专利名称：治疗动脉粥样硬化、血脂异常及相关病症的方法和药物组合物的制作方法
背景技术：
烟酸(吡啶-3-羧酸)是以其升高高密度脂蛋白(HDL)的血清浓度的作用而普遍闻名的药物。然而，烟酸常常伴随着皮肤的血管扩张，有时称作潮红。这一副作用是由烟酸诱发前列腺素D2在皮肤中释放造成的，而且严重得很多患者中断烟酸治疗。本发明涉及通过联合服用烟酸或另一种烟酸受体激动剂与一种能减少或消除否则会发生的皮肤血管扩张的化合物，治疗动脉粥样硬化、血脂异常、糖尿病及相关病症，使得治疗能够进行而没有显著的潮红。对于人类，这是通过服用烟酸或烟酸受体激动剂与一种拮抗DP受体的化合物来实现的。
有各种不同的受体亚型与前列腺素D2相互作用。一种前列腺素D2受体称作“DP”，另一种前列腺素D2受体称作“CRTH2”。本发明利用DP受体的拮抗作用来防止、减小或降低否则可能发生的潮红。
因此，本发明的一个目的是消除或者减少在用烟酸或其它烟酸受体激动剂治疗人类的动脉粥样硬化、血脂异常、糖尿病及相关病症期间作为副作用的显著的潮红(频率和/或严重性)。
本发明的另一目的是提供将副作用一般减至极小的动脉粥样硬化联合疗法。
再一目的是提供一种用于口服的固定的联合药物组合物。
这些及其它目的将在本申请提供的说明中显而易见。
发明内容
提供了一种对需要治疗的人类患者治疗动脉粥样硬化的方法，该方法包括对患者施用烟酸或其盐或溶剂化物，或另一种烟酸受体激动剂，以及一种DP受体拮抗剂，其数量能有效地治疗动脉粥样硬化而不产生明显的潮红。
附图简介本发明将联系附图进行说明，其中
图1表示化合物D抑制小鼠内前列腺素D2诱发的血管扩张；图2表示化合物D抑制小鼠内烟酸诱发的血管扩张。
图3表示所选择的其它化合物抑制小鼠内烟酸诱发的血管扩张。
发明详述烟酸或尼克酸(吡啶-3-羧酸)是一种药物，通常以其提高高密度脂蛋白(HDL)含量及脂质分布的其它有利变化(降低极低密度脂蛋白(VLDL)，低密度脂蛋白(LDL)，甘油三酯，游离脂肪酸(FFA)和脂蛋白(a)[Lp(a)])等作用而闻名。当对人施以治疗有效剂量，例如每天约50mg至高达约8g时，烟酸使HDL水平升高。然而，烟酸常伴有皮肤血管扩张，也称作潮红。潮红通常带来皮肤变红，并伴有发热、发痒或刺痛。它会极其令人不快，而且能严重得使很多患者中断烟酸治疗。本发明涉及用烟酸或其盐或溶剂化物，或另一种烟酸受体激动剂，治疗、预防或逆转动脉粥样硬化及本申请中描述的其它疾病和症状，而没有明显的潮红。对于人类，这是通过服用烟酸或其盐或溶剂化物，或另一种烟酸受体激动剂，与一种拮抗DP受体的化合物而实现的，从而防止、降低或减小了潮红现象的频率和/或严重性。
至少有两种与前列腺素D2相互作用的受体，称作“DP”或“CRTH2”。本发明主要涉及用来与DP受体拮抗剂联合使用的烟酸或烟酸受体激动剂。
本发明的一个有意义的方面是一种对于有治疗需要的人类患者治疗动脉粥样硬化的方法，该方法包括对患者施用烟酸或其盐或溶剂化物，或另一种烟酸受体激动剂，以及一种DP受体拮抗剂，其数量能有效地治疗动脉粥样硬化而不发生明显的潮红。
本发明的另一个有意义的方面是一种提高有治疗需要的人类患者的血清HDL水平的方法，该方法包括对患者施用烟酸或其盐或溶剂化物，或另一种烟酸受体激动剂，以及一种DP受体拮抗剂，这一组合能有效地提高患者的血清HDL水平而不发生明显的潮红。
本发明的另一个有意义的方面涉及治疗有治疗需要的人类患者的血脂异常的方法，该方法包括对患者施用烟酸或其盐或溶剂化物，或另一种烟酸受体激动剂，以及一种DP受体拮抗剂，其数量能有效治疗血脂异常而不发生明显的潮红。
本发明的另一个有意义的方面涉及一种对于有治疗需要的人类患者降低血清VLDL或LDL水平的方法，包括对患者施用烟酸或其盐或溶剂化物，或另一种烟酸受体激动剂，以及一种DP受体拮抗剂，其数量能有效降低患者的血清VLDL或LDL水平而不发生明显的潮红。
本发明的另一个有意义的方面涉及一种对于有治疗需要的人类患者降低血清甘油三酯水平的方法，包括对患者施用烟酸或其盐或溶剂化物，或另一种烟酸受体激动剂，以及一种DP受体拮抗剂，其数量能有效降低患者的血清甘油三酯水平而不发生明显的潮红。
本发明的另一个有意义的方面涉及一种对于有治疗需要的患者降低血清Lp(a)水平的方法，包括对患者施用烟酸或其盐或溶剂化物，或另一种烟酸受体激动剂，以及一种DP受体拮抗剂，其数量能有效降低患者的血清Lp(a)水平而不发生明显的潮红。这里所说的Lp(a)是指脂蛋白(a)。
本发明的一个特别有意义的方面涉及上述的各种方法中使用烟酸或其盐或溶剂化物。尤其有意义的是使用烟酸。在另一个有意义的方面，该DP受体拮抗剂以能有效减少或防止患者潮红现象的数量选择性地调制PD受体。
本发明的另一个特别有意义的方面涉及上述的各个方法，其中使用烟酸，而且DP受体拮抗剂选择性地调制DP受体，而基本上不调制CRTH2受体。
本发明的另一个特别有意义的方面涉及一种治疗有治疗需要的人类患者的动脉粥样硬化、血脂异常、糖尿病或相关病症的方法，包括对患者施用烟酸或其盐或溶剂化物，或另一种烟酸受体激动剂，以及一种DP受体拮抗剂，该联合药物以能够有效治疗动脉粥样硬化、血脂异常、糖尿病或相关病症的数量给药而不引起明显潮红。
本发明的一个方面是DP受体拮抗剂化合物与烟酸或其盐或溶剂化物、或与另一种烟酸受体激动剂，联合用于治疗人类的动脉粥样硬化而不发生明显的潮红。
本发明的另一个特别有意义的方面涉及上述方法，其中DP受体拮抗剂是选自化合物A至AJ及其可药用盐和溶剂化物。
特别适用于选择性拮抗DP受体和抑制潮红现象的化合物实例包括以下化合物及其可药用盐和溶剂化物
这里所说的动脉粥样硬化是血管疾病的一种形式，其特点是在大和中等尺寸的动脉壁的最内层上沉积含有胆固醇和脂质的粥样斑块。动脉粥样硬化包括在相关医学领域工作的医师认识和了解的血管疾病的症状。粥样硬化心血管病(包括血运重建手术后的再狭窄、冠心病(也称作冠状动脉病或缺血性心脏病))，脑血管病(包括多发性脑梗塞痴呆)以及外周血管病(包括勃起动能障碍)，都是动脉粥样硬化的临床表现，因此都包括在术语“动脉粥样硬化”和“粥样硬化病”之中。
“血脂异常”是在常规意义上使用，指血浆脂类的含量反常，例如HLD(低)、LDL(高)、VLDL(高)、甘油三酯(高)、脂蛋白(a)(高)、FFA(高)和其它血清脂类含量反常，或它们的组合。它可以是无并发症的疾病，或是某种特定的相关疾病或症状例如糖尿病(糖尿病血脂异常)、代谢综合症等的一部分。因此，无并发症的血脂异常及与基础病症相联系的血脂异常都包括在本发明之内。
“患者”一词包括使用本发明活性药物预防或治疗医学病症的哺乳动物，尤其是人。对患者给药包括自身服药和由他人对患者给药。患者可以是需要治疗现有的疾病或医学症状，也可以是希望防止或减少发生动脉粥样硬化风险的预防性治疗。
“治疗有效量”一词是指引起所期望的生物或医学响应的药物数量。例如，烟酸常以每天约50mg至约8g的剂量给药。
术语“预防有效量”和“对于防止有效的数量”是指将会防止或降低要防止的生物或医学事件的发生风险的药物数量。在很多情形，预防有效量与治疗有效量相同。
这里描述的本发明包括服用本文所述的化合物和组合物以防止或降低冠心病、脑血管病和/或间歇性跛行的发生风险，或可能存在的复发风险。冠心病事件包括CHD死亡、心肌梗死(即心脏病发作)，和冠状血管重建。脑血管事件包括缺血性或出血性卒中(也称作脑血管意外)和暂时性缺血发作。间歇性跛行是外周血管病的临床表现。这里使用的术语“粥样硬化病事件”包括冠心病事件、脑血管事件和间歇性跛行。对于先前已经历过一次或多次非致命性粥样硬化病事件的人，存在着再发生此类事件的可能性。
因此，本发明还提供了一种防止或降低首次或后继发生动脉粥样硬化事件的方法，包括对有发生此类病症的患者服用预防有效量的本文所述化合物，同时又防止或减小明显的潮红。患者可以是在服药时已经患有粥样硬化病，也可以是有发生该病的危险。
该方法还涉及防止或减缓新的粥样硬化损伤或斑块形成，防止或减缓现有的损伤或斑块的发展，以及使现有的损伤或斑块消退，同时又防止或减小明显的潮红。
因此，本发明的一个方面涉及一种阻停或减缓动脉粥样硬化的发展，包括阻停或减缓动脉粥样硬化斑块的发展的方法，该方法包括对需要这一治疗的患者联合施用治疗有效量的本文所述任何DP拮抗剂和烟酸或其它烟酸受体激动剂。这一方法还包括阻停或减缓在开始本治疗方法时已存在的粥样硬化斑块(即，“已有的粥样硬化斑块”)的发展，以及阻停或减缓患有动脉粥样硬化的患者的新的粥样硬化斑块的形成。
本发明的另一方面涉及一种防止或降低粥样硬化斑块破裂的危险，该方法包括对有治疗需要的患者服用预防有效量的本文所述任何化合物及烟酸或其它烟酸受体激动剂。这里所说的破裂，是指斑块的破裂松动，它可能卡在血管里。本发明的另一方面涉及一种防止或降低发生动脉粥样硬化的方法，包括对需要治疗的患者施用预防有效量的本文所述化合物。
本发明的另一方面涉及一种治疗或预防动脉粥样硬化、血脂异常或相关病症的方法，包括用抑制或减小潮红有效数量的DP受体拮抗剂对需要这种治疗的患者进行预治疗，然后用烟酸、其盐或溶剂化物或另一种烟酸受体激动剂，以能有效治疗或预防动脉粥样硬化、血脂异常或相关病症而不引起明显潮红的数量治疗患者。
本发明的另一方面涉及以上所述的方法，其中还包括用HMG Co-A还原酶抑制剂对患者进行预治疗或治疗。
本发明的另一方面涉及一种治疗或预防以上所述病症的方法，其中HMG Co-A还原酶抑制剂是辛伐他汀。
本文所述方法的一个方面涉及使用数量能实现所述效果的烟酸或其它烟酸受体激动剂化合物，以及选择性调制DP受体而基本上不调制CRTH2受体的DP受体拮抗剂。例如，该DP受体拮抗剂体在DP受体上的亲合性(即Kj)比在CRTH2受体上的亲合性至少高约10倍(Kj数值较低)。与DP按照这些原则选择性相互作用的任何化合物均被认为是“DP选择性的”。
短语“不发生明显潮约”是指在服用治疗数量的烟酸时常常看到的副作用。烟酸的潮红作用常常随患者对治疗剂量的药物产生耐药性而变得不太频繁和不太严重，但潮红现象仍有某种程度的发生。因此，“不发生明显潮红”是指当发生潮红时其严重程度降低，或者较原来的发生次数减少。优选的是，潮红的发生减少至少约三分之一，更优选减少一半，最好是减少约三分之二或更多。类似地，严重性优选减少约三分之一，更优选减少至少一半，最好是至少约三分之二。显然最优选的是潮红的发生和严重性减少100％，但并不要求这样。
对于任何特定的患者，具体的剂量方案和水平取决于多种因素，包括年龄、体重、一般健康情况、性别、饮食、用药时间、用药途径、排泄速度、药物联合和患者症状的严重程度。对这些因素的考虑完全在普通的专业临床医师的权限之内，以便确定为了防止、对抗或减缓症状的发展所需要的治疗有效剂量或预防有效剂量。预期所述化合物将每日服用一段适当的时间，以便治疗或防止与患者相关的医学症状，包括治疗过程持续几个月、几年甚至患者的一生。
可以与本发明化合物一起服用一种或多种其它活性药物。这些另外的活性药物可以是脂质调节化合物或具有其它药物活性的药剂，或既具有调脂作用、又有其它药物活性的药剂。可以使用的另外这些活性药物的实例包括但不限于HGM-CoA还原酶抑制剂，这包括其内酯化的或二羟基开链酸型的他汀类药物及其可药用的盐和酯，包括但不限于洛伐他汀(见美国专利4,342,767)，辛伐他汀(见美国专利4,444,784)，二羟基开链酸或辛伐他汀，特别是其铵或钙盐，普伐他汀，特别是其钠盐(见美国专利4,346,227)，氟伐他汀，特别是其钠盐(见美国专利5,354,772)，阿托伐他汀，特别是其钙盐(见美国专利5,273,995)，匹伐他汀，也称作NK-104(见PCT国际专利WO97/23200)，以及罗苏伐他汀，也称作ZD-4522(CRESTOR；见美国专利5,260,440)；HMG-CoA合成酶抑制剂；角鲨烯环氧酶抑制剂；角鲨烯合成酶抑制剂；脂酰辅酶A胆固醇酰基转移酶(ACAT)抑制剂，包括ACAT-1或ACAT-2的选择性抑制剂，以及ACAT-1和2的双重抑制剂；微粒体甘油三酯转移蛋白(MTP)抑制剂；内皮脂肪酶抑制剂；胆酸螯合剂；LDL受体诱导物；血小板聚集抑制剂，例如糖蛋白IIb/IIIa血纤蛋白原受体拮抗剂和阿斯匹林；人过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)激动剂，包括通常称作格列酮例如吡格列酮和罗西格列酮的化合物，并包括称作为噻唑烷二酮的结构类别内的那些化合物及在噻唑烷二酮结构类别外的那些PPARγ激动剂；PPARα激动剂，例如，氯贝特、非诺贝特(包括微粒化非诺贝特)和吉非贝齐；PPAR双重α/γ激动剂；维生素B6(也称作pyridoxine)及其可药用盐如HCl盐；维生素B12(也称作氰钴胺)，叶酸或其可药用盐或酯，例如钠盐和甲基葡糖胺盐；抗氧化维生素，例如维生素C和E和β胡罗卜素；β-阻断剂；血管紧张素II拮抗剂，如氯沙坦；血管紧张素转化酶抑制剂，例如依那普利和卡托普利；肾素抑制剂，钙通道阻断剂如硝苯地平和地尔硫；内皮素拮抗剂；增强ABCA1基因表达的试剂；胆固醇酯转移蛋白(CETP)抑制化合物，5-脂氧合酶活化蛋白(FLAP)抑制化合物，5-脂氧合酶(5-LO)抑制化合物，类法尼醇X受体(FXR)配体，包括拮抗剂和激动剂；肝X受体(LXR)-α配体，LXR-β配体，二膦酸盐化合物如阿仑膦酸钠；环加氧酶-2抑制剂，如罗非考昔和塞来考昔；以及消退血管发炎的化合物。
胆固醇吸收抑制剂也可用于本发明。这些化合物阻断胆固醇从肠腔向小肠壁的肠细胞内的运动，从而降低血清胆固醇含量。胆固醇吸收抑制剂的实例描述于US 5,846,966、5,631,365、5,767,115、6,133,001、5,886,171、5,856,473、5,756,470、5,739,321、5,919,672和PCT申请NO.WO 00/63703、WO 00/60107、WO 00/38725、WO 00/34240、WO 00/20623、WO 97/45406、WO 97/16424、WO 97/16455和WO 95/08532。最值得指出的胆固醇吸收抑制剂是伊泽替米贝，也称作1-(4-氟苯基)-3(R)-[3(S)-(4-氟苯基)-3-羟基丙基)1-4(S)-(4-羟基苯基)-2-吖丁啶酮，描述于美国专利5,767,115和5,846,966。
胆固醇吸收抑制剂的治疗有效量包括剂量从每天约0.01/mg/kg至约30mg/kg体重，优选为约0.1mg/kg至约15mg/kg体重。
对于糖尿病患者，本发明中使用的化合物可以与常用的糖尿病药物一起服用。例如，按受本文所述治疗的糖尿病患者还可以服用胰岛素或口服的抗糖尿病药物。适合本发明的口服抗糖尿病药物的一个实例是二甲双胍。
剂量信息本发明中使用的烟酸是指吡啶-3-羧酸。然而，对于在本发明中使用，还包括烟酸的盐和溶剂化物，而且烟酸的许多可药用盐和溶剂化物可用于本发明。碱金属盐，特别是钠盐和钾盐，是适用的盐。同样，碱土金属盐，特别是钙和镁盐，也是适用的盐。各种胺盐，例如铵和取代的铵化合物，也构成了适用的盐。类似地，烟酸的溶剂化形式在本发明范围内适用。其实例包括半水合物，一、二、三和倍半水合物。对于在本发明中使用，最有意义的是游离酸，吡啶-3-羧酸。
这里所述的DP拮抗剂可用于减小或防止哺乳动物患者，特别是人的潮红现象，其剂量从低至约0.01mg/kg/天直至高达约100mg/kg/天，以单剂量或分剂量逐日给药。优选该剂量为约0.1mg/天至高达约1.0g/天，以单剂量或分剂量每日给药。
本发明所述的可用的烟酸剂量范围是从低至约50mg/天直至高达约8g/天，每日单剂量或分剂量给药。最初可采用较低的剂量并增加剂量以进一步减小潮红作用。
烟酸之外的烟酸受体激动剂的剂量在很宽的范围内变化。一般，可用于治疗动脉粥样硬化的烟酸受体激动剂是以低至约0.01mg/kg/天至高达约100mg/kg/天的范围，按单剂量或分剂量给药。代表性的剂量是约0.1mg/天到约2g/天。
本发明中使用的化合物可以通过任何常规的给药途径给药。优选的给药途径是口服。
烟酸，其盐或溶剂化物，若其它的烟酸受体激动剂以及DP拮抗剂，可以一起或顺序地按每日单次或多次(例如每日二、三或四次)给药而不背离本发明。如果希望特别长的持续释放，可以每隔一天服用例如释放型或超过24小时的持久释放产口。然而，优选每日单次给药。同样，可以早晨或晚上用药。
药物组合物这里描述的药物组合物一般含有烟酸或另一种烟酸受体激动剂，一种DP受体拮抗剂和一种可药用的载体。
合适的口服组合物的实例包括片剂、胶囊、含片、锭剂、混悬剂、可分散粉剂或粒剂、乳剂、糖浆剂或酏剂。载体成分的实例包括稀释剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂、甜味剂、调味剂、着色剂、防腐剂等。稀释剂的实例包括例如碳酸钙、碳酸钠、乳糖、磷酸钙和磷酸钠。成粒和崩解剂的实例，包括玉米淀粉和藻酸。粘合剂的实例包括淀粉、明胶和阿拉伯胶。润滑剂的实例包括硬脂酸镁、硬脂酸钙、硬脂酸和滑石。片剂可以是不包衣的或用已知技术包衣。这种包衣可以延迟崩解并从而延迟在胃肠道中的吸收，提供较长一般时间的持久作用。
在本发明的一项实施方案中，烟酸或其盐或溶剂化物，或另一种烟酸受体激动剂，与DP受体拮抗剂及载体组合，形成一种固定的组合产品。这种固定的组合产品可以是用于口服的药片或胶囊。
更具体地说，在本发明的另一实施方案中，烟酸或其盐或溶剂化物，或另一种烟酸受体激动剂(约1-1000mg)，和DP拮抗剂(约1-500mg)，与药用载体相结合，形成用于口服的药片或胶囊。
持续释放较长时间在烟酸药物制剂中可能特别重要。特别优选地是持久释放的片剂。例如，可以使用一种延时材料例如甘油单硬脂酸酯或甘油二硬脂酸酯。该剂型也可以用US 4,256,108、4,166,452和4,265,874中所述的技术包衣，以形成用于控制释放的渗透治疗片剂。
还有其它的可控释放技术可供利用并包括在本发明中。可用来减慢持久释放片剂中烟酸释放速度的典型成分包括各种纤维素化合物，例如甲基纤维素、乙基纤维素、丙基纤维素、羟丙基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、微晶纤维素、淀粉等。各种天然和合成物质也可用于持久释放制剂中。实例包括藻酸和各种藻酸盐、聚乙烯吡咯烷酮、黄蓍胶、剌槐豆胶、瓜尔胶、明胶、各种长链醇(例如十六烷醇)和蜂蜡。
一种特别有意义的持久释放片剂使用烟酸与一种或多种上述纤维素化合物组合，压制成持久释放的片剂以形成聚合物基质。DP拮抗剂化合物可以在压制前掺加到掺混物中，或者包覆在该基质的外表面。
在更有意义的一项实施方案中，将烟酸和形成基质的物质组合并压制成持久释放的核心，DP拮抗剂化合物与一种或多种包衣剂混合，包覆在该核心的外表面上。
任选地并且更有意义的是上述的一种片剂，它还包覆着一种HMGCo-A还原酶抑制剂，例如，辛伐他汀。于是这一具体方案包含三种活性成分，可以在摄入时大量释放的HMG Co-A还原酶抑制剂和DP拮抗剂，以及如上所述可以在更长一般时间释放的烟酸。
对于符合本发明的持久释放片剂，典型的释放时间是从约1小时到长至约48小时，优选为约4小时至约24小时，更优选为约8-16小时。
硬明胶胶囊构成用于口服的另一类固体剂型。这种胶囊类似地也包含与上述载体物质混合的活性成分。软明胶胶囊包括与水混溶性溶剂如丙二醇、PEG和乙醇，或与油类如花生油、液体石蜡或橄榄油，混合的活性成分。
水基混悬剂也在考虑之内，它在具有适合制备水基混悬剂的赋形剂的混合物中含有活性物质。这些赋形剂包括悬浮剂，例如羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、藻酸钠、聚乙烯吡咯烷酮、黄蓍胶和阿拉伯胶；分散剂或润湿剂，例如，卵磷脂；防腐剂，例如对羟基苯甲酸乙酯或正丙酯；着色剂，香味剂，甜味剂等。
适合通过加水制备水基混悬剂的可分散粉剂和粒剂提供了与分散剂或润湿剂、悬浮剂和一种或多种防腐剂混合的活性成分。合适的分散或润湿剂及悬浮剂是以上已经举例说明的那些。
也可以配制成浆剂或酏剂特别有意义的药物组合物是持久释放的片剂，其中含有与可药用的载体组合的烟酸或其盐或溶剂化物及一种DP受体拮抗剂。
特别有意义的另一种药物组合物是一种持久释放的片剂，其中含有与可药用载体组合的烟酸或其盐或溶剂化物，一种DP受体拮抗剂，及一种HMG Co-A还原酶抑制剂。
更有意义的另一种药物组合是一种持久释放的片剂，其中含有与可药用载体组合的烟酸，一种DP受体拮抗剂和辛伐他汀。
特别有意义的另一种药物组合物是一种持久释放的片剂，其中含有与可药用载体组合的烟酸和一种选自化合物A至AJ的DP受体拮抗剂。
更有意义的另一种药物组合物含有与可药用载体组合的烟酸和选自化合物A、B、D、E、X、AA、AF、AG、AH、AI和AJ的一种DP拮抗剂化合物。
特别有意义的另一种药物组合物含有与可药用的载体组合的烟酸和DP拮抗剂化合物A。
更有意义的另一种药物组合物含有与可药用的载体组合的烟酸和DP拮抗剂化合物B。
更有意义的另一种药物组合物含有与可药用的载体组合的烟酸和DP拮抗剂化合物D。
更有意义的另一种药物组合物含有与可药用的载体组合的烟酸和DP拮抗剂化合物E。
更有意义的另一种药物组合物含有与可药用的载体组合的烟酸和DP拮抗剂化合物X。
更有意义的另一种药物组合物含有与可药用的载体组合的烟酸和DP拮抗剂化合物AA。
更有意义的另一种药物组合物含有与可药用的载体组合的烟酸和DP拮抗剂化合物AF。
更有意义的另一种药物组合物含有与可药用的载体组合的烟酸和DP拮抗剂化合物AG。
更有意义的另一种药物组合物含有与可药用的载体组合的烟酸和DP拮抗剂化合物AH。
更有意义的另一种药物组合物含有与可药用的载体组合的烟酸和DP拮抗剂化合物AI。
更有意义的另一种药物组合物含有与可药用的载体组合的烟酸和DP拮抗剂化合物AJ。
更有意义的另一种药物组合物含有与可药用的载体组合的烟酸，上述的一种DP拮抗剂和辛伐他汀。
更有意义的另一种药物组合物含有与可药用的载体组合的烟酸，选自化合物A至AJ的一种DP受体拮抗剂和辛伐他汀。
更有意义的另一种药物组合物含有和可药用的载体组合的烟酸，选自化合物A、B、D、E、X、AA、AF、AG、AH、AI和AJ的一种DP拮抗剂和辛伐他汀。
术语“组合物”除了包括上述的药物组合物以外，还包括直接或间接地由任何两种或多种成分(活性成分或赋形剂成分)的组合、复合或聚集，或由一种或多种成分的解离，或由一种或多种成分的其它类型的反应或相互作用，形成的任何产物。因此，本发明的药物组合物包括通过将化合物、任何附加的活性成分和可药用赋形剂混合或者组合制成的任何组合物。
本发明的另一方面涉及烟酸或其盐或溶剂化物，或另一种烟酸受体激动剂，以及一种DP拮抗剂，在制造药物中的应用。该药物具有本文所述的用途。
更具体地说，本发明涉及烟酸或其盐或溶剂化物，或另一种烟酸受体激动剂，一种DP拮抗剂和一种HMG Co-A还原酶抑制剂如辛伐他汀，在制造药物中的应用。该药物具有本文所述的用途。
除了作为烟酸受体激动剂的基准的烟酸，已经提到许多种烟酸受体激动剂。以下出版物公开了作为烟酸受体激动剂的化合物Lorenzen，A.et al.Molecular Pharmacology 59349-357(2001)，Lorenzen，A.et al.Biochemical Pharmacology 64645-648(2002)，Soga，T.et al.Biochemical and Biophysical Research Comm.303364-369(2003)，Tunaru，S.et al.Nature Medicine 9352-355(2003)，Wise，A.et al.Journal of Biological Chemistry 2789869-9874(2003)，和Van Herk，T.et al Journal of Medicinal Chemistry 463945-3951(2003).
应该指出，烟酸受体的部分激动剂，例如在van Herk等的文献中公开的那些，也打算包括在本发明组合物和治疗方法中。
另外，在WO 02/084298A2(2002年10月24日公布)和Soga，T.等、Tunaru，S等和Wise，A等的文献(上面引用的)中确认和鉴定了烟酸受体。
许多DP受体拮抗剂化合物已经公布，它们适用于并被包括在本发明的方法中。例如DP受体拮抗剂可以根据以下专利文献得到2001年10月25日公布的WO 01/79169，2003年5月2日公布的EP 1305286，2002年11月28日公布的WO 02/094830，和2003年7月31日公布的WO 03/062200。化合物AB可以根据2001年9月13日公布的WO01/66520A1中的说明来合成；化合物AC可以根据2003年3月20日公布的WO 03/022814A1中的描述来合成，化合物AD和AE可以根据2003年9月25日公布的WO 03/078409中的说明来合成。本发明中使用的其它代表性的DP拮抗剂化合物可以根据下面提供的实施例合成。
实施例1[5-[(4-氯苯基)硫代]-4-(甲基磺酰)-6，7，8，9-四氢吡啶并[3，2-b]吲嗪-6-基]乙酸(化合物G) 步骤14-氯烟碱醛此标题化合物按照F.Marsais等，J.Heterocyclic Chem.，25，81(1988)中所述制备。
步骤24-(甲硫基)烟碱醛向NaSMe(9.5g.135mmol)在MeOH(250ml)中的溶液加入步骤1的40氯烟碱醛(13.5g，94.4mmol)在MeOH(250ml)中的溶液。将反应混合物在60℃保持15分钟，然后倒在NH4Cl和EtOAc上。分离出有机相，用水洗，用Na2SO4干燥。然后将化合物在硅胶上用50％ EtOAc/己烷纯化，得到标题化合物。
步骤3(2Z)-2-叠氮基-3-[4-(甲硫基)吡啶-3-基]丙-2-烯酸甲酯在-12℃将4-(甲硫基)烟碱醛(4.8g，31mmol)和叠氮乙酸甲酯(9.0g，78mmol)在MeOH(50ml)中的溶液加到25％ NaOMe甲醇溶液(16.9ml，78mmol)中。监测内温并在30分钟的加料期间保持-10℃至-12℃。然后将形成的混合物在冰浴中搅拌几小时，随后在冷室内于冰浴中过夜。将该悬浮液倒在冰和NH4Cl的混合物上，搅拌10分钟后将浆体过滤。产物用冷水洗，然后真空干燥，得到标题化合物，为棕灰色固体(7.4g)，其中含一些盐。然后将该化合物在硅胶上用EtOAc纯化。
步骤44-(甲硫基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-2-羧酸甲酯将步骤3的化合物(0.40g，1.6mmol)在二甲苯(16ml)中的悬浮液慢慢加热至140℃。在140℃15分钟后，将该黄色溶液冷却至室温。由于形成氮而可能放热，必须小心。将悬浮液冷却至0℃，过滤，用二甲苯洗，得到标题化合物。
步骤54-(甲硫基)-6-氧代-6，7，8，9-四氢吡啶并[3，2-b]吲嗪-7-羧酸乙酯在0℃下向步骤4化合物(0.35g，1.6mmol)在DMF(20ml)中的溶液加入NaH(1.2eq)。5分钟后加入碘化四正丁铵(0.10g)和4-溴丁酸乙酯(0.40ml)。室温下1小时后，将反应混合物倒在饱和NH4Cl和EtOAc上。分离出有机相，用水洗，用Na2SO4干燥。蒸发后将粗产物用快速色谱法纯化。然后将该二酯溶于THF(7.0ml)在0℃下加入1.06M的叔丁醇钾THF溶液(2.2ml)。室温下1小时后，将反应混合物倒在饱和NH4Cl和EtOAc上。分离出有机相，用Na2SO4干燥，减压蒸发，得到标题化合物，为乙酯和甲酯的混合物。
步骤64-(甲硫基)-8，9-二氢吡啶并[3，2-b]吲嗪-6(7H)-酮向步骤5化合物(0.32g)加入EtOH(8.0ml)和浓盐酸(2.0ml)。形成的悬浮液回流5小时。将反应混合物分配在EtOAc和Na2CO3之中。分离有机相，蒸发后得到标题化合物。
步骤7(2E，2Z)-[4-(甲硫基)-8，9-二氢吡啶并[3，2-b]吲嗪-6(7H)-亚基]乙酸乙酯向膦酰乙酸三乙酯(0.45g，2.17mmol)的DMF溶液(12ml)中加入80％ NaH(0.06g，2.00mmol)和步骤6化合物(0.22g，1.00mmol)。在55℃4小时后，将反应混合物倒在饱和NH4Cl和EtOAc上。分离出有机相并减压蒸发。粗产物用快速色谱法纯化，得到标题化合物。
步骤8[4-(甲硫基)-6，7，8，9-四氢吡啶并[3，2-b]吲嗪-6-基]乙酸乙酯将步骤7化合物加热溶解在MeOH-THF中。在室温下向前面的冷却溶液加入PtO2，将形成的混合物在一大气压的氢气下维持18小时。反应混合物用CH2Cl2经硅藻土小心地过滤。将滤液减压蒸发，得到标题化合物。或者，步骤7的化合物可以在EtOAc中用Pd(OH)2在40psi的H2下氢化18小时。
步骤9[4-(甲磺酰基)-6，7，8，9-四氢吡啶并[3，2-b]吲嗪-6-基]乙酸乙酯向步骤8化合物(0.08g，0.27mmol)在MeOH(3.0mL)中的溶液加入Na2WO4(0.10g)和30％ H2O2(600μL)。1小时后将反应混合物分配在水和EtOAc之中。有机相用水洗，分离和蒸发。标题化合物用快速色谱法纯化。
步骤10[5-[(4-氯苯基)硫代]-4-(甲基磺酰)-6，7，8，9-四氢吡啶并[3，2-b]吲嗪-6-基]乙酸乙酯向4，4’二氯二苯基二硫醚(0.24g)的1，2-二氯乙烷溶液加入SO2Cl2(50μL)。向在DMF(2.0mL)中的步骤9化合物(0.05g)加入前面的混合物(≈180μL)。用1H NMR跟随反应并保持在室温，直至不再残留起始物。将反应混合物倒在饱和的NaHCO3和EtOAc上。分离有机相，蒸发，标题化合物用快速色谱法纯化。
步骤11[5-[(4-氯苯基)硫代]-4-(甲基磺酰基)-6，7，8，9-四氢吡啶并[3，2-b]吲嗪-6-基]乙酸向溶在1∶1的THF-MeOH混合物中的步骤10化合物加入1N NaOH。室温下18小时后，将反应混合物倒在NH4Cl和EtOAc之中。分离有机相，用Na2SO4干燥，蒸气，得到标题化合物。
1HNMR(500MHz，丙酮-d6)δ11.00(bs，1H)，8.60(d，1H)，7.80(d，1H)，7.20(d，2H)，7.00(d，2H)，4.65(m，1H)，4.20(m，1H)，3.75(m，1H)，3.35(s，3H)，2.80至2.10(m，6H).
实施例2[5-[(4-氯苯基)硫代]-4-(甲硫基)-6，7，8，9-四氢吡啶并[3，2-b]吲嗪-6-基]乙酸(化合物H) 标题化合物可以由实施例1步骤8的化合物，按照与实施例1步骤10和11中所述的类似方式制备。
实施例3[5-[(3，4-氯苯基)硫代]-4-(甲基磺酰基)-6，7，8，9-四氢吡啶并[3，2-b]吲嗪-6-基]乙酸(化合物I)
标题化合物按照实施例1中所述，用步骤10的二(3，4-二氯二苯基)二硫醚制备。
1H NMR(500MHz，丙酮-d6)δ8.55(d，1H)，7.85(d，1H)，7.35(d，1H)，7.15(s，1H)，6.95(d，1H)，4.60(m，1H)，4.15(m，1H)，3.80(m，1H)，3.40(s，3H)，2.80至2.10(m，6H).m/z 484.
对映体在一只Chiralecel OD柱(25cm×20mm)上分离，使用含30％异丙醇、17％乙醇和0.2％乙酸的己烷，流速8ml/分。其纯度用ChiralecelOD柱(25cm×4.6mm)证实，使用含30％异丙醇和0.2％乙酸的己烷，流速1.0ml/分。流出快的对映体Tr＝9.7分，流出慢的对映体Tr＝11.1分。
实施例4[5-(4-氯苯甲酰)-4-(甲基磺酰)-6，7，8，9-四氢吡啶并[3，2-b]吲嗪-6-基]乙酸(化合物J) 步骤1[5-(4-氯苯甲酰)-4-(甲硫基)-6，7，8，9-四氢吡啶并[3，2-b]吲嗪-6-基]乙酸乙酯向4-氯苯甲酰氯(0.30g，1.7mmol)在1，2-二氯乙烷(6.0mL)中的溶液加入AlCl3(0.24g，1.8mmol)。5分钟后，向前面的混合物加入实施例1步骤8的[4-(甲硫基)-6，7，8，9-四氢吡啶并[3，2-b]吲嗪-6-基]乙酸乙酯(0.15g，0.47mmol)在1，2-二氯乙烷(6.0mL)中的溶液。在80℃4小时后，将反应混合物分配在EtOAc和NaHNO3之中。分离有机相，用Na2SO4干燥，蒸发。标题化合物用快速色谱法纯化。
步骤2[5-(4-氯苯甲酰)-4-(甲基磺酰)-6，7，8，9-四氢吡啶并[3，2-b]吲嗪-6-基]乙酸乙酯向[5-(4-氯苯甲酰)-4-(甲硫基)-6，7，8，9-四氢吡啶并[3，2-b]吲嗪-6-基]乙酸乙酯(0.12g，0.27mmol)在MeOH(5.0mL)中的溶液加入Na2WO4(0.1g)和30％H2O2(300μL)反应混合物在55℃搅拌1小时，然后分配在水和EtOAc中。在机相用水洗，用Na2SO4干燥，蒸发。标题化合物用快速色谱法纯化。
步骤3[5-(4-氯苯甲酰)-4-(甲基磺酰)-6，7，8，9-四氢吡啶并[3，2-b]吲嗪-6-基]乙酸按照实施例1步骤11中所述，处理[5-(4-氯苯甲酰)-4-(甲基磺酰)-6，7，8，9-四氢吡啶并[3，2-b]吲嗪-6-基]乙酸乙酯，得到标题化合物。
1H NMR(500MHz，丙酮-d6)δ8.55(d，1H)，7.90(d，2H)，7.65(d，1H)，7.45(d，2H)，4.55(m，1H)，4.25(m，1H)，3.45(m，1H)，3.20(s，3H)，2.05至3.00(m，6H).m/z 446.
实施例5[5-(4-溴苯基)硫代]-4-(甲基磺酰)-6，7，8，9-四氢吡啶并[3，2-b]吲嗪-6-基]乙酸(化合物K) 标题化合物按实施例1中所述，用4，4’-二溴二苯基二硫醚制备。
1H NMR(500MHz，丙酮-d6)δ8.60(d，1H)，7.80(d，1H)，7.35(d，2H)，7.00(d，2H)，4.65(m，1H)，4.20(m，1H)，3.80(m，1H)，3.35(s，3H)，2.80至2.10(m，6H).
实施例6方法-1[9-[(3，4-二氯苯基)硫代]-1-(甲基磺酰)-7，8-二氢-6H-吡啶并[3，4-b]吡呤-8-基]乙酸(化合物L)
步骤12-(甲硫基)烟碱醛此标题化合物由2-溴烟碱醛(A.Numata Synthesis 1999 p.306)按照实施例1步骤2中所述制备，只是将溶液在55℃加热2小时。
步骤2(2Z)-2-叠氮基-3-[2-(甲硫基)吡啶-3-基]丙-2-烯酸甲酯标题化合物按照实施例1步骤3中所述制备。
步骤34-(甲硫基)-1H-吡咯并[3，2-c]吡啶-2-羧酸甲酯将(2Z)-2-叠氮基-3-[2-(甲硫基)吡啶-3-基]丙-2-烯酸甲酯(1.00g，4.00mmol)在1，3，5-三甲基苯(50mL)中于160℃加热1小时。将反应混合物冷却至室温，然后至0℃，滤出沉淀，用冷的1，3，5-三甲苯洗，得到标题化合物。
步骤41-(甲硫基)-8-氧代-7，8-二氢-6H-吡淀并[3，4-b]吡呤-7-羧酸甲酯向4-(甲硫基)-1H-吡咯并[3，2-c]吡啶-2-羧酸甲酯(0.30g，1.35mmol)在THF(3mL)/甲苯(12.0mL)中的悬浮液加入1.06M的叔丁醇钾THF溶液(1.42mL/1.41mmol)和丙烯酸甲酯(300μL)。将形成的混合物在80℃加热18小时。将混合物分配在EtOAc和NH4Cl之中，经硅藻土过滤。分离有机相，用Na2SO4干燥，过滤，得到标题化合物。
步骤51-(甲硫基)-6，7-二氢-8H-吡淀并[3，4-b]吡呤-8-酮按实施例1步骤6中所述，将1-(甲硫基)-8-氧代-7，8-二氢-6H-吡淀并[3，4-b]吡呤-7-羧酸甲酯转化成标题化合物。
步骤6[8-羟基-1-(甲硫基)-7，8-二氢-6H-吡淀并[3，4-b]吡呤-8-基]乙酸甲酯将1-(甲硫基)-6，7-二氢-8H-吡淀并[3，4-b]吡呤-8-酮(0.15g，0.68mmol)、溴乙酸甲酯(0.34mL)、Zn-Cu(0.226g)在THF(3.0mL)中的混合物超声2小时。然后将混合物在60℃加热5分钟直至反应完全。将反应混合物分配在EtOAc和NH4Cl之中。分离有机相，用Na2SO4干燥，过滤并减压蒸发，得到标题化合物。该化合物用快速色谱法纯化。
步骤7[1-(甲硫基)-7，8-二氢-6H-吡淀并[3，4-b]吡呤-8-基]乙酸甲酯向在3.2mL CH3CN内的NaI(0.300g)加入TMSCL(0.266mL)。将此混合物加到在水浴内的[8-羟基-1-(甲硫基)-7，8-二氢-6H-吡淀并[3，4-b]吡呤-8-基]乙酸甲酯(0.15g，0.515mmol)于CH3CN(1.5mL)中的悬浮液里。0.5小时后将反应混合物分配在EtOAct和NaHCO3中。分离出有机相，用硫代硫酸钠洗，用MgSO4干燥并蒸发。标题化合物用快速色谱法纯化。
步骤8[1-(甲基磺酰)-7，8-二氢-6H-吡啶并[3，4-b]吡呤-8-基]乙酸乙酯按实施例1步骤9中所述将[1-(甲硫基)-7，8-二氢-6H-吡啶并[3，4-b]吡呤-8-基]乙酸甲酯转化成标题化合物。
步骤9[9-[(3，4-二氯苯基)硫代]-1-(甲基磺酰)-7，8-二氢-6H-吡啶并[3，4-b]吡呤-8-基]乙酸按照实施例1步骤10和11中所述，使用步骤10中的二(3，4-二氯苯基)二硫醚，将[1-(甲基磺酰)-7，8-二氢-6H-吡啶并[3，4-b]吡呤-8-基]乙酸甲酯转化成标题化合物。
1H NMR(500MHz，丙酮-d6)δ8.35(d，1H)7.80(d，1H)，7.35(d，1H)，7.15(s，1H)，6.95(d，1H)，4.55(m，1H)，4.35(m，1H)，3.90(m，1H)，3.30(s，3H)，3.15(m，1H)，3.05(m，1H)，2.80(m，1H)，2.50(m，1H).
实施例6方法-2[9-[(3，4-二氯苯基)硫代]-1-(甲基磺酰)-7，8-二氢-6H-吡啶并[3，4-b]吡呤-8-基]乙酸步骤1 1-(甲硫基)-7，8-二氢-6H-吡咯并[3，4-b]吡呤-8-醇在0℃下向实施例6方法-1步骤5的1-(甲硫基)-6，7-二氢-8H-吡啶并[3，4-b]吡呤-8-酮(0.55g，0.22mmol)在EtOH(10ml)/THF(1ml)中的悬浮液加入NaBH4(0.10g，2.6mmol)。室温下30分钟后，加入丙酮猝灭反应。将溶剂减压蒸发，向残留物中加入EtOAc和水。分离有机相，用MgSO4干燥后蒸发。标题化合物用EtOAc/己烷洗并过滤。
步骤2 2-[1-(甲硫基)-7，8-二氢-6H-吡啶并[3，4-b]吡呤-8-基]丙二酸二甲酯在-78℃向1-(甲硫基)-7，8-二氢-6H-吡啶并[3，4-b]吡呤-8-醇(0.54g，2.1mmol)在THF(10ml)中的悬浮液加入1M的NaHMDS/THF溶液(2.35ml，2.4mmol)和氯磷酸二苯酯(0.53mL，2.6mmol)。30分钟后加入丙二酸二甲酯(0.73mL，6.4mmol)和1M的NaHMDS/THF溶液(6.8mL，6.8mmol)。将反应混合物升至0℃，然后至室温。将混合物分配在ETOAc和NH4Cl中，有机相用MgSO4干燥，过滤和蒸发。标题化合物用快速色谱法纯化。
步骤3[1-(甲硫基)-7，8-二氢-6H-吡啶并[3，4-b]吡呤-8-基]乙酸甲酯向2-[1-(甲硫基)-7，8-二氢-6H-吡啶并[3，4-b]吡呤-8-基]丙二酸二甲酯(0.59g，2.17mmol)和DMSO(4ml)的混合物中加入NaCl/水(0.45ml)。在150℃ 18小时后，将反应混合物分配在EtOAc和水之中。分离有机相，用Na2SO4干燥，蒸发。标题化合物随后用快速色谱法纯化。
步骤4[9-[(3，4-二氯苯基)硫代]-1-(甲基磺酰)-7，8-二氢-6H-吡啶并[3，4-b]吡呤-8-基]乙酸标题化合物由[1-(甲硫基)-7，8-二氢-6H-吡啶并[3，4-b]吡呤-8-基]乙酸甲酯，按照实施例6方法-1步骤8至9中所述得到。
实施例7[10-[(3，4-二氯苯基)硫烷基]-1-(甲基磺酰基)-6，7，8，9-四氢吡啶并[3，4-b]吲嗪-9-基]乙酸(化合物M) 步骤1[1-(甲基磺酰基)-6，7，8，9-四氢吡啶并[3，4-b]吲嗪-9-基]乙酸乙酯标题化合物由实施例6步骤3的产物按照与实施例1步骤5至9中所述的相同方式制备步骤2[10-[(3，4-二氯苯基)硫烷基]-1-(甲基磺酰)-6，7，8，9-四氢吡啶并[3，4-b]吲嗪-9-基]乙酸步骤1的产物按照与实施例1步骤10-11的相同方式，使用步骤10中的二(3，4-二氯苯基)二硫醚，转化成标题化合物。
MS M+1＝485实施例8(4-(甲基磺酰基)-5-{[4-(三氟甲基)苯基]硫代}-6，7，8，9-四氢吡啶并[3，2-b]吲嗪-6-基)乙酸(化合物N) 标题化合物按照实施例1中所述用二[4-(三氟甲基)苯基]二硫醚制备。
1H NMR(500MHz，丙酮-d6)δ8.55(d，1H)，7.75(d，1H)，7.45(d，2H)，7.15(d，2H)，4.55(m，1H)，4.15(m，1H)，3.80(m，1H)，3.30(s，3H)，2.80 to 2.10(m，6H).
m/z 513(M+1)。
实施例9[5-[(2-氯-4-氟苯基)硫代]-4-(甲基磺酰)-6，7，8，9-四氢吡啶并[3，2-b]吲嗪-6-基]乙酸(化合物0) 此标题化合物按照实施例1中所述，用二(2-氯-4-氟苯基)二硫醚制备。
m/z 469(M+1)。
实施例10[4-(甲基磺酰基)-5-(2-萘硫基)-6，7，8，9-四氢吡啶并[3，2-b]吲嗪-6-基]乙酸(化合物P) 此标题化合物按照实施例1中所述，用二(2-萘基)二硫醚制备。
m/z 467(M+1)。
实施例11[5-[(2，3-二氯苯基)硫代]-4-(甲基磺酰)-6，7，8，9-四氢吡啶并[3，2-b]吲嗪-6-基]乙酸(化合物Q) 标题化合物按照实施例1中所述，用二(2，3-二氯苯基)二硫醚制备。
1H NMR(500MHz，丙酮-d6)δ8.85(d，1H)，7.80(d，1H)，7.30(d，1H)，7.00(t，1H)，6.60(d，1H)，4.60(m，1H)，4.20(m，1H)，3.80(m，1H)，3.40(s，3H)，2.80 to 2.10(m，6H).
实施例12[5-[(4-甲基苯基)硫代]-4-(甲基磺酰)-6，7，8，9-四氢吡啶并[3，2-b]吲嗪-6-基]乙酸(化合物R) 标题化合物按照实施例1中所述，用对甲苯基二硫醚制备。
1H NMR(500MHz，丙酮-d6)δ8.55(d，1H)，7.80(d，1H)，6.95(m，4H)，4.60(m，1H)，4.15(m，1H)，3.80(m，1H)，3.35(s，3H)，2.80 to 2.10(m，6H).
实施例13[4-(甲基磺酰基)-5-(苯硫基)-6，7，8，9-四氢吡啶并[3，2-b]吲嗪-6-基]乙酸(化合物S) 标题化合物按实施例1中所述，用二苯基二硫醚制备。
1H NMR(500MHz，丙酮-d6)δ8.55(d，1H)，7.80(d，1H)，7.15to 6.90(m，5H)，4.60(m，1H)，4.15(m，1H)，3.75(m，1H)，3.30(s，3H)，2.80 to 2.10(m，6H).
实施例14[5-[(2，4-二氯苯基)硫代]-4-(甲基磺酰基)-6，7，8，9-四氢吡啶并[3，2-b]吲嗪-6-基]乙酸(化合物T) 标题化合物按实施例1中所述，用二(2，4-二氯苯基)二硫醚制备。该二硫醚由2，4-二氯苯硫酚用Br2在乙醚中制备。
1H NMR(500MHz，丙酮-d6)δ8.55(d，1H)，7.85(d，1H)，7.35(s，1H)，7.00(d，1H)，6.65(d，1H)，4.55(m，1H)，4.15(m，1H)，3.80(m，1H)，3.35(s，3H)，2.80 to 2.10(m，6H).
实施例15[5-[(4-氯苯基)硫代]-4-(甲基磺酰基)-6，7，8，9-四氢吡啶并[4，3-b]吲嗪-6-基]乙酸(化合物U) 标题化合物按实施例1所述，由3-氯烟碱醛(Heterocycles，p.151，1993)制备，但是热环化作用通过在回流下向十氢萘中加入叠氮化物来进行。
1H NMR(500MHz，丙酮-d6)δ9.20(s，1H)，8.85(s，1H)，7.20(d，2H)，7.00(d，2H)，4.70(m，1H)，4.30(m，1H)，3.75(m，1H)，3.35(s，3H)，2.80 to 2.10(m，6H).
实施例16[9-[(4-氯苯基)硫代]-1-(甲基磺酰基)-7，8-二氢-6H-吡啶并[3，4-b]吡呤-8-基]乙酸(化合物V) 标题化合物由实施例6方法1步骤8的产物，按照实施例1步骤10和11中概述的步骤，使用步骤10中的二(4-氯苯基)二硫醚制备。
1H NMR(500MHz，丙酮-d6)δ8.25-8.3(m，1H)，7.71-7.75(m，1H)，7.12-7.17(m，2H)，6.97-7.04(m，2H)，4.45-4.51(m，1H)，4.32-4.39(m，1H)，3.73-3.80(m，1H)，3.29(s，3H)，3.15-3.21(m，1H)，2.99-3.08(m，1H)，2.66-2.73(m，1H)，2.46-2.54(m，1H).
实施例17(一)-[(4-氯苄基)-7-氟-5-甲基磺酰基)-1，2，3，4-四氢环戊二烯并[b]吲哚-3-基]乙酸(化合物E) 步骤1(+/-)-(7-氟-1，2，3，4-四氢环戊二烯并[b]吲哚-3-基)乙酸乙酯 将10.00g 4-氟-2-碘苯胺、6.57g 2-(2-氧代环戊基)乙酸乙酯和121mg对甲苯磺酸在100ml苯中的溶液用Dean-Stark分水器在N2气氛下回流24小时。随后蒸馏除去苯。然后向溶液中加60ml DMF，脱气，再依次加入19mL Hunig碱和405mg Pd(OAc)2。将溶液在115℃加热3小时，然后冷却至室温。为猝灭反应，加入300ml 1N HCl和200ml乙酸乙酯，将混合物经硅藻土过滤。分离两相，酸性相用200ml乙酸乙酯萃取2次。将有机层合并，用盐水洗，用无水Na2SO4干燥，经硅藻土过滤后浓缩。粗产物用快速色谱法纯化，用100％甲苯洗脱，得到标题化合物。
1H NMR(丙酮-d6)δ9.76(br s，1H)，7.34(dd，1H)，7.03(d，1H)，6.78(td，1H)，4.14(q，2H)，3.57(m，1H)，2.85-2.55(m，5H)，2.15(m，1H)，1.22(t，3H).
步骤2(+/-)-(7-氟-1，2，3，4-四氢环戊二烯并[b]吲哚-3-基)乙酸 室温下向1.24g步骤1的酯在14mL四氢呋喃(THF)中的溶液依次加入7mL MeOH和7mL 2N NaOH。2.5小时后，将反应混合物倒入装有乙酸乙酯(EtOAc)/1N HCl的分液漏斗中。分离两相，酸相用EtOAc萃取2次。将有机相合并，用盐水洗，用无水Na2SO4干燥后蒸发至干，得到粗制的油状物，将其原样用于下一步骤(纯度＞90％)。
1H NMR(丙酮-d6)δ10.90(br s，1H)，9.77(br s，1H)，7.34(dd，1H)，7.04(dd，1H)，6.79(td，1H)，3.56(m，1H)，2.90-2.50(m，5H)，2.16(m，1H).MS(-APCI)m/z 232.2(M-H)-.
步骤3(+/-)-(5-溴-7-氟-1，2，3，4-四氢环茂二烯并[b]吲哚-3-基)乙酸 在-40℃向2.20g步骤2的酸(纯度＞90％)在30ml吡啶中的溶液加入6.85g三溴化吡啶鎓(90％纯度)。在0℃下搅拌该悬浮液10分钟，温热至室温30分钟。然后不加热，在高真空下除去溶剂。将粗产物溶于40ml AcOH中，向冷却至0℃的溶液分批加入2.88g Zn粉。将该悬浮液在15℃搅拌15分钟，温热至室温再保持15分。此时加入1N HCl猝灭反应，将该混合物倒入装有盐水/EtOAc的分液漏斗中。分离各层，有机层用水、盐水洗，用无水Na2SO4干燥后浓缩。该物质不经纯化直接用于下一步骤。
1H NMR(丙酮-d6)δ10.77(br s，1H)，9.84(br s，1H)，7.09(m，2H)，3.60(m，1H)，2.95-2.65(m，4H)，2.56(dd，1H)，2.19(m，1H).
步骤4(+/-)-[5-溴-4-(4-氯苄基)-7-氟-1，2，3，4-四氢环戊二烯并[b]吲哚-3-基]乙酸 向2.13g步骤3的酸在10mL THF中的溶液加入过量的重氮甲烷乙醚溶液，直到TLC监测到酸已完全消耗。然后减压除去溶剂。在-78℃向这样形成的甲基酯粗品在20ml DMF中的溶液加入539mg NaH悬浮液(60％在油中)。将该悬浮液在0℃搅拌10分钟，再次冷却至-78℃，用1.70g 4-氯苄基溴处理。5分钟后，将温度升至0℃，搅拌该混合物20分。此时加入2mL AcOH以猝灭反应，将混合物倒入装有1N HCl/EtOAc的分液漏斗中。分离各层，有机层用盐水洗，用无水Na2SO4干燥并浓缩。该烷基化物用步骤2中所述的步骤水解。粗物质用EtOAc/己烷研制来进一步纯化，得到标题化合物。
1H NMR(丙酮-d6)δ10.70(br s，1H)，7.31(d，2H)，7.18(d，1H)，7.06(d，1H)，6.92(d，2H)，5.90(d，1H)，5.74(d，1H)，3.61(m，1H)，3.00-2.70(m，3H)，2.65(dd，1H)，2.39(dd，1H)，2.26(m，1H).MS(-APCI)m/z 436.3，434.5(M-H)-.
步骤5(+)-[5-溴-4-(4-氯苄基)-7-氟-1，2，3，4-四氢环戊二烯并[b]吲哚-3-基]乙酸 在80℃向2.35g步骤4的酸在130ml EtOH中的溶液加入780μL(S)-(-)-1-(1-萘基)乙胺。将溶液冷却至室温并搅拌过夜。回收的盐(1.7g)用200ml EtOH重结晶。过滤后，将得到的白色固体盐用1N HCl中和，产物用EtOAc萃取。有机层用盐水洗，用无水Na2SO4干燥后浓缩。将该物质在SiO2垫上过滤，用EtOAc洗脱，得到标题对映体。两种对映体的保留时间分别是7.5分和9.4分[chiralPak AD柱，己烷/2-丙醇/乙酸(95∶5∶0.1)]。更为极性的对映体为98％ ee。ee＝98％；保留时间＝9.4分[ChiralPak AD柱250×4.6mm，己烷/2-丙醇/乙酸(75∶25∶0.1)]；[α]D21＝+39.2°(c 1.0，MeOH)。
步骤6(-)-[4-(4-氯苄基)-7-氟-5-(甲基磺酰)-1，2，3，4-四环戊二烯并[b]-吲哚-3-基]乙酸和钠盐步骤5的酸(15.4g)先用重氮甲烷酯化。将这样形成的酯与16.3g甲磺酸钠盐和30.2g CuI(I)在N-甲基吡咯烷酮中混合，进行磺化。将该悬浮液在N2气流下脱气，加热至150℃并搅拌3小时，然后冷却至室温。为猝灭反应，加入500ml乙酸乙酯和500ml己烷，将混合物经SiO2垫过滤，用EtOAc洗脱。将有机相浓缩。粗制的油状物溶于EtOAc中，用水洗3次，盐水洗1次，用无水Na2SO4干燥，过滤后浓缩。该粗物质进一步用快速色谱法纯化，用100％甲苯至50％甲苯/EtOAc。进行梯度洗脱，得到14g磺化酯。将其按着步骤2所述步骤水解。在两次连续重结晶(乙酸异丙酯/庚烷，随后用CH2Cl2/己烷)后得到标题化合物。
1H NMR(500MHz丙酮-d6)δ10.73(br s，1H)，7.57(d，2H，J＝8.8Hz)，7.31(m，1H)，7.29(m，1H)，6.84(d，2H，J＝8.8Hz)，6.29(d，1H，JAB＝17.8Hz)，5.79(d，1H，JAB＝17.8Hz)，3.43(m，1H)，2.98(s，3H)，2.94(m，1H)，2.85-2.65(m，3H)，2.42(dd，1H，J1＝16.1Hz，J2＝10.3Hz)，2.27(m，1H).13C NMR(125MHz丙酮-d6)δ173.0，156.5(d，JCF＝237Hz)，153.9，139.2，133.7，133.3，130.0(d，JCF＝8.9Hz)，129.6，128.2，127.5(d，JCF＝7.6Hz)，122.2(d，JCF＝4.2Hz)，112.3(d，JCF＝29.4Hz)，111.0(d，JCF＝22.6Hz)，50.8，44.7，38.6，36.6，36.5，23.3.MS(-APCI)m/z 436.1，434.1(M-H)-.
ee＝97％；保留时间＝15.3分[Chiral Cel OD柱250×4.6mm，己烷/2-丙醇/乙醇/乙酸(90∶5∶5∶0.2)]；[α]D21＝-29.3°(C1.0，MeOH)。Mp 175.0℃。
将6.45g(14.80mmol)以上的酸式化合物在EtOH(100ml)中用14.80ml 1N NaOH水溶液处理，制备成钠盐。减压除去有机溶剂，粗制的固体在回流下溶于1.2L异丙醇中。蒸馏溶剂至最终体积为500ml。冷却至室温使钠盐结晶。将晶态的钠盐悬浮在水中，用于冰浴冷冻并在高真空下冷冻干燥，得到钠盐形式的标题化合物。
1H NMR(500MHz DMSO-d6)δ7.63(dd，1H，J1＝8.5Hz，J2＝2.6Hz)，7.47(dd，1H，J1＝9.7Hz，J2＝2.6Hz)，7.33(d，2H，J＝8.4Hz)，6.70(d，2H，J＝8.4Hz)，6.06(d，1H，JAB＝17.9Hz)，5.76(d，1H，JAB＝17.9Hz)，3.29(m，1H)，3.08(s，3H)，2.80(m，1H)，2.69(m，1H)，2.55(m，1H)，2.18(m，2H)，1.93(dd，1H，J1＝14.4Hz，J2＝9.7Hz).
实施例17A另一制备(+/-)-[5-溴-4-(4-氯苄基)-7-氟-1，2，3，4-四氢环戊二烯并[b]吲哚-3-基]乙酸(实施例17，步骤4)的方法步骤1(+/-)-7-氟-1，2，3，4-四氢环戊二烯并[b]吲哚-3-基乙酸二环己胺(DCHA)盐将0.526M的2-溴-4-氟苯胺在二甲苯中的溶液与(2-氧代环戊基)乙酸乙酯(1.5eq)及硫酸(0.02eq)一起加热回流20小时。用Dean-Stark分水器共沸蒸馏除去水。用NMR跟踪反应，20小时后通常会观察到有80-85％转化成所要的亚胺中间体。反应混合物用1M碳酸氢钠(0.2体积)洗15分钟，蒸除有机级分。将剩余的浆体真空蒸馏(0.5mmHg)。残留的二甲苯在30℃蒸馏，多余的酮和未反应的苯胺在50-110℃回收；亚胺则回收110-180℃组分，为浅棕色透明液体，纯度83％。
然后将该亚胺中间体加到乙酸钾(3eq)、氯化四正丁铵-水合物(1eq)、乙酸钯(0.03eq)和N，N-二甲基乙酰胺的脱气混合物中(亚胺的最终浓度＝0.365M)。将该反应混合物在115℃加热5小时，随后冷却至室温。加入3N KOH(3eq)，将混合物在室温下搅拌1小时。反应混合物用水(1.0体积)稀释，用甲苯(3×0.75体积)洗。水相用3N HCl酸化至pH 1，用叔丁基甲基醚(2×0.75体积)萃取。合并的有机级分用水(0.75体积)洗。向该透明的浅棕色溶液加入二环己基胺(1eq)，将溶液在室温下搅拌16小时。将盐滤出，用乙酸乙酯，叔丁基甲基醚洗，干燥后得到标题化合物。分析结果94A％。
1H NMR(500mHz，CDCl3)δ9.24(s，1H)，7.16-7.08(m，2H)，6.82(t，1H)，6.2(br，2H)，3.6-3.5(m，1H)，3.04-2.97(m，2H)，2.88-2.70(m，3H)，2.66(dd，1H)，2.45-2.37(m，1H)，2.13-2.05(m，2.05)，1.83(d，4H)，1.67(d，2H)，1.55-1.43(m，4H)，1.33-1.11(m，6H).
步骤2(+/-)-(5-溴-7-氟-1，2，3，4-四氢环戊二烯并[b]吲哚-3-基)乙酸将以上步骤1中的DCHA在二氯甲烷中的浆体(0.241M溶液)冷却至-20至-15℃。将吡啶(2eq)一次加入，然后于30-45分钟内向浆体中逐滴加入溴(2.5eq)并保持温度为-20℃至-15℃(在加入约1/3溴时，反应混合物变粘，需要有效地搅拌。最终，在加完约1/2溴时，混合物又变“松”)。加完后，将反应混合物在-15℃再老化1小时。然后在5分钟内加入乙酸(3.04eq)并分批加入锌粉(3.04eq)。(一部分锌在-15℃加入并将混合物老化约5分钟以保证该放热反应进行(约-15至-10℃))。重复这一操作，在约30分钟内约投入5批锌。当不再放热时，较快地加入余下的锌。整个操作约费时30-45分。
加完后，将该批料温热至室温，老化1小时并浓缩。将反应混合物转移至甲基叔丁基醚(MTBE，0.8体积)中，加入10％乙酸水溶液(0.8体积)。将混合物在室温下老化1小时(盐的晶化，例如吡啶鎓)，经solka-floc(一种微晶纤维素)过滤。用MTBE(约0.2倍体积)冲洗solka-floc垫，将滤液(两相，MTBE/水)转移到萃取器中。有机相用水(0.8体积)洗。将MTBE萃取液浓缩并转移到异丙醇(IPA，0.25体积)中使化合物结晶。加水(0.25体积)，使该批料老化1小时。在1小时内再加水(0.33体积)。加完后将批料再老化一小时，过滤，用30/70的异丙醇/水(0.15体积)冲洗。将晶化的溴代酸在烘箱中于+45℃干燥。
步骤3(+/-)-[5-溴-4-(4-氯苄基)-7-氟-1，2，3，4-四氢环戊二烯并[b]吲哚-3-基]乙酸将步骤2中的溴代酸溶于二甲基乙酰胺(0.416M溶液)中，一次加入2.5eq的碳酸铯。向该浆体中一次加入4-氯苄基氯(2.5eq)，在50℃加热20小时。该批料冷却至室温，于5分钟内加入5N NaOH(4.00eq)，温度升至+40℃。将反应混合物在50℃老化约3小时，冷却至室温，转移到一只L萃取器中。将溶液用乙酸异丙酯(IPAc，2体积)稀释并冷却至+15℃。用5N HCl将溶液酸化至pH～2。分离各层，有机层用水洗(2×2体积)。将IPAc溶液浓缩，转移至IPA(0.8体积)中使产物结晶。于2小时内加水(8L)，将批料过滤，得到标题化合物。该批料可以在烘箱中于+40℃干燥24小时。
实施例18(+/-)-{4-[1-(4-氯基基)乙基]-7-氟-5-甲磺酰-1，2，3，4-四氢环茂二烯并[b]吲哚-3-基}乙酸(化合物X) 标题化合物按照2003年7月30日公布的PCT WO 03/062200中提供的说明合成。
实施例19(+/-)[9-(4-氯苄基)-6-氟甲磺酰-2，3，4，9-四氢-1H-咔唑-1-基]乙酸(化合物Y) 标题化合物按照PCT WO 03/062200(2003年7月30日公布)中提供的说明合成。
实施例20[4-(4-氯苄基)-7-氟-5-甲磺酰-1-氧代-1，2，3，4-四氢环戊二烯并[b]吲哚-3-基]乙酸(化合物Z) 标题化合物按照2003年7月30日公布的PCT WO 03/062200中提供的说明合成。
实施例21{9-[(3，4-二氯苯基)硫代]-1-异丙基-7，8-二氢-6H-吡啶并[3，4-b]吡呤-8-基}乙酸(对映体A和对映体B)(化合物AA) 步骤1 2-氯烟碱醛在-40℃向二异丙基胺(110ml，780mmol)在THF(500ml)中的溶液加入2.5M的正丁基锂(300ml，750mmol)/己烷溶液。5分钟后将反应混合物冷却至-95℃，然后依次加入DMPU(15ml)和2-氯吡啶(50ml，532mmol)，将形成的混合物温热并在-78℃搅拌4小时。在这之后，将该黄色悬浮液再次冷却至-95℃，然后加入DMF(70ml)。将最终的反应混合物温热至-78℃并在该温度下搅拌1.5小时。将反应混合物倒入冷的盐酸水溶液(3N，800ml)中，搅拌5分钟。加入浓氨水将pH调节至7.5。水层用EtOAc萃取3次。合并的有机层用NH4Cl水溶液和盐水洗，用无水Na2SO4干燥，过滤后浓缩。粗物质用硅胶垫进一步纯化，用100％己烷至100％EtOAc进行梯度洗脱，产物在冷的己烷中结晶，得到浅黄色固体的标题化合物。
步骤2(2Z)-2-叠氯基-3-(2-氯吡啶-3-基)丙-2-烯酸甲酯在-20℃向25％的甲醇钠/甲醇溶液(80ml，349mmol)加入2-氯烟碱醛(20.0g，139.9mmol)和叠氮基乙酸甲酯(32.2ml，349.7mmol)在甲醇(168ml)中的溶液。监测内温并在30分钟的加料期间保持约-20℃。然后将形成的混合物在冰浴中搅拌几小时，随后于冷室内在冰浴中过夜。将悬浮液倒在冰和NH4Cl的混合物上，10分钟后将该浆体过滤。产物用冷水洗，然后在真空下干燥。将粗产物溶于CH2Cl2中，加入MgSO4。将该悬浮液经硅胶垫过滤，用CH2Cl2洗。将滤液减压浓缩，得到棕灰色标题化合物沉淀(20g)。
步骤3 4-氯-1H吡咯并[3，2-c]吡啶-2-羧酸甲酯将(2Z)-2-叠氮基-3-[2-氯吡啶-3-基]丙-2-烯酸甲酯(21g，88mmol)在1，3，5-三甲基苯(880ml)中的溶液加热回流1小时。将反应混合物冷却至室温，然后至0℃，过滤出沉淀，用冷己烷洗。将该物质在1∶20的乙酸乙酯/己烷中搅拌过夜，过滤后得到浅黄色固体的标题化合物(13.2g)。
步骤4 1-氯-8-氧代-7，8-二氢-6H-吡啶并[3，4-b]吡呤-7-羧酸甲酯向4-氯-1H-吡咯并[3，2-c]吡啶-2-羧酸甲酯(12.5g，59mmol)在THF(116ml)/甲苯(460ml)中的悬浮液里加入1.0M的叔丁醇钾/THF溶液(64ml，64mmol)和丙烯酸甲酯(55ml，611mmol)。将形成的混合物在100℃加热18小时。在这之后将悬浮液冷却至室温，倒入NH4Cl饱和水溶液(400ml)和己烷(400ml)的混合物。倾析出固体，过滤并用水和己烷洗，得到标题化合物。
步骤5 1-氯-6，7-二氢-8H-吡啶并[3，4-b]吡呤-8-酮向前一步骤的化合物中加入异丙醇(8.0ml)和浓盐酸(2.0ml)并在100℃加热1小时。将反应混合物分配在EtOAc和Na2CO3之中。分离有机相，蒸发，得到标题化合物。
步骤6 1-异丙烯基-6，7-二氢-8H-吡啶并[3，4-b]吡呤-8-酮向1-氯-6，7-二氢-8H-吡啶并[3，4-b]吡呤-8-酮(5.0g，24.3mmol)、三(二亚苄基丙酮)合二钯(0)(1.0g，1.09mmol)和三苯胂(2.70g，8.82mmol)在DMF(100ml)中的混合物加入三丁基异丙烯基锡烷(9.60g，29.00mmol)。将形成的混合物脱气并在78℃加热18小时。减压蒸除溶剂。向形成的混合物中加入CH2Cl2和硅藻土，然后经硅藻土过滤。标题化合物用快速色谱法纯化(50％至100％的EtOAc/己烷)。
步骤7(2E)-(1-异丙烯基-6，7-二氢-8H-吡啶并[3，4-b]吡呤-8-亚基)乙酸乙酯在-78℃下向1-异丙烯基-6，7-二氢-8H吡咯并[3，4-b]吡呤-8-酮(0.60g，2.8mmol)和膦酰乙酸三乙酯(1.00g，4.46mmol)在THF(24ml)中的溶液加入80％NaH(0.12g，4.00mmol)，将反应混合物温热至0℃，然后至室温。将反应混合物倒在饱和NH4Cl和EtOAc上。分离出有机相，用Na2SO4干燥并蒸发。标题化合物用快速色谱法纯化(40％EtOAc/己烷)。
步骤8(1-异丙基-7，8-二氢-6H-吡啶并[3，4-b]吡呤-8-基)乙酸乙酯向(2E)-(1-异丙烯基-6，7-二氢-8H-吡啶并[3，4-b]吡呤-8-亚基)乙酸乙酯(0.40g，1.4mmol)在MeOH(20ml)中的溶液加入Pd(OH)2(0.20g)。将混合物在1大气压H2下搅拌3小时。混合物经硅藻土过滤，蒸发，得到标题化合物。
步骤9{9-[(3，4-二氯苯基)硫代]-1-异丙基-7，8-二氢-6H-吡啶并[3，4-b]吡呤-8-基}乙酸乙酯向二(3，4-二氯苯基)二硫醚(0.24g，0.67mmol)在CH2Cl2(5.6ml)中的溶液加入SO2Cl2(0.036ml)。形成的黄色混合物在室温搅拌1小时。将此溶液在0℃下加到(1-异丙基-7，8-二氢-6H-吡啶并[3，4-b]吡呤-8-基)乙酸乙酯(0.15g，0.52mmol)在DMF(5.6ml)中的溶液。在0℃下1.5小时后，将反应混合物倒在饱和的NaHCO3溶液和EtOAc上。分离有机相，用Na2SO4干燥，过滤并蒸发。标题化合物用快速色谱法(30％至40％EtOAc/己烷)纯化。
步骤10{9-[(3，4-二氯苯基)硫代]-1-异丙基-7，8-二氢-6H-吡啶并[3，4-b]吡呤-8-基]乙酸向{9-[(3，4-二氯苯基)硫代]-1-异丙基-7，8-二氢-6H-吡啶并[3，4-b]吡呤-8-基}乙酸乙酯(0.23g，0.50mmol)在THF(5ml)和MeOH(2.5ml)中的溶液加入1.0M NaOH(1.5ml，1.5mmol)。室温下搅拌18小时后，加入HOAc(0.25ml)，蒸除溶剂。残余物置于EtOAc/水中，有机层用水和盐水洗。用Na2SO4干燥后，将溶液过滤并蒸发。残余物用1∶1的乙酸乙酯/己烷搅拌，过滤后得到白色固体标题化合物。
1H NMR(MeOH-d4)δ1.14-1.26(m，6H)，2.47-2.56(m，1H)，2.56-2.64(m，1H)，2.94-3.05(m，2H)，3.81-3.89(m，1H)，4.22-4.30(m，1H)，4.33-4.44(m，2H)，6.93-6.99(m，1H)，7.14-7.19(m，1H)，7.33-7.39(m，1H)，7.54-7.59(m，1H)，8.16-8.21(m，1H).
将步骤10的产物用CH2N2转化成其甲酯，该酯在手性固定相(Chiralcel OD柱2×25cm)上进行HPLC分离，用12％的2-丙醇/己烷洗脱，流速6ml/分。对映体A(极性小)的保留时间为31.9分，对映体B(极性强)的保留时间为35.5分。A和B都如实施例17步骤10一样水解，得到标题化合物的对映体A和B。
实施例22((1R)-6-氟-8-(甲磺酰)-9-{(1S)-1-[4-(三氟甲基)苯基]乙基}-2，3，4，9-四氢-1H-咔唑-1-基)乙酸(化合物AJ) 步骤1氯化2-(2-溴-4-氟苯基)肼鎓在-10℃下向2-溴-4-氟苯胺在浓盐酸中的悬浮液(1.5M)慢慢加入10.0M的NaNO2水溶液(1.1eq)。将该混合物在0℃搅拌2.5小时。然后慢慢加入SnCl2在浓盐酸中的冷(-30℃)溶液(3.8M)，同时保持内温低于10℃。形成的混合物在10℃下机械搅20分钟，然后在室温下搅拌1小时。将该浓稠的浆体过滤，将固体空气干燥过夜。重新悬浮在冷盐酸中，再次过滤。将干物质悬浮在乙醚中，搅拌10分钟，过滤，空气干燥过夜，得到棕灰色固体标题化合物。
步骤2(+/-)(8-溴-6-氟-2，3，4，9-四氢-1H-咔唑-1-基)乙酸乙酯向步骤1化合物(1eq)在AcOH中的悬浮液(0.5M)加入(2-氧代环己基)乙酸乙酯(1eq)。将混合物在回流下搅拌16小时，冷却，减压蒸发除去AcOH。残余物用EtOAc稀释，用水和饱和NaHCO3水溶液洗。有机层用Na2SO4干燥并浓缩。残余物随后在硅胶垫上纯化，用甲苯洗脱。将滤液浓缩，在己烷中搅拌，过滤后得到白色固体标题化合物。MS(+APCI)m/z 354.2(M+H)+。
步骤3(+/-)-[6-氟-8-(甲磺酰)-2，3，4，9-四氢-1H-咔唑-1-基]乙酸乙酯向步骤2化合物(1eq)在无水DMSO中的溶液(0.28M)加入甲基亚磺酸钠(3eq)和碘化铜(3eq)。向混合物中鼓入N2气5分钟，然后在100℃于氮气氛下搅拌。12小时后，再加入甲基亚磺酸钠(2eq)和碘化酮(2eq)。将混合物于100℃再搅拌12小时，冷却，用EtOAc稀释，加入1N HCl将混合物酸化。将悬浮液搅拌30分钟，经硅藻土过滤。该滤液用水洗，用Na2SO4干燥并浓缩。残余物经硅胶垫过滤，先用甲苯洗脱以除去非极性杂质，然后用2∶1的己烷/EtOAc混合物洗脱所要的产物。将用己烷/EtOAc混合物洗脱得到的滤液浓缩成浅黄色固体标题化合物。MS(-APCI)m/z 352.1(M-H)-。
步骤4[(1R)-6-氟-8-(甲基磺酰基)-2，3，4，9-四氢-1H-咔唑-1-基]乙酸乙酯将步骤3的外消旋混合物用制备型HPLC在一只Chiralpak AD制备柱上拆解，用15％的异丙醇/己烷混合物洗脱。根据最终产物的活性，确定极性高的对映体(保留时间长)为标题化合物。
步骤5[(1R)-9-[(1S)-1-(4-氯苯基)乙基]-6-氟-8-(甲磺酰)-2，3，4，9-四氢-1H-咔唑-1-基]乙酸乙酯在10分钟内，向步骤4化合物(1eq)、三苯膦(1.5eq)和(1R)-1-(4-氯苯基)乙醇(1.5eq，按照参考实施例1中所述的通用步骤制备)在THF中的溶液(0.175M)加入偶氮二羧酸二叔丁酯(2.1M THF溶液，1.5eq)。室温下搅拌该混合物2小时并浓缩之。残余物用硅胶快速色谱法纯化，用7％EtOAc/甲苯洗脱，得到所要的产物(纯度～90％)，将其原样用于下一反应。
步骤6[(1R)-[(1S)-1-(4-氯苯基)乙基]-6-氟-8-(甲磺酰)-2，3，4，9-四氢-1H-咔唑-1-基]乙酸和[(1S)-9-[(1S)-1)-1-(4-氯苯基)乙基]-6-氟-8-(甲磺酰)-2，3，4，9-四氢-1H-咔唑-1-基]乙酸向步骤5化合物在2∶1的THF/甲醇混合物中的溶液(0.1M)加入1N LiOH水溶液(3eq)。室温下搅拌该混合物2小时，加入AcOH，蒸发除去溶剂。残余物置于EtOAc/水中，有机层用盐水洗，用Na2SO4干燥，过滤后浓缩。残余物在30％的EtOAc/己烷中摇动，将该产物悬浮在乙醚中超声45分钟，过滤，在50℃真空干燥24小时，得到白色固体标题化合物。MS(-APCI)m/z 462.1(M-H)。
或者是，在步骤5中使用(+/-)[6-氟-8-(甲磺酰)-2，3，4，9-四氢-1H-咔唑-1-基]乙酸乙酯进行烷基化反应，得到两种非对映异构体的混合物[(1R)-9-[(1S)-1-(4-氯苯基)乙基]-6-氯-8-(甲磺酰)-2，3，4.9-四氢-1H-咔唑-1-基]乙酸乙酯和[(1S)-9-[(1S)-1-(4-氯苯基)乙基]-6-氟-8-(甲磺酰)-2，3，4，9-四氢-1H-咔唑-1-基]乙酸乙酯。该非对映体混合物利用以下步骤进行选择性水解，得到所要的[(1R)-9-[(1S)-1-(4-氯苯基)乙基]-6-氟-8-(甲磺酰)-2，3，4，9-四氢-1H-咔唑-1-基]乙酸。
拆解将[(1R)-9-[(1S)-1-(4-氯苯基)乙基]-6-氟-8-(甲磺酰)-2，3，4，9-四氢-1H-咔唑-1-基]乙酸乙酯和[(1S)-9-[(1S)-1-(4-氯苯基)乙基]-6-氟-8-(甲磺酰)-2，3，4，9-四氢-1H-咔唑-1-基]乙酸乙酯的非对映体混合物(1eq)溶在3.5∶1的THF/MeOH混合物中(0.25M)并在0℃冷却。慢慢加入LiOH 1N水溶液(1eq)，将混合物在0℃搅拌12小时或者到[(1R)-9-[(1S)-1-(4-氯苯基)乙基]-6-氟-8-(甲磺酰)-2，3，4，9-四氢-1H-咔唑-1-基]乙酸乙酯几乎完全水解，另一非对映体在这些条件下仅轻微水解。加入AcOH，蒸发除去溶剂，残余物置于EtOAc/水中，有机层用盐水洗，用Na2SO4干燥，过滤并浓缩。利用快速色谱法将[(1S)-9-[(1S)-1-(4-氯苯基)乙基]-6-氟-8-(甲磺酰)-2，3，4，9-四氢-1H-咔唑-1-基]乙酸乙酯和[(1R)-9-[(1S)-1-(4-氯苯基)乙基]-6-氟-8-(甲磺酰)-2，3，4，9-四氢-1H-咔唑-1-基]乙酸分离，用EtOAc在含1％AcOH的己烷中的40％溶液洗脱，得到所要的[(1R)-9-[(1S)-1-(4-氯苯基)乙基]-6-氟-8-(甲磺酰)-2，3，4，9-四氢-1H-咔唑-1-基]乙酸，de＞90％，将其在30％的EtOAc/己烷中搅动，得到所要的化合物，为白色固体，de＞95％。
步骤7[(1R)-6-氟-8-(甲磺酰)-2，3，4，9-四氢-1H-咔唑-1-基]乙酸甲酯向[(1R)-9-[(1S)-1-(4-氯苯基)乙基]-6-氟-8-(甲磺酰)-2，3，4，9-四氢-1H-咔唑-1-基]乙酸([α]D＝-226°，MeOH中)在MeOH中的溶液(0.1M)加入10％的钯/碳(10％wt/wt)。向混合物中鼓入N2气流5分钟。在室温和H2气氛(气瓶)下搅拌该反应混合物24小时，经硅藻土垫过滤，用CH2Cl2洗脱。减压蒸发除去溶剂，残余物转移至MeOH中，得到化合物[(1R)-6-氟-8-(甲磺酰)-2，3，4，9-四氢-1H-咔唑-1-基]乙酸甲酯。
步骤8((1R)-6-氟-8-(甲磺酰)-9-{(1S)-1-[4-(三氟甲基)苯基]乙基}-2，3，4，9-四氢-1H-咔唑-1-基)乙酸(化合物AJ)在20分钟内，向步骤7化合物(1eq)、三苯膦(1.5eq)和(1R)-1-[4-(三氟甲基)苯基]乙醇(1.5eq)在THF中的溶液(0.2M)加入偶氮二羧酸二叔丁酯溶液(1M THF溶液，1.5eq)。室温下搅拌该混合物2小时并浓缩之。残余物用硅胶快速色谱法纯化，用10％EtOAc/甲苯洗脱，得到((1R)-6-氟-8-(甲磺酰)-9-{(1S)-1-[4-(三氟甲基)苯基]乙基}-2，3，4，9-四氢-1H-咔唑-1-基)乙酸甲酯(纯度～90％)，将其原样用于下一反应。
向以上的酯(1eq)在3.5/1的THF/MeOH混合物中的0℃溶液(0.25M)慢慢加入1N的LiOH水溶液(1eq)，将混合物在0℃搅拌16小时或直到该酯几乎完全水解。在这些条件下，另一个较少的非对映体的水解速度要慢得多。加入AcOH，减压除去溶剂。残余物置于EtOAc/水中，有机层用盐水洗，用Na2SO4干燥，过滤和浓缩。为除去未反应的甲基酯，将残余物经硅胶垫过滤，先用10％EtOAc/甲苯、然后用含1％AcOH的60％EtOAc/甲苯洗脱。将残余物在EtOAc/己烷中搅动，于50℃和高真空下干燥16小时，得到标题化合物，为白色固体，de和ee＞95％(用手性HPLC检验)。MS(-APCI)m/z 496.0(M-H)-。[α]D＝-181°(在MeOH中)。
生物学在本发明中使用的作为选择性DP拮抗剂起作用的化合物通常对DP的亲合性(Ki)比对CRTH2受体的亲合性(Ki)至少高约10倍。在本发明中使用的典型的DP拮抗剂对于DP受体的选择性比对CRTH2受体至少高约10倍。更特别的是，该选择性DP受体拮抗剂对DP受体的选择性至少是对CRTH2受体的选择性的100倍。尤其特别的是，该选择性DP拮抗剂化合物对DP受体的选择性高于对CRTH2受体的至少约800-1000倍，也就是说，对DP受体的亲合性(Ki)比对CRTH2受体的亲合性(Ki)高800-1000倍。
正如本文中所使用的，当一个化合物“选择性地调制DP受体”时，该化合物在某个治疗剂量可达到的浓度结合并拮抗DP受体，而在这样一个治疗上可达到的浓度下对CRTH2基本上无调制作用。
一般来说，本发明中使用的DP拮抗剂对于CRTH2受体的亲合性(Ki)约为0.5微摩尔或更高。对于CRTH2受体的结合亲合性为约0.5微摩尔或更高，而且对DP受体的选择性高于对CRTH2受体至少约10倍的那些化合物，可用于抑制在服用烟酸而不加这种选择性DP拮抗剂时见到的潮红现象。
化合物在重组人DP和CRTH2受体上的亲合性和选择性测定化合物在DP和CRTH2上的受体亲合性和选择性用Abramovitz M等，Biochem.Biophys.Acta(2000)1483285-293和Sawyer N等，Br.J.pharmacol.(2002)1371163-1172中所描述的放射性配体结合性分析来测定。简言之，用人胚胎肾(HEK)293 EBNA(EB病毒核抗原)细胞(称作HEK 293E细胞系)建立各自表达DP和CRTH2受体的稳定细胞系。将从这些重组细胞系制备的膜级分用在平衡竞争放射性配体结合性分析中以确定化合物在DP和CRTH2受体上的亲合性和选择性。
将对应于全长编码序列的DP和CRTH2 cDNAs亚克隆到哺乳动物表达载体pCEP4(Invitrogen)的适当部位中并表达在HEK 293E细胞内。利用差速离心(1000xg 10分钟，然后160,000xg 30分钟，全在4℃)，随后在冰上于蛋白酶抑制剂(2mM AEBSF，10μM亮抑蛋白酶肽和0.05mg/ml抑胃酶肽)存在下通过在800psi下氮气空腔化30分钟将细胞裂解，制备细胞膜。将160,000xg的沉淀按照约5-10mg/ml蛋白质利用Dounce均化作用(Dounce A；10次冲击)重新悬浮在含1mM EDTA的10mM HEPES/KOH(pH7.4)中，在液氮中冷冻并在-80℃贮存。受体结合性分析是在含1mM EDTA、10mM MnCl2和0.7nM[3H]PGD2(200Ci/mmol)的10mM HEPES/KOH(pH7.4)中进行，最终培养体积0.2ml。通过加入从160,000xg级分得到的膜蛋白(对于DP约30μg，对于CRTH2约10μg)引发反应。将配体加在二甲基亚砜(DMSO)中，在所有培养样中均恒定在1％(v/v)。在10μM非放射性PGD2存在下测定非特异性结合。在微型轨道式摇荡器上于室温下培养60分钟。使用一台Tomtec MachIII96孔半自动细胞收获器，快速滤过预先在不含EDTA的分析培养缓冲液中润湿(在4℃)的96孔Unifilter GF/C(Canberra Packard)以结束亲合性分析。过滤器用3至4ml的同一缓冲液洗，在55℃干燥90分钟。加入50μL Ultima Gold F(Canberra Packard)，使用一台1450 MicroBeta(Wallac)计数器，用闪烁计数法测定各过滤器结合的残留放射性。
最大比结合性定义为总结合量减去竞争剂不存在时的非特异结合量。在化合物的各个浓度测定特异结合并表示成最大特异结合的百分数。将最大特异结合的百分数表示成试验化合物浓度的函数构成S形平衡竞争曲线，使用定制设计的软件包进行分析以确定转折点(InPt)，该软件包采用以四参数方程为基础的单向驱动的非线性最小二乘方曲线拟合例行程序。由方程Ki＝InPt/1+([放射性配体]/Kd)计算平衡抑制常数(Ki)，确定试验化合物的结合亲合性，其中Kd是放射性配体-受体相互作用的平衡解离常数。当InPt无法确定时，使用IC50(即，抑制50％最大特异结合所需的试验化合物浓度)。
本发明中使用的化合物一般对于DP受体的Ki是从低至约0.4nM到高至约16.3nM。而且，本发明中使用的化合物一般对于CRCH2受体的Ki是从低至约180nM到高至约22,000nM甚至更高。
化合物对烟酸诱发的小鼠血管扩张的作用本发明描述的选择性DP拮抗剂的效力可以利用人类的烟酸诱发潮红的鼠模型，通过测定抑制潮红作用来证实。在对用载体(作为对照样)或DP拮抗剂进行过预处理的小鼠施用烟酸后，测定鼠耳中的血液流动(人类潮红的重要成分血管扩张的量度)。具体地说，该研究中使用雄性C57BL/6小鼠。每个试验组内评价5只鼠。将戊巴比妥用水稀释至最终浓度为5mg/ml，每只鼠腹腔内注射0.3ml。将DP拮抗剂溶于5％羟丙基β-环糊精中，最终浓度5mg/ml。该化合物以0.2ml/鼠的体积腹腔内施用(～40mpk)。烟酸溶于5％羟丙基β环糊精内，最终浓度12.5mg/ml。用αN NaOH将该烟酸贮备液调节至pH7.4，按0.2ml/鼠皮下注射(～100mpk)。
用激光Doppler灌流成像仪(PeriScan PIM II，Perimed，Sweden)，从施用烟酸之前5分钟开始，每30秒监测鼠耳皮肤的灌流共30分钟。计算施用载体或烟酸后的10分钟期间内的平均灌流的变化百分数，对每只动物画出平均灌流变化百分数随时间的变化。对每个图计算平均灌流的曲线下面积(AVC，％Δx分)，将结果对各组表示成平均AVC±SEM。
化合物D抑制PGD-2在小鼠中诱发的血管扩张(图1)。试验的DP拮抗剂抑制烟酸在小鼠中诱发的血管扩张。所选择的化合物的数据提供在图2和图3中。
本文中引用的所有专利、专利申请和出版物均全文引用作为参考。虽然已详细描述了一些优选的实施方案，但在本发明的范围内有许多可供选择的其它实施方案。
权利要求
1.一种治疗有治疗需要的人类患者的动脉粥样硬化的方法，包括对患者施用烟酸或其可药用盐或溶剂化物，或另一种烟酸受体激动剂，以及一种DP受体拮抗剂，其数量能有效治疗动脉粥样硬化而不引起明显的潮红。
2.一种提高有治疗需要的人类患者的血清HDL水平的方法，包括对患者施用烟酸或其可药用盐或溶剂化物，或另一种烟酸受体激动剂，以及一种DP受体拮抗剂，所述的组合能有效提高患者的血清HDL水平而不引起明显的潮红。
3.权利要求1或2的一种方法，其中施用烟酸或其可药用盐或溶剂化物，该DP受体拮抗剂选择性调制DP受体，而基本上不调制CRTH2受体。
4.权利要求1或2的方法，其中DP受体拮抗剂是选自以下化合物或其可药用盐或溶剂化物
5.一种药物组合物，其中含有烟酸或其盐或溶剂化物，或另一种烟酸受体拮抗剂，及一种DP受体拮抗剂，与一种可药用的载体相组合。
6.权利要求5的一种药物组合物，其中含有烟酸和一种DP受体拮抗剂与一种可药用的载体组合。
7.权利要求6的一种药物组合物，其中该DP拮抗剂是选自以下化合物或其可药用盐或溶剂化物
8.权利要求7的药物组合物，其中DP拮抗剂是选自化合物A、B、D、E、X、AA、AF、AG、AH、AI和AJ。
9.权利要求5、6、7或8的一种药物组合物，其中还含有一种HMGCo-A还原酶抑制化合物。
10.权利要求9的一种药物组合物，其中该HMG Co-A还原酶化合物是辛伐他汀。
全文摘要
公开了一种治疗动脉粥样硬化的方法，其中将烟酸或另一种烟酸受体激动剂与DP受体拮抗剂联合施用于患者。施用该DP受体拮抗剂是为了减小、防止或消除否则会发生的潮红。
文档编号A61K31/538GK1787819SQ200480012853
公开日2006年6月14日 申请日期2004年5月13日 优先权日2003年5月15日
发明者K·程, M·G·沃特斯, K·M·梅特斯, G·奥内尔 申请人:麦克公司, 麦克弗罗斯特加拿大有限公司