专利名称：南五味子木脂素的提取物及其制备方法和用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及中药有效部位的提取工艺领域，具体地涉及南五味子的木脂素提取物的提取和制备方法及用途。本发明还涉及含南五味子木脂素提取物的组合物及用途。
背景技术：
五味子是木兰科植物五味子(Schisandra chinensis)和华中五味子(Schisandra sphenanthera)的干燥成熟果实，前者根据中国2000年药典被收载为五味子，俗称北五味子，后者收载为南五味子。
南五味子和北五味子化学成分相近，均含有挥发性油和木脂素两个部分。然而，木脂素的成分和含量在两者之间有所不同。北五味子的木脂素成分为五味子甲素、五味子乙素、五味子丙素、五味子醇甲、五味子醇乙、五味子酯甲、五味子酯乙，而南五味子的主要木脂素成分为五味子酯甲、五味子酯乙、五味子酯丙、五味子酯丁、五味子醇甲、安五酸、dl-安五脂素、d-表加巴辛、襄五脂素等(杨放等，华西药学杂志，2003，18(6)438-440)。
已有文献报道北五味子醇提取物具有中枢抑制作用，可用于治疗失眠(CN03100533.0)。该专利申请中采用了超临界CO2萃取再经过蒸馏、减压浓缩、树脂吸附和乙醇洗脱的步骤，工艺繁复并且成本高。然而，未见对于南五味子的治疗失眠的有效部位分离并鉴定成功的相关文献报道。
宋小妹等(现代中医药，2003年第5期，74-75页)描述了对于南五味子有效成分的提取工艺研究，得出结论认为南五味子用粗粉提取，并且用4倍量80％的乙醇回流提取是最佳的。
其它人研究了五味子醇提取物对于中枢抑制作用的主要成分，鉴定其为五味子醇甲，给药途径为注射，有效给药剂量大于60mg/kg(张林魁等，中国医学科学院学报，第13卷第1期，1991年2月)，而该五味子醇甲并不是南五味子的主要成分，其在南五味子中的含量远小于五味子酯甲，因此中国2000年药典选择五味子酯甲为南五味子的指标成分。还有人对五味子的挥发油进行了研究，发现其对于中枢神经系统有兴奋作用(齐治等，北京医科大学学报，1988，卷20，No.6)。
中药材南五味子的成本低廉，仅为北五味子的1/5。目前对中药材南五味子的有效部位的有效提取方法，及其在治疗疾病中的应用具有需求。
发明内容
本发明的一个目的是提供一种制备南五味子木脂素提取物的方法，其中通过水蒸馏药材，除去挥发油，过滤，水煎煮药渣后，再乙醇回流提取，树脂吸附洗脱，过滤，获得有效部位。该南五味子木脂素提取物具有镇静催眠作用，可有效治疗失眠。
本发明的另一个目的是提供南五味子木脂素提取物及含南五味子木脂素提取物的组合物及用途。
因此，在本发明的一个方面，提供了一种制备南五味子木脂素提取物的方法，包括步骤(a)用6-15倍南五味子药材重量的水蒸馏药材1-6小时；(b)过滤，剩余药渣；(c)煎煮药渣10-60分钟，过滤；(d)体积为药材量5-15倍的75％重量以上的乙醇水溶液提取药渣，每次0.5-3小时，过滤获得滤液；(e)将所得滤液过1-3倍药材量树脂吸附柱，获得流出液，所述树脂选自极性大孔吸附树脂；(f)用体积为树脂量1-5倍的75％重量以上的乙醇洗脱，获得洗脱液；(g)合并流出液和洗脱液，获得液态南五味子木脂素提取物。
在该方面的一个具体实施方式
中，步骤(a)中的水性溶剂的用量优选为药材重量的8-12倍，最优选为8倍。
在该方面的另一个具体实施方式
中，步骤(a)中优选回流提取4小时。
在该方面的另一个具体实施方式
中，步骤(d)中酒精的用量优选为药材量的12倍，酒精优选为90％重量的乙醇水溶液，优选重复进行(d)步骤1-3次，最优选为2次。
在该方面的另一个具体实施方式
中，步骤(e)中的树脂优选是弱极性大孔吸附树脂。
在该方面的另一个具体实施方式
中，步骤(f)的乙醇体积优选为树脂量的2倍，乙醇浓度优选为95％重量的乙醇水溶液。
在该方面的另一个具体实施方式
中，还包括步骤(h)减压或常压回收尽溶剂，然后在50-100℃烘干，获得固态的南五味子木脂素提取物。
在本发明的另一个方面，提供了一种用上述方法制备的南五味子木脂素提取物，该提取物中总木脂素浓度为50％-95％重量，五味子酯甲浓度为5％-45％重量。
在本发明的另一个方面，提供了一种治疗失眠的药物组合物，它含有1-99％上述的南五味子木脂素提取物和1-99％药学上可接受的载体。
在本发明的另一个方面，提供了上述南五味子木脂素提取物的用途，该提取物用于制备治疗失眠的药物。
在本发明的还有一个方面，提供了上述南五味子木脂素提取物的用途，该提取物用于制备抗抑郁的药物。
具体实施例方式
在本文中，术语“药材量”指药材重量。
本发明经过研究发现，南五味子中的木脂素类物质是其主要的治疗失眠的有效部位，主要有效成分之一是五味子酯甲，在此基础上开发了有效提取南五味子木脂素提取物的方法，从而完成了本发明。根据我们的研究，在南五味子木脂素中的主要有效成分之一是五味子酯甲，而不是先前的研究中所提示的五味子醇甲。其给药途径为口服，中枢抑制有效给药剂量五味子酯甲为5-30mg/kg，南五味子木脂素提取物为10-60mg/kg。
南五味子一般取其晒干果实入药，或将其研磨成粗粉使用。该药材可从各南五味子产地或中药商店购得，例如安徽毫州药材市场等。各地南五味子中的木脂素和五味子酯甲含量有所不同，以汉中、商洛和河南的南五味子为佳，分别可达到1.039％和0.912％。
本发明的南五味子提取方法采用水蒸汽蒸馏除去挥发油后，再以高浓度乙醇作为提取试剂，然后用大孔树脂进行吸附纯化，以提取治疗失眠有效部位为目的，木脂素和五味子酯甲作为质控标准。与本领域先前的超临界二氧化碳萃取和文献中提到的乙醇回流提取有所不同，本有效部位定位为木脂素其含量大于50％，有效成分为五味子酯甲其含量大于5％，并且药材价格低廉，方法简便，设备要求低，所得提取物成本低，木脂素纯度高，给药剂量小。
本发明的树脂吸附柱使用极性大孔吸附树脂，优选弱极性大孔吸附树脂。代表性的树脂例子包括LSA-7或10、AB-8、D101系列。优选树脂购自西安蓝深吸附材料有限公司LSA-7。在使用前可先用高浓度乙醇平衡。上样，洗涤，上样和洗脱速度不受限制，但优选每公斤树脂洗脱速度在10-80ml/min之间，最优选是40ml/min。
本发明(d)和(g)中所使用的过滤装置可以是各种常规过滤装置。例如滤纸真空吸滤，多孔树脂，超滤膜，分子筛，填充柱等。
本发明组合物中南五味子有效部位的木脂素提取物含量为50％以上(如50-95％，较佳地为60-90％)，有效部位得率为2％以上(基于药材总重量)(即得率为提取物与药材投入的百分比，得率2％即1公斤南五味子果实得到20克木脂素提取物)。经紫外分光光度法，于258nm处检测木脂素含量，也可用比色法，于570nm处检测木脂素含量；经HPLC法，于258nm处检测五味子酯甲含量，提取物中有效部位的含量在50％以上，五味子酯甲含量在5％以上。同时，由于操作步骤简单，对设备要求低，可用于大批量工业生产。
本发明获得的有效部位主要是木脂素提取物，具有镇静催眠的作用，可用于治疗失眠。本发明获得的主要部位毒性低，可以高剂量使用而无副作用。
本发明的南五味子木脂素提取物可直接使用，或与药物学上可接受的载体和添加剂一起，制成药物组合物。例如添加甜味剂、调味剂、着色剂和防腐剂，制备口服给药的片剂、锭剂、水或油悬液、可分散性粉末或颗粒、乳剂、硬或软胶囊、或糖浆或酏剂。片剂含有与适用于制造片剂的无毒的可接受的赋形剂混合的活性成分。这些赋形剂可以是例如惰性稀释剂，如碳酸钙、碳酸钠、乳糖、磷酸钙或磷酸钠；成粒剂及崩解剂，例如褐藻酸；粘合剂，如淀粉、明胶或阿拉伯胶；和润滑剂，如硬脂酸镁、硬脂酸或滑石。片剂可无糖衣或用已知技术包衣，来延迟在胃肠道内的解体和吸收，从而在较长时间内提供持续作用。例如，可施用延时物质，如一硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。口服使用的制剂还可制成硬明胶胶囊，其中活性成分与惰性固态稀释剂，如碳酸钙、磷酸钙或高岭土混合，或制成软明胶胶囊，其中活性成分和水或油性介质，例如花生油、液态石蜡或橄榄油混合。
本发明的药物组合物中有效成分的含量范围是1-99％，可由有经验的医师根据临床需要确定给药途径和剂量。
本发明的药物组合物还可含有其他治疗失眠的成分，例如目前可得的常规安眠药戊巴比妥钠等或其它中药制剂。
本发明的药物组合物可以用各种途径施用，例如口服、注射、透皮吸收，优选是口服。
发明效果使用本发明的制备方法，可得到含有高浓度木脂素的南五味子木脂素提取物。本发明的南五味子木脂素提取物具有显著的治疗失眠的作用，能够与戊巴比妥起到协同作用。
实施例实施例1-4南五味子木脂素的提取和检测1.材料和仪器材料南五味子(购自安徽亳洲药材市场，经南京中医药大学生药教研室吴启南教授鉴定)；大孔树脂(购自西安蓝深交换吸附材料有限公司)；乙醇(购自苏州东吴酒厂)。
仪器多功能提取罐(武进蒙河制药机械厂)；岛津UV-1240分光光度计；岛津LC-10ATVP高效液相色谱仪。
实施例1取50kg南五味子干燥果实，碾碎，用10倍药材量的水进行水蒸气蒸馏3小时，过滤，得到药渣。药渣用6倍药材量的水煎煮提取30分钟，过滤，弃去滤液(重复2次)。10倍药材量的90％乙醇回流提取，共提取两次，每次1小时，合并两次乙醇提取液，过滤，得到15L药液，所得药液过树脂吸附柱(LSA-10)，树脂用量为药材量的1倍，药液过完柱床后用95％乙醇洗脱，收集乙醇液(包括流过液和洗脱液)，过滤，回收乙醇，水浴蒸干，60℃烘干，得南五味子木脂素提取物。
实施例2取50kg南五味子干燥果实，碾碎，用8倍药材量的水进行水蒸气蒸馏4小时，过滤，得到药渣。药渣用6倍药材量的水煎煮提取，过滤，弃去滤液(重复1次)。8倍药材量的95％乙醇回流提取，共提取两次，每次1.5小时，合并两次乙醇提取液，过滤，得到13L药液，所得药液过树脂吸附柱(LSA-7)，树脂用量为药材量的1.5倍，药液过完柱床后用95％乙醇洗脱，收集乙醇液(包括流过液和洗脱液)，过滤，回收乙醇，水浴蒸干，70℃烘干，得南五味子木脂素提取物。
实施例3取50kg南五味子干燥果实，碾碎，用12倍药材量的水进行水蒸气蒸馏5小时，过滤，得到药渣。药渣用10倍药材量的水煎煮提取，过滤，弃去滤液(重复2次)。12倍药材量的85％乙醇回流提取，共提取两次，每次1小时，合并两次乙醇提取液，过滤(过中性氧化铝吸附柱)，得到19L药液，所得药液过树脂吸附柱(LSA-7)，树脂用量为药材量的2倍，药液过完柱床后用95％乙醇洗脱，收集乙醇液(包括流过液和洗脱液)，过滤，回收乙醇，水浴蒸干，80℃烘干，得南五味子木脂素提取物。
实施例4南五味子木脂素提取物中总木脂素和五味子酯甲含量的检测1.仪器紫外可见分光光度计(UV-1240，日本岛津公司苏州工厂)HPLC(LC-10ATVP，日本岛津公司苏州工厂)2.实验方法总木脂素精密吸取五味子酯甲对照品溶液、供试品溶液和甲醇各80微升，挥发去甲醇，再分别精密加入10％变色酸澄清水溶液1ml，硫酸6ml，蒸馏水3ml，摇匀，置沸水浴加热30分钟，迅速冷却，以甲醇管为空白，分光光度570nm处测定吸光度，计算木脂素含量。
五味子酯甲HPLC法，流动相甲醇-水(80∶20)，检测波长258nm，流速1ml/分，柱温20℃。
3.结果如下
三批50公斤的药材经提取，主要有效部位南五味子木脂素的最终提取率为在60％以上(以药材中含有的总木脂素为3％)，有效部位得率在2％以上(相对药材投入量)，经检测提取物中有效部位的含量在50％以上(总木脂素在提取物中所占的重量百分比)。
实施例5南五味子对阈下计量戊巴比妥钠的睡眠具有协同作用实验材料1.药物与试剂安定10mg/kg，配制成0.5mg/ml输液南五味子水煎液1g生药/kg (药材水煎液浓缩)南五味子木脂素55mg/kg (实施例2制备的木脂素提取物)南五味子多糖77mg/kg(药材水煎醇沉、沉淀水溶出除蛋白精制)南五味子挥发油70μl/kg (水蒸汽蒸馏法)南五味子水溶物92mg/kg(水蒸汽蒸馏法除去挥发油后的水煎液浓缩)溶解时加吐温80两滴；以上各药1g生药/kg，配制成0.2ml/10g小鼠灌胃。
2.动物ICR小鼠，雄性SD大鼠，均购自中国药科大学实验动物中心，合格证号SCXK(苏)2002-0011号。
3.实验方法与结果雌性小鼠70只，随机分成7组，分别为空白组、阳性药组、各南五味子组。灌胃给药0.2ml/10g，40分钟后腹腔注射戊巴比妥钠20mg/kg(0.1ml/10g)。观察注射后1h内翻正反射消失的动物数，并记录入睡时间。
结果见表1表1
结论南五味子木脂素与安定对阈下剂量的戊巴比妥钠具有显著的协同作用，提示南五味子中主要中枢抑制有效部位是总木脂素。
阈下剂量的戊巴比妥钠所造成的催眠模型常规剂量为20-30mg/kg，不用其它药物的小鼠不会入睡，同时使用中枢抑制药才会产生睡眠。
实施例6对小鼠自发活动的影响实验材料1.药物与试剂实施例1制备的南五味子木脂素提取物50、100、200mg/kg，配制成2.5、5、10mg/ml的溶液，溶解时加吐温80两滴；以上各药0.2ml/10g灌胃。
2.动物ICR小鼠，雄性SD大鼠，均购自中国药科大学实验动物中心，合格证号SCXK(苏)2002-0011号。
3.方法雌性小鼠50只，随机分组，分别为空白组、阳性药组、南五味子木脂素提取物高、中、低3个给药组，灌胃给药0.2ml/10g，1小时后观察小鼠2min内的活动轨迹，并描记。
结果见表2。
表2
*p＜0.05结论南五味子木脂素各组药物在该剂量下对小鼠自发活动无显著影响，提示其对正常的生理活动无影响。
实施例7南五味子木脂素提取物对阈下剂量戊巴比妥钠的睡眠协同作用实验材料1.药物与试剂安定10mg/kg；实施例1制备的南五味子木脂素提取物50、100、200mg/kg，配制成2.5、5、10mg/ml的溶液，溶解时加吐温80两滴；以上各药0.2ml/10g灌胃。
2.动物ICR小鼠，雄性SD大鼠，均购自中国药科大学实验动物中心，合格证号SCXK(苏)2002-0011号。
3.方法雌性小鼠50只，随机分组，分别为空白组、阳性药组、南五味子木脂素提取物高、中、低3个给药组，灌胃给药0.2ml/10g，40分钟后腹腔注射戊巴比妥钠20mg/kg(0.1ml/10g)。观察注射后1h内翻正反射消失的动物数，并记录入睡时间。
结果见表3。
表3
结论样品对于阈下剂量的戊巴比妥钠具有显著的协同作用，且成剂量依赖性，说明其具有镇静催眠作用。
实施例8 延长戊巴比妥钠的睡眠时间1.药物与试剂安定10mg/kg，配制成0.5mg/ml的溶液；实施例1制备的南五味子木脂素提取物50、100、200mg/kg，配制成2.5、5、10mg/ml的溶液，溶解时加吐温80三滴；以上各药0.2ml/10g灌胃。
2.动物ICR小鼠，雄性SD大鼠，均购自中国药科大学实验动物中心，合格证号SCXK(苏)2002-0011号。
3.方法雄性小鼠50只，称重随机分组，分别为空白组、阳性药组、南五味子木脂素提取物高、中、低3个给药组，灌胃给药0.2ml/10g，40分钟后腹腔注射戊巴比妥钠35mg/kg(0.1ml/10g)。观察注射后2h内翻正反射消失的动物数，并记录入睡时间和苏醒时间，计算入睡潜伏期和睡眠时间。
结果见表4。
表4
*p＜0.05，**p＜0.01结论与空白组比较，南五味子木脂素提取物具有延长戊巴比妥钠睡眠时间，提示其具有较好的助眠作用。
如上所述，本发明的方法能够高效的提取南五味子木脂素提取物，工艺简单，有效成分含量高。另外，所得到的产品在对于失眠的治疗中具有卓越的作用。
如上描述了本发明所公开的南五味子木脂素提取物制备方法和制得的产品及其用途。但需理解其中包含了本领域技术人员所理解的变化和改变。这些变化和改变也包含在权利要求所限定的本发明的范围内。
权利要求
1.一种制备南五味子木脂素提取物的方法，其特征在于，该方法包括步骤(a)用6-15倍南五味子药材重量的水蒸馏药材1-6小时；(b)过滤，剩余药渣；(c)煎煮药渣10-60分钟，过滤；(d)体积为药材量5-15倍的75％重量以上的乙醇水溶液提取药渣，每次0.5-3小时，过滤获得滤液；(e)将所得滤液过1-3倍药材量树脂吸附柱，获得流出液，所述树脂选自极性大孔吸附树脂；(f)用体积为树脂量1-5倍的75％重量以上的乙醇洗脱，获得洗脱液；(g)合并流出液和洗脱液，获得液态南五味子木脂素提取物。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(a)中的水性溶剂的用量是药材重量的8-12倍。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(a)中，回流提取3小时。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法还包括步骤(h)减压或常压回收尽溶剂，然后在50-100℃烘干，获得固态的南五味子木脂素提取物。
5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，重复步骤(d)1-3次。
6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(e)中的树脂选自弱极性大孔吸附树脂。
7.一种南五味子木脂素提取物，其特征在于，该提取物中总木脂素浓度为50％-95％重量，五味子酯甲浓度为5％-45％重量。
8.如权利要求7所述的南五味子木脂素提取物，其特征在于，该提取物是用权利要求1所述的方法制备的。
9.一种治疗失眠的药物组合物，其特征在于，它含有1-99％权利要求7所述的南五味子木脂素提取物和1-99％药学上可接受的载体。
10.权利要求7所述的南五味子木脂素提取物的用途，其特征在于，该提取物用于制备治疗失眠的药物。
全文摘要
公开了一种制备南五味子木脂素提取物的方法，包括步骤(a)用6－15倍南五味子药材重量的水蒸馏药材1－6小时；(b)过滤，剩余药渣；(c)煎煮药渣10－60分钟，过滤；(d)体积为药材量5－15倍的75％重量以上的乙醇水溶液提取药渣，每次0.5－3小时，过滤获得滤液；(e)将所得滤液过1－3倍药材量树脂吸附柱，获得流出液，所述树脂选自极性大孔吸附树脂；(f)用体积为树脂量1－5倍的75％重量以上的乙醇洗脱，获得洗脱液；(g)合并流出液和洗脱液，获得液态南五味子木脂素提取物。还公开了用该方法制备的南五味子木脂素提取物及含有它的组合物，及其在制备治疗失眠的药物上的用途。
文档编号A61P25/20GK1813900SQ20051002387
公开日2006年8月9日 申请日期2005年2月5日 优先权日2005年2月5日
发明者徐丽华, 黄芳, 徐强 申请人:苏州市思源医药科技有限公司