专利名称：尼莫司汀脑部缓释植入剂及其制备方法
技术领域：
本发明涉及新型药物剂型，尤其是一种治疗恶性脑胶质瘤的尼莫司汀脑部缓释植入剂及其制备方法。
背景技术：
恶性脑肿瘤是导致死亡的主要癌症之一。原发性脑肿瘤的半数是胶质瘤，它是脑肿瘤中最富挑战性的肿瘤之一。近30年来，恶性胶质瘤的治疗效果未能得到明显改善，由于其呈浸润性生长，与正常脑组织分界不清，手术不可能彻底切除，术后常有复发，根据美国脑瘤共同研究组的统计，恶性胶质瘤的单纯手术治疗的中位生存期(MTS)仅为14周，而手术后辅以放疗平均生存期不超过一年。因此，提高脑肿瘤特别是胶质瘤的治疗效果，仍然是摆在我们面前的艰巨任务。
恶性脑胶质瘤综合治疗方法为手术十全身化疗十放疗。有报道根据实验发现测算，认为即使手术和放射治疗杀死了99.9％的胶质瘤细胞，残余肿瘤也可以在78天恢复到原有肿瘤大小。因此，在肿瘤缓解期采用维持治疗以巩固疗效是极为重要的。维持治疗的方法，如化疗、放疗及免疫治疗等有许多种，其中，化学药物治疗已成为恶性脑胶质瘤综合治疗的重要环节。
尽管这些年来不断开发各种新药，或尝试采用多种药物联合应用的各种方案，来应用于恶性脑胶质瘤的化学药物治疗，但亚硝脲类药物(如ACNU、BCNU)由于最易透过血脑屏障而一直居于主导地位。过去常用有卡氮芥(BCNU)，环己亚硝脲(CCNU)和甲基环己亚硝脲(MECCNU)。但这些药物，都会产生骨髓抑制和对肝肾功能的毒害以及强烈的胃肠道反应，而且彼此间还存在交叉耐药性。为此我们选用这一新的亚硝基脲类药——尼莫司汀(Nimustine ACNU)。尼莫司汀又名盐酸嘧啶亚硝脲，属烷化剂的亚硝脲类抗癌药。主要作用是使细胞内DNA烷化而使DNA低分子化，从而阻碍DNA的合成，抑制肿瘤细胞的生长。
血脑屏障的存在，使很多药物不能进入脑部，限制了脑部疾病的治疗，为此研究了许多脑给药系统的技术。20世纪90年代以来，药物剂型和制剂研究已进入药物释放系统时代，新型药物释放系统已成为药学领域的重要发展方向。新型给药系统中脑给药的一些新方法也已形成，其中脑内植入将全合成的、生物相容性好、可生物降解的高分子材料与药物制成小丸，圆片，微球植入脑内。使脑瘤局部控缓释药物间质化疗成为可能。
脑瘤局部控缓释药物间质化疗解决了传统的全身化疗药物具有难以通过血脑屏障、药物局部浓度低、全身反应严重、作用肿瘤时间短而影响疗效等缺点和不足，它避开血脑屏障，直接增加局部药物浓度，同时延长了化疗药物的作用时间，亦减少了药物的全身毒副作用，且这种给药方法也符合脑胶质瘤几乎无转移，局部复发多在原肿瘤2cm范围内的特点。
发明内容
本发明在于提供一种治疗恶性脑胶质瘤的尼莫司汀脑部缓释植入剂，它由尼莫司汀和聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)组成，通过病变部位局部植入，发挥长期高效的脑胶质瘤抑制作用。
本发明的另一目的在于提供该尼莫司汀脑部缓释植入剂的制备方法。
为了解决上述技术问题，本发明的技术方案如下一种尼莫司汀脑部缓释植入剂，由尼莫司汀和聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)组成，其特征在于尼莫司汀与聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)的重量比例为1∶100至40∶100，采用复乳化-溶剂挥发法制成尼莫司汀缓释微球，将缓释微球压片，制成尼莫司汀脑部缓释植入剂，用于治疗恶性脑胶质瘤及其他脑部肿瘤。
尼莫司汀脑部缓释植入剂的制备采用复乳化-溶剂挥发法，将尼莫司汀和聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)按1∶100至40∶100的重量比例，其最佳重量比例为5∶100至20∶100，在完全避光的条件下，将尼莫司汀溶解在一定浓度的明胶水溶液中，作为内水相；PLGA用二氯甲烷完全溶解，作为油相；将油相加至内水相中，涡旋混匀，超声乳化得初乳；初乳快速冷却后滴加到浓度为4％聚乙烯醇(PVA)水溶液中，高速搅拌得复乳；复乳加至0.1％PVA溶液中，低速搅拌挥干有机溶剂，离心收集微球，用蒸馏水洗涤；冷冻干燥后真空干燥制成尼莫司汀缓释微球，将缓释微球压片，灭菌得成品尼莫司汀脑部缓释植入剂。
尼莫司汀脑部缓释植入剂植入患者脑部肿瘤切除后的残腔内，发挥长期高效抑制脑胶质瘤的作用。
图1.尼莫司汀脑部缓释植入剂体内释放曲线图2.荷瘤大鼠存活时间具体实施方式
以下通过试验例来进一步阐明本发明所述药物的有益效果。
试验例1.体内药物释放测定实验动物Wistar大鼠，雌雄各半，鼠龄4-6周，体重175-200g，数量36只，由第二军医大学实验动物中心提供。
测定方法36只大鼠随机分成6组，每组6只。戊巴比妥钠腹腔注射麻醉后，将大鼠头部固定，碘酒、乙醇消毒，于矢状缝左2mm、冠状缝后3mm处切开皮肤，钻孔，将植入剂量为6mg的尼莫司汀脑部缓释植入剂植于额叶脑皮质下1mm处，骨蜡封闭骨孔，缝合皮肤。分别于术后1、7、14、21、28、35天6个时间点处死动物，取大脑植入部位组织制成匀浆，测定其中尼莫司汀含量，结果见图1。体内实验表明，尼莫司汀脑部缓释植入剂具有明显的缓释作用，体内作用可达到一个月。
试验例2.荷瘤大鼠存活时间观察实验动物Wistar大鼠，雌雄各半，鼠龄4-6周，体重175-200g，数量40只，由第二军医大学实验动物中心提供。
实验方法1、选大鼠右侧脑尾状核为靶点，坐标为前囱前1.0mm，矢状缝右旁开3.0-3.5mm，硬膜下6.0mm。2、接种方法大鼠经2％戊巴比妥钠腹腔注射麻醉后固定，手术暴露颅骨标志，按坐标定位牙钻钻孔，孔径1.2mm暴露硬膜。将微量注射器固定于立体定向仪，进针深度为硬膜下6.0mm。将C6细胞悬液注入靶区，缓慢拔针后以骨蜡封闭骨孔缝合皮肤。一周后将大鼠分两组，一组植入剂量为6mg的尼莫司汀脑部缓释植入剂，另一组注射剂量为6mg的尼莫司汀注射剂。观察大鼠存活时间，记录如图2所示。实验结果表明，尼莫司汀脑部缓释植入剂较尼莫司汀普通注射剂可明显延长大鼠存活时间。
试验例3.尼莫司汀脑部缓释植入剂对C6细胞的抑制作用采用细胞计数法检测细胞增殖，流式细胞仪分析细胞周期和凋亡，观察尼莫司汀脑部缓释植入剂及注射剂对C6细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用，结果见表1。
表1尼莫司汀脑部缓释植入剂对C6细胞的抑制作用(n＝3)
实验结果表明，尼莫司汀脑部缓释植入剂对C6细胞的抑制作用较普通注射剂更为明显。
试验例4.尼莫司汀脑部缓释植入剂及注射剂对脑胶质瘤的抑制作用比较尼莫司汀脑部缓释植入剂及注射剂对脑胶质瘤的抑制作用，将荷瘤大鼠分为两组，一组植入尼莫司汀脑部缓释植入剂，另一组注射注射剂，一定时间后处死大鼠，获取脑肿瘤标本，称重，结果见表2。
表2尼莫司汀脑部缓释植入剂对脑胶质瘤的抑制作用(n＝3)
实验结果表明，尼莫司汀脑部缓释植入剂对脑脑胶质瘤的抑制作用较普通注射剂更为明显。
通过上述试验可得如下结论尼莫司汀脑部缓释植入剂能够有效释放达一个月，直接延长了药物的作用时间，使荷瘤大鼠存活时间得以有效延长，表现了更好的对C6细胞及脑胶质瘤的抑制作用，具有广阔的治疗前景。
下面通过实施例进一步说明本发明。应该理解的是，本发明的实施例是用于说明本发明而不是对本发明的限制。根据本发明的实质对本发明进行的简单改进都属于本发明要求保护的范围。
采用复乳化-溶剂挥发法，在完全避光的条件下，将尼莫司汀溶解在明胶水溶液中，作为内水相；PLGA用二氯甲烷完全溶解，作为油相；将油相加至内水相中，涡旋混匀，超声乳化得初乳；初乳快速冷却后滴加到浓度为4％聚乙烯醇水溶液中，高速搅拌得复乳；复乳加至0.1％PVA溶液中，低速搅拌3小时挥干有机溶剂，离心收集微球，用蒸馏水洗涤；冷冻干燥后真空干燥制成尼莫司汀缓释微球，将缓释微球压片，灭菌得成品尼莫司汀脑部缓释植入剂。
现结合实施例，对本发明尼莫司汀脑部缓释植入剂制备作详细描述。
实施例1.
尼莫司汀与PLGA重量比为20∶100。
缓释聚合物采用浓度为60％的PLGA(75∶25)与二氯甲烷溶液的混合物。
制备步骤采用W/O/W复乳化-溶剂挥发法(1)精密称取20mg尼莫司汀置1.5ml塑料离心管中，加入20μl浓度为16％的明胶水溶液，60℃水浴加热，使药物溶解完全，作为内水相。
(2)精密称取PLGA0.1g置1.5ml塑料离心管中，加入167μl二氯甲烷，使PLGA溶解完全，作为油相。
(3)用移液枪将油相加至内水相中，旋涡混匀，60℃水浴加热，超声乳化得初乳。
(4)初乳至冰水浴中冷却至18℃，然后加至40ml 4％聚乙烯醇1788水溶液中，8000转/分钟搅拌2分钟得复乳。
(5)复乳加至80ml 0.1％PVA水溶液中，200转/分钟搅拌3小时，挥干有机溶剂，2500转/分钟离心收集微球，蒸馏水洗涤3次，加水混悬为2ml，冷冻干燥得微球。
(6)取微球100mg压片得尼莫司汀脑部缓释植入剂。
实施例2.
尼莫司汀与PLGA重量比为2∶100，缓释聚合物采用浓度为5％的PLGA(75∶25)与二氯甲烷溶液的混合物。制备步骤如实施例1，制得尼莫司汀脑部缓释植入剂。
实施例3.
尼莫司汀与PLGA重量比为5∶100，缓释聚合物采用浓度为10％的PLGA(75∶25)与二氯甲烷溶液的混合物。制备步骤如实施例1，制得尼莫司汀脑部缓释植入剂。
实施例4.
尼莫司汀与PLGA重量比为10∶100，缓释聚合物采用浓度为20％的PLGA(75∶25)与二氯甲烷溶液的混合物。制备步骤如实施例1，制得尼莫司汀脑部缓释植入剂。
实施例5.
尼莫司汀与PLGA重量比为15∶100，缓释聚合物采用浓度为40％的PLGA(75∶25)与二氯甲烷溶液的混合物。制备步骤如实施例1，制得尼莫司汀脑部缓释植入剂。
实施例6.
尼莫司汀与PLGA重量比为25∶100，缓释聚合物采用浓度为40％的PLGA(75∶25)与二氯甲烷溶液的混合物。制备步骤如实施例1，制得尼莫司汀脑部缓释植入剂。
实施例7.
尼莫司汀与PLGA重量比为30∶100，缓释聚合物采用浓度为60％的PLGA(75∶25)与二氯甲烷溶液的混合物。制备步骤如实施例1，制得尼莫司汀脑部缓释植入剂。
实施例8.
尼莫司汀与PLGA重量比为38∶100，缓释聚合物采用浓度为60％的PLGA(75∶25)与二氯甲烷溶液的混合物。制备步骤如实施例1，制得尼莫司汀脑部缓释植入剂。
临床有效的抗癌药必须在肿瘤内达到足够的药物浓度而对身体其它系统无或仅有可以耐受的毒性作用。系统给药化疗使全身所有组织器官都暴露于抗癌药，特别是治疗脑肿瘤，往往需要加大剂量才能在中枢神经系统达到有效药物浓度。因此，使得治疗剂量接近甚至超过病人的最大耐受剂量，有些病人因严重全身毒副作用而无法接受化疗。局部给药可以用较小的剂量达到最大治疗浓度，而身体其它部位的抗癌药物浓度极低，可以明显提高局部药物浓度而减少全身毒副作用。直接作用于肿瘤部位，避开了血脑屏障，大大增加了脑瘤化疗药物选择范围。胶质瘤几乎没有转移，向颅外的远方转移更是罕见。胶质瘤常为局部复发，且80％均在原发肿瘤的2cm范围内，这就使尼莫司汀脑部缓释植入剂非常适合进行局部缓释化疗。
权利要求
1.一种尼莫司汀脑部缓释植入剂，由尼莫司汀和聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)组成，其特征在于尼莫司汀与聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)的重量比例为1∶100至40∶100，采用复乳化-溶剂挥发法制成尼莫司汀缓释微球，将缓释微球压片，制成尼莫司汀脑部缓释植入剂，用于治疗恶性脑胶质瘤及其他脑部肿瘤，通过病变部位局部植入，发挥长期高效抑制脑胶质瘤的作用。
2.一种按照权利要求1所述的尼莫司汀脑部缓释植入剂的制备方法，其特征在于采用复乳化-溶剂挥发法，将尼莫司汀和聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)按1∶100至40∶100的重量比例，在完全避光的条件下，将尼莫司汀溶解在一定浓度的明胶水溶液中，作为内水相；PLGA用一定量的二氯甲烷完全溶解，作为油相；将油相加至内水相中，涡旋混匀，超声乳化得初乳；初乳快速冷却后滴加到浓度为4％聚乙烯醇水溶液中，高速搅拌得复乳；复乳加至0.1％PVA溶液中，低速搅拌挥干有机溶剂，离心收集微球，用蒸馏水洗涤；冷冻干燥后真空干燥制成尼莫司汀缓释微球，将缓释微球压片，灭菌得成品尼莫司汀脑部缓释植入剂。
3.一种按照权利要求1或2所述的尼莫司汀脑部缓释植入剂，其特征在于尼莫司汀与聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)的最佳重量比例为5∶100至20∶100。
全文摘要
一种尼莫司汀脑部缓释植入剂，由尼莫司汀和聚乳酸－羟基乙酸共聚物(PLGA)组成，尼莫司汀与PLGA的重量比例为1∶100至40∶100，采用复乳化－溶剂挥发法，制成尼莫司汀缓释微球，将缓释微球压片，灭菌得尼莫司汀脑部缓释植入剂，通过病变部位局部植入，发挥长期高效的脑胶质瘤抑制作用，解决了传统的全身化疗药物具有难以通过血脑屏障、药物局部浓度低、全身反应严重、作用肿瘤时间短而影响疗效等缺点和不足，它避开血脑屏障，直接增加局部药物浓度，同时延长了化疗药物的作用时间，亦减少了药物的全身毒副作用，用于恶性脑胶质瘤及其他脑部肿瘤的治疗。
文档编号A61K31/506GK1686134SQ20051002495
公开日2005年10月26日 申请日期2005年4月7日 优先权日2005年4月7日
发明者张翮, 高申, 陈建明, 邹豪, 管斐, 李国栋, 丁雪鹰, 俞媛 申请人:中国人民解放军第二军医大学