专利名称：一种新的防治艾滋病及保肝解毒制剂的制作方法
技术领域：
本发明为由金银花、菊花和茼蒿的提取物所成的组合物，是具有保肝养肝增强免疫力及防治艾滋病的保健品，该组合物可以根据需要制备成口服液，胶囊，片剂，凝胶和咀嚼片等一系列的剂型。
一、背景
金银花原名忍冬，中国药典2005年版一部收载为忍冬科植物忍冬Lonicera japonica Thunb.的干燥花蕾或带初开的花。性味甘，寒。归肺、心、胃经。功能为清热解毒，凉散风热。用于痈肿疔疮，喉痹，丹毒、热毒血痢，风热感冒，温病发热。2002年，国家卫生部《关于进一步规范保健食品原料管理的通知》中明确了金银花既是食品又是药品。金银花的化学成分研究表明，其含有机酸类、黄酮类、三萜皂苷类和挥发油等。其活性主要有抑菌、抗病毒、解热、抗炎、止血、抗氧化、抗生育和降血脂、保肝和调节免疫功能的作用。
菊花中国药典2005年版一部收载为菊科植物菊Chrysanthemummorifolium Ramat.的干燥头状花序。性味甘、苦，微寒。归肺、肝经。功能为散风清热，平肝明目。用于风热感冒，头痛眩晕，目赤肿痛，眼目昏花。《医林纂要》云“入肺而行肝气，降逆气。”；《本草正义》云“抑肝木之横逆。”；《本草拾遗》云“治诸风头眩，解酒毒疔肿。”。2002年，国家卫生部《关于进一步规范保健食品原料管理的通知》中明确了菊花既是食品又是药品。菊花的化学成分研究表明，其含有有机酸及其酯类、多种黄酮及其苷类、挥发油类、植物甾醇及三萜类，此外菊花还含有多种人体生命活动所必需的氨基酸、微量元素等。药理研究表明菊花具有抗菌、抗病毒、抗疟、抗衰老、抗炎、抗诱变、抗肿瘤、解热、增加毛细血管抵抗力、抑制血小板凝集等作用，近年来的研究发现其具有保肝和调节免疫功能的作用。
另外，菊花的提取物具有很强的抗氧化作用，可增强机体清除自由基及抑制自由基反应的能力，防止过度的脂质过氧化，对肝脏起保护作用。中药菊花煎液灌肠具有一定的免疫调节作用，可阻断溃疡性结肠炎患者粘附分子的表达，调节粘膜免疫系统，有利于疾病的恢复。此外，菊花的提取液还能提高人体的免疫力，增强人体对周围环境的适应能力。
茼蒿(Chrysanthemum Coronarium L.var.Spatiosum Bailey)异名蒿子杆、蓬蒿、菊花菜、蒿菜、春菊，为菊科植物。茼蒿原产于我国，是我国主要蔬菜之一，也有部分地区将其作为观赏植物或中草药，全国大部分地区均有栽培。味辛甘，性平。入脾、胃二经。功能为和脾胃，利二便。《饮膳正要》“甘，平，无毒。”《千金·食治》云茼蒿功能“安心气，养脾胃，消痰饮。”《日用本草》云能“行肝气，治偏坠气疼，利小便。”《得配本草》云能“利肠胃，通血脉，除膈中臭气。”故凡脾胃不和，二便不利，咳嗽痰多诸症，无不适宜。茼蒿的化学成分研究表明其含有丝氨酸、天门冬素、苏氨酸、丙氨酸、谷氨酰胺、β-丁氨酸等氨基酸；棉黄苷(Gossypitrin)，栋皮苷(Quercimeritrin)、绿原酸(Chlorogenic acid)、香豆素、赫尼亚林(Herniarin)，伞形花内酯(Umbeliferone)和东莨菪内酯(Scopoletin)、长链脂肪酸等。茼蒿具有较高的抗氧化活性、抗心动过速、抗肿瘤化疗引起的白细胞减少、抗癌等活性，同时具催吐、祛痰、发汗、降压、强心等功效。
茼蒿等植物提取物都能减少慢性炎症疾病和对人体的健康有利。另外，茼蒿含有丰富的挥发性精油以及胆碱等物质，后者能促进胃肠蠕动增加营养物质的吸收，促进蛋白质代谢和脂肪的分解。茼蒿也是重要的铁、钙补充剂。
二咖啡酰奎宁酸有研究报道孙燕荣等(解放军药学学报，2004，20(2)81～84)采用肝原代细胞培养及四氯化碳损伤法，观察此物质对肝细胞的保护作用，并通过体外实验初步探探讨二咖啡酰奎宁酸保护肝细胞的作用机制，结果二咖啡酰奎宁酸在7.8～250mg/L浓度对肝细胞无明显毒性作用，能促进正常及四氯化碳损伤的肝细胞增殖及增强细胞活力，降低细胞上清的天门冬氨酸转移酶(AST)活性，抑制四氯化碳引起的肝细胞凋亡以及改变受损细胞周期。并且有其他实验(生命科学研究，2001，5(4)355～357；河南医科大学学报，1993，28(1)31-33)表明二咖啡酰奎宁酸能促进受损肝细胞的DNA合成，加速细胞的分裂增殖，减轻肝细胞的变性坏死，抑制炎性反应，具有显著的肝细胞保护作用；其作用机制为促进肝细胞的增殖及活力，抑制受损肝细胞的凋亡，并可明显降低天门冬氨酸转移酶水平。二咖啡酰奎宁酸能够显著降低大鼠血清LN，HA，MDA，NO含量，明显改善肝组织炎症及纤维化状态，具有抗复合因素致大鼠肝纤维化及脂质过氧化作用。另外，二咖啡酰奎宁酸可显著抑制NIH/3T3细胞增殖，明显抑制胶原和透明质酸的合成，在体外具有显著的抗肝纤维化作用。另外2005年底由江西江中制药(集团)有限责任公司投资并与中国军事医学科学院共同研制的抗艾滋病新药二咖啡酰奎尼酸，在经过严格的动物药效学试验和安全性试验后，正式被国家食品药品监督管理局批准进入人体临床试验阶段。
二、配方依据
化学性肝损伤是指由化学性肝毒性物质所造成的肝损伤。这些化学物质包括酒精及某些药物引起的肝损伤，而且酒精肝损伤也是目前最常见的。这些毒物在人群中普遍易感，潜伏期短，病变的过程与感染的剂量直接相关，可引起肝脏不同程度的肝细胞坏死、脂肪变形、肝硬化、胆汁淤积、肝纤维化、甚至肝癌。
1、传统中医药学养生、保健理论依据
化学性肝损伤引起的肝疾病，中医虽无此病名。但涉及酒精性肝病，中医学早有记载。如《金匮要略·黄疸病脉症并治》中的酒疸就类似干西医学的酒精性肝病。又如，《症因脉治·内伤黄疸》“酒疸之因，其人以酒为事，或饮时浩饮，大醉当风入水，兼以膏粱积热，互相蒸酿，则酒疸之证成矣。”指出了酒疸的成因及病理。近年来各地学者对酒精性肝病的病因病理进行了系统论述。认为多因平素多饮、嗜食肥甘厚腻。停宿中焦，影响脾胃运化，酒湿生痰，痰阻气机，肝脾同病，而成气滞湿阻之变；气病及血，气滞血瘀；若痰湿中阻，日久化热，湿热胶结，蕴于肝胆，使胆汁外溢，遂成黄疸。王天舒等认为酒精性脂肪肝的形成多因湿热酒毒内蕴易伤肝胆，损伤脾胃，导致气机郁滞、血脉瘀阻、痰浊内生，气血痰互结于胁下形成痞块。故本病的形成基本病机是热毒湿浊蕴结于肝，据此应以清热解毒为大法。
脏腑(肝)蕴热，火毒结聚。治以清热解毒为主，使热结火毒清解消散。方中金银花甘寒，两清气血热毒，为君药。菊花，性味甘、苦，微寒，归肺、肝经，有清热解毒，平肝明目之功，为臣药。君臣合用，清解之力更强，且能凉散壅结，以消肿痛。茼蒿，味辛甘，性平，能行肝气，以散郁结；又能和脾胃，利二便，以健脾化湿，消痰饮，使邪毒有出路，为佐使药。全方各药共奏清热解毒，疏肝健脾，化湿利痰之功。
2、现代医学理论依据
现代临床应用和药理研究表明
金银花含有二咖啡酰奎宁酸类、绿原酸类、三萜皂苷类物质，这些物质的保肝作用非常明确。特别是二咖啡酰奎宁酸类物质能促进受损肝细胞的DNA合成，加速细胞的分裂增殖，减轻肝细胞的变性坏死，抑制炎性反应，能够显著降低大鼠血清层连蛋白(LN)，透明质酸(HA)，丙二醛(MDA)，一氧化氮(NO)含量，明显改善肝组织炎症及纤维化状态，具有抗复合因素致大鼠肝纤维化及脂质过氧化作用，具有显著的肝细胞保护作用；二咖啡酰奎宁酸可以可以有效抑制艾滋病毒，其副作用小，且比鸡尾酒疗法更有效。金银花还有抗炎、抗病毒和免疫调节的作用。
菊花能减少胆固醇在肝脏的堆积量，防止高胆固醇对肝脏的损害，从而达到保肝的作用；菊花还具有很强的抗氧化作用，可增强机体清除自由基及抑制自由基反应的能力，防止过度的脂质过氧化，对肝脏起保护作用；菊花同时能提高人体的免疫力，增强人体对周围环境的适应能力。
茼蒿所含酚类物质有具有较高的抗氧化活性，减少氧化应激，阻断氧化应激产物对肝细胞的毒性影响，可达到抗氧化、保肝作用；茼蒿有利于将肠道的胆固醇排除体外，有助于消化和降低胆固醇，对高胆固醇所致的肝脏损害有防治效果。茼蒿可调控细胞免疫功能来发挥其显著的抗炎作用。
配方中各成分通过作用机体的各个环节而发挥着保肝和增强免疫力的作用。
3、配方中各原料的有效剂量及安全食用剂量
配方中金银花的提取物量相当于原药材的12克，在国家药典2005的使用范围(9克～12克)内；菊花的提取物量相当于原药材的6克，在国家药典2005的使用范围(5克～9克)内；茼蒿提取物量相当于原干燥品5克，在食品的使用范围内。
三种成分中，金银花和菊花既是食品又是药品，茼蒿是蔬菜。文献资料表明他们之间没有配伍的禁忌，其中金银花和菊花的配伍应用在临床用药、保健食品配制、食品饮料广泛使用。他们的使用是安全的。
国内市面上目前也存在着各种利用金银花和菊花制备而成的保健品，有些没有明确的质量标准，即使有质量标准也均是以绿原酸的含量作为指标的。然而我们的研究发现以绿原酸含量为单一指标不能很好地控制此类保肝保健品的质量标准，也就是说该单一指标不能与保健活性功能很好地对应。我们进一步研究发现，同时控制二咖啡酰奎宁酸的含量可以更为有效地控制该品的功能效果。另外在研究中我们将茼蒿的提取物作为佐使物，也很好地增强了保健品的保健功能。从而本研究发现同时采用“二咖啡酰奎宁酸”为标准制备的该新型口服保健品制剂，具有保肝养肝、清热解毒和增强免疫力的功效，可用于体弱多病、长期酗酒或肝病引起的肝损伤的辅助治疗，亦可用于艾滋病的防治。
三、实施实例
(一)动物实验
1、保肝养肝实验
材料成年SD大鼠60只，雌雄不限，质量(220±10)g。
方法随机分组，每组20只；初正常对照外，其余各组均每周皮下注射CCl4(1ml/kg)两次，每周调整一次剂量，共12周；从开始注射CCl4起，每天按药物剂量给药一次；共12周；实验结束时
a、按试剂盒方法采血测定各指标；b、取肝组织一块，匀浆，按试剂盒方法测定羟脯氨酸含量；c、取肝组织一块，HE染色，做病理组织学检查，计算胶原容积积分。给药途径为腹腔注射给药，保健品组合物为30mg/kg给药。
实验数据如下表，
表1保健品组合物对CCl4所致大鼠慢性肝损伤后肝功能的影响(n＝20)
表2保健品组合物对CCl4所致大鼠慢性肝损伤后肝纤维化的影响(n＝20)
表3保健品组合物对CCl4所致大鼠慢性肝损伤后胶原容积积分的影响(n＝20)
实验结果
功能、生化检测结果见表1、2模型对照组AST、ALT、TP、HP、PIIIP及CIV与正常对照组相比有极显著差异(P＜0.01)，给保健品组合物组与模型对照组相比均有极显著性差异(P＜0.01)，说明保健品组合物有保护肝脏的作用。
病理学检测结果见表3模型对照组的胶原容积积分与正常对照组相比有极显著差异(P＜0.01)，给保健品组合物组与模型对照组相比均有极显著性差异(P＜0.01)说明保健品组合物有对慢性CCl4诱发的大鼠肝纤维化的有治疗作用。
该结果表明该保健品的确有保肝养肝的疗效。
2、增强免疫力实验
(A)取昆明小鼠200只，体重11～13g，雌雄各半，随机分成4组，每组50只。(1)空白对照组，等量生理盐水；(2)模型对照组，等量生理盐水；(3)利巴韦林组40mg/kg，7.5mg/ml；(4)保健品组30mg/kg。以上各组小鼠均灌胃给药，灌胃容量10ml/kg，1次/×6天，于给药第2天各组小鼠(除空白对照组外)在乙醚浅麻醉下以增毒3次的病毒尿囊液滴鼻感染小鼠，每鼠30μl(20个LD50攻击量)。观察动物感染后发病症状，记录感染14天后死亡数，并计算保护率及平均存活天数，结果如下表所示
根据实验结果可以看出本保健品对甲型流感病毒感染的小鼠具有保护作用，虽然保护率不达50％，但与模型对照组比还是有显著的保护作用的，并可延长感染小鼠存活天数。
表4保健品对被甲型流感病毒感染的小鼠的保护作用
(B)取清洁级ICR小鼠60只，体重20±3g，雌雄各半。实验分为3组，即正常组、模型组、保健品组。IgG、IgM、IFN-γ和IL-2均由ELISA检测试剂盒检验。
正常组常规饲养。模型组隔日1次皮下注射环磷酰胺40mg/kg，共8次。保健品组在建模同时每日灌胃保健品，连续14天，并于末次给药后1h眼眶取血，分别按各个试剂盒使用说明书测IgG、IgM、IFN-γ和IL-2；将小鼠脱颈椎处死，剖取胸腺盒脾胀，称重，求脏器指数。胸腺指数＝(胸腺重量/体重)×100％；脾脏指数＝(脾脏重量/体重)×100％。
将数据用统计软件分析得下列表格
表5各组小鼠体液免疫功能的比较(X±S)
表6各组小鼠细胞免疫功能的比较(X±S)
表7各小鼠胸腺指数和脾脏指数比较(X±S)
虽然实验数据中保健品对脏器指数无显著影响，但是从表5、6和7中可以得出该品显著提高了体液免疫和细胞免疫力。结论因此该保健品由增强免疫机能的作用。
3、抗艾滋病试验
药物该药品/保健品胶囊，空白对照填充有淀粉的胶囊，阳性对照为AZT。
恒河猴9只，5～6kg/只，6岁龄左右，体征健康，血清检测SIV、SRV和STLV-1病毒抗体阴性。试验组、空白组和对照组各3只。通过SIV病毒液适量静脉注射感染猴。
试验猴感染后2小时口服给药，连续2个月。空白组给与药相当的淀粉胶囊。AZT阳性对照组连续口服AZT8周。停药后各组再观察两个月。
按感染后6、9、13、15、20、28、43、57、80、115天可检查各组实验猴血常规，CD4+淋巴细胞亚群、血浆病毒滴度、全血病毒滴度、淋巴结、肝肾功能等。
表8各组猴WBC和CD4+淋巴细胞亚群(ul)
由上表可以看出该药品/保健品能有效抑制急性SIV病毒，有效防治艾滋病。
(二)保健品样品高效液相分析图谱
为了控制胶囊质量，我们采用中国药典2005版(一部)中金银花项下测定绿原酸的方法，对绿原酸、3，5-二咖啡酰奎宁酸的含量进行了含量测定，图谱如下
在上述液相图谱中，绿原酸与3，5-二咖啡酰奎宁酸出峰时间分别为5.032分与10.782分，能与成分能得到较好的分离。
并对该胶囊做了初步稳定性测试
A、影响因素实验
a)高温试验
将胶囊样品置于40℃恒温箱中，在第5、10天取样，分析结果与0天数据比较，结果见下表。
胶囊40℃高温试验结果
小结40℃高温试验表明本品有效成分略有降低。
b)高湿试验
将胶囊样品置于相对湿度为75％RH的密闭容器中，于第5、10天取样分析，与0天数据比较，结果见下表。
胶囊高湿试验结果(75％RH)
小结高湿试验数据表明本品易引湿，建议加包装中放置干燥剂。
c)光照试验
将样品除去包装放在4500Lx光强的日光灯下照射10天，于5天、10天分别取样分析，与0天数据比较，结果见下表。
胶囊光照试验结果
小结光照试验表明有效成分含量下降。
d)高温高湿及冷冻试验
将样品裸露在100％湿度、60℃的恒温密闭容器中，5天后取样分析，结果显示吸湿变糊状。
冷藏于-5℃，在第10天取样，外观色泽、有效成分含量等各项指标未见改变。
小结高温高湿试验数据表明内容物糊状化，样品已不合格。
B、加速实验
将本品模拟上市包装，置相对湿度为60％、温度为30℃的恒温恒湿条件下6个月，并分别于1、2、3个月及6个月取样分析，与0月相对照，结果见表。
胶囊30℃加速试验结果
小结加速试验观察6个月表明，有效成分含量均稍有下降，但仍在合格范围内。
C、室温留样考察
将本品模拟上市包装，在实验室留样观察间贮放，于0、3、6、12、18、24、36个月取样分析，结果见下表
胶囊室温留样试验结果(25℃±1)
小结两年常温放置保存没有问题。
总结有关因素影响中湿度对该保健品的作用最大，因此包装注意控制湿度和在大包装中放置干燥剂。另外模拟上市包装在常温避湿避湿保存相当稳定，24个月后样品仍合格。
(三)药剂制备
以下将描述本发明的几个制剂实施例，但本发明的内容包括但不局限于此。
实施例一保健品之片剂
金银花提取物 120g
菊花提取物 100g
茼蒿提取物 80g
甜味剂、润滑剂等其他适当辅料 20g
将上述物质混合均匀后，用干法制粒并整粒后进行压片制备，压制成1000片。
实施例二保健品之胶囊
金银花提取物120g
菊花提取物 100g
茼蒿提取物 90g
润滑剂等其他适当辅料15g
将上述物质混合均匀后，无菌环境下封装入1000粒胶囊中即可。
实施例三保健品之口服液
金银花提取物130g
菊花提取物 100g
茼蒿提取物 85g
水等适当溶剂2L
按口服制剂工艺，将金银花、菊花和茼蒿的提取物溶于溶剂中，充分混合均匀后，分装为1000支。
实施例四保健品之凝胶
金银花提取物120g
菊花提取物 100g
茼蒿提取物 90g
琼脂糖等凝胶介质8g
水 4L
按凝胶制剂制备工艺，将上述物质充分混合后，在适当温度下加热，直到所有物质变为，粘稠的液状混合物时，将所得到的混合物分装成1000份，待冷却凝结后即可。
实施例五保健品之泡腾片
金银花提取物120g
菊花提取物 100g
茼蒿提取物 90g
酒石酸 7g
碳酸氢钠5g
硬脂酸镁2g
羧甲基淀粉钠1g
淀粉10g
矫味剂 适量
混匀，干法制粒后，无菌压制成1000片。
权利要求
1.一种天然植物提取物所制备成的口服药品/保健品制剂。
2.根据权利要求1所述，其特征在于药品/保健品是由一定比例的金银花、菊花和茼蒿的提取物及可以接受的药品/保健品制剂辅料组合而成的制剂。
3.根据权利要求2所述，其特征在于该药品/保健品制剂中含有金银花、菊花和茼蒿的主要成分。其中含有金银花、菊花和茼蒿提取物的重量比例范围为金银花∶菊花∶茼蒿＝(1～10)∶(1～10)∶(1～10)，其中又以金银花∶菊花∶茼蒿＝6∶5∶4为最适比例，效果最佳。
4.根据权利要求3所述，其特征在于其中单位制剂量为0.05g-1g，并且所含三者总成分按重量计算不低于0.05g。
5.根据权利要求3和4所述，其特征在于该药品/保健品可以制备成各种口服制剂形式，如口服液、胶囊、片剂、凝胶、咀嚼片、泡腾片和分散片等一系列剂型通过胃肠道给药。
6.根据权利要求5，其特征在于所做成的不同剂型中所含二咖啡酰奎宁酸所占比例为0.1％-60％，绿原酸含量为0.1％-50％。
7.根据权利要求3所述，其特征为这样的比例，三者的组合可出现在其他任何形式的药品/保健品的配方中。
8.根据权利要求6，其特征为该制剂可用于保肝养肝、清热解毒、增强免疫力和艾滋病的防治。
全文摘要
本发明涉及一种增强免疫力防治艾滋病及保肝解毒的口服药品/保健品，该药品/保健品由三种天然植物金银花、菊花和茼蒿的有效提取物组合而成。本发明的特点是采用药食同源植物，为纯天然植物药品/保健品，且提取物组合中特别含有绿原酸和二咖啡酰奎宁酸，制成的药品/保健品制剂用于保肝养肝、清热解毒和增强免疫系统及艾滋病的防治。
文档编号A61K36/185GK101185668SQ20061012356
公开日2008年5月28日 申请日期2006年11月15日 优先权日2006年11月15日
发明者孙天宇, 霆 王, 陈晓峰, 浩 陆 申请人:广州联创思远利生物科技有限公司