治疗眼高压和青光眼的他汀类的制作方法

专利名称：治疗眼高压和青光眼的他汀类的制作方法
背景技术：
本发明涉及青光眼的治疗以及控制或降低患者眼内压。本发明更加特别地涉及用于治疗青光眼以及控制或降低眼内压的药物组合物的应用。青光眼的视神经病(青光眼)是一种特征在于由视神经不可逆损伤而引起视觉功能永久性丧失的疾病。一些形态或功能类型不同的青光眼的典型特征是眼内压(IOP)增高，其被认为是涉及该疾病的病理过程。眼高压是一种IOP增高的病症，但是不发生视觉功能的明显丧失；这种患者被认为极有可能最终发展为伴随青光眼的视觉丧失。一些青光眼视域丧失的患者IOP相对较低。这些正常眼压或低眼压的青光眼患者也可得益于降低和控制IOP的药剂。如果青光眼或眼高压能够尽早发现并以有效降低增高的眼内压的药物迅速治疗，则视觉功能丧失或其恶化进程通常会得以改善。已被证实有效降低眼内压的药物疗法包括减少房水产生的药剂和增加流出的药剂。IOP的持续增高与视网膜的逐渐退化和视觉功能的丧失相关。因此，为了减少青光眼视网膜病的可能性或者其严重程度，降低IOP可能成为治疗青光眼患者的目标。不幸的是，许多个体以现有的青光眼疗法治疗时并不产生良好的响应。本发明主要涉及一类显示HMG-CoA还原酶抑制活性的药物。术语“他汀类”通常用于描述“HMG-CoA还原酶抑制剂”。出于多种目的，他汀类在不同的药物研究中被应用或评价。这些研究中的一部分记载在下面。然而，所有这些研究均未认识到他汀类对治疗青光眼和/或控制或降低眼内压有效。他汀类属于3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A(HMG-CoA)还原酶抑制剂类，临床已知其具有促使血清脂质减少的性质。促使血清脂质减少的性质是由于他汀类能够抑制HMG-CoA还原酶，防止3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A转变为甲羟戊酸，这一过程是胆固醇合成中的限速步骤。然而，他汀类也能够发挥与抑制胆固醇生物合成可能无关的作用。例如，除其它的效应外，已经报道他汀类还能够抑制多种粘合素的表达，抑制超氧阴离子的产生，干扰Rho蛋白的异戊二烯化，以及作为自由基清除剂(Wassmann和Nickenig，Endothelium，2003，1023-33；Mason JC，Clin Sci(Lond)2003，105251-66)。另外已经报道了他汀类的抗炎和心脏保护活性(Yoshida M J.Atheroscelrosis Thromb 2003，10(3)，140-4；Luo JD和Chen AF Curr Med Chem 2003，10(16)，1593-601)。其它关于他汀类用于非青光眼目的的研究例子在美国专利申请2003/0065020中有所描述，该申请涉及应用HMG-CoA还原酶抑制剂他汀类治疗或者预防黄斑变性。另外，美国专利No.6,569,461涉及应用某些二羟基开放酸他汀类的缓释制剂治疗糖尿病性视网膜病。Schmidt等(Ophthalmic Res.1994，26，352-60)报道患者口服洛伐他汀或辛伐他汀至少一年进行治疗，其眼内压没有明显的临床变化。氯贝丁酯，能够适度降低LDL胆固醇和甘油三酯的过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)激动剂的贝特类中的一员，还被报道能够降低IOP。本发明者通过一些重要研究发现了用HMG-CoA还原酶抑制剂如他汀类治疗青光眼和/或控制或降低眼内压的方法。
发明概述本发明的一个特征是应用化学稳定性增强并且可以用于降低和控制正常的或升高的眼内压和/或治疗青光眼的化合物。本发明的另一个特征是应用提供降低和控制正常或升高的眼内压和/或治疗青光眼的所需治疗活性水平的化合物。本发明另一个方面提供一种治疗或预防青光眼的方法，该方法提供神经保护作用。本发明还有一个特征是提供一种显著减少小梁网(TM)细胞产生结缔组织生长因子(CTGF)而治疗或预防青光眼的方法。本发明还有一个特征是提供一种显著减少TM细胞分泌纤维结合素而治疗或预防青光眼的方法。本发明其它的特征和优点一部分记载在下面的说明书中，一部分是由说明书显而易见的得出，或者可以通过实施本发明而获知。通过说明书和附加的权利要求特别指出的要素和组合将实现和达到本发明的目的和其它优点。如本文具体化及概括性描述的，为获得这些和其它的优点并且合乎本发明的目的，本发明涉及包含至少一种HMG-CoA还原酶抑制剂的组合物治疗青光眼和/或降低或控制正常的或升高的IOP，如与正常眼压性青光眼和/或眼高压有关的IOP的应用。组合物可以是优选的药物组合物，例如，适于局部递送至眼部的药物组合物。应该理解，前面的概括描述和接下来的详细描述均是示范性的，示例的意图仅仅在于提供对于本发明主张的更进一步的解释。
附图简述

图1-3是表示他汀类对于培养的人类小梁网细胞中基础的和TGFβ2-诱导的CTGF基因表达的作用的图。图4是表示H2O2诱导的氧化应激在HTM-35D细胞生存能力中作用的柱状图。细胞在存在或者不存在测验试剂的无血清培养基中孵育30分钟(37℃，5％CO2)，然后用无血清的培养基清洗和置换2天。然后通过中性红摄取法评估生存能力。图中的柱表示两个独立实验的平均值和SEM，每个试验重复三次。图5表示洛伐他汀对于GTM-3细胞纤维结合素分泌和生存能力影响的柱状图。转化的人类小梁网(GTM-3)细胞在存在或不存在测验试剂的无血清DMEM培养基中孵育24小时(37℃，5％CO2)。然后用ELISA分析细胞上清液中的纤维结合素含量，用中性红摄取法分析细胞单层的生存能力。
发明详述本发明一部分涉及一种治疗人类患者或其它哺乳动物青光眼的方法。本发明还涉及一种降低或控制人类患者或其它哺乳动物的正常的或者升高的IOP的方法。这些方法包括施用包含至少一种3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A(HMG-CoA)还原酶抑制剂的组合物。换言之，本发明涉及至少一种具有HMG-CoA还原酶抑制活性的物质的用途。已知一组适用于本发明的HMG-CoA还原酶抑制剂是他汀类。为实现本发明的目的，这里所使用的“他汀类”是HMG-CoA抑制剂。这些药物由于能够抑制HMG-CoA还原酶，防止3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A转变为甲羟戊酸，此转化过程是胆固醇合成中的限速步骤，因而可能具有促使血清脂质减少的性质。HMG-CoA还原酶抑制剂的例子包括但是不限定于，康帕丁、洛伐他汀、辛伐他汀、普伐他汀、美伐他汀、氟伐他汀、罗苏伐他汀、阿伐他汀、匹伐他汀、西立伐他汀、柏伐他汀、达伐他汀、格仑伐他汀、RP61969、SDZ-265859、BMS-180431、CP-83101、二氢洛伐他汀、L-669262或其组合。化学名如下康帕丁(美伐他汀，(2S)-2-甲基丁酸(1S，7S，8S，8aR)-1，2，3，7，8，8a-六氢-7-甲基-8-[2-[(2R，4R)-四氢-4-羟基-6-氧代-2H-吡喃-2-基]乙基]-1-萘基酯)，洛伐他汀(2(S)-2-甲基-丁酸(1S，3R，7S，8S，8aR)-1，2，3，7，8，8a-六氢-3，7-二甲基-8-[2-[(2R，4R)-四氢-4-羟基-6-氧代-2H-吡喃-2-基]乙基]-1-萘基酯)，辛伐他汀(2，2-二甲基-丁酸(1S，3R，7S，8S，8aR)-1，2，3，7，8，8a-六氢-3，7-二甲基-8-[2-[(2R，4R)-四氢-4-羟基-6-氧代-2H-吡喃-2-基]乙基]-1-萘基酯)，普伐他汀((βR，δR，1S，2S，6S，8S，8aR)-1，2，6，7，8，8a-六氢-β，δ，6-三羟基-2-甲基-8-[(2S)-2-甲基-1-氧代丁氧基]-1-萘庚酸)，氟伐他汀((3R，5S，6E)-rel-7-[3-(4-氟苯基)-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-2-基]-3，5-二羟基-6-庚烯酸)，罗苏伐他汀((3R，5S，6E)-7-[4-(4-氟苯基)-6-(1-甲基乙基)-2-[甲基(甲磺酰)氨基]-5-嘧啶基]-3，5-二羟基-6-庚烯酸)，阿伐他汀((βR，δR)-2-(4-氟苯基)-β，δ-二羟基-5-(1-甲基乙基)-3-苯基-4-[(苯基氨基)羰基]-1H-吡咯-1-庚酸)，匹伐他汀((3R，5S，6E)-7-[2-环丙基-4-(4-氟苯基)-3-喹啉基]-3，5-二羟基-6-庚烯酸)，西立伐他汀((3R，5S，6E)-7-[4-(4-氟苯基)-5-(甲氧甲基)-2，6-二(1-甲基乙基)-3-吡啶基]-3，5-二羟基-6-庚烯酸)，柏伐他汀((R*，S*-(E)-7-(4-(4-氟苯基)螺(2H-1-苯并吡喃-2，1′-环戊)-3-基)-3，5-二羟基-乙酯)，达伐他汀((4R，6S)-rel-6-[(1E)-2-[2-(4-氟-3-甲基苯基)-4，4，6，6-四甲基-1-环己烯-1-基]乙烯基]四氢-4-羟基-，2H-吡喃-2-酮)，格仑伐他汀((4R，6S)-6-[(1E)-2-[4-(4-氟苯基)-2-(1-甲基乙基)-6-苯基-3-吡啶基]乙烯基]四氢-4-羟基-2H-吡喃-2-酮)，RP 61969([2S-[2α(E)，4β]]-；4-(4-氟苯基)-2-(1-甲基乙基)-3-[2-(四氢-4-羟基-6-氧代-2H-吡喃-2-基)乙烯基]-1(2H)-异喹啉酮)，BMS-180431((3R，5S，6E)-rel-9，9-二(4-氟苯基)-3，5-二羟基-8-(1-甲基-1H-四唑-5-基)-6，8-壬二烯酸)，CP-83101((3R，5S，6E)-rel-3，5-二羟基-9，9-二苯基-6，8-壬二烯酸甲酯)，二氢洛伐他汀((2S)-2-甲基-丁酸(1S，3S，4a R，7S，8S，8aS)-1，2，3，4，4a，7，8，8a-八氢-3，7-二甲基-8-[2-[(2R，4R)-四氢-4-羟基-6-氧代-2H-吡喃-2-基]乙基]-1-萘基酯)，L-669262(2，2-二甲基-丁酸(1S，7R，8R，8aR)-1，2，6，7，8，8a-六氢-3，7-二甲基-6-氧代-8-[2-[(2R，4R)-四氢-4-羟基-6-氧代-2H-吡喃-2-基]乙基]-1-萘基酯)。一些优选的HMG-CoA还原酶抑制剂的具体结构如下 康帕丁(2S)-2-甲基-丁酸(1S，7S，8S，8aR)-1，2，3，7，8，8a-六氢-7-甲基-8-[2-[(2R，4R)-四氢-4-羟基-6-氧代-2H-吡喃-2-基]乙基]-1-萘基酯 洛伐他汀2(S)-2-甲基-丁酸(1S，3R，7S，8S，8aR)-1，2，3，7，8，8a-六氢-3，7-二甲基-8-[2-[(2R，4R)-四氢-4-羟基-6-氧代-2H-吡喃-2-基]乙基]-1-萘基酯 辛伐他汀2，2-二甲基-丁酸(1S，3R，7S，8S，8aR)-1，2，3，7，8，8a-六氢-3，7-二甲基-8-[2-[(2R，4R)-四氢-4-羟基-6-氧代-2H-吡喃-2-基]乙基]-1-萘基酯
普伐他汀(βR，δR，1S，2S，6S，8S，8aR)-1，2，6，7，8，8a-六氢-β，δ，6-三羟基-2-甲基-8-[(2S)-2-甲基-1-氧代丁氧基]-1-萘庚酸 氟伐他汀(3R，5S，6E)-rel-7-[3-(4-氟苯基)-1-(1-甲基乙基)-1H-吲哚-2-基]-3，5-二羟基-6-庚烯酸 阿伐他汀(βR，δR)-2-(4-氟苯基)-β，δ-二羟基-5-(1-甲基乙基)-3-苯基-4-[(苯基氨基)羰基]-1H-吡咯-1-庚酸 西立伐他汀(3R，5S，6E)-7-[4-(4-氟苯基)-5-(甲氧甲基)-2，6-二(1-甲基乙基)-3-吡啶基]-3，5-二羟基-6-庚烯酸 罗苏伐他汀(3R，5S，6E)-7-[4-(4-氟苯基)-6-(1-甲基乙基)-2-[甲基(甲磺酰)氨基]-5-嘧啶基]-3，5-二羟基-6-庚烯酸除了上述例子，其它可用于本发明中的适宜的HMG-CoA还原酶抑制剂的例子包括那些具有结构A-B的化合物，其中A和B代表构成符合本发明目的的适宜的HMG-CoA还原酶抑制剂的化合物的组成部分。下面结构中的弯曲线表示A和B之间共价键即C-C键所在之处。优选地，该A-B键是β构型。可结合于任意组合中的A和B的适宜的例子如下
结构B部分可以以上面第一个结构所示的开放的二羟基酸、酯、酰胺或醇的形式存在，或者以上面第二个结构所示的内酯形式存在。在此处被称作“结构A”和“结构B”部分的上述结构中，取代基可分别如下R1＝CO2R，CONR5R6或CH2OR7，或者R1和R3可形成内酯；R＝H或者阳离子盐部分，或者CO2R形成药学可接受的酯部分；R2，R3，R4＝相同或者不同＝H，C(O)R8或者C(O)NR5R6；R5，R6＝相同或者不同＝H或者烷基；R7＝H或者C(O)R8；以及R8＝烷基。
术语“烷基”包括具有总数为1-10个原子的直链、支链和环烷基或者(环烷基)烷基基团。烷基可以是非取代的，或者被其它基团如卤素或者羟基所取代。
公认上述化合物可以包含一个或者多个手性中心。本发明涵盖所有的对映体、非对映体或其混合物。用于本发明的HMG-CoA还原酶抑制剂还包括具有或包含上述结构B的部分与除上述结构A部分之外的部分相结合的化合物。上述化合物的药学可接受的盐和溶剂化物以及前药形式也可以用于本发明的方法中。而且，上述化合物的衍生物也可以用于本发明的方法中。衍生物包括羧酸衍生物(例如羧酸盐、酯、内酯、酰胺、异羟肟酸、醇、酯化醇和烷化醇(醇盐))以及醇衍生物(例如酯、氨基甲酸酯类、内酯、碳酸盐、醇盐、缩醛、缩酮、磷酸盐和磷酸酯)。就上述化合物而言，一些化合物在一个或多个芳香环上包含氟，因此除了氟，其它任何卤素均可使用。而且，替代上述化合物中的氢或烷基，也可以使用不同的烷基基团。例如，代替-OH，可使用-O-烷基基团。因此，基于这里提出的教导和知识与本领域技术人员的常识的结合，可以容易地将多种衍生物用于本发明中。上述实例既可以商购(如Calbiochem-Novabiochem公司，SST公司，Aceto公司，Tocris Cookson公司，Sigma，和BIOMOL研发实验室公司)也可以在本领域技术人员可以获知的文献基础上合成得到。由于在肝和肠粘膜中广泛进行循环前消除，因此他汀类的口服生物利用度低(即，通常范围是5-20％)。另外，多数他汀类与血浆高度结合并快速消除(Klotz U Arzneim Forsch(Drug Research)2003，53，605-611)。这些因素大大地限制了口服给药后到达眼组织的活性化合物的量。因此在本发明中眼睛局部给药应用是相当优选的。然而，本发明者发现，一些他汀类(如普伐他汀)在眼睛局部给药后能够通过角膜的渗透而到达眼内组织，而其它一些他汀类(如阿伐他汀)不容易透过角膜，因此不能通过这种给药途径而成为本发明方法中的可行的治疗剂。已经证实应用反相高压液相色谱法保留参数如保留指数(“RI”)可以预测进入及通过生物膜的分子的比例。(Brent DA.Sabaltks JJ，Minick DJ和Henry DW.Journal of MedicinalChemistry 1983，26，1014-1020)。本发明者已经发现RI值可以用于预测他汀类在眼睛局部给药后在眼内组织中达到治疗浓度的能力。特别是本发明者发现RI值为0.2至0.7的他汀类可以通过眼睛局部给药施用于患者。RI值可通过下述的步骤加以测定。
保留指数(“RI”)值的测定检品溶于溶剂成为15-20μg/mL的溶液。将此溶液和参比溶液(1％的PGF2α异丙酯乙醇液用3mL稀释溶剂稀释)直接注入Microsorb-MV ODS反相高压色谱柱(4.6mm ID×15cm长，5μm)。流动相是pH3.0的磷酸铵缓冲液的水相/乙腈(1∶1)混合物，流速是大约每分钟1mL。保留指数(RI)用下列公式计算RI＝RT1/RT2其中RT1＝检品的保留时间，RT2＝PGF2α异丙酯标准品的保留时间上述RI值的范围0.2至0.7适用于本文所述的所有的他汀类。然而，该范围是基于化合物的二羟基开放酸的形式。因此，结构B在内酯构型中的他汀类在测定RI值前必须转化成相应的开放酸。本发明的化合物可以用于降低或者控制IOP，包括与正常眼压性青光眼、眼高压以及温血动物特别是人类的青光眼有关的IOP。组合物优选制成优选适于局部递送如施用于患者眼睛的药物组合物。组合物可以通过常规技术以任何适宜的方式给药。他汀类可以帮助延缓/抵抗青光眼中常见的小梁网(TM)细胞质的流失。他汀类的抗氧化和自由基清除作用可以抵抗TM中衰老和/或青光眼有关的氧化损伤/应激，尽管其确切机制还不清楚。之前已经注意到青光眼患者TM组织中细胞质的减少(Alvarado等，Ophthalmology，1984，91564-579)。而且，据报道青光眼患者房水中脂质过氧化产物水平增加至少两倍，伴随着总的抗氧化能力的降低(Kulysheva等，Vestn Of talmol，1996，1123-5)。自由基水平增加可能正在损伤多种组织，因此他汀类可以帮助延缓/抵抗青光眼中常见的TM细胞质的流失。TM是房水(AH)排水的主要场所，AH经由TM外流的不畅可能是青光眼中常见的IOP增高的诱发因素。用他汀类治疗而保留TM细胞质，能够使AH外流得到改善，IOP降低。因此，本发明还涉及通过给患者施用药物有效量的包含至少一种HMG-CoA还原酶抑制剂的组合物而保护患者TM的方法。本发明还能够防止过量或者不适当的细胞外基质累积而堵塞外流通路。在TM的附近细胞外基质物质的过度累积也是许多形式青光眼的标志。这种增加会导致房水外流阻力增加，从而提高IOP。结缔组织生长因子(CTGF)在与ECM过度累积有关的病症如硬化病、纤维增生性疾病和瘢痕化中暗示作为诱发因素。CTGF可以增加细胞外基质(ECM)物质如胶原I和纤维结合素的生成。在离体的组织和人类TM细胞系中均检测到了CTGF基因产物的存在，培养的人类TM细胞积极地分泌ECM组分纤维结合素。他汀类药物如辛伐他汀、洛伐他汀和美伐他汀(康帕丁)显著地降低培养的人类TM细胞的结缔组织生长因子(CTGF)的基因表达。他汀类还显著减少培养的人类TM细胞分泌纤维结合素。因此，由于抗氧化和自由基清除活性，以及抑制CTGF表达和纤维结合素分泌，他汀类药物代表一种新的降低IOP的潜在手段。作为降低眼压作用的补充，他汀类可以产生神经保护作用。在青光眼的视网膜中观察到了神经变性介导物如iNOS、TNFα、基质金属蛋白酶(MMP)和活化的星形胶质细胞水平升高。神经保护的一个方法可以是由于减少神经元组织的缺血性损伤。他汀类上调内皮一氧化氮合酶，从而可有助于保持进入缺血性组织的血流。他汀类在缺血-再灌注损伤的模型中还显示出能够保护视网膜神经元，这是被一氧化氮合酶抑制剂阻滞的一种作用。而且，他汀类的抗氧化和自由基清除作用可以防止与青光眼有关的视网膜和视神经的氧化损伤/应激。青光眼引起视网膜神经节细胞(RGC)的死亡。确切的分子机制尚不清楚。然而，存在三种流行的假说(1)视网膜血管异常导致局部缺血(Flammer等，Prog RetinEye Res，2002，21359-393)，(2)谷氨酸盐毒性(Dreyer等，ArchOphthalmol，1996，114299-305)和(3)神经营养因子戒断(Quigley等，Arch Ophthalmol，1981，99635-649；Quigley等，ArchOphthalmol，1982，100135-146；Quigley等，Am J Ophthalmol，1983，95674-691)。提出的所有这些机制均可导致青光眼中对RGC的氧化毒性以及促成RGC的死亡。例如，局部缺血可产生过量的自由基和活性氧物质，使ATP产物耗尽，引起线粒体机能障碍并增加自由基。谷氨酸盐毒性增加细胞内钙浓度，激活钙蛋白酶和NO合酶，产生自由基。神经营养因子的戒断也已显示出可以引起氧化损伤(Greenlund等，Neuron，1995，14303-315)。基于这些信息，抗氧化剂如他汀类可用作青光眼患者的神经保护剂。本发明还涉及一种通过给患者施用药学有效量的包含至少一种HMG-CoA还原酶抑制剂的组合物预防患者青光眼视网膜病的方法。用于本发明的组合物可以是各种类型的药物组合物，如给药于眼中(如局部地、前房内或者经由植入物)的眼用制剂。组合物优选是给药于眼中的局部眼用制剂。组合物可包括眼科可接受的防腐剂、增粘剂、渗透促进剂、缓冲液、氯化钠和水以形成水性的、无菌眼科用混悬液或者溶液。眼用溶液制剂可将活性成分溶解在生理可接受的等渗水性缓冲液中而制备。此外，眼用溶液可包含眼科可接受的表面活性剂以帮助活性物质的溶解。而且，眼用溶液可包含增加粘性的物质如羟甲基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙甲基纤维素、甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮等等以改善制剂在结膜囊中的贮留。还可用胶凝剂，包括但是不限定于，胶凝糖和黄单胞菌胶。为制备无菌眼膏剂，将活性成分与防腐剂结合于适当的载体如矿物油、液体羊毛脂或白凡士林中。根据已经公开的类似眼用制剂的配方，无菌的眼凝胶剂可以将活性成分混悬在由例如卡伯姆-974或等同物的组合制备的亲水基质中而得到；可以并入防腐剂和张力调节剂。用于本发明的组合物优选地配制成局部眼用混悬液或者溶液，pH例如为大约4至大约8。由临床医生确定每个个体的具体给药剂量方案。这些制剂中通常所包含的活性成分(如他汀)的量为组合物或制剂重量的大约0.01％至大约10％，如大约0.01％至大约5％重量，优选大约0.05％至大约2％，最优选大约0.1％至大约1.0％重量。剂型可以是溶液剂或者混悬微乳剂。例如，对于局部应用而言，根据有经验的临床医生的判断，将这些制剂施用于眼睛表面1-2滴，每天大约1-大约4次。本发明的组合物可以单剂量或者多剂量给药。本发明的组合物可以给药一天或者多天，本发明的组合物可以连续若干天给药或者在不连续治疗时按照计划进行给药。换言之，治疗可以非连续日进行。治疗可以进行至少两个连续日、至少三个连续日或者更多。而且，同一天、连续日或者非连续日内均可以多剂量给药。任何剂量方案的组合均是可以的。组合物也可以与其它治疗青光眼的药剂联用，例如但是不限定于，β阻断剂(如噻吗洛尔、倍他洛尔、左倍他洛尔、卡替洛尔、左布诺洛尔、普萘洛尔)，碳酸酐酶抑制剂(如布林唑胺和多佐胺)，α1拮抗剂(如nipradolol)，α2激动剂(如阿可乐定和溴莫尼定)，缩瞳药(如毛果芸香碱和肾上腺素)，前列腺素类似物(如拉坦前列素、曲伏前列素、比马前列素、乌诺前列酮及美国专利5,889,052、5,296,504、5,422,368、5,352,708和5,151,444中所述的化合物)，以及神经保护剂(如美国专利4,690,931中的化合物，特别是申请U.S.S.N.60/203,350中所述的依利罗地和R-依利罗地)，以及WO94/13275中的合适的化合物，包括美金刚。下面的实施例是发明人实现本发明不同方面所采用的技术的范例。应该理解虽然这些技术是实施发明的优选技术方案的代表，然而本领域技术人员根据本说明书的公开可以认识到多种变形并不脱离本发明的精神和范围。
实施例1HMG-CoA还原酶抑制测定如美国公开专利申请US 2003/0065020中所描述的，可以用Shefer等[J.Lipid Res 1972，13，402]的下列方法评定HMG-CoA还原酶的活性。完整的测定介质总体积为0.8mL，包含100mM pH 7.2的磷酸缓冲液，3mM MgCl2，3mM NADP，3个酶单位的葡萄糖-6-磷酸脱氢酶，50mM还原型谷胱苷肽，0.2mM(0.1μCi)HMG-CoA(戊二酰-3-14C)，和100μL部分纯化的酶储备溶液。将酸盐形式的测定化合物以选定的浓度加入各个10μL体积测定体系中。在37℃露置于空气中振摇孵育40分钟后，加入0.4mL 8N的HCl停止反应。如Alberts等[Proc Natl.Acad.Sci.U.S.A.1980，77，3967]所述，于37℃再孵育30分钟以确保所有的甲羟戊酸内酯化成为甲羟戊酸内酯，然后将0.2mL混合物加入用蒸馏水润湿的包含100-200目Bio-Rex 5氯化物形式(Bio-Rad)的0.5×0.5cm柱。用树脂吸附未反应的[C14]HMG-CoA，[C14]甲羟戊酸酯直接用蒸馏水(2×1mL)洗脱进入7-mL闪烁瓶。每个瓶中加入5毫升Aquasol-2，在闪烁计数器中测定放射性。通过绘制抑制百分比对测定化合物浓度的图并使用最小二乘法拟合结果数据的直线从而确定IC50值。为了估测相对抑制效力，以康帕丁作为标准品并指定其值为100，将测定化合物的IC50值与同时测定的康帕丁的IC50值相比较。
实施例2TGFβ2刺激的CTGF基因表达的抑制研究了在培养的人类小梁网(TM)细胞中他汀类对CTGF基因表达的作用。结果概括在图1-3中。在这些实验中，用定量的逆转录PCR(QPCR)测定CTGF/18S cDNA水平并进行比较。如图1和2归纳的结果中所示，检测三种不同类型的他汀类以确定对控制CTGF水平的作用。如图中所示，当TGFβ2存在于载体中时，CTGF的水平相当高。然而，引入一种他汀类时，这些水平显著降低超过100％的数量级。洛伐他汀以剂量依赖方式抑制TGFβ2刺激的CTGF表达，IC50值为75nM(图3)。该研究的结果清楚地说明他汀类在培养的人类小梁网细胞中显著地作用于CTGF基因表达。
实施例3防止H2O2介导的TM细胞死亡在存在及不存在他汀时检测H2O2诱导的氧化应激对HTM-35D细胞(培养的人类TM细胞株)生存能力的作用。特别地，在存在或者不存在测定试剂时细胞在无血清培养基中孵育30分钟(37℃，5％CO2)，然后用无血清的培养基清洗并置换两天。然后通过中性红摄取来评价生存能力。结果概括在图4中，其中柱表示两个单独实验的平均值和SEM，每个实验重复三次。如图4所示，当他汀存在时，H2O2对HTM-35D细胞生存能力的作用被抑制或控制到实质上可与没有H2O2存在时的水平相比拟的水平。因此，这些测验表明他汀类用于治疗青光眼和控制或降低IOP的能力。
实施例4TM纤维结合素分泌的抑制检测洛伐他汀对于基础的(载体)和刺激的(TGFβ2)GTM-3(转化的人类TM细胞株)分泌纤维结合素的作用。在存在或者不存在检测试剂时于无血清培养基中孵育GTM-3细胞24小时(37℃，5％CO2)，然后用ELISA测定细胞上清液中的分泌的纤维结合素水平的改变。为了确定检验试剂对GTM-3细胞生存能力的影响，在剩余的细胞单层上进行中性红摄取试验。结果概括在图5中。从图5中可以容易地看出，洛伐他汀除抑制基础分泌外，还抑制TGFβ2-刺激的纤维结合素分泌，不影响细胞生存能力。因此，由于能够降低细胞外基质(如纤维结合素)的过度累积，他汀类可以用于治疗青光眼和控制或降低IOP。
实施例5清醒的短尾猴激光的照射(高压)眼中的急性IOP响应用0.1％丙美卡因造成轻微角膜感觉丧失后，用AlconPneumatonometer测定眼内压(IOP)。每次测定后用生理盐水清洗眼睛。测定基线IOP后，仅向九只短尾猴的右眼滴注在30μL等分液中的检测化合物。剩余六只动物的右眼中滴注载体。后续的IOP测定在第1、3、6小时进行。洛伐他汀、氟伐他汀、阿伐他汀和普伐他汀在单次局部眼用300μg后没有显著地降低IOP。
实施例6反复给药后清醒短尾猴激光照射的(高压)眼中的响应在另外的研究中，用一个五-剂量三天的研究计划在意识清醒的眼高压短尾猴中测定洛伐他汀的降低眼内压效果。将30μL等分液中的检品施用于八只动物的激光照射的(一侧激光小梁成形术)眼中。载体滴注入其余六只动物的激光照射的眼中作为对照。剂量1、3、5于连续三天的九点钟滴注；剂量2和4在第1、2天的16:30滴注。在剂量1和5后的第1、3、6小时测定IOP。还在剂量4后的第16小时测定IOP。确定每只动物每次IOP测定相对于零时基线的百分变化。激光照射的猴在第五次局部眼滴注300μg洛伐他汀后，第1、3、6小时激光照射的猴眼的IOP分别平均降低22.8％(8.3mmHg)、21.5％(8.1mmHg)和25.5％(9.5mmHg)。对照组IOP平均降低12.5％。在后续的研究中，洛伐他汀在五天时间内施用九次，IOP降低至多7.4％。为实现本发明的目的可以制备下述制剂。
实施例7 虽然以优选实施方案的形式描述了本发明的组合物和方法，然而对于本领域技术人员来说对本文描述的组合物和/或方法以及方法的步骤或步骤的顺序在不脱离本发明概念、精神和范围的情况下作一些变更是显而易见的。更具体而言，某些化学上及结构上相关的化合物试剂可以取代本文中描述的试剂获得类似的结果也是显而易见的。如附加的权利要求所定义的，这些本领域技术人员显而易见的取代和变更被视为在本发明的精神、范围和概念之内。本文所提及的所有专利、专利申请及其它出版物均全文引入作为参考，构成本发明的一部分。
权利要求
1.一种治疗患者青光眼的方法，包括向所述患者施用药物有效量的包含至少一种HMG-CoA还原酶抑制剂的组合物。
2.如权利要求1的方法，其中所述的HMG-CoA还原酶抑制剂是至少一种他汀。
3.如权利要求2的方法，其中所述的至少一种他汀包括康帕丁、洛伐他汀、辛伐他汀、普伐他汀、美伐他汀、氟伐他汀、罗苏伐他汀、阿伐他汀、匹伐他汀、西立伐他汀、柏伐他汀、达伐他汀、格仑伐他汀、其前药，或者其衍生物，或者其组合。
4.如权利要求2的方法，其中所述的至少一种他汀RI值为0.2-0.7，所述的组合物局部施用于所述患者的至少一只眼睛。
5.如权利要求1的方法，其中所述的HMG-CoA还原酶抑制剂具有式A-B，其中 R1＝CO2R，CONR5R6或CH2OR7，或者R1和R3形成内酯；R＝H或者阳离子盐部分，或者CO2R形成药学可接受的酯部分；R2，R3，R4＝相同或者不同＝H，C(O)R8或者C(O)NR5R6；R5，R6＝相同或者不同＝H或者烷基；R7＝H或者C(O)R8；以及R8＝烷基。
6.如权利要求1的方法，其中所述的HMG-CoA还原酶抑制剂是包含结构B之一的HMG-CoA还原酶抑制剂 其中R1＝CO2R，CONR5R6或CH2OR7，或者R1和R3一起形成内酯；R＝H或者阳离子盐部分，或者CO2R形成药学可接受的酯部分；R2，R3＝相同或者不同＝H，C(O)R8或者C(O)NR5R6；R5，R6＝相同或者不同＝H或者烷基；R7＝H或者C(O)R8；以及R8＝烷基。
7.如权利要求1的方法，其中所述的组合物局部施用于所述患者的至少一只眼睛。
8.如权利要求1的方法，其中所述的HMG-CoA还原酶抑制剂包含大约0.05％至大约2.0％重量的所述组合物。
9.一种控制患者正常或增高的眼内压的方法，包括向所述患者施用药物有效量的包含至少一种HMG-CoA还原酶抑制剂的组合物。
10.如权利要求9的方法，其中所述的HMG-CoA还原酶抑制剂是至少一种他汀。
11.如权利要求10的方法，其中所述的至少一种他汀包括康帕丁、洛伐他汀、辛伐他汀、普伐他汀、美伐他汀、氟伐他汀、罗苏伐他汀、阿伐他汀、匹伐他汀、西立伐他汀、柏伐他汀、达伐他汀、格仑伐他汀、其前药，或者其衍生物，或者其类似物或者其组合。
12.如权利要求10的方法，其中所述的至少一种他汀RI值为0.2-0.7，所述的组合物局部施用于所述患者的至少一只眼睛。
13.如权利要求9的方法，其中所述的HMG-CoA还原酶抑制剂是 R1＝CO2R，CONR5R6或CH2OR7，或者R1和R3形成内酯；R＝H或者阳离子盐部分，或者CO2R形成药学可接受的酯部分；R2，R3，R4＝相同或者不同＝H，C(O)R8或者C(O)NR5R6；R5，R6＝相同或者不同＝H或者烷基；R7＝H或者C(O)R8；以及R8＝烷基。
14.如权利要求9的方法，其中所述的组合物局部施用于所述患者的至少一只眼睛。
15.如权利要求9的方法，其中所述的HMG-CoA还原酶抑制剂包含大约0.05％至大约2.0％重量的所述组合物。
16.一种保护患者小梁网的方法，包括向所述患者施用药物有效量的包含至少一种HMG-CoA还原酶抑制剂的组合物。
17.如权利要求16的方法，其中HMG-CoA还原酶抑制剂是至少一种他汀。
18.一种防止眼神经变性的方法，包括向所述患者施用药物有效量的包含至少一种HMG-CoA还原酶抑制剂的组合物。
19.如权利要求18的方法，其中所述的HMG-CoA还原酶抑制剂是至少一种RI值为0.2-0.7的他汀，所述的组合物局部施用于所述患者的至少一只眼睛。
20.一种防止患者青光眼视网膜病的方法，包括向所述患者施用药物有效量的包含至少一种HMG-CoA还原酶抑制剂的组合物。
21.如权利要求20的方法，其中所述的HMG-CoA还原酶抑制剂是至少一种RI值为0.2-0.7的他汀，所述的组合物局部施用于所述患者的至少一只眼睛。
22.如权利要求20的方法，其中所述的组合物眼内施用于所述患者的至少一只眼睛。
23.如权利要求1的方法，进一步包括施用β-阻断剂、碳酸酐酶抑制剂、α1拮抗剂、α2激动剂、缩瞳药、前列腺素类似物、神经保护剂或其组合，作为组合物的一部分或者独立给药。
24.如权利要求1的方法，进一步包括施用至少一种碳酸酐酶抑制剂，作为组合物的一部分或者独立给药。
25.如权利要求9的方法，进一步包括施用β-阻断剂、碳酸酐酶抑制剂、α1拮抗剂、α2激动剂、缩瞳药、前列腺素类似物、神经保护剂或其组合，作为组合物的一部分或者独立给药。
26.如权利要求9的方法，进一步包括施用至少一种碳酸酐酶抑制剂，作为组合物的一部分或者独立给药。
27.如权利要求18的方法，进一步包括施用β-阻断剂、碳酸酐酶抑制剂、α1拮抗剂、α2激动剂、缩瞳药、前列腺素类似物、神经保护剂或其组合，作为组合物的一部分或者独立给药。
28.如权利要求18的方法，进一步包括施用至少一种碳酸酐酶抑制剂，作为组合物的一部分或者独立给药。
全文摘要
本发明描述了HMG－CoA还原酶抑制剂(如他汀类)治疗青光眼、控制眼内压、保护小梁网，防止视神经变性和/或防止青光眼视网膜病的应用。优选的HMG－CoA还原酶抑制剂是RI值为0.2－0.7的他汀类(如普伐他汀)，局部施用于患者患病的眼部。
文档编号A61K31/401GK1946384SQ200580013006
公开日2007年4月11日 申请日期2005年4月25日 优先权日2004年4月26日
发明者M·R·赫尔伯格, D·L·弗里诺尔, A·谢泼德, 彭玉豪 申请人:爱尔康公司