料的聚丙烯盒中。老鼠腹膜内施用320mg/kg剂量的匹鲁卡品以诱导癫痫状态。
正如所预期的，全身施用匹鲁卡品导致的结果是行为改变，如运动不能、身体震颤和/或头部的肌阵孪反射和伴随大量唾液的口脸刻板动作。癫痫发作状态，这是一种不停的癫痫发作状态的疾病，在注射匹鲁卡品之后平均19±5分钟发生。在开始癫痫发作状态之后3小时，在实验组内的动物(n＝10)腹膜内注射第一最初剂量的比哌立登(8mg/kg)。该剂量代表在啮齿类动物中诱发记忆损伤所需的浓度(Roldan G，Bolanos-BadilloE，Gonzales-Sanches H，Quirarte GL and Prado-Alcala RA JW.选择性的M1毒覃碱受体拮抗剂破坏老鼠的抑制性逃避的记忆强化.Neurosci.Lett.，230，23093-6，1997)。
当其半衰期为24±1.2小时时，每8小时给予比哌立登，以便于在10天的总治疗过程中，维持稳定的治疗水平。对于对照组内的动物(n＝6)，在开始癫痫发作状态之后2小时，按照类似的方案开始施用灭菌盐水溶液(0.9％NaCl)，而不是比哌立登。
在癫痫病的匹鲁卡品模型中，在施用匹鲁卡品并诱导癫痫病状态之后数周，只要使动物存活着，则该动物出现反复的自发性癫痫发作状态。据认为，这种癫痫病况充分地模拟人类的一些类型的癫痫发作状态且能紧密地反映在创伤后癫痫病中发生的一系列事件。
在诱导癫痫病状态之后的约15-20天，即自发性癫痫发作开始的潜伏期的报道持续时间，开始约12小时/周地用摄像机监控癫痫发作的行为。基于我们最初的假设，(用比哌立登治疗的)实验组或者具有显著的下降或者不显示出自发性癫痫发作，因此为了避免错误的负面结果，24小时/周地视频监控这些动物的取样速度。在诱导癫痫发作状态之后约120天视频监控这些动物。在29英寸宽的电视屏上常规地评估被记录的视频带，并记录对每一动物所观察到的癫痫发作。
对于对照组来说，视频记录时间开始的潜伏期为3.2±1.1周，因此在引发自发性癫痫发作所报道的时间内，和对于实验组来说，为6.0±1.1周，因此，比未治疗组的时间大2倍(表1)。对照组所出现的数值显著类似于已经在特征是匹鲁卡品模型的各种论文中报道的那些。这种类似性因此辅助我们证实我们监控自发性癫痫发作的程序。
表1对于实验组和对照组来说，第一次记录的自发性癫痫发作开始时的潜伏期的长度
数据用平均值±标准偏差的形式表达；p*＜0.03(Mann-Whitney)。
可以看出，表1表达的数据清楚地表明，在该模型中，所采用的治疗对自发性癫痫发作开始方面的保护效果。确实，实验组的平均潜伏期是对照组的2倍。若在人类的临床研究中可再现的话，这一效果单独已经代表了在控制创伤后的癫痫发作方面的巨大进步。
对照组与实验组在癫痫发作频率方面的比较确实也得到统计学上的显著差别(参见表2)。
表2实验组和对照组的自发性癫痫发作的频率
数据用平均值±标准偏差的形式表达；p*＜0.02(Mann-Whitney)。
表2清楚地表明，对照组的自发性癫痫发作的平均频率比(用比哌立登治疗的)实验组高2倍。然而，对于每次单独的癫痫发作来说，我们没有发现这两组之间在其定性或定量本质上的差别。因此，在其它特征方面，用比哌立登治疗也得到保护。
我们的结果表明，在严重的头部受伤之后共10天长期施用(例如连续灌注、多次施用、经皮施用)比哌立登可能具有减少或阻断随后形成癫痫病的可能性。本发明在人类上的可能用途自然必须依赖于临床试验，以确定合适的剂量和治疗的持续时间以实现最佳的结果。本发明的结果支持在人类出现严重的头部创伤之后立即采用比哌立登治疗的临床研究开发。如果严重的头部创伤的频率和强有力的临床证据将该事件与随后形成癫痫病相关联，则应当不难以招聘所需数量的患者进行初步评估所提议的治疗方案。最后，重要的是记住目前得不到可能用于这一疾病的治疗方案。
权利要求
1.抗毒覃碱药物的用途，其特征在于，这种药物用于制备能阻滞癫痫病发展的化合物。
2.根据权利要求1中所述的抗毒覃碱药物的用途，其特征在于，这种药可在严重的头部创伤意外之后使用。
3.根据权利要求1中所述的抗毒覃碱药物的用途，其特征在于，这种药可在切除致癫痫本性的解剖学结构的外科手术之后使用。
4.根据权利要求1中所述的抗毒覃碱药物的用途，其特征在于，这种药可在一段癫痫发作状态之后使用。
5.根据权利要求1中所述的比哌立登的用途，其特征在于，所述的比哌立登用于制备能阻滞癫痫病发展的化合物。
6.根据权利要求5中所述的比哌立登的用途，其特征在于，所述的比哌立登可在严重的头部创伤意外之后使用。
7.根据权利要求5中所述的比哌立登的用途，其特征在于，所述的比哌立登可在切除致癫痫本性的解剖学结构的外科手术之后使用。
8.根据权利要求5中所述的比哌立登的用途，其特征在于，所述的比哌立登可在一段癫痫发作状态之后使用。
全文摘要
抗毒覃碱药物，特别是比哌立登，作为药物的用途，用于防止在癫痫病状态的病况、严重头部创伤之后可能随之发生的那些，所述的头部创伤包括因神经外科创伤和大脑的急性损伤事件引起的那些。
文档编号A61KGK1753660SQ200480004992
公开日2006年3月29日 申请日期2004年2月25日 优先权日2003年2月24日
发明者路易斯·欧热尼奥·阿劳若·德梅洛, 西蒙娜·卡斯特罗皮尔·贝纳西, 克里斯蒂娜·高卡泰, 克里斯蒂娜·岗克乌兹·马桑特 申请人:圣保罗州研究奖励基金会, 圣保罗州联邦大学