一种具有降血糖活性的中药提取物、制法、组合物与用途的制作方法

专利名称：一种具有降血糖活性的中药提取物、制法、组合物与用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及从蛇菰属植物(Balaophoran L)中提取能够降血糖的提取物，这种提取物的制备方法，含有蛇菰属植物(Balaophora L)或该属提取物的药物组合物，以及蛇菰属植物(Balaophora L)或该属提取物和其药物组合物作为药物的用途，尤其是可用于制备治疗和预防糖尿病及其并发症等相关的代谢性疾病的药物和保健品。
背景技术：
据WHO有关资料表明，糖尿病的患病率、致残率和死亡率以及总体健康危害程度已列非传染性疾病的第三位，它已成为继心脑血管疾病及肿瘤之后，严重威胁人类健康的第三大疾病。当今世界有糖尿病患者1.3亿人，其中90％以上未2型糖尿病患者，而且每年以1％的速度递增，预计到2020年将猛增至2.3亿。我国的糖尿病患者总数已有6000万以上，预计每年发病增长率超过6％。此病不仅给患者带来极大的痛苦，生活质量受到很大影响，甚至威胁患者的生命，还给社会带来沉重的经济负担。临床医生和患者都希望有更多、更有效的治疗手段。目前临床上治疗糖尿病的口服药物有磺酰脲类、双胍类、噻唑烷二酮类胰岛素增敏剂、非磺酰脲类胰岛素分泌剂以及α-葡萄糖苷酶抑制剂等。
磺酰脲类有甲苯磺酰脲、氯磺丙脲、格列苯脲、格列吡嗪和格列齐特。这类药物除了首次治疗的失败率较高外，易发生继发性失效，约有10％的病人对随后的治疗没有应答。不良反应发生率较高，如过敏、眩晕、肝损伤，主要是低血糖休克和体重增加，尤其是氯磺丙脲、格列苯脲更为常见，因此体重超重的病人不宜用此类药物。
双胍类药物有二甲双胍、苯乙双胍。此类药物虽然在50年代末已用于治疗糖尿病，但不良反应发生率很高，主要有胃肠刺激等明显的消化道副作用和乳酸型中毒，使其应用受到限制。物别是苯乙双胍因为其严重的不良反应，很多国家已经禁用。
胰岛素增敏剂类药物已上市的代表性药物有罗格列酮等噻唑烷二酮类药物。噻唑烷二酮类药物可直接增强2型糖尿病患者的肝脏、肌肉和脂肪组织对胰岛素的敏感性，主要的作用靶点为过氧化物酶增殖体激活受体γ(PPARγ)，使2型糖尿病患者的空腹和餐后血糖降低，且不引起低血糖。近年来发展较快，先后有曲格列酮、罗格列酮、匹格列酮上市，曲格列酮由于严重的肝毒性(肝功能衰竭)而被撤出市场。
一种短效口服胰岛素分泌促进剂有瑞格列奈和那格列奈，主要作用于胰腺的β细胞膜的ATP敏感的钾通道，促进β细胞分泌胰岛素。病人餐时服用，能使2型糖尿病患者进食相关的异常胰岛素分泌模式得到纠正，模拟生理胰岛素分泌。其起效快，作用维持时间短，仅对餐时胰岛素的分泌有较强的刺激作用，使患者达到良好的整体血糖控制。严重的低血糖发生率显著低于磺酰脲类药物。它经粪便排泄，肝肾毒性小，但对β细胞衰竭、糖尿病酮症酸中毒及严重的肝肾损害者禁用。
α-葡萄糖苷酶抑制剂类药物已上市的药物有阿卡波糖、伏格利波糖和米格列醇3种。随着德国拜耳拜糖平(Acatbose)90年代初的上市，在国内外已被公认为是治疗糖尿病的新途径，其主要作用靶点在小肠，因而拜糖平已成为治疗糖尿病的一线药物，并进一步扩大适应症。
蛇菰科(Balaophoraceae)蛇菰属植物(Balaophora L)中，药用的原药材是葛蕈(蛇菰，Balaophora japonica Mak.)，筒鞘蛇菰(Balaophora inovolucrata Hook f.)和多蕊蛇菰(Balaophorapolyandra Griff.)。
葛蕈(蛇菰，Balaophora japonica Mak.)，筒鞘蛇菰(Balaophorainovolucrata Hook f.)和多蕊蛇菰(Balaophora polyandra Griff.)都是多年生的寄生性肉质草本植物。根状茎生长在地下，呈球形，表面有小瘤突。花茎红色或黄色，其上生肥大的肉穗花序。花单性，雌雄同株或异株，8月开花，是雌雄异序(花序单性)植物，块状根茎多个聚成一团。全体无叶绿素。茎纤弱，叶交互对生或近对生。雄花序椭圆形，雄花下有一苞片，苞片彼此融合而形成许多呈六角形的窝穴，自窝穴的基部生出具梗的雄花，花被片3基数。雌花序近球形或椭圆形，小棒状体倒锥形，先端截形，长为宽的3～4倍；雌花只着生在花序主轴上。9-10月结果。筒鞘蛇菰的雄花有有柄，花茎中部有叶状的筒鞘包被；而蛇菰的雄花无柄，花茎的中部无筒鞘。生长在海拔1000--2500米的山坡林下，寄生在木本植物的根上。
该药具有止血、生肌、镇痛的功效。民间常用于治疗胃痛、鼻出血、妇女月经出血不止、痢疾及外伤出血等。还可用作补药。煎服可解酒醉，研粉调以麻油外用治直肠脱出。
蛇菰属植物(Balaophora L)的药理作用已经报道的有抗炎镇痛和解酒毒的作用[1，阮汉利，中医药学刊，2003，21(6)910-911][2，戎聚全，中国民族民间医药杂志，2003，65(总)347-349]。
蛇菰属植物(Balaophora L)的化学成分研究中得到化合物有β-香树酯(蛇菰素A)、棕榈酰羽扇豆烯醇酯(蛇菰素B)、乙酸β-香树酯、乙酸羽扇豆烯醇酯、β-香树脂酮、羽扇豆烯酮及棕榈酸、(-)-lariciresinol、(-)-松脂醇[(-)-pinoresinol]、1-O-咖啡酰基-β-D-葡萄吡喃糖、1-O-咖啡酰基-(6-O-没食子酰基)-β-D-葡萄吡喃糖、1-O-咖啡酰基-(4-O-没食子酰基)-β-D-葡萄吡喃糖、没食子酸、赪桐甾醇、赪桐甾醇-3-O-(6-O-棕榈酰基)-β-D-葡萄吡喃糖甙、松柏甙，甲基松柏甙[3，沈小玲，中草药，1996，27(5)259-260][4，夏新中，中草药，2001，32(16-9)][5，刘锡葵，云南植物研究，1998，20(3)369-373]。

发明内容
本发明目的在于提供从蛇菰属植物(Balaophora L)中提取的提取物。
本发明的另一目的在于提供制备这种提取物的方法。
本发明的又一目的在于提供药物组合物，包括蛇菰属植物(Balaophora L)、蛇菰属植物(Balaophora L)提取物和制药领域中常用的载体。
本发明的又一目的在于提供蛇菰属植物(Balaophora L)和/或蛇菰属植物(Balaophora L)提取物，或含有蛇菰属植物(Balaophora L)和/或蛇菰属植物(Balaophora L)提取物的组合物在制备治疗和预防糖尿病及其并发症药物中的应用。
本发明的又一目的在于提供蛇菰属植物(Balaophora L)和/或蛇菰属植物(Balaophora L)提取物，或含有蛇菰属植物(Balaophora L)和/或提取物的组合物在制备治疗和预防糖尿病及其并发症保健品中的应用。
本发明的又一目的在于提供蛇菰属植物(Balaophora L)和/或蛇菰属植物(Balaophora L)提取物，或含有蛇菰属植物(Balaophora L)和/或蛇菰属植物(Balaophora L)提取物的组合物在制备治疗和预防糖尿病相关代谢性疾病药物中的应用。
本发明的又一目的在于提供蛇菰属植物(Balaophora L)和/或蛇菰属植物(Balaophora L)提取物，或含有蛇菰属植物(Balaophora L)和/或蛇菰属植物(Balaophora L)提取物的组合物在制备治疗和预防糖尿病相关代谢性疾病保健品中的应用。
为了完成本发明目的，本发明采取如下的技术方案蛇菰属植物(Balaophora L)原药材经干燥并适当的粉碎，以增加药材与溶剂的接触面积，提高效率。
原药材的提取溶剂使用水、醇类、或水与醇类的混合物。优选的醇类包括甲醇、乙醇、异丙醇、丁醇等。水与醇类的混合物，例如含有醇类化合物40％-80％(体积比)的水。提取时溶剂量为原药重量的4-14倍。提取可以在静态或动态下，优选在动态条件下。为了提高提取的效率，可以使用超声波等。提取的温度是从室温(例如20℃)到溶剂回流温度的范围内，优选在回流的温度下。提取可连续或间歇进行，间歇提取时可重复1-4次。
上述步骤结束后，合并滤液，滤液在动态状态下，在常压或减压加热浓缩至药材重量1-5倍的体积时冷却。使用的提取溶剂是醇类化合物包括甲醇、乙醇、异丙醇、丁醇等，或其混合物；优选是乙醇。静置沉淀，过滤或离心除去不溶物，不溶物用水洗涤，一般1-3次。将滤液合并进一步浓缩成膏状。
对所得膏状物进行纯化，根据权利要求8所述的提取方法，其特征在于，纯化是通过，溶剂萃取，凝胶过滤，聚酰胺，大孔树脂、离子树脂或吸附柱层析。得到的有效部位。
吸附柱层析包括硅胶、氧化铝、纤维素、聚酰胺。吸附剂的用量为样品量的30-200倍，优选80-100倍，更优选为90-100倍。洗脱系统可以用薄层层析来筛分，选择使被分离组分的Rf值在0.2-0.3的溶剂系统。洗脱剂中加入适当的碱，例如氨、二乙胺、吡啶、2-甲基吡啶、三甲基吡啶、N-乙基吗啉，以防止脱尾、促进分离。活性碳可以拌入适量的硅藻土作稀释剂，以增加溶液的流速。
提取液也可以直接用交换柱和膜技术进行精制浓缩后，再制备成浸膏或干粉。可以使用的交换柱包括大孔树脂、离子交换树脂、活性炭、葡聚糖凝胶等；优选大孔树脂和活性炭。
提取物可以经冷冻干燥成干粉，也可把浓缩液体直接喷雾干燥成干粉进行各种制剂成型。
本发明还涉及含有作为活性成份的本发明提取物和常规药物赋形剂或辅剂的药物组合物。通常本发明药物组合物含有0.1-95％重量的本发明提取物。
本发明还提供一种药物组合物，它包括药物有效剂量的，作为活性成分的如本发明方法蛇菰属植物(Balaophora L)和/或蛇菰属植物(Balaophora L)提取物及药学上可接受的载体。
本发明提取物的药物组合物可根据本领域公知的方法制备。用于此目的时，如果需要，可将本发明提取物与一种或多种固体或液体药物赋形剂和/或辅剂结合，制成可作为人药或兽药使用的适当的施用形式或剂量形式。
本发明提取物或含有它的药物组合物可以单位剂量形式给药，给药途径可为肠道或非肠道，如口服、鼻腔、口腔粘膜、皮肤、腹膜或直肠给药等，优选口服给药。
本发明提取物或含有它的药物组合物的给药途径，同样包括注射给药。注射包括静脉注射、肌肉注射、皮下注射、皮内注射等。
给药剂型可以是液体剂型、固体剂型。如液体剂型可以是真溶液类、胶体类、微粒剂型、乳剂剂型、混悬剂型。其他剂型例如片剂、胶囊、滴丸、气雾剂、丸剂、粉剂、溶液剂、混悬剂、乳剂、颗粒剂、栓剂、冻干粉针剂等。
本发明提取物可以制成普通制剂、也可以是缓释制剂、控释制剂、靶向制剂及各种微粒给药系统。
为了将单位给药剂型制成片剂，可以广泛使用本领域公知的各种载体。关于载体的例子是，例如稀释剂与吸收剂，如淀粉、糊精、硫酸钙、乳糖、甘露醇、蔗糖、氯化钠、葡萄糖、尿素、碳酸钙、白陶土、微晶纤维素、硅酸铝等；湿润剂与粘合剂，如水、甘油、聚乙二醇、乙醇、丙醇、淀粉浆、糊精、糖浆、蜂蜜、葡萄糖溶液、阿拉伯胶浆、明胶浆、羧甲基纤维素钠、紫胶、甲基纤维素、磷酸钾、聚乙烯吡咯烷酮等；崩解剂，例如干燥淀粉、海藻酸盐、琼脂粉、褐藻淀粉、碳氢钠与枸橼酸、碳酸钙、聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯、十二烷基磺酸钠等；润滑剂，例如滑石粉、二氧化硅、玉米淀粉、硬脂酸盐、硼酸、液体石蜡、聚乙二醇等。还可以将片剂进一步制成包衣片，例如糖包衣片、薄膜包衣片、肠溶包衣片，或双层片和多层片。
例如为了将给药单元制成丸剂，可以广泛使用本领域公知的各种载体。关于载体的例子是，例如稀释剂与吸收剂，如葡萄糖、乳糖、淀粉、可可脂、氢化植物油、聚乙烯吡咯烷酮、Gelucire、高岭土、滑石粉等；粘合剂，如阿拉伯胶，黄蓍胶，明胶，乙醇、蜂蜜、葡萄糖溶液、阿拉伯胶浆、明胶浆、羧甲基纤维素钠、紫胶、甲基纤维素、磷酸钾、聚乙烯吡咯烷酮等；崩解剂，例如干燥淀粉、海藻酸盐、琼脂粉、褐藻淀粉、碳氢钠与枸橼酸、碳酸钙、聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯、十二烷基磺酸钠、甲基纤维素、乙基纤维素等；崩解抑制剂，例如蔗糖、三硬脂酸甘油酯、可可脂、氢化油等；吸收促进剂，例如季铵盐、硬脂酸盐、硼酸、液体石蜡、聚乙二醇等。还可以将片剂进一步制成包衣片，例如糖包衣片、薄膜包衣片、肠溶包衣片，或双层片和多层片。
例如为了将给药单元制成丸剂，可以广泛使用本领域公知的各种载体。关于载体的例子是，例如稀释剂与吸收剂，如葡萄糖、乳糖、淀粉、可可脂、氢化植物油、聚乙烯吡咯烷酮、Gelucire、高岭土、滑石粉等；粘合剂，如阿拉伯胶、黄蓍胶、明胶、乙醇、蜂蜜、液糖、米糊等。崩解剂，如琼脂粉、干燥淀粉、海藻酸盐、十二烷基磺酸钠、甲基纤维素等。例如为了将给药单元制成胶囊，将有效成分本发明提物与上述的各种载体混合，并将由此得到的混合物置于硬的明胶胶囊或软胶囊中。也可将有效成分本发明提取物制成微囊剂，混悬于水性介质中形成混悬剂，亦可装入硬囊中或制成注射剂应用。
例如，将本发明提取物制成注射用制剂，如溶液剂、混悬剂溶液剂、乳剂、冻干粉针剂，这种制剂可以是含水或非水的，可含一种和/或多种药效学上可接受的载体、稀释剂、粘合剂、润滑剂、防腐剂、表面活性剂或分散剂。如稀释剂可选自水、乙醇、聚乙二醇、1，3-丙二醇、乙氧基化的异硬脂醇、多氧化的异硬脂醇、聚氧乙烯山梨醇脂肪酸酯等。另外，为了制备等渗注射击液，可以向注射用制剂中添加适量的氯化钠、葡萄糖或甘油，此外，还可以添加常规的助溶剂、缓冲剂、PH调节剂等。这些辅料是本领域常用的。此外，如需要，也可以向药物制剂中添加着色剂、防腐剂、香料、矫味剂、甜味剂或其它材料。
为达到用药目的，增强治疗效果，本发明的药物或药物组合物可用任何公知的给药方法给药。
本发明提取物药物组合物的给药剂量取决于许多因素，例如所要预防或治疗疾病的性质和严重程度，患者或动物的性别、年龄、体重、性格及个体反应，给药途径、给药次数、治疗目的，因此本发明的治疗剂量可以有大范围的变化。一般来讲，本发明中药学成分的使用剂量是本领域技术人员公知的。可以根据本发明提取物组合物中最后的制剂中所含有的实际药物数量，加以适当的调整，以达到其治疗有效量的要求，完成本发明的预防或治疗目的。本发明提取物的每天的合适剂量范围本发明的提取物的用量为0.001-100g/Kg体重，优选为0.01-50g/Kg体重，最优选为0.05-25g/Kg体重。上述剂量可以单一剂量形式或分成几个，例如二、三或四个剂量方式给药受限于给药医生的临床经验以及包括运用其它治疗手段的给药方案。每一种治疗所需总剂量可分成多次或按一次剂量给药。本发明的提取物或组合物可单独服用，或与其他治疗药物或对症药物合并使用并调整剂量。


图1.蛇菰提取物对正常小鼠口服淀粉负荷后血糖升高的抑制作用图2.蛇菰提取物对正常小鼠口服蔗糖负荷后血糖升高的抑制作用图3.蛇菰提取物对正常小鼠葡萄糖负荷后血糖升高的影响图4.蛇菰提取物对正常小鼠胰岛素耐量的影响
具体实施例方式
下述实施例具体显示本发明的应用。但本实施例不限定本发明的使用范围。
提取实验实施例1.水提提取物葛蕈(蛇菰，Balaophora japonica Mak.)全草100g，用蒸馏水500g热回流，提取三次(500ml水/次)，每次提取1小时，提取液减压浓缩后得水提物26.0g，溶于50ml水中，加乙醇至含醇量到70％(体积比)，沉淀，过滤，浓缩滤液至干，得黄色粉末状固体14.0g。
滤液部分经大孔树脂柱分离滤液部分14.0g，用50ml水溶解，加到100g大孔树脂柱(S-8)上，用蒸馏水洗至流出液无色，再用乙醇洗脱至流出液无色，乙醇洗脱部分浓缩得7.5g。大孔树脂水洗至流出液无醇(大孔树脂再生)。
实施例2.醇提提取物筒鞘蛇菰(Balaophora inovolucrata Hook f.)全草2500g，用95％EtOH热回流，提取三次(10L 95％EtOH/次)，缓慢加热至沸腾，每次提取1小时，提取液减压浓缩后得95％EtOH提取物532.0g，混悬于1500ml水中，过滤，滤液加乙酸乙酯萃取三次(1500ml/次)，合并萃取液，减压回收溶剂，得黄色色粉末状固体210.0g。
实施例3.乙酸乙酯提提取物多蕊蛇菰(Balaophora polyandra Griff.)全草1000g，用石油醚5000ml，加热至回流，提取三次，每次提取1小时，提取液减压浓缩后得石油醚提取物56.0g；然后用乙酸乙酯5000ml，加热至回流，提取三次，每次提取一小时，提取液合并，减压回收溶剂，得乙酸乙酯提取部位173.0g。
乙酸乙酯提取部位经大孔树脂分离滤液部分173.0g，用1000ml水溶解，过滤，滤液加到1000g大孔树脂柱(S-8)上，用蒸馏水洗至流出液无色，再用乙醇洗脱至流出液无色，乙醇洗脱部分浓缩得113.0g。大孔树脂水洗至流出液无醇(大孔树脂再生)。
药理活性实验实验例1.蛇菰提取物对正常小鼠淀粉负荷后血糖升高的抑制作用正常ICR雄性小鼠，随机分为5组(n＝10)，实验前禁食过夜，一组以淀粉(3.0g/kg)灌胃作为对照组，一组以淀粉与Acarbose(拜唐平，10mg/kg)灌胃作为阳性对照药组，其余组分别以淀粉(3.0g/kg)与不同的蛇菰提取物(SHG88、SHG89、SHG90)各20g生药/kg体重灌胃，于灌胃前和灌胃后30min、60min、120min采血，用葡萄糖氧化酶法测定血糖浓度。结果(图1、表1)说明，蛇菰提取物在20g生药/kg剂量下，能明显抑制正常小鼠淀粉负荷后血糖的升高，血糖曲线下面积(AUC)减少。不同部位的蛇菰提取物作用强度不同。该结果与α-葡萄糖苷酶抑制剂Acarbose的作用类似。
表1.蛇菰提取物对正常小鼠淀粉耐量之AUC的影响

*，**，与对照组比较，p＜0.05，0.01.
实验例2.蛇菰提取物对正常小鼠蔗糖负荷后血糖升高的抑制作用正常ICR雄性小鼠，随机分为4组(n＝10)，实验前禁食过夜，一组以蔗糖(4.0g/kg)灌胃作为阳性对照药组，其余组分别以蔗糖与不同的提取物(SHG88、SHG89、SHG90)各20g生药/kg体重灌胃，于灌胃前和灌胃后30min、60min、120min测定血糖浓度。结果(图2、表2)表明，蛇菰提取物在20g生药/kg剂量下，明显抑制正常小鼠蔗糖负荷后血糖的升高，血糖峰值后移，血糖曲线下面积(AUC)减少。不同部位的蛇菰提取物作用强度不同。
表2.蛇菰提取物对正常小鼠蔗糖耐量之AUC的影响

*，***，与对照组比较，p＜0.05，0.001.
实验例3.蛇菰提取物对正常小鼠葡萄糖负荷后血糖升高的影响正常ICR雄性小鼠，随机分为4组(n＝10)，实验前禁食2小时，一组以葡萄糖(2.0g/kg)灌胃作为对照组，其余组分别以葡萄糖与不同的蛇菰提取物(SHG88、SHG89、SHG90)各20g生药/kg体重连续灌胃7天，于灌胃前和灌胃后30min、60min、120min采血，用葡萄糖氧化酶法测定血糖浓度。结果(图3、表3)说明，蛇菰提取物提取物在20g生药/kg剂量下，明显抑制正常小鼠口服葡萄糖糖负荷后血糖的升高，血糖峰值降低，血糖曲线下面积(AUC)减少。说明蛇菰提取物不仅具有抑制α-葡萄糖苷酶的活性、延缓葡萄糖吸收的作用，还具有促进正常小鼠葡萄糖代谢的作用。不同部位的蛇菰提取物作用强度不同。
表3.蛇菰提取物对正常小鼠葡萄糖耐量之AUC的影响


*，与对照组比较，p＜0.05.
实验例4.蛇菰提取物对正常小鼠胰岛素耐量的影响正常ICR雄性小鼠，随机分为4组(n＝10)，一组以水灌胃作为对照组，其余组分别以不同的蛇菰提取物(SHG88、SHG89、SHG90)各20g生药/kg体重灌胃连续10天。实验前禁食2小时，皮下注射胰岛素0.4U/kg，于注射前和注射后30min、60min采血，用葡萄糖氧化酶法测定血糖浓度。结果(图4、表4)说明，蛇菰提取物提取物在20g生药/kg剂量下，明显增强正常小鼠皮下注射胰岛素的反应性，与相应的对照组比较，各时间点的血糖值明显降低，血糖曲线下面积(AUC)减少。说明蛇菰提取物具有一定的增加正常小鼠对胰岛素敏感性的作用。不同部位的蛇菰提取物作用强度不同。
表4.蛇菰提取物对正常小鼠胰岛素耐量之AUC的影响

*，**，与对照组比较，p＜0.05，0.01.
实验例5.蛇菰提取物对蛋白酪氨酸磷酸酶1b(PTP1b)的抑制作用蛋白酪氨酸磷酸酶1b(PTP1b)是胰岛素信号传导系统中的重要的调节因子之一。胰岛素信号传导系统中的多个因子是通过其分子的蛋白酪氨酸磷酸化而激活，再经PTP1b作用使其去磷酸化而失活，从而保持胰岛素信号传导系统的平衡。因此，PTP1b被认为是胰岛素增敏剂的新靶点之一。我们用基因重组的方法得到PTP1b蛋白，在体外试验观察到100μg/ml的蛇菰提取物可明显抑制PTP1b的活性(表5)。不同部位的蛇菰提取物作用强度不同。实验例4、5的结果均说明，蛇菰提取物有胰岛素增敏作用。
表5.蛇菰提取物对蛋白酪氨酸磷酸酶1b(PTP1b)的抑制作用(n＝3)

实验例6.蛇菰提取物对正常小鼠血糖的影响正常ICR雄性小鼠，随机分组(n＝10)，对照组每天以水灌胃，其余组分别以不同的蛇菰提取物(SHG21、SHG88、SHG89、SHG90)各5、20、20、20g生药/kg体重灌胃连续7-10天。实验当天上午8:30采血，测定不禁食(no-fasting)血糖(相当于餐后血糖)。实验当天禁食2.5小时，并于给药后2小时采血前测定空腹(fasting)血糖。用葡萄糖氧化酶法测定血糖浓度。结果SHG21、SHG88、SHG89、和SHG90分别使动物的之不禁食(no-fasting)血糖的平均值降低了27、23、16、和6％；使其空腹(fasting)血糖的平均值降低了25、19、7、0％。说明蛇菰提取物在5-20g生药/kg剂量下，有一定的降低正常小鼠空腹和餐后血糖的作用，不同部位的蛇菰提取物作用强度不同。
实验例7.蛇菰提取物对四氧嘧啶高血糖小鼠血糖的影响ICR雄性小鼠尾静脉注射四氧嘧啶75mg/kg，72h后取血测定血糖。血糖＞200mg/dl者为高血糖小鼠，并根据动物的血糖水平分组(n＝10)。对照组每天以水灌胃，给药组以5g生药/kg体重的蛇菰提取物SHG21灌胃连续10天。实验当天上午8:30取血，测定不禁食(no-fasting)血糖(相当于餐后血糖)。实验当天禁食2.5小时，并于给药后2小时取血前测定空腹(fasting)血糖。用葡萄糖氧化酶法测定血糖浓度。结果显示，蛇菰提取物SHG21在5g生药/kg剂量下，可使四氧嘧啶高血糖小鼠之不禁食(no-fasting)血糖的平均值降低42％；使其空腹(fasting)血糖的平均值降低34％。说明蛇菰提取物有一定的降低四氧嘧啶高血糖小鼠血糖的作用。
上述7个药理实验表明，蛇菰属植物(Balaophora L)提取物具有一定的抑制α-葡萄糖苷酶的活性，使动物多糖和双糖负荷后血糖升高的峰值降低并后移，血糖曲线下面积减少；具有一定的胰岛素增敏作用，使动物增加胰岛素诱导的血糖的降低幅度，血糖曲线下面积减少；对PTP1B显示一定的抑制作用；具有促进机体葡萄糖代谢，使动物葡萄糖负荷后血糖升高的峰值降低，血糖曲线下面积减少；此外，还具有一定的降低正常和四氧嘧啶高血糖小鼠的空腹血糖和不禁食血糖的作用。这些作用均有益于糖尿病糖代谢、脂质代谢紊乱的改善，尤其是可用于制备治疗和预防糖尿病及其并发症等相关的代谢性疾病的药物和保健品。
权利要求
1.蛇菰属植物(Balaophora L)在制备治疗和预防糖尿病及其并发症药物中的应用。
2.根据权利要求1所述的蛇菰属植物(Balaophora L)，其特征在于，所述原药材是葛蕈(蛇菰，Balaophora japonica Mak.)，筒鞘蛇菰(Balaophora inovolucrata Hook f.)和多蕊蛇菰(Balaophorapolyandra Griff.)。
3.蛇菰属植物(Balaophora L)在制备治疗和预防糖尿病相关代谢性疾病的药物中的应用。
4.一种蛇菰属植物(Balaophora L)提取物的提取方法，其特征在于，原药材蛇菰属植物(Balaophora L)，经过干燥、粉碎，用溶剂提取，合并提取液，浓缩，再进行纯化。
5.根据权利要求4所述的提取方法，其特征在于，所述的粉碎是所得粒度大小从全草到过200目筛。
6.根据权利要求4所述的提取方法，其特征在于，所述的溶剂选自有机溶剂，水，混合有机溶剂，水和有机溶剂的混合物。
7.根据权利要求4所述的提取方法，其特征在于，纯化是通过，溶剂萃取，凝胶过滤，聚酰胺，大孔树脂、离子树脂或吸附柱层析。
8.根据权利要求4所述的提取方法，其特征在于，纯化时的洗脱剂的最佳pH值为5-10。
9.根据权利要求7所述的提取方法，其特征在于，大孔树脂树脂是聚苯乙烯型树脂，所述吸附柱层析包括硅胶、氧化铝、纤维素、聚酰胺、活性碳。
10.一种如权利要求4所述的方法提取的蛇菰属植物(BalaophoraL)提取物。
11.一种药物组合物，其特征在于，包括药物有效剂量的，作为活性成分的如权利要求4所述的方法提取的蛇菰属植物(BalaophoraL)提取物和/或蛇菰属植物(Balaophora L)及药学上可接受的载体。
12.如权利要求4所述的方法提取的蛇菰属植物(Balaophora L)提取物在制备治疗和预防糖尿病及其并发症药物中的应用。
13.如权利要求6所述的方法提取的蛇菰属植物(Balaophora L)提取物在制备胰岛素增敏剂中的应用。
全文摘要
本发明公开了从蛇菰属植物(Balaophora L)提取的降血糖提取物，这种提取物的制备方法，含有蛇菰属植物(Balaophora L)或该属植物提取物的药物组合物，以及蛇菰属植物(Balaophora L)或该属植物提取物和其药物组合物作为药物和保健品的用途，尤其是可用于制备治疗和预防糖尿病及其并发症等相关的代谢性疾病的药物和保健品。
文档编号A61P3/00GK1965873SQ200610092038
公开日2007年5月23日 申请日期2006年6月7日 优先权日2005年6月7日
发明者吉腾飞, 叶菲, 苏亚伦, 田金英, 叶峰, 辛冰牧, 丛维娜, 冯孝章 申请人:中国医学科学院药物研究所