芦荟色苷d和有效组分，及其制法、药物组合物与用途的制作方法

专利名称：芦荟色苷d和有效组分，及其制法、药物组合物与用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及医药技术领域，确切地说芦荟中有效成份芦荟色苷D及其色原酮苷类衍生物和富含芦荟色苷D有效组分，可期待制成对抗老年痴呆症的有效药物。
背景技术：
老年痴呆症，又名阿尔兹海默氏症(Alzheimer‘s disease，AD)的发病在人口老龄化的中国成为越来越严重的问题，病理机制研究认定β-淀粉样蛋白(Aβ)的非正常堆积是老年痴呆症最重要的成因。β-分泌酶是与老年痴呆症的发病和进行密切相关的一个新靶点。它可将淀粉样蛋白前体蛋白(APP)裂解成40肽或42肽的Aβ；在动物体内证明，β-分泌酶的抑制剂可以大大降低Aβ的水平，并改善与AD类似的发病症状。现已报道的β-分泌酶抑制剂绝大多数是多肽和拟肽类化合物，仅有少数是合成的小分子杂环化合物。从天然产物中发现的抑制剂仅在2003年11月才有第一次报道(儿茶酚类化合物，IC5010-6M水平)。在药理筛选过程中，我们发现芦荟属植物芦荟的提取物具有较好的抑制β-分泌酶的活性(10-5μg/mL水平)，虽然芦荟的化学成分因品种而有很大差异，而且对芦荟已有不少化学成分研究，但从中发现新结构的β-分泌酶抑制剂却尚未见文献报道。我们对其β-分泌酶抑制活性进行了考察，结果表明色原酮苷类化合物芦荟色苷D为芦荟中抑制β-分泌酶的主要有效成份，而芦荟色苷D含量在80％的有效组分也具有显著的β-分泌酶抑制活性和神经细胞保护活性，可用于治疗老年痴呆症。其特点是1)有效成份和有效组分明确；2)作用显著，机制明确；3)结果稳定，各实验结果均可重复。

发明内容
本发明的目的在于提供芦荟中有效成份芦荟色苷D及其色原酮苷类衍生物和有效组分的制备方法、药理活性和医药用途，它包括1.芦荟有效成份芦荟色苷D，其特征为芦荟有效成分——芦荟色苷D，结构式如下 芦荟色苷D2.上述芦荟有效成份芦荟色苷D及其色原酮苷类衍生物的化学结构，其特征在于芦荟色苷D的三维空间化学结构，芦荟色苷D的色原酮苷类衍生物的三维空间化学结构。
3.上述芦荟有效成份及其衍生物和有效组分的药理活性，其特征在于上述有效成分及其衍生物和有效组分不仅具有较好的β-分泌酶抑制活性，还具有抗氧化活性(芦荟色苷D的活性水平在10-6μg/mL)，可对抗Aβ聚合过程中产生的游离基对神经细胞的损伤。因此，上述有效成分及其衍生物和有效组分有可能从减少Aβ生成和保护神经细胞两个机理对抗老年痴呆症4.上述芦荟有效成份及其衍生物和有效组分的医药用途，其特征为上述有效成分及其衍生物和有效组分可作为制备治疗和预防老年痴呆症的有效药物。
5.上述芦荟有效成份及其衍生物和有效组分的制备方法、检测方法和有效成份含量测定方法。其特征在于a.芦荟有效组分AV(芦荟色苷D含量为30％～50％)的制备方法，95％的乙醇水溶液热回流提取三次，回收乙醇水溶液，提取液浓缩后用5％的乙醇水溶液溶解，用大孔吸附树脂作为层析材料，经过不同浓度的乙醇水溶液进行梯度洗脱，定量收集洗脱液，浓缩，薄层层析检查，收集40％～60％乙醇洗脱液，即含芦荟色苷D的组分，回收溶剂即得。(其中所用醇可以是甲醇、乙醇、丙醇、丁醇、乙二醇、碳链小于32烷醇、碳链小于32烯醇及苯酚等；其中所用大孔树脂包括各种非极性、弱极性、中极性、极性的国产或进口大孔吸附树脂。)b.芦荟有效组分AV中有效成份芦荟色苷D的薄层检查方法薄层板为GF254正相硅胶薄层板，展开剂为氯仿∶甲醇∶水(80∶20∶2)三相溶剂系统，观察方法是在波长为254nm的紫外灯下，芦荟色苷D呈现蓝色荧光。
c.芦荟有效组分AV中有效成份芦荟色苷D的HPLC含量测定方法分析柱为反相C18柱，流动相为甲醇∶水(40∶60)系统，流速1ml/min，检测波长254nm，用外标法法确定有效成分芦荟色苷D的含量。
6.上述芦荟有效成份及其衍生物和有效组分，其特征为a.上述芦荟有效成份芦荟色苷D的及其衍生物和有效组分，包括加入各种辅料的各种片剂、颗粒剂、胶囊剂、缓释剂等口服制剂和注射水针剂、粉针剂、冻干剂等注射制剂。
b.各种辅料包括葡萄糖、蔗糖、微晶纤维素、各种高分子辅料等。
c.其缓释制剂包括缓释包衣微丸剂、缓释骨架片剂、缓释脉冲释放片剂、缓释渗碳透泵片剂、缓释包衣片剂等口服缓释、控释剂型。其中应用的缓释包衣技术包括PH依赖型缓释包衣技术、溶蚀延迟包衣技术、基于结肠酶降解缓释包衣技术等。
d.在制备工艺和制剂中加入抗氧化剂，防止芦荟有效组分的分解和变化，抗氧化剂包括各种水溶性抗氧化剂和脂溶性抗氧化剂，及其混合使用。水溶性的抗氧化剂包括Vc、亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、焦亚硫酸盐、硫代硫酸钠、甲醛合亚硫酸氢钠、硫脲、半胱氨酸、蛋氨酸、硫代乙酸、硫代甘油等；脂溶性抗氧化剂包括叔丁基对羟基茴香醚(BHA)、二丁甲苯酚(BHT)、培酸丙酯(PG)、生育酚(Ve)、卵磷脂等，抗氧化剂的加入量为制剂总量的0.01％-95％。
本发明的优点将芦荟醇提物精制提纯得到有效成份芦荟色苷D和制备为有效成份含量在30％-50％的有效组分，可以除去大量蛋白质、氨基酸、糖类、有机酸等杂质，药效明确，副作用小，提供了可期待用于治疗和预防老年痴呆症的医药用途的有效部位，本实验发明的制备方法，为进一步制成药物剂型奠定了基础。


图1.有效组分AV对静息状态下PC12细胞内钙离子浓度的影响在无Mg2+的Hanks液中，各种不同浓度有效组分AV对细胞内钙离子浓度无影响；在有Mg2+的Hanks液中，10ug/ml的有效组分AV能降低Hanks液中PC12细胞内的钙离子浓度。结果用平均值±SD表示，n＝4，*P＜0.05。(有效组分AV的3个浓度，AV10.1ug/ml，AV21ug/ml，AV310ug/ml)图2.有效组分对于由KCl刺激引起的细胞内钙离子浓度上升的影响将预先给AV或不给AV的细胞经Fura-2负载后用含100mmol/L KCl的培养液吻孵。结果用平均值±SD表示，**P＜0.01。(有效组分AV的3个浓度，AV10.1ug/ml，AV21ug/ml，AV310ug/ml)
图3.SH-SY5Y细胞用64mmol NaN3孵育4小时后，再用10μmol/L JC-1负载。用Polarstar在激发波长490nm处检测535nm和595nm发射波长的荧光强度。结果用红色荧光/绿色荧光值的平均值±SD表示。n＝4，*P＜0.05。(有效组分AV的3个浓度，AV10.1ug/ml，AV21ug/ml，AV310ug/ml)图4.在96孔板中加入线粒体，用不同浓度的有效组分温孵，然后在孔中加入5μmol/L resazurin，经孵育30分钟后检测荧光强度(530nm激发光/590nm发射光)。结果用平均值±SD表示，n＝4，*P＜0.05。(有效组分AV的3个浓度，AV10.1ug/ml，AV21ug/ml，AV310ug/ml)图5.有效组分AV对由半胱氨酸亚铁诱导的大鼠脑组织中MDA生成量的影响的体外实验。半胱氨酸亚铁50μmoL/L硫酸亚铁，200μmol/L半胱氨酸。结果用平均值±SD表示，n＝4，**P＜0.01。(有效组分AV的3个浓度，AV10.1ug/ml，AV21ug/ml，AV310ug/ml)。
图6.在Morris水迷宫实验中，有效组分对大鼠寻找平台时间的影响。结果用平均值±SD表示，n＝8，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001。(有效组分AV的3个浓度，AV10.1ug/ml，AV21ug/ml，AV310ug/ml)。
图7.在Morris水迷宫实验的最后一天，将平台撤走后，观察有效组分AV对大鼠停留在原来放置平台象限的停留时间的影响。结果用平均值±SD表示，n＝8，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001。(有效组分AV的3个浓度，AV10.1ug/ml，AV21ug/ml，AV310ug/ml)。
图8.在Morris水迷宫实验的最后一天，将平台撤走后，观察有效组分AV对大鼠寻找平台总距离的影响。结果用平均值±SD表示，n＝8，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001。(有效组分AV的3个浓度，AV10.1ug/ml，AV21ug/ml，AV310ug/ml)。
图9.在穿梭箱实验中，有效组分AV对大鼠被动反应次数的影响。结果用平均值±SD表示，n＝8，*P＜0.05，**P＜0.01。(有效组分AV的3个浓度，AV10.1ug/ml，AV21ug/ml，AV310ug/ml)。
图10.在穿梭箱实验中，有效组分AV对大鼠被动反应时间的影响。结果用平均值±SD表示，n＝8，*P＜0.05，**P＜0.01。(有效组分AV的3个浓度，AV10.1ug/ml，AV21ug/ml，AV310ug/ml)。
具体实施例方式
下述实施例具体显示本发明的应用。但本实施例不限定本发明的使用范围。
实施例实施例1.库拉索芦荟有效组分AV的制备库拉索芦荟(Aloe vera L.)粗提取物干粉20g粉碎后过60目筛。样品先用130ml乙醇溶解，再用2600ml水稀释，即将样品溶解于5％乙醇水溶液中。按样品∶层析材料(1∶30)的倍数，用SP825型大孔树脂(三菱公司产品)600g装柱。将溶解好的样品加到柱上，先依次用水(5L)、10％乙醇(13L)、30％乙醇洗脱(45L)，然后用50％乙醇(1.8L)洗脱，每1000ml收集一份，每份用薄层层析检查，展开剂为氯仿∶甲醇∶水(80∶20∶2)，在254nm紫外灯下观察，收集含有aloeresinD呈现蓝色荧光斑点的组分，为库拉索芦荟有效组分5g。
实施例2.有效组分中有效成份芦荟色苷D的含量测定方法色谱条件分析柱为反相C18柱(kromasil，5μm)，流动相为甲醇∶水(40∶60)系统，流速1ml/min，检测波长254nm，方法外标法操作用芦荟色苷D标准品配制5个浓度的标准溶液，浓度范围在0.1mg/ml～1.0mg/ml之间。以样品浓度和峰面积的相关关系，作出标准曲线和线性方程。精密称取有效部分样品1.18mg，溶解于1ml甲醇，配制成1.18mg/mll待测样品，根据线性方程，以峰面积计算有效部分中芦荟色苷D的含量。
线性方程y＝8784x-668.26(R2＝0.9965)有效部分中芦荟色苷D的峰面积为4188.78076有效部分中芦荟色苷D的含量为46.86％。
实施例3.芦荟色苷D的制备及光谱数据库拉索芦荟(Aloe vera L.)粗提取物，经硅胶柱层析(200目)，氯仿-甲醇-水(80∶20∶2)溶剂系统洗脱，分成I-V五个部分。第II部分进一步硅胶柱层析(200目)，氯仿-甲醇梯度洗脱得到化合物芦荟色苷D。
化合物芦荟色苷D，白色无定型粉末，m.p.154℃；[α]22D-156.3°(c 0.71，MeOH)；UV(MeOH)λmax(logε)＝213(4.52)，228(4.58)，242 sh(4.28)，252(4.34)，300(4.54)nm；IR(KBr)vmax＝3400，1700，1640，1600，1510，1380，1170cm-1；C29H32O11，FABMS m/z＝557[M+H]+，308，290，154，136；，713.2017)；1HNMR和13CNMR数据，见附表I。
附表I.芦荟色苷D的核磁共振光谱数据(500兆赫兹，溶剂氘代甲醇)

药理实验实验例1 β-分泌酶抑制实验试剂a重组人BACE-1b荧光底物IVc0.1M醋酸缓冲液(PH 4.0)仪器384孔荧光测定微板Fluostar galaxy微板光学测定仪实验步骤在384孔板中依次加入样品5ul、缓冲液5ul、酶稀释液20ul、底物稀释液20ul。空白孔中不加样品及酶稀释液，用缓冲液代替。标准孔中不加样品，用缓冲液代替。于384孔板中混匀，25℃条件下Ex＝320nm，Em＝405nm处测荧光，2分钟一个循环，共测10个循环，计算荧光值变化斜率作为酶活性。与标准对照比较计算化合物对β-分泌酶的抑制率。
结果评价β-分泌酶抑制率＝〔(标准对照酶活性-空白酶活性)-(样品酶活性-空白酶活性)〕/(标准对照酶活性-空白酶活性)*100％结果分析

实验例有效部位和有效成分的神经保护药理实验目录1.Glu诱导细胞损伤模型2.[Ca]2+i测定静息状态①Hanks solution[Ca]2+i降低②Hanks solution(Mg2+free)[Ca]2+I无明显影响③D-Hanks solution[Ca]2+I无明显影响KCl诱导钙内流+Glu诱导钙内流-3.对叠氮钠诱导的细胞损伤的影响线粒体膜电位测定(MMP)+刃天青法测定AV对线粒体氧化还原能力的影响+4.对线粒体氧化应激损伤的保护作用MDA生成测定GSH含量测定H-ATP酶活性测定5.细胞凋亡抑制活性1)血清撤除诱导原代神经细胞凋亡-2)MPP+诱导细胞凋亡-3)H2O2诱导细胞损伤+6.抗衰老体内实验1)Morris水迷宫2)穿梭箱实验注+为有效，-为无效细胞内钙测定静息状态于96孔板加入PC12细胞悬液90μl/孔，与5μmol.L-1Fura-2/AM在37℃恒温震荡35min。负载结束后，分别以含0.2％BSA Hanks、不含Mg2+的0.2％BSA Hanks液洗两次，调细胞悬液为2×106个/ml。Fura-2的最大激发波长是380nm，与Ca2+结合后的最大激发波长是340nm，发射波长是500nm。用FLUO-STAR荧光计进行荧光检测。加入Triton X-100破碎细胞膜，震荡混匀后测定荧光，此时为Ca2+饱和时荧光强度。加入EGTA络合细胞内钙，震荡混匀后测定荧光，此时为零Ca2+时荧光强度。
按下式计算Ca2+浓度[Ca2+]＝KDa*(R-Rmin)/(Rmax-R)*(Ff2/Fb2)R＝F340/F380其中KDa是Fura-2与Ca2+的解离常数，为224nmol.L-1。
Ff2、Fb2分别是零Ca2+和Ca2+饱和时380nm处荧光值。
药物处理细胞负载结束后，预先加入AV(终浓度分别为0.1ug/ml，1ug/ml，10ug/ml)温孵5分钟后，分别加入刺激剂KCl，谷氨酸(Glu)，立即测定荧光变化。
结果见图1表1图1的原始数据


结果见图2
表2图2的原始数据

对叠氮钠诱导的SH-SY5Y细胞损伤的影响线粒体膜电位测定(MMP)细胞培养SH-SY5Y细胞由中国医学科学院基础所提供。SH-SY5Y细胞以完全1640培养基(含10％胎牛血清，青霉素100U/ml，链霉素100μg/ml)，于37℃、5％CO2恒温培养箱中培养，每2-3天换液一次。
线粒体膜电位(Δψ)的测定JC-1为一种特异性的阳离子荧光染料，可定位在线粒体膜上，其激发光为490nm，单体发射光为527nm，聚集体发射光为590nm，其聚集程度与膜电位成正比。当线粒体膜电位增高时，红色荧光增强，红色荧光和绿色荧光的比值可代表膜电位的高低。细胞处理如上所示，与64mmol·L-11叠氮钠孵育4小时后，用Hank’s液漂洗细胞一次，然后与10μmol·L-1的JC-1 37℃负载15min，PBS洗二次后于荧光显微镜下观察拍照。并在Polastar上测定其荧光值(Fluostar galaxy software)，以红色荧光值与绿色荧光值的比值的大小来表示膜电位的高低。
刃天青法测定AV对线粒体氧化还原能力的影响脑线粒体提取取大脑皮层，称重，转入玻璃匀浆器中，加入MSETB缓冲液10ml/g组织，(MSETB缓冲液210mmol·L-1mannitol，70mmol·L-1sucrose，0.5m mol·L-1EDTA，10m mol·L-1Tris-HCl and 0.2％bovine serum albumin，pH 7.4)，手动匀浆10次。所得匀浆液以2000g离心3min，取上清离心12000g，8min。以MSETB缓冲液将所得沉淀洗涤一次(离心12000g×10)，所得沉淀即为线粒体。将沉淀按10∶1(v/w)悬于SET缓冲液中，SET缓冲液(280mmol·L-1sucrose，0.5mmol·L-1EDTA and 10mmol·L-1Tris-HCl，pH 7.4)，离心10min。最后将沉淀悬于SET缓冲液中，整个线粒体制备过程均在4℃进行。以Lowry法测定蛋白含量。
刃天青法检测线粒体氧化还原能力在96孔板中加入线粒体5μg蛋白/孔，加入不同浓度的红景天甙，resazurin 5μmol·L-1，立即在Polastar测定仪上测定荧光强度。(激发波长530nm，发射波长590nm)。96孔板于37℃继续孵育30min后测定荧光强度的变化。以荧光强度的增长率表示线粒体功能的变化。另取线粒体蛋白5μg加入到96孔板中，加入不同浓度的红景天甙及线粒体功能抑制剂(NaN3650μmol·L-1)，37℃作用30min，加入resazurin5μmol·L-1，Polastar微板测定仪测定荧光强度F0(激发波长530nm，发射波长590nm)。96孔板于37℃继续孵育60min，检测荧光F60。
荧光强度增长率＝(F60-F0)/F0×100％F0，F60分别为resazurin加入0min和60min时的荧光强度。
结果见图3表3图3的原始数据


结果见图4表4图4的原始数据

对大鼠脑线粒体氧化应激损伤的体外保护作用脂质过氧化产物MDA测定测定在96孔板中进行，以0.2mol/L组氨酸缓冲液为缓冲体系，反应总体积为100μl，含线粒体蛋白100μg，50μmol/L FeSO4，500μmol/L半胱胺酸和不同浓度的红景天甙。混匀后置37℃温育20min，然后加入100μl的TBA反应液，60℃加热30min后在酶标仪上测定。
还原型谷胱甘肽(GSH)的测定反应体系以0.1mol/L磷酸盐-0.5mmol/LEDTA为缓冲液，线粒体蛋白0.5mg/ml，加入不同浓度的红景天甙37℃温育10min，加入H2O2(100μmol/L)继续温育5min，加入Triton破膜后，加入20％的偏磷酸终止反应。取上清经OPT荧光显示法测定GSH的含量。
H+-ATP酶活性测定用定磷法测定氧化应激损伤后的线粒体H+-ATP酶活性。反应体系为100μl，50mM Tris缓冲液，5mM MgCl2，5mM ATP，pH7.95，25℃温育2min后加入线粒体蛋白，终浓度为0.2mg/ml，25℃温育2min。加三氯醋酸中止反应。3000rpm离心2min，取上清。加入2.5％FeSO4和2％钼酸胺，振荡均匀后于690nm处测定吸光度。H+-ATP酶活性单位μmol.Pi/min.mg.pro结果见图5表5图5的原始数据

表6还原型谷胱甘肽(GSH)的测定的筛选结果

表7H+-ATP酶活性测定结果

H2O2诱导细胞损伤PC12细胞培养PC12细胞以完全1640培养基(含10％马血清，5％胎牛血清，青霉素100U/ml，链霉素100ug/ml)，于37℃、5％CO2恒温培养箱中培养，每2-3天换液一次。
细胞处理①正常对照组PC12细胞在含血清DMEM培养基中正常培养；②H2O2作用组PC12细胞铺成单层后，吸除原培养基，加入含有终浓度为100μmol/l、200μmol/l、300μmol/l、500μmol/l的H2O2的无血清培养基于37℃、5％CO2恒温培养箱中培养12小时③药物处理组PC12细胞铺成单层后，吸除原培养基，加入含有终浓度为的0.1ug/ml，1ug/ml，10ug/mlAV预处理4h后，加入终浓度为200μmol/l的H2O2无血清培养12小时。
细胞活力测定每孔加入100ul MTT液，终浓度为0.5mg/ml，于37℃5％CO2继续培养4h，弃上清，每孔加入DMSO 100ul，振荡后于540nm处测定吸光度OD值。
表8细胞活力测定结果

抗衰老体内实验——有效组分AV对由叠氮化钠和D-半乳糖诱发衰老的大鼠模型的作用在D-半乳糖致衰老模型的基础上，加用线粒体复合酶IV抑制剂叠氮钠来模拟老年痴呆。
实验材料D-半乳糖；叠氮钠或鱼藤酮；邻苯二甲醛(OPT)；偏磷酸HPO3；TBA；邻苯三酚；钼酸胺；ATP；Wistar雄性大鼠实验方法动物模型的建立Wistar雄性大鼠随机分成7组，每组10只Sham腹腔注射生理盐水5周+脑室插管注射人工脑脊液一周Model-3腹腔注射D-galactose 5周+脑室插管注射NaN3一周
AV1Model 3+腹腔注射10mg/kg·day AV，第4周开始给药，共给药3周。
AV2Model 3+腹腔注射30mg/kg·day AV，第4周开始给药，共给药3周。
AV3Model 3+腹腔注射100mg/kg·day AV，第4周开始给药，共给药3周。
阳性对照Model 3+腹腔注射脑复康30mg/kg·day指标测定1、Morris水迷宫水迷宫装置由直径120cm的圆形水池和一可移动位置的直径10cm的平台组成。将水池均匀分成四个象限，平台放置于某一象限的中间位置并使其没于水下1.5cm，水温保持22±2℃并加入奶粉使其不透明。实验第一天动物自由游泳60s后放置于平台上60s作为预训练。从第二天开始认知训练，每天训练2次持续5天，每次训练时间为60s，记录潜伏期和游泳距离。在最后一次认知训练结束后，将平台撤去，测试动物60s内在原来放置平台象限的停留时间作为空间记忆形成指标。
见图6表9图6的原始数据

见图7表10图7的原始数据

见图8表11图8的原始数据

2、穿梭箱实验采用穿梭箱法测定其学习记忆能力。每只动物每日训练20次，以蜂鸣音响后10秒内自动逃到另一侧为一次主动回避反应，记录连续5天内主动回避反应次数及被动回避反应时间，以此作为学习记忆成绩。
见图9表12图9的原始数据

表13图10的原始数据

附表II库拉索芦荟有效成分以及有效部位的药理活性结果


权利要求
1.芦荟中的有效成份芦荟色苷D及其色原酮苷类衍生物的化学结构、药理活性和医药用途，它包括芦荟中的有效成份芦荟色苷D，其特征为芦荟有效成份——芦荟色苷D，结构式如下 芦荟色苷D
2.芦荟中有效组分AV的制备方法、药理活性和医药用途，其特征为它包括芦荟中的有效成份芦荟色苷D，其含量在30％～50％。
3.根据权利1要求所述的芦荟中有效成份芦荟色苷D及其色原酮苷类衍生物的化学结构，其特征在于芦荟色苷D的三维空间化学结构，芦荟色苷D的色原酮苷类衍生物的三维空间化学结构。
4.根据权利要求1所述的芦荟中活性成分芦荟色苷D及其色原酮苷类衍生物，和权利要求2所述的芦荟中主要包括芦荟色苷D的有效组分的药理活性，其特征在于上述有效成分及其衍生物和有效组分不仅具有较好的β-分泌酶抑制活性，还具有抗氧化活性(芦荟色苷D的活性水平在10-6μg/mL)，可对抗Aβ聚合过程中产生的游离基对神经细胞的损伤。因此，上述有效成分及其衍生物和有效组分能有效对抗老年痴呆症
5.根据权利要求1所述的芦荟中活性成分芦荟色苷D及其色原酮苷类衍生物，和权利要求2所述的芦荟中主要包括芦荟色苷D的有效组分的医药用途，其特征在于上述有效成分及其衍生物和有效组分可作为制备治疗和预防老年痴呆症的药物。
6.一种如权利要求2所述的芦荟中的有效组分AV(芦荟色苷D含量为30％～50％)的制备方法，检测方法和有效成份含量测定方法，其特征在于包括a.芦荟有效组分AV(芦荟色苷D含量为30％～50％)的制备方法，95％的乙醇水溶液热回流提取三次，回收乙醇水溶液，提取液浓缩后用5％的乙醇水溶液溶解，用大孔吸附树脂作为层析材料，经过不同浓度的乙醇水溶液进行梯度洗脱，定量收集洗脱液，浓缩，薄层层析检查，收集富含芦荟色苷D的组分，回收溶剂即得。(其中所用醇可以是甲醇、乙醇、丙醇、丁醇、乙二醇、碳链小于32烷醇、碳链小于32烯醇及苯酚等；其中所用大孔树脂包括各种非极性、弱极性、中极性、极性的国产或进口大孔吸附树脂。)b.芦荟有效组分中有效成份芦荟色苷D的薄层检查方法薄层板为GF254正相硅胶薄层板，展开剂为氯仿∶甲醇∶水(80∶20∶2)三相溶剂系统，观察方法是在波长为254nm的紫外灯下，芦荟色苷D呈现蓝色荧光。c.芦荟有效组分中有效成份芦荟色苷D的HPLC含量测定方法分析柱为反相C18柱，流动相为甲醇∶水(40∶60)系统，流速1ml/min，检测波长254nm，用外标法确定有效成分芦荟色苷D的含量。
7.根据权利要求1所述的芦荟中芦荟色苷D及其色原酮苷类衍生物，和权利要求2所述的芦荟中主要包括芦荟色苷D的有效组分，其特征在于a.上述芦荟有效成份芦荟色苷D的及其衍生物和有效组分，包括加入各种辅料的各种片剂、颗粒剂、胶囊剂、缓释剂等口服制剂和注射水针剂、粉针剂、冻干剂等注射制剂。b.各种辅料包括葡萄糖、蔗糖、微晶纤维素、各种高分子辅料等。c.其缓释制剂包括缓释包衣微丸剂、缓释骨架片剂、缓释脉冲释放片剂、缓释渗碳透泵片剂、缓释包衣片剂等口服缓释、控释剂型。其中应用的缓释包衣技术包括PH依赖型缓释包衣技术、溶蚀延迟包衣技术、基于结肠酶降解缓释包衣技术等。d.在制备工艺和制剂中加入抗氧化剂，防止芦荟有效组分的分解和变化，抗氧化剂包括各种水溶性抗氧化剂和脂溶性抗氧化剂，及其混合使用。水溶性的抗氧化剂包括Vc、亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、焦亚硫酸盐、硫代硫酸钠、甲醛合亚硫酸氢钠、硫脲、半胱氨酸、蛋氨酸、硫代乙酸、硫代甘油等；脂溶性抗氧化剂包括叔丁基对羟基茴香醚(BHA)、二丁甲苯酚(BHT)、培酸丙酯(PG)、生育酚(Ve)、卵磷脂等，抗氧化剂的加入量为制剂总量的0.01％-95％。
全文摘要
本发明是芦荟中有效成份芦荟色苷D及其色原酮苷类衍生物和有效组分的制备方法、药理活性和医药用途。芦荟中的有效成份芦荟色苷D及其色原酮苷类衍生物具有较好的β－分泌酶抑制活性和神经细胞保护活性，作用机理明确，是前景很好的对抗老年痴呆症的有效药物。芦荟中的有效组分AV(芦荟色苷D的含量为30％～50％)，可通过95％的乙醇提取，提取物用大孔吸附树脂经不同浓度的乙醇水溶液梯度洗脱，回收溶剂制得，可期待用于治疗老年痴呆症。
文档编号A61P25/28GK1965852SQ20061009203
公开日2007年5月23日 申请日期2006年6月7日 优先权日2005年6月7日
发明者方唯硕, 杜冠华, 杨庆云, 王月华, 曹莉莉 申请人:中国医学科学院药物研究所